Trichostatin A Regulates hGCN5 Expression and Cell Cycle on Daudi Cells in vitro

The expression of human general control of amino acid synthesis protein 5 (hGCN5) in human Burkitt's lymphoma Daudi cells in vitro, effects of Trichostatin A (TSA) on cell proliferation and apoptosis and the molecular mechanism of TSA inhibiting proliferation of Daudi cells were investigated. The effects of TSA on the growth of Daudi cells were studied by 3-(4, 5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium (MTT) assay. The effect of TSA on the cell cycle of Daudi cells was assayed by a propidium iodide method. Immunochemistry and Western blot were used to detect the expression of hGCN5. The proliferation of Daudi cells was decreased in TSA-treated group with a 24 h IC50 value of 415.3979μg/L. TSA induced apoptosis of Daudi cells in a time- and dose-dependent manner. Treatment with TSA (200 and 400μg/L) for 24 h, the apoptosis rates of Daudi cells were (14.74±2.04) % and (17.63±1.25) %, respectively. The cell cycle was arrested in G0/G1 phase (50, 100μg/L) and in G2/M phase (200μg/L) by treatment with TSA for 24 h. The expression of hGCN5 protein in Daudi cells was increased in 24 h TSA-treated group by immu-nochemistry and Western blot (P<0.05). It was suggested that TSA as HDACIs could increase the expression of hGCN5 in Daudi cells, and might play an important role in regulating the proliferation and apoptosis of B-NHL cell line Daudi cells.     

5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人胃癌细胞系MGC-803经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）作用后细胞增殖和凋亡变化。方法MTT比色法测定各组细胞的增殖情况,Annexin V染色法检测各组细胞凋亡率。结果单独应用5-Aza-CdR或TSA作用于胃癌细胞系MGC-803后,细胞增殖均受到抑制,生长抑制率分别为68.0%、65.8%;凋亡率分别为（42.31±4.53）%、（39.30±5.37）%,而联合用药组细胞生长抑制率明显增加,达到86.3%,细胞凋亡率为（68.20±7.14）%。结论与单用5-Aza-CdR或TSA相比,联合应用两种药物更能显著的诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,这可能为胃癌的生物治疗提供一种新的思路。     

曲古抑菌素A对甲状腺未分化癌DRO细胞株生长及其端粒酶逆转录酶mRNA表达影响的研究

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对甲状腺未分化癌DRO细胞株的体外作用,探讨TSA对甲状腺未分化癌的作用机制。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测TSA对DRO细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测经TSA1.0μmol/L作用24、48、72h后细胞周期和凋亡率的变化;RT-PCR方法观察经TSA1.0μmol/L作用48h后细胞内hTERT和p21基因的表达情况。结果:在0.1～1.5μmol/LTSA作用下,DRO细胞生长明显受抑制;倒置相差显微镜检测DRO细胞经TSA处理后形态发生明显变化;1.0μmol/LTSA作用于DRO细胞,48h后出现明显的细胞周期阻滞;hTERT经TSA诱导后表达明显下调,呈量效关系。结论:一定浓度的TSA可以抑制甲状腺未分化癌细胞株DRO增殖。其作用机制可能与下调hTERT表达有关。     

曲古抑菌素A上调肿瘤细胞柯萨奇-腺病毒受体表达而抑制其侵袭力的体外研究

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI）曲古抑菌素A（TSA）抑制肿瘤细胞侵袭力是否通过上调肿瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体（CAR）的表达而实现的。方法：在TSA作用124细胞和MCF-7细胞后，分别检测CAR mRNA和蛋白水平的表达；同时采用体外黏附实验和Boyden小室体外侵袭实验，以评价细胞黏附和侵袭力的改变。结果：TSA作用72h后，肿瘤细胞CARmRNA和蛋白表达水平明显上调，细胞间同型黏附增强，侵袭力下降。且这一过程可被CAR特异性抗体部分逆转。结论：TSA可以通过上调CAR而使肿瘤细胞同型黏附增加，侵袭力下降。     

