不同表皮对成纤维细胞增殖及胶原含量的影响

目的 了解不同表皮对成纤维细胞（Fb）增殖的影响，并探寻其机制。方法 将10例增生期瘢痕患者自身的正常皮肤Fb＋正常表皮、瘢痕Fb＋瘢痕表皮进行非接触性共同培养，另培养不加表皮的瘢痕Fb，将这3个培养体系依次设为A、B、C组；另将10例成熟期瘢痕患者的皮肤同法培养，也建立3个培养体系依次为D、E、F组。检测各组Fb培养72h后的细胞数量、培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量及其比值的变化。结果 C组与A组、F组与D组比较，均表现为细胞数显著升高，培养上清液中I、Ⅲ型胶原含量上升，I型与Ⅲ型胶原比值下降（P〈0．05）；B组与C组比较，培养上清液中Ⅲ型胶原含量增高，I型与Ⅲ型胶原的比值下降（P〈0．05），细胞数和I型胶原含量两组相近；E组与F组比较，细胞数显著降低且上清液中I、Ⅲ型胶原含量下降（P〈0．05），两者比值无明显变化。B组与A组、E组与D组比较，细胞数及I、Ⅲ型胶原含量均显著增高（P〈0．05），I型与Ⅲ型胶原的比值均显著下降（A、B组为2．20±0．27、1．16±0．21，D、E组为2．18±0．14、1．93±0．26，P〈0．05）。结论 正常表皮可能通过产生某些活性物质调节Fb增殖及胶原合成，在防止瘢痕增生中发挥重要作用。     

氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法:以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将氨甲喋呤(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)加入细胞培养液中进行干预并与空白对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响。结果:10-6mol/L、10-5mol/L的氨甲喋呤对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),10-9mol/L～10-5mol/L的氨甲喋呤对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P<0.01)。结论:氨甲喋呤在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用。     

明胶降解物对大鼠真皮成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响

目的 探讨组织工程心瓣膜常用人工基质材料--明胶发生降解后的产物对大鼠真皮成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响. 方法 利用酶组合技术制备明胶降解物（gelatin hydrolysate, GH）,采用超滤的方法分离出低分子量明胶降解物组分（gelatin hydrolysate fraction, GHF）,用于5只SD大鼠真皮成纤维细胞的体外培养.采用CCK-8活细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8）检测细胞的增殖情况,ELISA试剂盒检测细胞I型胶原蛋白的分泌情况. 结果 ①GHF对细胞增殖作用的浓度效应：在0.125～1.0 mg/ml浓度范围内,GHF对细胞的促增殖作用呈现先增强后减弱的趋势,在0.25 mg/ml时,细胞增殖率最大,达到（47.54±16.35）%;②GH与GHF对细胞增殖影响比较：GH与GHF均具有促进细胞增殖的作用,且在浓度为0.25 mg/ml时,促细胞增殖作用无显著差异[（27.04±15.21）% vs （39.22±15.55）%, P=0.177];③GH与GHF对细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白影响比较：GHF组第3天时Ⅰ型胶原分泌量为（28.06±5.60）pg/105,与空白对照的（18.24±4.52）pg/105相比,有显著差异（P=0.006）,而GH组直至第6天时Ⅰ型胶原蛋白分泌量,与空白对照相比,无统计学意义（P=0.103）. 结论 分子量大小不同的明胶降解物GH与GHF均具有促进大鼠真皮成纤维细胞增殖的作用,且分子量较小的GHF还具有促进细胞I型胶原分泌的功能.     

