微管相关蛋白1轻链3在新生期大鼠惊厥后海马的表达

目的 研究新生期大鼠反复惊厥后海马中自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达及3-MA对表达的干预作用.方法 实验在苏州大学衰老与神经疾病实验室进行.日龄6 d的sprague-Dawley大鼠72只随机(随机数字法)分成三组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;3-MA组惊厥前腹腔注射3-MA(总量2μL),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥,方法同惊厥组.三组大鼠于最后一次惊厥后分别按1.5 h,3 h,6 h,24 h后取海马组织,采用蛋白质免疫印迹技术(western blot)分别检测三组大鼠大脑海马中LC-3的表达.各组LC3蛋白水平采用方差分析进行比较.结果 对照组和3-MA组同一时间点LC3表达差异无统计学意义,惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)海马组织中LC-3的表达明显高于对照组和3-MA组同一时间点LC3表达(F值分别为4.70,5.28,8.51,5.89,P<0.05).结论 惊厥后自噬途径被激活,3-MA参与了自噬途径的调控.     

新生大鼠反复惊厥对海马区肾上腺皮质激素受体表达的影响

目的 研究新生期大鼠反复惊厥对海马区肾上腺皮质激素受体MR和GR表达的影响,以及对成年期大鼠记忆功能的影响,探讨发育期脑损伤和脑内相关受体之间的相互关系.方法 生后7 d的SD大鼠随机分成两组,每组40只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次,每次持续30 min,连续6 d;于反复惊厥后1、3、7、30、60 d处死大鼠取脑,分别采用免疫组织化学方法观察大鼠海马肾上腺皮质激素受体MR和GR表达的变化.最后一组大鼠处死前于第61～65天行Morris水迷宫实验,检测大鼠的学习记忆功能.对照组同样操作但不吸入三氟乙醚.结果 61～64 d,两组大鼠寻找平台时间均逐渐缩短,惊厥组大鼠在第64天的平均寻找平台时间[(82 424.3±35 622.0)ms]与对照组[(40 712.4±29 467.6)ms]比较明显延长(P=0.001).在第65天,惊厥组大鼠120 s内穿越原平台位置次数[(1.2±0.9)次]较对照组[(3.1±1.3)次]明显减少(P<0.001).免疫组化结果显示新生大鼠反复惊厥后的1、3、7、30、60 d海马CA1～4区GR、MR的表达较埘照组明显降低(P<0.05).结论 海马区GR及MR随脑发育成熟表达不断增高,呈现一定规律及分布特点,参与了脑发育过程.新生大鼠反复惊厥造成海马GR、MR表达的持续异常,参与发育期脑损伤.     

Cathepsin B抑制剂对发育期惊厥大鼠海马自噬相关蛋白表达的调节

目的 探讨新生期大鼠反复惊厥后海马自噬、凋亡相关蛋白Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达及溶酶体蛋白酶抑制剂CBI对表达的干预作用.方法 实验在苏州大学神经科学研究所进行.日龄6 d的Sprague-Dawley大鼠90只随机(随机数字法)分为3组,每组30只:对照组、反复惊厥组及CBI组.反复惊厥组(RS)每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30 min,连续9 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;CBI组于惊厥前腹腔注射cathepsin B(2 μL,0.5μg/μL),同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥发作.各组分别于末次惊厥后1.5 h,3 h,6 h,24 h和生后35 d 5个时间点[(n=6/(每点,每组)]取海马组织,采用免疫印迹技术检测自噬相关蛋白Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达,采用方差分析进行统计.结果 对照组和CBI组同一时间点Beclin-1,Cathepsin B和Bcl-2的表达差异无统计学意义,惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)海马组织中Beclin-1和Cathepsin B的表达明显高于对照组和CBI组同一时间点的Beclin-1表达(F值分别为Beclin-1:7.44,6.58,5.43,9.69,P＜0.05;Cathepsin B:4.62,2.02,3.49,4.86);而惊厥组(1.5 h,3 h,6 h,24 h)Bcl-2的表达则明显低于对照组和CBI组同一时间点Bcl-2的表达(F值分别为4.34,3.79,4.88,4.42,P＜0.05).结论 发育期大鼠反复惊厥后海马神经元自噬信号通路激活,同时抗凋亡基因Bcl-2蛋白水平显著下调,表明自噬信号途径与凋亡途径共同激活,协调参与发育期大鼠惊厥急性期兴奋毒性脑损伤的病理生理机制.

