CD74小干扰RNA通过NF - κB途径诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察CD74小干扰RNA（siRNA）对胃癌细胞BGC - 823细胞生长增殖、DNA合成、细胞凋亡的影响,通过检测NF - κB信号通路家族成员P65及细胞凋亡关键调控因子Bcl - 2和Bax的表达变化,探讨CD74在胃癌发生发展中的可能机制。方法 选取胃癌细胞BGC - 823进行体外培养,选取对数生长期的细胞进行后续实验。实验分成3组:空白对照组（mock组）,转染对照组（control siRNA组）和CD74 siRNA转染组。western blotting检测细胞中CD74 siRNA对胃癌细胞BGC - 823中CD74的干涉效能;MTT法测定不同分组胃癌细胞BGC - 823的增殖率;BrdU掺入法测定BGC - 823细胞的DNA合成;流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡情况;western blotting检测细胞中P65蛋白、Bcl - 2和Bax的蛋白表达。结果 与2组对照组比较,CD74 siRNA组CD74蛋白表达降低,BGC823细胞的增殖和DNA合成明显受抑制,细胞凋亡比例增加,P65蛋白和Bcl - 2蛋白表达减少,Bax的表达增加。结论 下调CD74的表达抑制胃癌细胞BGC - 823增殖和DNA合成,诱导胃癌BGC823细胞发生凋亡,其作用机制可能与抑制NF - κB家族成员P56的表达,进而改变细胞凋亡关键调控因子Bcl - 2和Bax的表达相关。     

Fas及TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的表达

目的通过检测Fas蛋白及端粒结合蛋白TRF1、TRF2在亚硒酸钠诱导胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡过程中的表达,探讨硒抗癌的机制。方法用含不同浓度亚硒酸钠(0.5、2.5、5.0、.8.0μmol/L)的培养液分别培养人胃癌细胞株SGC-7901细胞24、48、72、96h后,用流式细胞仪检测Fas蛋白的表达;链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法和Western blot法检测TRF1、TRF2蛋白的表达。结果亚硒酸钠能提高Fas蛋白阳性表达细胞百分比(P<0.05)。免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可以降低TRF1蛋白和提高TRF2蛋白的灰度值(P<0.05)。Western blot检测结果显示:亚硒酸钠可以提高TRF1和降低TRF2蛋白表达强度(P<0.05)。它们都具有剂量依赖性。结论亚硒酸钠诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制可能跟上调Fas蛋白和TRF1蛋白表达,下调了TRF2蛋白表达有关。     

二甲双胍联合阿帕替尼对胃癌细胞的增殖抑制作用

目的 探讨二甲双胍联合阿帕替尼对胃癌BGC823细胞系的增殖抑制作用及其可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度二甲双胍（0～30 mmol/L)、不同浓度阿帕替尼（0～60 μmol/L）及两药联合应用处理BGC823细胞24、48、72 h的增殖抑制率,结晶紫染色法检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,western blot检测细胞中血管内皮生长因子信号通路及凋亡相关蛋白VEGFR2、PI3K、p - AKT、AKT、Bax、Bcl - 2表达水平。结果 二甲双胍和阿帕替尼单独处理BGC823后,细胞增殖抑制率均增加（P＜0.05）,联合用药产生协同作用（CI＜1）,二甲双胍和阿帕替尼单独及联合应用均能抑制细胞集落形成并使总凋亡比例增加（P＜0.05）。与对照组和单药组相比,联合用药可明显下调细胞中VEGFR2、PI3K、p - AKT、AKT、Bcl - 2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 二甲双胍联合阿帕替尼具有协同抑制胃癌BGC823细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制VEGF信号通路有关。     