转化生长因子β1对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义。方法：采用非放射性细胞增殖检测,3H－胸腺嘧啶摄入,3H－哺氨酸摄入及DNA定量分析方法,观察TGFβ1对体外培养的生长融合后早期（24h)的病理性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的增殖活性和胶原合成的作用。结果：经TGFβ1作用后,来自瘢痕的成纤维细胞的3H－胸腺嘧啶核苷和3H－脯氨酸掺入增强（P＜0．01）,但来自正常皮肤的无明显变化（P＞0．05）。结论：在细胞生长融合后早期（24h),TGFβ1对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有正性调控作用,其在瘢痕的形成中可能具有重要作用。     

羧甲基壳多糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 观察羧甲基壳多糖（carboxymethyl-chitosan，CM-CH）对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFB）增殖和胶原合成的作用，探讨其治疗瘢痕疙瘩的机制。方法 采用四噻唑蓝（methylthiazoletrazolium，MTT）测定法和羟脯氨酸比色法（hydroxyproline，HP）测定不同浓度CM-CH作用KFB后对其增殖和上清液中胶原合成的影响。结果 CM-CH在10、50、100、200μg／ml作用KFB48、72h后，对KFB增殖有明显抑制作用（P〈0．05）。200μg／ml作用24、48、72h后，对KFB增殖抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CM-CH在10、50、100、200μg／ml对KFB作用48h后，能显著抑制该细胞胶原的合成（P〈0．01）。100、200μg／ml CM-CH抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 CM-CH对体外培养的KFB增殖和胶原合成有明显抑制作用，从而提示该物质治疗瘢痕疙瘩具有潜在前景。     

柑皮提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原代谢的作用

目的观察柑皮提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及胶原代谢的影响。方法人增生性瘢痕皮肤标本取自笔者单位行整形术的2例烧伤患者。采用组织块法培养成纤维细胞后分为:实验组,细胞加入成纤维细胞培养基与柑皮提取物,并根据提取物的浓度分为2．5、5．0、10．0、25．0 mg／L4个部分;空白对照组,细胞仅加入成纤维细胞培养基;对照组,细胞加入体积分数5％乙醇与成纤维细胞培养基。采用噻唑蓝比色分析法、原位缺口末端标记法及放射免疫法观察各组成纤维细胞增殖情况,计算增殖抑制率;计算凋亡指数(AI)以及检测Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ICTP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)含量的变化。结果实验组2．5-25．0 mg／L柑皮提取物的细胞增殖抑制率分别为(7．100±0．038)％、(8．100±0．048)％、(10．900±0．055)％、(15．900±0．097)％; AI分别为69．7％、71．7％、86．4％、95．2％;ICTP分别为(17．2±0．6)、(18．3±0．6)、(19．8±0．5)、(23．2±0．6)μg／L;PINP分另0为(101．7±1．4)、(107．8±1．1)、(111．6±1．2)、(124．6±1．3)μg／L,均明显高于对照组(P<0．05)。空白对照组上述指标与对照组相近(P>0．05)。结论柑皮提取物能抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进其凋亡及Ⅰ型胶原分解,具有治疗和预防增生性瘢痕的作用。     

姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:观察姜黄素对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.01)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕疙瘩的作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

钒酸盐对内侧副韧带成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨钒酸盐对大鼠内侧副韧带(medial collateral ligament,MCL)成纤维细胞增殖和I型胶原合成的影响. 方法 选取成年雄性SD大鼠12只,体重350～375 g,无菌切取MCL,以眼科剪剪成1 mill×l mm×1 mm大小后置于培养瓶中,0.25%胰蛋白酶消化传代制备MCL成纤维细胞.取第3代MCL成纤维细胞,分别加入不同浓度(O、1.0、2.5、5.0 ng/mL)的钒酸盐,采用MTT法测定细胞增殖,ELISA法及RT-PCR测定各浓度组细胞I型胶原的合成和I型胶原基因的表达,每浓度组样本量均为12. 结果 MTT法测得0～5 ng/mL4个浓度组细胞增殖的吸光度(A)值分别为0.213±0.016、0.327 4±0.023、0.449 4±0.137和0.561±4-0.028,1.0、2.5、5.0 ng/mL浓度组钒酸盐对MCL成纤维细胞有明显促增殖作用,与0 ng/mL浓度组比较差异均有统计学意义(P<0.05).ELISA法测得0～5 ng/mL各浓度组I型胶原的A值分别为0.47 4±0.02、0.51 4±0.03、0.60 4±0.01和0.72 4±0.02,1.0、2.5、5.0 ng/mL浓度组钒酸盐能明显促进I型胶原的合成,与0 ng/mL浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05).RT-PCR测得0～5 rig/mL各浓度组I型胶原条带密度比值分别为1.37 4±0.76、1.97 4±0.53、2.41 4±0.94和2.73 4±0.82,1.0、2.5、5.0 ng/mL浓度组的I型胶原基因表达显著高于0 rig/mL浓度组,比较差异有统计学意义(P<0.05).以上每项指标1.0、2.5、5.0 rig/mE三浓度组间比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 钒酸盐具有促进MCL成纤维细胞的增殖和I型胶原合成的能力,可能为治疗MCL损伤提供一种新的途径.     