Abstract：

Objective To explore the dynamic expressions of autophagia and apoptosis associated protein Beclin-1, Cathepsin B and Bcl-2 in hippocampus and the intervention efficacy of cathepsin-B inhibitor (CBI) after recurrent neonatal seizure. Method Ninty 6-day-old SD rats were randomly (random number) divided into the recurrent neonatal seizure group (RS group, n = 30), CBI-treated seizure group (CBI group, n = 30) and the control group (n = 30). Rats in RS group were subjected to 55 attacks of seizure induced by using flurothyl during the consecutive 9 days beginning on the 6 th postnatal day (P6). In CBI group, CBI (2 μL, 0.5 μg/μL) was administered every day before seizures induced. Western blot was employed to determine the protein level at different intervals (1.5 h,3 h,6 h,24 h) after the last convulsion.Results There were higher expressions of Beclin-1 and Cathepsin B, and lower expressions of Bcl-2 expression in RS group(1. 5 h,3 h,6 h and 24 h) than those at the same time in control group (P ＜ 0.05). Beclin1 and Cathepsin B expressions were lower while Bcl-2 expressions were higher in CBI group at the intervals of 1.5 h,3 h,6 h and 24 h compared with those in RS group (P ＜ 0. 05). Conciusions Autophagic and apoptotic pathways were activated immediately after recurrent neonatal seizures as indicated by expression changes of Beclin-1, Cathepsin B and Bcl-2 in hippocampus, which suggests a synergistic effect of the two pathways in the pathophysiology of the long-term brain damage of neonateε resulted from the adverse effects of recurrent neonatal seizures.     

右美托咪定对七氟醚麻醉下老年大鼠海马神经元自噬的影响

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine, DEX)对七氟醚麻醉下老年大鼠海马神经元自噬的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为对照组、七氟醚组、DEX预处理组,每组20只,对照组大鼠吸入体积分数60%O_2 6 h,七氟醚组大鼠吸入体积分数3.4%～3.6%七氟醚6 h,DEX预处理组大鼠在吸入七氟醚前1 h腹腔注射15μg/kg DEX。分别于麻醉前(T_1)、麻醉后12 h(T_2)、24 h(T_3)、48 h(T_4)每组各处死大鼠5只并取出其海马,HE染色进行组织病理学观察,采用荧光双标法检测LC-3与NeuN、mTOR共定位表达。采用免疫组织化学法检测海马组织自噬蛋白Beclin-1相对表达量,采用Western blot法检测海马组织自噬蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及p-Akt、p-mTOR通路蛋白相对表达量。于麻醉后48 h处死大鼠前进行神经功能评分,记录各组Morris水迷宫实验结果。结果七氟醚组海马组织神经细胞胞质染色变浅、细胞核染色增深,DEX预处理组神经细胞形态改善和胞核染色较七氟醚组明显减轻;七氟醚组、DEX预处理组大鼠神经运动功能评分[(7.69±2.79)、(13.38±2.36)分]低于对照组[(22.15±1.47)分](P0.05),七氟醚组低于DEX预处理组(P0.05);七氟醚组、DEX预处理组、对照组大鼠逃避潜伏期依次缩短(P0.05),平台象限停留时间、穿越平台象限次数依次增加(P0.05);T_1～T_4时,对照组大鼠海马组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1及p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P0.05);T_2～T_4时,七氟醚组、DEX预处理组海马组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白相对表达量较T_1时增高(P0.05),p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量较T_1时降低(P0.05),DEX预处理组LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin蛋白相对表达量低于七氟醚组(P0.05),p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量高于七氟醚组(P0.05)。结论右美托咪定可明显改善七氟醚麻醉下老年大鼠的神经运动和认知功能,可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路、抑制海马神经元自噬,从而减轻脑损伤有关。     

