EPO对心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)在心肺复苏后对大鼠脑海马神经元细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响。方法雄性Wistar大鼠32只,随机分4组:正常对照组(A组)、假手术组(B组)、心肺复苏模型组(C组)、EPO干预组(D组)。C组、D组采用窒息的方法制作大鼠呼吸心跳骤停模型,后行心肺复苏治疗(CPR),D组CRP同时静脉给予EPO 3000U/kg;B组仅静脉给予等剂量生理盐水,4小时的脑海马组织,采用免疫组化法观察各组神经元细胞凋亡、Bcl-2及Bax的表达情况。结果光镜下A、B组未见凋亡细胞,C组可见较多凋亡细胞,D组凋亡细胞数少于C组(P0.01)。A、B组少量Bcl-2、Bax阳性细胞,C、D组Bcl-2、Bax阳性细胞数均高于A、B组(P0.01),D组Bcl-2阳性细胞数高于C组(P0.01),D组Bax阳性细胞数低于C组。结论心肺复苏后大鼠海马神经元的细胞凋亡明显增加,Bcl-2、Bax表达上调。EPO可抑制心肺复苏后海马神经元的细胞凋亡、上调Bcl-2表达同时下调Bax表达。     

磷酸肌酸对大鼠心肺复苏后脑能量代谢的影响

目的 观察外源性磷酸肌酸(CP)对大鼠心肺复苏(CPR)后脑损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠160只,随机(随机数字法)分为4组:假手术对照组(A组)、常规复苏组(B组)、小剂量CP组(C组)、大剂量CP组(D组),各组再分别按自主循环恢复(ROSC)后(B、C、D组)或气管切开后(A组)0.5、3、6、12、24h时间点分为5亚组(n=8).B、C、D组采用窒息法建立大鼠CPR模型,ROSC后即刻C组静注CP0.5 g/kg,D组静注CP 1.0 g/kg.A组仅施行麻醉、气管切开、血管穿刺等操作,不行窒息及复苏.各亚组在相应时间点取材大脑额叶.采用高效液相色谱法( HPLC)测定脑组织三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量,并计算总腺苷酸(TAN)及能倚(EC)值;采用吸光度法测定脑组织Na+ -K+ -ATP酶、Ca2+ - Mg2+ - ATP酶活性;HE染色观察光镜下大脑皮层病理变化.应用SPSS 16.0软件包进行数据统计,组间比较采用方差分析.结果 与A组比较,B组C组各时间点ATP、TAN、EC、Na+-K+-ATPase、Ca2+ -Mg2+ -ATPase均降低(P＜0.05或P＜0.01),D组0.5、3、6、12 h时间点的ATP、TAN、EC、Na+ -K+ -ATPase、Ca2 -Mg2 -ATPase均降低(P＜0.05或P＜0.01),B组各时间点AMP均升高(P＜0.01),C组D组0.5h和3h时间点的AMP升高(P＜0.01);与B组比较,C组D组6、12、24h时间点的ATP、TAN、EC、Na+ -K+ -ATP酶、Ca2+ -Mg2+ -ATP酶均升高(P＜0.05或P＜0.01),C组D组6、12、24h时间点的AMP均降低(P＜0.05或P＜0.01);与C组比较,D组6、12、24h时间点的TAN、Na+ -K+ -ATPase、Ca2 -Mg2 -ATPase以及24h的ATP均升高(P＜0.05或P＜0.01).大脑皮层病理变化B组严重,C组D组较轻.结论 心肺复苏后存在脑能量代谢障碍,CP可以增加CPR后脑组织中的ATP含量,提高Na+ -K+ -ATPase和Ca2 -Mg2+ -ATPase的活性,减轻脑组织病理损伤,具有脑保护作用,在大剂量给药时作用更明显.     

纯氧与空气复苏对窒息新生大鼠心肌细胞凋亡及BCL-2,BAX蛋白表达的影响

目的：在建立新生大鼠窒息的动物模型基础上。比较纯氧与空气复苏对窒息新生大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法：采用SD新生大鼠建立窒息模型2．5h，并分组进行纯氧与空气复苏。实验分为正常对照组、纯氧复苏组（PO组）和空气复苏组（RA组），均在复苏后24h和72h取心肌组织，制成石蜡切片，HE染色光镜观察心肌组织病理变化，TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数，免疫组织化学S-P法检测心肌组织Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果：HE染色光镜观察，与正常对照组相比，PO组可见大部分心肌纤维肿胀，有少许断裂，心肌间质及小静脉明显淤血，RA组心肌纤维则表现明显的片状或灶性坏死。RA组心肌细胞凋亡指数明显高于PO组，且以24h升高最显著。PO组凋亡抑制基因Bcl-2表达高于RA组，RA组促凋亡基因Bax明显高于PO组。结论：空气复苏较纯氧复苏后心肌细胞凋亡更严重，且以复苏后24h最明显，空气复苏促进Bax基因的表达上调，纯氧复苏可使凋亡抑制基因Bcl-2表达上调，提示高浓度氧对窒息复苏后心肌有一定的保护作用     