正常皮肤提取物对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 探讨自体成纤维细胞注射移植后是否出现过度增殖和胶原异常分泌.方法 按照Engel-Catchpole程序制备正常皮肤提取物,在浓度分别为0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.0000 mg/mlDMEM培养基下,观察对正常成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.结果 正常皮肤提取物抑制正常皮肤成纤维细胞的增殖,细胞外胶原的分泌也受一定的影响,受抑制的程度与培养基中皮肤提取物的浓度呈正相关.结论 正常皮肤内存在成纤维细胞增殖和胶原分泌功能的负调节机制,有可能在进行自体成纤维细胞注射移植时发挥作用.     

Effect of human bone marrow stromal cells and dermal fibroblasts on collagen synthesis and epithelization

In a previous in vitro study, the authors reported that bone marrow stromal cells (BSCs) have better wound-healing activities than fibroblasts. The purpose of this study was to evaluate the effect of BSCs and fibroblasts on wound-healing activity in vivo. Cultured human BSCs and dermal fibroblasts taken from the same patients were tested to compare collagen synthesis and epithelization in a rat wound model. No-cell-treated animals were used as controls. The BSC group showed the highest collagen level, followed by the fibroblast group, and then the no-cell group (P < 0.05). In addition, the best epithelization was observed in the BSC group. These results demonstrate that BSCs better stimulate wound healing than fibroblasts in vivo and in vitro.     

二甲双胍对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨二甲双胍对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、胶原合成及蛋白激酶B/叉头框蛋白O1(Akt/FoxOl)信号通路磷酸化水平的影响.方法 将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为培养液处理的空白对照组和用含不同浓度二甲双胍培养液处理的实验组,给药后48 h采用CCK-8比色法检测细胞增殖,western blot技术检测Akt 、FoxO1的磷酸化水平,羟脯氨酸试剂盒检测胶原的合成.结果 二甲双胍可显著抑制成纤维细胞的增殖,用30、60、90、120 mmol/L不同浓度的二甲双胍处理成纤维细胞后,成纤维细胞的抑制率依次升高为(13.30±2.04)％、(22.64±4.70)％、(54.00±5.34)％和(63.12±3.48)％,呈明显的剂量依赖性.与空白对照组比较,二甲双胍处理后的成纤维细胞中Akt、FoxO1磷酸化水平降低,胶原蛋白产生减少,并且呈剂量依赖性(P ＜0.05,P＜0.01).结论 二甲双胍可显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成,其机制可能与调控Akt/FoxOl信号通路的磷酸化水平有关.     