运动训练对新生期惊厥大鼠学习能力和海马ZnT1表达的远期影响

目的：探讨新生期大鼠单次长程或反复惊厥对学习能力和海马锌离子转运体1（ZnT1）表达的远期影响及运动训练的干预作用。方法：生后6d（用P6表示）的SD大鼠随机分成3组各12只。单次惊厥组（SS组）和反复惊厥组（RS组）在P6吸入三氟乙醚诱导惊厥发作,持续30min,SS组诱导P1,RS组连续P6;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚。3组大鼠分别于P27-31、P58～61、P80-82进行3次Morris水迷宫测试,检测学习和记忆功能;同时在PS1～56对SS组和RS组进行踏转轮训练,30min,每天1次,连续P6。P82时行脑组织切片观察ZnT1在海马的表达。结果：①逃避潜伏期：各组各次逃避潜伏期均有逐渐缩短趋势,其中第1次水迷宫测试RS组P1～4潜伏期明显高于对照组（P〈0．05）,第5次各组差异不明显;第2次水迷宫RS组P1～2潜伏期较对照组仍显著延长（P〈0．05）,P3差异无显著性意义;第3次测试各组间差异不明显。②ZnT1原位杂交：RS组ZnT1 mRNA在海马表达明显高于对照组和SS组（P〈0．01）。结论：新生期反复长程惊厥能够对学习功能产生远期损害;而单次长程惊厥对学习能力无明显影响。早期运动训练能够改善反复惊厥所致的学习能力损害,这可能与海马ZnT1表达上调有关。     

川芎嗪对发育期大鼠惊厥性脑损伤后海马caspase-1 mRNA表达的影响

目的:探讨发育期大鼠反复惊厥后海马caspase 1 mRNA表达及川芎嗪对其表达的影响。方法:162只20日龄健康SD大鼠随机分为对照组、惊厥组及川芎嗪组。采用三氟乙醚反复吸入(连续6次,每日1次)方法制作发育期大鼠惊厥模型。逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测各组动物反复惊厥后6 h及1、3、7 d时海马组织caspase 1 mRNA的表达,同时观察脑含水量的变化和光镜下海马区神经元病理改变,并对脑损伤进行病理半定量积分。结果:川芎嗪干预组各时间点caspase 1 mRNA表达较惊厥组均显著下调,脑含水量(7 d时除外)和脑损伤积分显著降低(P均<0.01),海马神经元水肿、变性、坏死均明显减轻。结论:川芎嗪能有效减轻惊厥性脑水肿和海马神经元病理损伤,其机制可能与抑制海马caspase 1 mRNA异常表达有关。     

银杏叶提取物对幼年期大鼠惊厥后海马caspase-3 FasL表达的影响

目的研究幼年大鼠反复惊厥后海马组织caspase-3、FasL表达的变化及银杏叶提取物干预对其的影响。方法108只加日龄健康SD大鼠随机分为三组：正常对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组，通过三氟乙醚反复吸入（每天1次，连续6d），制作幼年大鼠惊厥动物模型。用免疫组化（sP）法检测各组动物反复惊厥结束后1、3、7d海马组织中caspase-3和Fa8L蛋白的表达，RT—PCR方法检测各时相点海马组织中caspase-3mRNA的表达。结果反复惊厥结束后1、3、7d海马组织均有caspase-3、FasL的表达，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。银杏叶提取物干预组海马各时间点ca8pase-3mRNA及caspa8e-3、FasL蛋白的表达均较惊厥组显著下调（P〈0．05）。结论caspase-3、FasL参与了幼年期惊厥性脑损伤。银杏叶提取物对幼年期惊厥性脑损伤的保护机制，可能与抑制海马caspase-3、FasL的异常表达有关。     