曲古霉素A体外诱导膀胱癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的机制探讨

目的:观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古霉素A(TSA)对体外培养膀胱癌细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L)的TSA对人膀胱癌T24细胞生长的影响.透射电镜观察TSA(0.4 μmol/L) 诱导后膀胱癌细胞的形态学变化;流式细胞术检测处理后膀胱癌细胞周期分布及凋亡率的变化;Western 印迹法检测处理后膀胱癌细胞组蛋白乙酰化水平的变化;FQ-PCR检测处理后膀胱癌细胞p21CIP1/WAF1、cyclin A和cyclin E mRNA的表达.结果:TSA体外能明显抑制T24细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性.TSA(0.4 μmol/L)诱导后,透射电镜下可见大量具有凋亡形态特征的T24细胞;流式细胞术检测示细胞阻滞于G0/G1期,并且出现典型的亚二倍体(Sub-G1)峰;TSA可明显提高组蛋白乙酰化水平,并诱导p21CIP1/WAF1的mRNA表达和抑制cyclin A的mRNA表达,而对cyclin E无明显作用.结论:TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗膀胱癌作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及相关基因(p21CIP1/WAF1、cyclin A)表达的调控.     

曲古菌素A对Molt-4细胞细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:本研究旨在探讨曲古菌素A(TSA)对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用及TSA高效低毒的抗肿瘤特性。方法:应用细胞培养、PI单标流式细胞术和DNA Ladder等方法初步探讨TSA对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用。结果:在一定浓度范围内,TSA能以浓度依赖性诱导Molt-4细胞S期及G2期阻滞。TSA以浓度依赖性方式诱导Molt-4细胞凋亡,随着TSA的浓度的升高,细胞凋亡率也显著增高。TSA的各实验组的凋亡率和对照组的凋亡率相比均有显著性差异,P<0.01。经200 nmol/L的TSA处理后,Molt-4细胞凋亡率增高,且呈时间依赖性效应关系。TSA在显著诱导Molt-4细胞凋亡的浓度范围内对正常人外周血单个核细胞(NPBMNC)无明显的诱导凋亡作用。结论:TSA有明确的诱导Molt-4细胞周期阻滞和诱导Molt-4细胞凋亡的能力,并且这种作用呈浓度和时间依赖性,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系Molt-4生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一,与NPBMNC相比较,TSA能够选择性诱导Molt-4细胞凋亡。     

C5a对血管内皮细胞表达P-选择素的影响

中性粒细胞与血管内皮细胞间的粘附及跨内皮移行是炎症反应的关键环节 ,选择素等粘附分子在其中发挥着重要的作用。炎症局部产生的ＴＮＦ、凝血酶、激活的补体片段等多种因素都能上调粘附分子的表达 ,但Ｃ5ａ对Ｐ 选择素表达的影响尚不十分清楚 ,本实验在体外用不同浓度Ｃ5ａ与培养的人脐静脉内皮细胞用 ,测定Ｐ 选择素及中性粒细胞粘附率的动态变化 ,研究Ｃ5ａ对Ｐ 选择素表达和对中性粒细胞粘附的影响。1　材料与方法1.1　材料　　人脐静脉内皮细胞株ＥＣＶ30 4:本室冻存 ;重组人Ｃ5ａ[美国ｓｉｇｍａ公司 ] ;小鼠抗人Ｐ 选择素单克隆抗体…     

曲古菌素A对K562细胞中HDAC1表达的影响

目的研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC1)在多种肿瘤中高表达,曲古菌素A(trichostatin A,TSA)可以抑制肿瘤细胞的生长.该实验研究HDAC1在K562细胞的表达及TSA对其增殖的影响.方法50～400 nmol/L的TSA分别处理K562细胞8～48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)比色检测K562细胞的生长活性;应用流式细胞仪法观察细胞凋亡.RT-PCR和蛋白印迹法(western blot)方法检测K562细胞在24 h不同浓度(50～400 nmol/L)的条件下HDAC1的mRNA和蛋白的表达以及TSA对其作用.结果TSA可显著抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈时间及剂量依赖性.HDAC1的mRNA A值的半定量表达以及蛋白表达明显增强(P＜0.05),但随着浓度的增加而表达下调.结论TSA对K562细胞具有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,抑制HDAC1的表达,可能是其重要作用机制之一.     