内皮素对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的实验研究

目的：探讨内皮素（ET）在瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成中的作用及一氧化氮（NO）、粉防已碱（Tet）的拮抗效应。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，以^3H-TdR掺入法测定细胞增殖；以^3H-脯氨酸掺入量判断细胞胶原合成。结果：ET呈浓度依赖性促进瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成，随着ET浓度（2．5－100ng/ml）的增加，^3H-TdR掺入值较对照组分别增加了1．8、4．0和4．9倍；^3H－脯氨酸掺入值较对照组分别增加了1．1、3．1和3．8倍（P＜0．01）。用NO供体亚硝基乙酰青霉胺（S-nitroso-N-acetyl penicillamine,SNAP)50μg/ml单独处理成纤维细胞，对^3H-TdR掺入值无明显影响（与对照组相比，P＞0．05），但对^3H-脯氨酸掺入值有下调作用；SNAP可拮抗ET－1（25ng/ml）刺激细胞增殖作用（抑制率为22．89％，P＜0．05）；对ET－1的促胶原合成作用无明显影响（P＞0．05）。Tet在不抑制细胞DNA合成的药物浓度（3μg/ml）即可明显减少瘢痕成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入值，并能显著降低由ET介导的瘢痕成纤维细胞^3H-TdR掺入值（抑制率为33．21％，P＜0．01）。结论：ET对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成具有显著促进作用，此效应可部分被SNAP、Tet所阻抗。     

没药提取物对人成纤维细胞增殖与胶原mRNA表达影响的实验研究

目的 观察没药提取物对人皮肤Fb生物学特性的影响,探讨其促进创面愈合的可能机制. 方法 从人正常包皮组织中分离并培养Fb,取第3～5代细胞用于实验.(1)将Fb接种至96孔板,按随机数字表法分为对照组,1×10-4、1 ×10-3、1×10-2、1 ×10-1、1、10、1×102 g/L没药水提取物组以及上述7种浓度的没药醇提取物组.对照组用含体积分数0.25％小牛血清的DMEM培养液(简称低浓度血清培养液)培养,各浓度没药水及没药醇提取物组分别用含相应终浓度2种没药提取物的低浓度血清培养液培养.培养48 h,用倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定各组Fb增殖活性(以吸光度值表示).(2)将Fb分别接种于培养瓶和培养皿中,均按随机数字表法分为2组:1 g/L没药水提取物组,用含终浓度1 g/L没药水提取物的低浓度血清培养液培养;对照组,采用低浓度血清培养液培养.培养72 h,分别采用流式细胞仪、实时荧光定量PCR法检测Fb周期与Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达.对数据进行LSD-t检验. 结果 (1)各组细胞均呈长梭形生长,1 g/L没药水提取物组细胞融合较对照组更显著.1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10 g/L没药水提取物组Fb吸光度值分别为0.378±0.032、0.402±0.007、0.390±0.038、0.453±0.036、0.390±0.037,均高于对照组的0.332±0.044,t值分别为2.24、2.93、2.69、5.73、2.71,P值均小于0.05.1×10-4、1×102 g/L没药水提取物组吸光度值分别为0.312±0.048、0.154±0.009,前者与对照组比较,差异无统计学意义(t=2.84,P＞0.05);后者显著低于对照组(t =7.17,P＜0.05).1×10-3、1 ×10-1、1、10、1×102 g/L没药醇提取物组Fb吸光度值显著低于对照组(t值为2.30～24.79,P值均小于0.05).(2)1 g/L没药水提取物组G0/G1期细胞百分比为(74.3±6.3)％,明显少于对照组的(82.2±7.9)％,t=6.77,P＜0.05;S期及G2/M期细胞百分比分别为(16.6±3.4)％、(9.1±1.6)％,明显多于对照组的(13.3±2.3)％、(4.5±0.8)％,t值分别为7.53、6.34,P值均小于0.051 g/L没药水提取物组Fb中Ⅰ型胶原mRNA相对表达量(0.89±0.08)与对照组(1.00±0.06)比较,差异无统计学意义(t =1.17,P＞0.05);Ⅲ型胶原mRNA相对表达量(1.38±0.12)显著高于对照组(1.00±0.05,t=3.81,P＜0.01). 结论 没药水提取物能显著促进Fb增殖,加快Fb细胞周期进程,上调Fb中Ⅲ型胶原mRNA表达,可能与其促进创面愈合的机制相关.     