亚硒酸钠对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及hTERT表达的影响

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞株生长、凋亡和hTERT表达的作用及相关机制。方法用含不同浓度亚硒酸钠(0、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24、48、72、96h,用相差显微镜观察亚硒酸钠对SGC-7901细胞形态的影响;MTT法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI双染法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞细胞的凋亡的影响;链霉亲和素-生物素-酶复合物(SABC)免疫细胞化学法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞hTERT蛋白表达的影响。结果 (1)MTT法结果显示:用亚硒酸钠培养SGC-7901细胞株24,48,72,96h后,随浓度增加,吸光度值逐渐降低,24h后当亚硒酸钠浓度大于2.5μmol/L时,与对照组比较其吸光度值均明显降低(P<0.01),48、96h后各浓度亚硒酸钠组与正常对照组比其吸光度值均明显降低(P<0.01)。随浓度的增加,亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长抑制率逐渐增加。(2)流式细胞仪检测结果显示:亚硒酸钠可促进SGC-7901细胞发生细胞凋亡。5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组比正常对照组凋亡率明显升高(P<0.01)。(3)免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可降低SGC-7901细胞中hTERT蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5、8μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),48h时0.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),72h时2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),96h时实验组与对照组比较MOD均明显降低(P<0.01)。结论亚硒酸钠能抑制SGC-7901细胞生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调hTERT表达有关。     

CTGF单克隆抗体对胃腺癌细胞BGC823生物学行为的影响

[目的]观察结缔组织生长因子(CTGF)单克隆抗体对人胃癌细胞BGC823生物学行为的影响。[方法]体外培养BGC823胃癌细胞,分别经不同浓度的CTGF单抗作用不同时间后,用MTT法测定细胞活力;通过黏附实验观察CTGF单抗对胃癌细胞黏附能力的影响;Boyden小室法观察BGC823细胞侵袭、迁移能力的改变。[结果]CTGF单抗抑制胃癌细胞的增殖,CTGF单抗处理组细胞的黏附、迁移和侵袭能力明显低于对照组(P﹤0.05)。[结论]抗体中和CTGF抑制胃癌细胞的增殖、明显减弱细胞的粘附、迁移和侵袭能力。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

Rapamycin抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MGC-803细胞影响

目的探讨rapamycin作用于胃癌细胞株MGC-803后对细胞生长影响及其作用机制。方法体外培养胃癌细胞株MGC-803,使用不同浓度rapamycin干预MGC-803细胞。采用MTT法检测细胞增殖变化;实时荧光定量PCR(QPCR)检测关键基因的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。结果与对照组相比,rapamycin对胃癌MGC-803细胞的增殖活性有明显的抑制作用,呈现出剂量依赖性(P0.05)。Rapamycin显著抑制PI3K、AKT、m TOR、4EBP、P70S6K基因的m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05);Rapamycin能抑制p-m TOR、p-P70S6K蛋白的表达;Rapamycin将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P0.05)。结论靶向m TOR抑制剂rapamycin可通过调控PI3K/AKT/m TOR信号通路进而调控胃癌细胞的生长。     

亚硒酸钠对人乳腺癌细胞MCF-7的作用研究

[目的]探讨不同浓度亚硒酸钠对人乳腺癌细胞MCF-7的作用.[方法]0、0.5、2、8、32μmol/LNa2SeO3处理人乳腺癌细胞24h后,用MTT比色法检测不同浓度亚硒酸钠对人乳腺癌细胞MCF-7的作用;DNA Ladder抽提试剂盒提取DNA后凝胶电泳法观察亚硒酸钠诱导人乳腺癌细胞凋亡的作用.[结果]随着亚硒酸钠浓度的增加,其对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用增强.不同浓度的亚硒酸钠作用MCF-7人乳腺癌细胞24h后,各组均未出现典型的DNA梯状条带.[结论]亚硒酸钠对人乳腺癌细胞增殖具有抑制作用;尚未发现其诱导凋亡的作用.     

缺氧条件下大豆异黄酮对胃癌细胞增殖和缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的:研究缺氧条件下大豆异黄酮(soy bean isoflavone,SI)对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制作用及可能机制。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造缺氧条件,实验分为正常对照、SI、缺氧对照和缺氧SI四组,用MTT法检测常氧和缺氧条件下药物效应。流式细胞仪分析各组细胞周期分布,透射电镜观察细胞超微形态的改变,免疫细胞化学法检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α和FAS的表达。结果:不同浓度SI在常氧和缺氧条件下都对人胃癌细胞株SGC-7901生长有抑制作用,并呈剂量-效应关系,细胞均滞留于G2/M期,缺氧条件下SI组抑制作用增加,细胞凋亡率增加。透射电镜观察常氧下SI处理后细胞出现凋亡,缺氧条件下出现凋亡和坏死。SI在不同氧条件下均上调Fas表达,并能下调因缺氧表达增加的HIF-1。结论:SI对人胃癌细胞生长有抑制作用,其机制可能通过阻抑细胞周期进程,上调FAS蛋白表达,从而诱导胃癌细胞凋亡而实现的。缺氧条件下SI抑制作用增强,抑制HIF-1α的表达可能是其重要机制。     