生长激素对心肺复苏大鼠心肌损伤的保护作用

目的　研究生长激素对心肺复苏后大鼠心肌细胞的保护作用。方法　本实验采用窒息合并冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停 5min后开始心肺复苏的动物模型。Sprague -Dawley大鼠随机分为 3组 :对照组 (假手术组 )、常规复苏组、生长激素治疗组 (每组 6只 )。复苏后 2 4h采用酶生化法测定血浆中CK -MB的含量 ;采用放射免疫法测定血浆中肿瘤坏死因子α(TNF -α)的含量。采用透射电镜和TUNEL法观察心肌细胞的损伤及凋亡情况 ;采用免疫组化法观察心肌细胞Bcl- 2、Bax蛋白的表达情况。结果　心肺复苏后常规组大鼠血浆CK -MB、TNF -α分别为 (2 5 9± 37 93)U/L、(1 2 0 0± 0 199)ng/mL ,TUNEL阳性细胞率为 4 70 % ,Bcl- 2表达率 2 5 39% ;生长激素治疗组血浆CK -MB、TNF -α较常规组明显降低 ,而Bcl- 2的表达明显增加 (45 6 0 % ) ,降低了心肌细胞凋亡的比例 (TUNEL阳性细胞率为 2 5 8% )。结论　生长激素可通过促进Bcl- 2的表达抑制心肌细胞凋亡 ,从而起到复苏后心肌保护作用。     

细胞凋亡与心肺复苏后心肌功能障碍的研究进展

心搏骤停因其具有严重的社会经济学影响,一直以来是医学界的研究热点.随着复苏理论与技术的发展提高,对此类患者实施心肺复苏术(CPR)和高级生命支持后,其中有20%～40%的患者可以达到自主循环恢复(ROSC),但仍有高达50%～70%的ROSC患者在住院期间死亡[1-2].经常令临床医师们感到失望的是,据统计,院内或院外成功复苏患者的最终生存率仅30%左右[3-5].上述情况产生的主要原因是心搏骤停患者易罹患心搏骤停综合征中的两大特征性损害,即CPR后心肌功能障碍及CPR后脑损伤[6],其中,CPR后心肌功能障碍因其可诱发多器官功能障碍综合征(MODS)和导致复苏后早期高病死率而备受关注.     

胰岛素对心肺复苏大鼠神经元凋亡及Bcl-2,Bax mRNA表达的影响

目的 探讨脑室内注射胰岛素对心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后大鼠海马CA1区神经元凋亡和对抑凋亡因子Bcl-2,促凋亡因子Bax mRNA表达的影响.方法 实验地点在首都医科大学宣武医院试验动物中心.30只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(对照组,n=6)、心肺复苏组(复苏组,n=12)及CPR后胰岛素干预组(胰岛素组,n=12).经食道超速起搏诱发6min室颤制备大鼠CPR模型;以CPR后大鼠恢复室上性心率、收缩压超过60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)并持续10 min以上,作为自主循环恢复(ROCS)标准;ROCS 10 min后,胰岛素组大鼠经立体定位仪定位,脑室内注射12.5 μL(1 U)胰岛素,其余2组大鼠注射等量生理盐水.维持生命体征,CPR后24,72 h,应用实时荧光PCR (Realtime-PCR)测定海马CA1区神经元Bcl-2,Bax mRNA的表达量;CPR后7d,应用TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;CPR前后监测大鼠静脉血糖变化.计量资料采用均数±标准差(-x±s),组间比较采用单因素方差分析(ANOVA);相关性统计应用Pearson相关分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①CPR后24,72 h,胰岛素组大鼠Bcl-2 mRNA表达量均高于复苏组(1.45±0.05) vs.(0.79±0.01);(0.95±0.06) vs.(0.35±0.03),差异具有统计学意义(P＜0.01).组内比较发现,胰岛素组、复苏组72 h表达均低于24 h(P＜0.01).而胰岛素组与复苏组Bax mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),胰岛素组、复苏组72 h与24h比较差异无统计学意义(P＞0.05).②CPR后7d,胰岛素组大鼠海马CA1区神经元凋亡计数,复苏组(124.75±17.35)个/mm2明显高于对照组(5.12±3.26)个/mm2和胰岛素组(92.79±7.49)个/mm2,差异具有统计学意义(P＜0.01).③各组大鼠各时间点外周静脉血糖比较无统计学意义(P＞0.05).结论 脑室内注射1U胰岛素,能够促进CPR后大鼠神经元促凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达,抑制神经元凋亡,具有神经保护作用.脑室注射1U胰岛素不降低外周血糖.     