不同程度缺氧对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨不同程度缺氧对瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法取体外培养的皮肤瘢痕成纤维细胞,分别在20%、10%、5%和1.5%四种氧浓度条件下培养24 h后,进行细胞计数、PCNA免疫组织化学检测.结果随着氧浓度的降低,皮肤瘢痕成纤维细胞数目逐渐增加,PCNA的表达强度逐渐增强.结论缺氧可促进皮肤瘢痕成纤维细胞增殖,减轻缺氧可能有助于预防瘢痕增生.     

不同程度缺氧对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨不同程度缺氧对瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法取体外培养的皮肤瘢痕成纤维细胞,分别在20%、10%、5%和1.5%四种氧浓度条件下培养24h后,进行细胞计数、PCNA免疫组织化学检测。结果随着氧浓度的降低,皮肤瘢痕成纤维细胞数目逐渐增加,PCNA的表达强度逐渐增强。结论缺氧可促进皮肤瘢痕成纤维细胞增殖,减轻缺氧可能有助于预防瘢痕增生。     

体外持续培养对瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的探讨人瘢痕成纤维细胞在体外持续培养时,其胶原合成能力的变化。方法体外持续培养人瘢痕成纤维细胞,检测不同代次细胞的大体形态、羟脯氨酸含量及超微结构的变化,并对比分析。结果第1、6、12、18代瘢痕成纤维细胞的羟脯氨酸(HPr)含量分别为(0.1460±0.0066)、(0.1020±0.0095)、(0.0700±0.0061)、(0.0540±0.0035)mg/L。随着体外培养细胞代次的增多,HPr呈下降趋势,并有相应的超微结构的变化。结论人瘢痕成纤维细胞在体外持续培养时,胶原合成能力逐渐下降,可能与其局部微环境的刺激因子有直接关系。第1～6代为最适实验细胞。     

Effects of tamoxifen on normal human dermal fibroblasts

OBJECTIVE: To evaluate the effects of tamoxifen on the growth and autocrine growth factor production of human dermal fibroblasts from the face. METHODS: In vitro study of normal adult dermal fibroblast cells developed from surgical specimens in a serum-free model. Cell cultures were exposed to 5-, 8-, 12-, 16-, and 50-microg/mL concentrations of tamoxifen solution. Cell counts were performed, and the cell-free supernatants were collected at 0, 1, 3, 5, and 7 days after the initial exposure. Population doubling times were calculated, and supernatants were quantitatively assayed for basic fibroblast growth factor (bFGF), vascular endothelial growth factor (VEGF), and transforming growth factor (TGF) beta1. RESULTS: Tamoxifen appears to delay cellular proliferation rates in a dose-dependent manner up to a concentration of 12 microg/mL. Higher concentrations, approaching 50 microg/mL, appear to have a toxic effect on cell growth. The analysis of growth factor production revealed decreased levels of bFGF and VEGF but no change in the levels of TGF-beta1. CONCLUSIONS: The in vitro findings of delayed cell proliferation and decreased production of VEGF and bFGF in cells exposed to tamoxifen are consistent with previous in vivo reports of delayed wound healing but improved scar formation. The in vitro findings of growth factor modulation by tamoxifen provide cellular and molecular evidence supporting the clinical use of tamoxifen to ultimately improve scar formation.     

Laser light of low power density does not influence chemotaxis and collagen synthesis of human dermal fibroblasts

Since it has been thought that low energy laser has important biological effects in modulating connective tissue metabolism, this laser was utilized in the treatment of wound-healing defects and fibrotic diseases as well. We report here on in vitro experiments which demonstrate that laser light in dosages between 0.05 and 32 J cm⁻² does not influence proliferation and protein synthesis of normal human dermal fibroblasts. There was also no effect on collagen synthesis and chemotaxis of these cells. In memoriam Dr. D. Haina, who died on 9 March 1989.