幼年大鼠惊厥性脑损伤白细胞介素-1β和白细胞介素-18的表达及川芎嗪干预的影响

目的探讨幼年大鼠反复惊厥后IL-1β和IL-18的表达及川芎嗪对其表达的影响。方法144只20日龄健康SD大鼠随机分为3组：对照组、惊厥组及川芎嗪干预组。通过三氟乙醚反复吸入(连续6次,每天1次)制作幼鼠惊厥动物模型。RT-PCR方法检测各组动物反复惊厥后6 h、1 d、3 d、7 d脑组织中IL-1β、IL-18 mRNA的表达,ELISA方法检测各时相点脑组织中IL-1β和IL-18蛋白表达,同时观察脑含水量变化。结果川芎嗪干预组各时间点脑组织IL- 1β、IL-18 mRNA和IL-1β、IL-18蛋白的表达较惊厥组显著下调(P＜0．05或P＜0．01),脑含水量较惊厥组显著降低(P＜0．01)。结论川芎嗪对幼鼠惊厥性脑损伤具有保护作用,其机制可能与抑制IL-1β、IL-18 mRNA及其蛋白的异常表达有关。     

哺乳期大鼠反复吸入七氟醚对母体及子代海马神经元cofilin蛋白表达水平和认知功能的影响

目的研究哺乳期大鼠反复吸入七氟醚对母体及子代海马神经元cofilin蛋白表达水平和认知功能的影响。方法将15只健康的哺乳期雌鼠及其仔鼠随机分为3组,每组5只母鼠25只仔鼠,记录仔鼠体重;七氟醚组大鼠每3天一次,分别接受3. 0%和1. 5%的七氟醚麻醉1 h,对照组相同时间吸入运载气体。麻醉7次后通过Morris水迷宫试验检测母体及子代的认知功能;分离母体和子代大鼠的海马体神经元提取总蛋白,通过Westernblot分析cofilin蛋白表达水平。结果三组大鼠生长状况良好,体重稳定增加,三组间无显著差异(P 0. 05); Morris水迷宫结果显示:反复吸入七氟醚会延长哺乳期母鼠的逃避潜伏期、降低穿台次数和延长停留时间,但差异无统计学意义(P 0. 05);与对照组相比,3. 0%七氟醚组仔鼠的逃避潜伏期显著延长,同时穿台次数明显降低,平台停留时间显著增加(P 0. 05);Westernblot分析发现反复吸入七氟醚母鼠海马体神经元cofilin蛋白表达量无显著变化(P 0. 05),而七氟醚组仔鼠的蛋白表达量显著低于对照组(P 0. 05)。结论哺乳期大鼠反复吸入七氟醚不会对母鼠的认知功能和海马神经元cofilin蛋白表达及仔鼠的生长产生显著影响,但会抑制仔鼠海马神经元cofilin蛋白表达,降低仔鼠的认知功能。     

大鼠脑缺血再灌注后自噬的变化及灯盏生脉胶囊干预的影响

目的观察大鼠脑缺血再灌注后自噬的变化及灯盏生脉胶囊干预的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠50只分为假手术组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、3-MA对照组、灯盏生脉胶囊(DZSM)组和DZSM对照组,每组10只。除假手术组外,其他大鼠线栓法制作大脑中动脉阻塞1 h再灌注模型。3-MA组和3-MA对照组造模前1 h立体定位侧脑室内注射3-MA或生理盐水,DZSM组和DZSM对照组从造模后4 h起每天予DZSM 20 mg/kg或生理盐水灌胃,共3 d。再灌注3 d后,各组采用Longa评分检测,免疫荧光染色和Western blotting检测脑组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin1表达,化学荧光法检测DZSM组和DZSM对照组活性氧水平。结果与假手术组相比,脑缺血再灌注后LC3、Beclin1表达显著增加(P0.001),尤其在梗死灶周边的皮层和纹状体区。3-MA组LC3、Beclin1阳性细胞计数均显著少于3-MA对照组(均P0.001),Longa评分显著低于3-MA对照组(P0.001)。DZSM组LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达显著低于DZSM对照组(均P0.001),活性氧水平、Longa评分也显著低于DZSM对照组(P0.001)。结论抑制局灶性脑缺血再灌注后自噬反应可保护神经功能。DZSM胶囊的作用机制包括抑制自噬反应。     