曲古抑菌素A上调CD4T细胞叉头框蛋白3基因表达

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预对正常人CD4+T细胞FOXP3表达的影响.方法 采用密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞,免疫磁珠分离CD4+T细胞,分别给予TSA 处理培养相应时间后收集细胞,RT-PCR法分析TSA干预对正常CD4+T细胞FOXP3 mRNA表达影响.结果 100 nmol/L TSA干预48h可上调正常CD4+T细胞FOXP3表达.结论 TSA干预能上调CD4+T细胞FOXP3表达.     

白藜芦醇对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5mRNA表达的影响

目的:探讨白藜芦醇(RES)对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5mRNA表达的影响。方法:取对数生长期的786-0细胞,用含25μmol/LRES的培养基(实验组)培养24、48及72h后,应用流式细胞术检测786-0细胞周期和凋亡情况,采用原位杂交技术检测细胞中PDCD5mRNA的表达情况,均以不含RES的培养基作为空白对照。结果:25μmol/LRES作用24h后,实验组786-0细胞G1期及G2期比例显著下降,S期比例明显升高。经25μmol/LRES处理24、48及72h后,实验组786-0细胞凋亡细胞数(F组间=869.853,P<0.001)和PDCD5mR-NA的表达均高于空白对照组(F时间=10.067,P<0.001;F组间=649.629,P<0.001),差异有统计学意义。结论:RES可上调人肾细胞癌786-0细胞PDCD5mRNA的表达,使786-0细胞阻滞在S期而诱导细胞凋亡。     

低氧对大鼠心肌细胞蛋白激酶A活性与SCN5A基因表达的影响

目的 研究低氧对培养大鼠心肌细胞蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)与SCN5A基因表达的影响.方法 将原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞随机分为5组:对照组、低氧(5%CO2+2%O2+93%N2)培养1h组、6h组、12h组和24h组,利用非放射性方法测定各组细胞内PKA活性,利用RT-PCR和Western blot等方法检测各组SCN5A基因表达情况.结果 各组PKA活性:低氧1h组和低氧6 h组高于正常组(P<0.01),低氧12 h组和24 h组低于正常组(P<0.01).SCN5A mRNA相对表达量与蛋白质表达量:低氧1h组和低氧6h组显著高于对照组;低氧12 h组和低氧24 h组显著低于对照组.结论 低氧对培养细胞内PKA活性与SCN5A基因的表达有一定调节作用,且对PKA的作用早于对SCN5A基因表达的作用,PKA可能参与影响大鼠心肌细胞缺氧后SCN5A基因的表达.     

白藜芦醇对淋巴瘤BJAB细胞体外增殖及细胞周期作用的研究

目的：研究白藜芦醇对BJAB细胞的体外增殖抑制作用,探讨其对细胞周期的影响。方法：分别应用浓度为5、10、25、50、75、100μg/mL的白藜芦醇作用于BJAB细胞,在24、48、72 h用MTT法检测细胞抑制率,应用流式细胞术分析白藜芦醇对BJAB细胞周期的影响。结果：白藜芦醇可明显抑制BJAB细胞体外增殖,其抑制细胞增殖的效果与药物浓度及作用时间呈正相关,其作用后的BJAB细胞主要表现为G1期阻滞,S、G2期细胞减少。结论：白藜芦醇对BJAB细胞的体外增殖具有明显的抑制作用,其干扰BJAB细胞的细胞周期,产生G1期阻滞,从而抑制细胞增殖。     