心肺复苏后大鼠肝细胞凋亡的实验研究

目的研究心肺复苏后大鼠肝细胞的凋亡情况及其可能机制。方法sD雄性大鼠40只，随机分为5组，即对照组（假手术组）以及复苏后3、6、12、24h组，每组各8只。采用窒息合并冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型，停跳5min后开始心肺复苏，采用TUNEL法观察复苏后肝细胞的凋亡情况，采用免疫组化的方法观察大鼠肝细胞Bcl-2、fas基因的表达情况。结果复苏后3h大鼠肝细胞就有明显凋亡，复苏后6h达到高峰（P〈0．01），24h肝细胞TUNEL仍为高表达；复苏后3h肝细胞Bcl-2有微弱表达，6h表达增加，24h达到高峰；而fas复苏后3h即呈高表达，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），之后持续高表达。结论心肺复苏后大鼠存在肝细胞凋亡．其中fas的高表达介导了肝细胞凋亡。     

参附注射液对心肺复苏后大鼠心肌细胞保护作用的研究

目的探讨参附注射液对心肺复苏后大鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax、NF-κB等蛋白表达的影响,为防治心肌细胞的凋亡提供理论依据.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参附治疗组,采用窒息合并冰氯化钾致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型,运用免疫组织细胞化学方法观察复苏后不同时间点心肌细胞bcl-2、bax基因的蛋白表达,采用末端标记技术(TUNEL)检测各组心肌细胞的凋亡情况;并在电镜下观察各组心肌细胞超微结构.结果复苏后3 h CK-MB开始升高,复苏后24h明显升高达顶峰,各时相点参附治疗组与模型对照组比较CK-MB显著降低(P＜0.05).复苏后各时相点参附治疗组bcl-2表达明显增强(P＜0.01),而bax表达无明显差异(P＞0.05),参附治疗组NF-κB的表达明显降低(P＜0.05).bcl-2阳性表达率在复苏后24 h达到高峰,参附治疗组阳性表达率明显高于模型组(P＜0.01).各时相点参附治疗组bax表达与复苏模型组比较无显著差异(P＜0.05).在心肺复苏后的不同时段心肌细胞均有凋亡发生.参附治疗组各时相点凋亡细胞阳性指数均明显低于复苏模型组(P＜0.05);而假手术组无明显凋亡现象发生(P＞0.01).超微结构显示参附治疗组心肌损伤较模型组明显减轻,假手术组心肌超微结构正常.结论细胞凋亡参与了心肺复苏后大鼠心肌细胞的损伤,参附注射液可降低NF-κB活性,上调bcl-2蛋白表达,改善心肌细胞的超微结构,抑制细胞凋亡的发生,对心肌细胞具有明显的保护作用.     

大鼠心肺复苏后脑损伤研究

目的:探讨大鼠心肺复苏(CPR)后脑功能及病理组织学变化.方法:42只雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(A组,6只),假手术组(B组,6只),复苏组(C组,按ROSC后1 h、6 h、12 h、24 h、72 h各时点分5亚组,6只).分别行神经功能缺损评分(NDS),测定脑组织含水量及病理形态学观察.结果:C组大鼠NDS评分降低,随ROSC时间延长,NDS水平逐渐上升,但72 h仍低于正常;大鼠ROSC后脑组织含水量呈上升趋势,24 h达高峰,各时点均高于B组(P<0.01);脑组织存在缺血性病理改变,神经元细胞坏死、胶质细胞增生、血管周水肿、尼氏体减少或消失,以24 h最明显,72 h损伤仍较重;体视学分析显示C组神经元细胞比表面、数面密度下降,平均体积增加(P<0.01).结论:大鼠CPR后出现神经元细胞坏死、脑水肿、整体行为学评分下降,存在脑功能损害.     

Effect of exogenous phosphocreatine on cardiomycytic apoptosis and expression of Bcl-2 and Bax after cardiopulmonary resuscitation in rats

BACKGROUND:

Ischemia-reperfusion injury in the myocardium after cardiac arrest (CA) and cardiopulmonary resuscitation (CPR) is an important pathologic basis of post-cardiac arrest of syndrome (PCAS), and apoptosis is one of the major mechanisms in myocardial ischemia-reperfusion injury. To lessen myocardial ischemia-reperfusion injury after cardiac arrest and CPR, it is important to reduce energy consumption and to increase energy supply in the myocardium. This study aimed to observe changes of cell apoptosis and expression of Bcl-2 and Bax protein on the myocardium after CPR in rats, and the protective effects of different doses of exogenous phosphocreatine (creatine phosphate, CP) on them.