小鼠全脑缺血模型海马区Bcl-2和Bax的表达

背景由C57black/6小鼠制成的全脑缺血模型在实验性脑缺血的研究中使用在明显增加,目前需要对这种模型的神经元损伤死亡在分子生物学方面的改变进行全面深入的研究,此项研究正是观察两种与缺血神经元死亡密切相关基因的表达水平.目的在小鼠全脑缺血模型上观察缺血后海马区Bcl-2和Bax的表达,在蛋白分子表达水平对该模型进行研究,为这种模型在今后脑缺血研究中的应用提供实验依据.设计以实验动物为研究对象,随机对照前瞻性研究.单位一所大学生理学和病理解剖学教研室.对象实验于2002-11/2003-05在首都医科大学生理系完成.选择C57black/6小鼠12只,随机分为假手术组和对照组,每组6只.干预双侧颈总动脉夹闭15 min诱发全脑缺血模型,24 h后取脑组织.全脑缺血后应用免疫组织化学染色,观察海马Bcl-2和Bax的表达水平.主要观察指标海马Bcl-2和Bax的表达水平.结果缺血组海马CA1区Bax阳性反应神经元数目为(57.3±2.9个)个,假手术组Bax阳性细胞数目为(17.2±1.3)个,两组比较,差异有显著性意义(t=30.91,P＜0.05).缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性反应神经元数目为(43.9±1.1)个,假手术组Bcl-2阳性细胞数目为(28.6±1.7)个,两组比较,差异有显著性意义(t=18.51,P＜0.05).阳性着色区灰度值测定结果显示缺血组海马CA1区Bax阳性细胞染色灰度值为90.45±5.23,假手术组Bax阳性细胞染色灰度值为168.39±4.55,两组比较,差异有显著性意义(t=27.54,P＜0.05);缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性细胞染色灰度值为113.10±4.20,假手术组Bcl-2阳性细胞染色灰度值为157.25±7.68,两组比较,差异有显著性意义(t=12.35,P＜0.05).结论小鼠全脑缺血模型在缺血24 h后,Bcl-2和Bax表达发生改变,Bax表达增加在CA1区,Bcl-2表达增加在CA3区和齿状回.     

胰岛素对心肺复苏大鼠神经元凋亡及Bcl-2,Bax mRNA表达的影响

目的 探讨脑室内注射胰岛素对心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后大鼠海马CA1区神经元凋亡和对抑凋亡因子Bcl-2,促凋亡因子Bax mRNA表达的影响.方法 实验地点在首都医科大学宣武医院试验动物中心.30只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(对照组,n=6)、心肺复苏组(复苏组,n=12)及CPR后胰岛素干预组(胰岛素组,n=12).经食道超速起搏诱发6min室颤制备大鼠CPR模型;以CPR后大鼠恢复室上性心率、收缩压超过60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)并持续10 min以上,作为自主循环恢复(ROCS)标准;ROCS 10 min后,胰岛素组大鼠经立体定位仪定位,脑室内注射12.5 μL(1 U)胰岛素,其余2组大鼠注射等量生理盐水.维持生命体征,CPR后24,72 h,应用实时荧光PCR (Realtime-PCR)测定海马CA1区神经元Bcl-2,Bax mRNA的表达量;CPR后7d,应用TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;CPR前后监测大鼠静脉血糖变化.计量资料采用均数±标准差(-x±s),组间比较采用单因素方差分析(ANOVA);相关性统计应用Pearson相关分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①CPR后24,72 h,胰岛素组大鼠Bcl-2 mRNA表达量均高于复苏组(1.45±0.05) vs.(0.79±0.01);(0.95±0.06) vs.(0.35±0.03),差异具有统计学意义(P＜0.01).组内比较发现,胰岛素组、复苏组72 h表达均低于24 h(P＜0.01).而胰岛素组与复苏组Bax mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),胰岛素组、复苏组72 h与24h比较差异无统计学意义(P＞0.05).②CPR后7d,胰岛素组大鼠海马CA1区神经元凋亡计数,复苏组(124.75±17.35)个/mm2明显高于对照组(5.12±3.26)个/mm2和胰岛素组(92.79±7.49)个/mm2,差异具有统计学意义(P＜0.01).③各组大鼠各时间点外周静脉血糖比较无统计学意义(P＞0.05).结论 脑室内注射1U胰岛素,能够促进CPR后大鼠神经元促凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达,抑制神经元凋亡,具有神经保护作用.脑室注射1U胰岛素不降低外周血糖.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肺泡上皮钠通道表达的影响