曲古抑菌素A预处理对小鼠脑缺血再灌注损伤皮质炎症反应和凋亡的影响*

目的 探讨曲古抑菌素A预处理在小鼠脑缺血再灌注损伤中对大脑皮质炎症反应和凋亡的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为3组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、曲古抑菌素A预处理组（预处理组）,每组10只。采用颈部切口大脑中动脉线栓（MCAO）法缺血1?h,再灌注24?h复制脑缺血再灌注模型,预处理组在复制脑缺血再灌注模型前连续3?d腹腔注射曲古抑菌素A 5?mg/kg。取脑皮质组织,光学显微镜下观察病理学结果,ELISA检测TNF-α、IL-1β,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3,TUNEL检测细胞凋亡。结果 3组TNF-α、IL-1β、Bax、Bcl-2及Caspase-3比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。与S组比较,IR组病理学损伤严重,TNF-α、IL-1β、Bax、Caspase-3阳性表达水平升高,Bcl-2降低（P?<0.05）;与IR组比较,预处理组病理学损伤减轻,TNF-α、IL-1β、Bax、Caspase-3阳性表达水平降低,Bcl-2升高（P?<0.05）。结论 曲古抑菌素A预处理能抑制炎症因子、凋亡因子的表达及减少细胞凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

不同发展阶段黑素瘤细胞中Wnt5A和Wntll基因表达的动态变化

目的:研究Wnt/Ca2 通路中WntSA,Wntll基因在不同发展阶段的黑素瘤细胞中的表达水平.方法:运用RTPCR法,检测正常黑素细胞和6种黑素瘤细胞中Wnt5A和Wntll基因表达水平.结果:在正常黑素细胞和不同的黑素瘤细胞中,WntSA和Wntll基因的表达均表现出动态变化的特征.WntSA和Wntll水平在正常黑素细胞中表达很低,而在黑素瘤细胞中有不同程度的升高.另外,分别来自表面生长阶段、结节状生长阶段和黑色素瘤淋巴结转移的WM793B,451Lu和A2058细胞系中,WntSA和Wntll基因表达水平逐渐下降,甚至在A2058细胞系中,两种基因的表达均低于正常黑素细胞.结论:在黑素瘤的不同发展阶段,WntSA和Wntll基因表达的动态变化使非经典的Wnt/Ca2 通路激活程度不同.     

曲古菌素A对去乙酰化酶2在子宫内膜癌细胞株HEC-1B中表达的影响

目的研究曲古菌素A（TSA）对子宫内膜癌细胞株HEC-1B中去乙酰化酶2（HDAC2）和p53表达的影响,及TSA对HEC-1B增殖的抑制作用,探讨TSA诱导HEC-1B细胞增殖抑制的机制。方法用不同浓度的TSA（100、200、400nmol／L）分组培养HEC-1B细胞（0、24、48、72h）,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度、不同时间的TSA作用后子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖率。应用Western Blot以及RT-PCR方法检测HDAC2和p53的表达水平,研究TSA对其表达的影响。结果TSA对HEC-IB细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈时间依赖性（P〈0．01）。HDAC2在该细胞中的表达随TSA的剂量和时间呈减弱趋势,而p53的表达呈升高趋势。结论TSA具有去乙酰化酶抑制剂作用,抑制HDAC2的表达并促进肿瘤抑制因子p53的活化与表达,能够抑制子宫内膜癌细胞的增殖。     

小鼠PMX-IRES-Wnt5a逆转录病毒载体的构建及在3T3细胞中的表达

目的构建小鼠Wnt-5a逆转录病毒载体,观察Wnt-5a在3T3细胞的表达情况。方法采用同源重组技术将小鼠Wnt-5a插入逆转录病毒载体PMX-IRES-GFP,构建PMX-IRES-Wnt5a重组质粒,利用脂质体转染3T3细胞,RT-PCR检测Wnt-5a mRNA表达情况,Western-Bloting检测Wnt-5a蛋白表达情况。结果经限制性内切酶证实成功构建了携带Wnt-5a基因的逆转录病毒载体PMX-IRES-Wnt5a,RT-PCR检测结果显示Wnt-5a在转染的3T3细胞的表达明显增高。结论成功构建Wnt-5a逆转录病毒载体,并能在3T3细胞成功表达Wnt-5a。     

双酚A及玉米赤霉烯酮对神经母细胞瘤细胞周期蛋白表达的影响

目的 探讨两种环境内分泌干扰物双酚A(bisphenol A,BPA)与玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞细胞周期素CyclinD1、CDK4、p21表达的影响.方法 SK-N-SH细胞经培养扩增后分为7组:组1,无干预(对照组);组2,加17β-雌二醇(E2);组3,加...     