METHODS:

A total of 32 male adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups: control group (group A), CPR group (group B), low-dose CP group (group C, CP 0.5 g/kg at beginning of CPR and 1.0 g/kg at 2 hours after CPR) and high-dose CP group (group D, CP 1.0 g/kg at beginning of CPR and 2.0 g/kg at 2 hours after CPR). Cardiac arrest was induced by asphyxiation and CPR started at 7 minutes after asphyxiation in groups B, C and D. Myocardium samples were taken at 24 hours after CPR. Cardiomycytic apoptosis was detected by the TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) method. The expression of Bcl-2 and Bax protein was measured by immunohistochemistry.

RESULTS:

Cardiomyocytic apoptosis index (AI) and expression of Bcl-2 and Bax protein increased more significantly in groups B, C and D than in group A (P<0.01), but Bcl-2/Bax ratio significantly decreased (P<0.01). Cardiomyocytic AI and expression of Bcl-2 and Bax protein decreased more significantly in groups C and D than in group B (P<0.01), but Bcl-2/Bax ratio increased more significantly (P<0.01). Cardiomyocytic AI and expression of Bcl-2 and Bax protein decreased more significantly in group D than in group C (P<0.05), but Bcl-2/Bax ratio increased more significantly (P<0.05).

CONCLUSION:

Exogenous phosphocreatine, especially at a large dose, could inhibit cardiomyocytic apoptosis and alleviate myocardial injury after CPR in rats.KEY WORDS: Cardiopulmonary resuscitation, Phosphocreatine, Apoptosis, Bcl-2, Bax, TUNEL     

严重颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达

目的 探讨严重颅脑损伤后Bel-2、Bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法 采用改进的Feeney自由落体损伤模型，应用分子生物学方法——脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleofidyl transferase mediated nick end labeling，TUNEL)以及免疫组织化学方法，对50只严重颅脑大鼠脑组织中的凋亡细胞和Bel-2、Bax免疫反应阳性的细胞进行观察、统计。结果 损伤组大鼠脑组织中凋亡细胞数明显高于未损伤组，Bel-2、Bax表达也有所增加，同时，损伤组Bax／Bel-2阳性细胞数的比值明显大于未损伤组。结论 Bel-2和Bax表达的比例对严重颅脑损伤后细胞凋亡可能起重要的调控作用。     

小檗碱对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织Bcl-2、Bax表达及凋亡活性影响

目的:观察小檗碱对大鼠脑缺血-再灌注损伤后神经保护作用及Bcl-2,Bax表达的影响,探讨小檗碱在脑缺血一再灌注损伤中的抗凋亡作用及机制.方法:线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注模型大鼠随机分为模型组、小檗碱低剂量组、小檗碱高剂量组、假手术组.脑缺血2 h再灌注24 h;分别在再灌注后3 h和24 h进行神经行为评分,并在再灌注24 h后断头取脑.采用连续切片观察组织形态学改变,免疫组织化学技术检测脑组织中Bcl-2、Bax表达的部位及数量.结果:小檗碱组神经功能评分明显低于模型组,且大鼠脑梗死体积较模型组明显缩小,小檗碱高剂量组及低剂量组调高Bcl-2阳性细胞数增多、Bax阳性细胞教减少,Bcl-2/bax的表达比例增加(P<0.05);大鼠额顶部皮质神经元凋亡数目与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).小檗碱高剂量组大鼠额顶部皮质Bcl-2、Bax阳性细胞数,皮质神经元凋亡数目与低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:小檗碱能明显减轻脑缺血再灌注损伤所致的行为障碍.缩小梗死体积,可能通过上调抑凋亡Bcl-2表达、抑制Bax表达,减少细胞凋亡发挥脑保护作用.     

心肺复苏后大鼠神经细胞凋亡的实验研究

目的：研究全脑缺血再灌注后大鼠脑神经细胞的凋亡情况。方法：Sprague Dawley 大鼠28只，雌雄各半，随机分5组，即对照组(假手术组)以及复苏后3、6、12、24h组，对照组4只，其余每组6只。采用窒息合并冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型，停跳5min后开始心肺复苏，采用TUNEL方法和透射电镜观察复苏后神经细胞的凋亡情况。结果:复苏后3h大鼠脑皮质神经元就出现细胞凋亡，复苏后24h海马区TUNEL阳性率为6．0％。结论:细胞凋亡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞损伤的主要机制之一。