目的 探讨外源性血管紧张索Ⅱ (Ang Ⅱ)对大鼠肺泡液体清除及肺泡上皮钠通道(ENaC)表达的影响。方法 按随机数字表法将15只SD大鼠分为对照组、Ang Ⅱ组及Ang Ⅱ 1型受体阻滞剂ZD7155干预组,每组5只。Ang Ⅱ组和ZD7155干预组大鼠经左侧颈静脉置管后,微量泵持续泵入外源性Ang Ⅱ10 μg．kg-1．min-1;对照组泵入等量生理盐水。ZD7155干预组于泵入Ang Ⅱ前30 min经腹腔注射10 mg/kg ZD7155。6h后观察肺组织病理学改变;用伊文思蓝标记5％白蛋白法测定离体肺组织肺泡液体清除率(AFC);用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定ENaC mRNA表达,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定ENaC蛋白表达。结果 Ang Ⅱ组AFC较对照组显著降低[（6.16±3.01）％比(16.10±3.46)％,P＜0.01],ZD7155干预组AFC较Ang Ⅱ组显著升高[（10.60±2.05）％比(6.16±3.01)％,P＜0.05]。Ang Ⅱ组α-ENaC mRNA表达较对照组显著升高（0.663±0.068比0.236±0.030,P＜0.01）,ZD7155干预组α-ENaC mRNA表达较Ang Ⅱ组显著降低（0.386±0.061比0.663±0.068,P＜0.01）;β-ENaC及γ-ENaC的mRNA表达无明显差异。与对照组比较,Ang Ⅱ组α-ENaC蛋白表达显著增加(0.343±0.053比0.145±0.030,P＜0.01),β-ENaC和γ-ENaC的蛋白表达显著降低（0.286±0.038比0.512±0.055,0.144±0.040比0.460±0.066,均P＜0.01）;与Ang Ⅱ组比较,ZD7155干预组α-ENaC蛋白表达显著降低(0.228±0.045比0.343±0.053,P＜0.01),β-ENaC和γ-ENaC的蛋白表达显著升高(0.358±0.043比0.286±0.038,0.220±0.033比0.144±0.040,均P＜0.05)。结论 外源性Ang Ⅱ通过其1型受体途径调节ENaC基因及蛋白表达,减弱大鼠肺泡液体清除,加重肺水肿。     

氢气饱和生理盐水对百草枯中毒大鼠肺组织的作用

目的 探讨氢气饱和生理盐水对百草枯(PQ)中毒大鼠肺损伤及肺纤维化的保护作用.方法 该实验在南昌大学第一附属医院动物实验室完成.48只SD大鼠随机分为对照组、染毒组和干预组,每组16只.染毒组及干预组给予50 mg/kgPQ一次性灌胃染毒,对照组给予等量蒸馏水灌胃.干预组大鼠在染毒1 h后开始予腹腔注射氧气饱和生理盐水5 mL/kg,2次/d,直至处死;染毒组及对照组大鼠按体质量给予等量生理盐水腹腔内注射.于染毒第3天及第21天分别测定各组大鼠动脉血氧分压(PaO2)、肺组织8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)含量及转化生长因子β1(TGF-31)的表达.结果 (1)染毒后3 d,与对照组比较,染毒组及干预组PaO2均明显下降(P＜0.01);与染毒组比较,干预组PaO2有所改善(P＜0.05).21 d后,与对照组比较,染毒组PaO2仍明显减低(P＜0.01),干预组有一定程度下降(P＜0.05);与染毒组比较,干预组PaO2明显升高(P＜0.01).(2)染毒后3 d,与对照组比较,染毒组8-OHDG含量明显增加(P＜0.01),干预组亦有一定程度增加(P＜0.05);与染毒组比较,干预组8-OHDG含量有明显下降(P＜0.01).21 d后,各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(3)染毒后3 d,与对照组比较,染毒组TGF-β1表达明显增加(P＜0.01),干预组有一定程度增加(P＜0.05);干预组较染毒组间比有一定下降(P＜0.05).21 d后,与对照组比较,染毒组TGF-β1表达明显增加(P＜0.01),干预组有一定增加(P＜0.05);与染毒组比较,干预组TGF-β1表达明显下降(P＜0.01).结论 氢气饱和生理盐水能改善PQ大鼠氧化应激状态,减轻肺氧化损伤,降低肺纤维化程度.     