Effects of Trichostatin A on HDAC8 Expression, Proliferation and Cell Cycle of Molt-4 Cells

The effects of Trichostatin A (TSA) on histone deacetylase 8 (HDAC8) expression, proliferation and cell cycle arrest in T-lymphoblastic leukemia cell line Molt-4 cells in vitro were investigated. The effect of TSA on the growth of Molt-4 cells was studied by MTT assay. Flow cytometry was used to examine the cell cycle. The expression of HDAC8 was detected by using immunocyto-chemistry and Western blot. The results showed that proliferation of Molt-4 cells was inhibited in TSA-treated group in a time- and dose-dependent manner. The IC50 of TSA exposures for 24 h and 36 h were 254.3236 and 199.257μg/L respectively. The cell cycle analysis revealed that Molt-4 was mostly in G0/G1 phase, and after treatment with TSA from 50 to 400μg/L for 24 h, the percents of G0/G1 cells were decreased and cells were arrested in G2/M phase. Treatment of TSA for 24 h could significantly inhibit the expression of HDAC8 protein in Molt-4 cells (P<0.01). It was concluded that TSA could decrease the expression of HD AC8 in Molt-4 cells, which contributed to the inhibition of proliferation and induction of cell cycle arrest in Molt-4 cells.     

叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞Hes5基因表达的影响

目的：探讨叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞肌s5mRNA、蛋白表达的影响。方法：分离培养24h新生SD大鼠噙神经干细胞：将细胞分为4组：正常对照组、缺氧模型组、缺氧叶酸添加组、缺氧叶酸缺乏组;于增殖第3天将除正常对照组外的其他3组细胞进行缺氧培养,6h后取出,继续培养至第6天收集细胞;用台盼蓝染色计‘数缺氧损伤后的各组细胞密度;RT—PCR方法检测Hes5mRNA表达;Westernblot方法检测Hes5蛋白表达。结果：缺氧叶酸添加组细胞密度高于其他各组．缺氧叶酸缺乏组最低,差异均有统计学意义（P〈0．05）;RT—PCR结果显示,缺氧叶酸添加组的Hes5mRNA表达量高于其余3组,缺氧叶酸缺乏组表达最少,各组间差异有统计学意义（P〈0．05）;Westernblot检测表明．缺氧叶酸添加组Hes5蛋白表达高于其他各组,缺氧叶酸缺乏组Hes5蛋白表达量最低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：体外神经干细胞缺氧损伤造模成功;叶酸对缺氧损伤的神经干细胞增殖有促进作用,可为预防和治疗脑缺血缺氧损伤提供依据。     

生长停滞特异性转录本5在乳腺癌中低表达并抑制上皮细胞-间充质转化

目的 探讨生长停滞特异性转录本5(lncRNA-GAS5)在乳腺癌中发展和上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织(n=36)、乳腺癌MCF-7亲本和耐药细胞中lncRNA-GAS5的表达,并分析GAS5表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移相关性;qRT-PCR法、Western blot和免疫组化法检测细胞周期和EMT相关蛋白的表达;迁移、趋化和黏附分离实验检测细胞生物学活性;通过光学显微镜观察细胞的形态学变化;以耐药细胞株构建裸鼠乳腺癌模型,体内探讨过表达GAS5对紫杉醇抗乳腺癌作用的影响.结果 LncRNA GAS5转录本水平相对于癌旁组织是显著降低的(P<0.05),GAS5低表达与乳腺癌TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05);耐药细胞株中GAS5表达下调(P<0.05),GAS5与P21表达正相关,而与CDK6表达呈负相关;体外干扰GAS5促进乳腺癌亲本细胞株发生EMT表型改变和侵袭能力增加,而过表达lncRNA GAS5可抑制乳腺癌耐药细胞株EMT表型和侵袭能力(P<0.05),并提高紫杉醇的药物敏感性.体内实验发现,过表达GAS5通过逆转EMT标志蛋白,提高紫杉醇抑制肿瘤生长和肺转移的作用.结论 LncRNA GAS5低表达可能通过诱导EMT促进乳腺癌的肺转移,可能是乳腺癌的一个潜在治疗靶点.