一种新的复合型野战创伤早期抗休克液的实验研究

目的 依据失血性休克发生的理论基础和长期的临床实践经验,配制一种新的"复合型战地抗休克液",并利用大鼠失血性休克模型进行评价.方法 建立大鼠失血性休克模型.以乳酸林格液和羟乙基淀粉的2∶1混合液(LH)作为对照组休克复苏液;以添加地塞米松和呋塞米的LH作为加药组休克复苏液;复苏4 h后取血和器官标本检测生化、肝功能指标和肺组织含水量,并观察组织病理学变化.结果 两组液体均可使失血性休克大鼠平均动脉压恢复到基础值.与对照组比较,加药组血生化指标均无明显差异,但大鼠复苏后肺组织湿/干重比值明显降低(4.56±0.14比4.88±0.29,P＜0.05),丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平显著下降[ALT:(73.02±41. 89)U/L比(193.85±104.49)U/L;AST:(199.06±108.70)U/L比(395.25±137.08)U/L,均P＜0.05],利尿作用明显[开始排尿时间:(76±20)min比(153±14)min;尿量:(9.6±5.2)ml比(1.5±2.2)ml,P＜0.01和P＜0.05],腹水量减少[(1.3±0.6)ml比(5.0±3.0)ml,P＜0.05].肝、肺和小肠组织病理学观察也显示加药组损伤轻于对照组.结论 本研究中设计的"复合型战地抗休克液"配方简单,用于大鼠失血性休克复苏可快速恢复并稳定血流动力学,同时可起到减轻组织水肿及肝、肺、小肠损伤的作用.

Abstract：

Objective To propose a resuscitation fluid with a new formula for resuscitation of shock in battlefield on the basis of pathogenesis of hemorrhagic shock and clinical experiences, and to evaluate its safety and effectiveness in a rat hemorrhagic shock model. Methods After hemorrhagic shock was (referred to as LH)was used for resuscitation in animals of control group; LH supplemented with dexamethasone and furosemide(referred to as LHDF)was used as resuscitation fluid for experimental group.After 4 hours of infusion, blood and major organs were obtained for serum biochemical tests, lung water content measurement and histopathological observation. Results The mean arterial pressure of rats of both control and experimental groups recovered rapidly after resuscitation. There was no significant difference in the parameters of serum biochemistry between control group and experimental group. The wet/dry weight ratio of lung tissue in experimental group was significantly lower than control group(4. 56±0. 14 vs. 4. 88±0. 29, P＜0. 05). The blood alanine aminotransferase(ALT)and aspartate aminotransferase(AST)levels in experimental group were also significantly lower than in control group[ALT:(73. 02±41.89)U/L vs.(193. 85 ± 104. 49)U/L; AST:(199.06 ± 108. 7)U/L vs.(395.25 ± 137.08)U/L, both P＜0. 05).Diuretic effect was obviously observed in experimental group than control group[time of start urination:(76±20)minutes vs.(153±14)minutes; urine volume:(9. 6±5. 2)ml vs.(1.5±2. 2)ml, P＜0. 01 and P＜0. 05], and the amount of ascitic fluid in experimental group was significantly lower than in control group [(1.3 ± 0. 6)ml vs.(5.0 ± 3.0)ml, P＜ 0. 05). Histopathological observation of the liver, lung and intestine also showed less pathological changes in experimental group than in control group. Conclusion The designed battlefield anti-shock fluid in this study has been shown to be effective in fluid resuscitation for hemorrhage shock in rats, with reduced tissue edema and less injury to the liver, lung and intestine.