幽门螺杆菌cagA基因对胃癌细胞影响

目的观察幽门螺杆菌（Hp）野生株与cagA基因同源缺失突变株对人胃癌细胞株BGC823的细胞增殖和凋亡的影响,探讨与Hp毒力基因cagA相关的细胞水平的毒性效应。方法将幽门螺杆菌野生株与cagA基因缺失突变株与BGC823细胞共培养,分别在6,12,24和48 h观察细胞形态学变化,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果野生株和突变株Hp攻击BGC823细胞6 h,即可引起细胞的形态学变化,48 h时均可观察到细胞形态呈分散及蜂鸟样改变（细胞拉伸）。MTT法检测显示,野生株对BGC823细胞增殖具有抑制作用,而缺失cagA基因的突变株可刺激细胞增殖,且在24,48 h的2个时间点上均高于对照组和野生株组（P〈0.05）。流式细胞分析显示,在攻击BGC823细胞48 h后,野生株和突变株均可引起细胞凋亡,凋亡率高于对照组（P〈0.05）,2个实验组的凋亡率差异无统计学意义。结论Hp作用后细胞呈分散和蜂鸟样改变（伸长）并不是cagA基因特有的细胞学效应;cagA基因是Hp抑制细胞增值所必需的元素;cagA基因的有无对Hp致凋亡效应的影响不大,在Hp致细胞凋亡的效应中作用可能有限。     

大豆异黄酮诱导胃癌细胞凋亡作用研究

目的：体外实验探讨大豆异黄酮诱导胃癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法：采用MTT比色法测定大豆异黄酮对胃癌细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL染色法，定性、定量地研究大豆异黄酮与胃癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT－PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：大豆异黄酮对胃癌细胞有明显抑制作用，随大豆异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强；透射电镜可见胃癌细胞出现典型的凋亡细胞形态，如细胞核染色质致密浓缩，或聚集于核膜呈新月形小体；TUNEL染色法可染色阳性的胃癌细胞出现细胞核碎裂，核质固缩，细胞膜突出形成质膜小泡等凋亡细胞形态学变化。免疫组织化学和RT－PCR法发现大豆异黄酮下调bcl-2的表达，上调bax的表达。结论：诱导胃癌细胞发生凋亡是大豆异黄酮抗胃癌作用的机制之一，大豆异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌细胞发生凋亡。     

叶酸对体外人胃腺癌细胞SGC-7901生长的作用

目的 以体外培养的人胃癌细胞株SGC—7901为材料，观察叶酸的抑癌防癌作用。方法 采用生长曲线法、MTT法观察叶酸对细胞的增殖和功能的影响；采用FCM进行细胞周期分析，观察叶酸对细胞凋亡的影响。结果 在叶酸浓度为375，750和1875nmol／L时对人胃癌细胞株的增殖和功能有抑制作用，浓度为375nmol／L时引起的凋亡率可达33．1％。结论 叶酸对人胚肌腱细胞无抑制作用，表明叶酸对正常人体细胞无不良影响而对癌细胞有抑制作用。     

染料木黄酮对人胃癌细胞生长抑制作用研究

目的 :　探讨染料木黄酮对体外培养的人胃癌 SGC- 790 1细胞的抑制和诱导细胞发生凋亡的作用。方法 :　用 MTT法、集落形成实验、透射电镜及流式细胞仪的方法 ,观察染料木黄酮处理 SGC- 790 1后细胞生长和细胞凋亡。结果 :　 (1 ) MTT法和集落形成实验证实染料木黄酮对 SGC- 790 1细胞生长有抑制作用 ,抑制作用呈剂量 -效应关系 ;　 (2 )透射电镜可见 SGC- 790 1细胞在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂等凋亡细胞的形态学改变 ;　 (3)流式细胞仪检测到凋亡峰。结论 :　染料木黄酮对 SGC- 790 1细胞有抑制作用 ,而这一作用的机制之一是通过诱导人胃癌细胞发生凋亡 ,即诱导肿瘤细胞发生凋亡是染料木黄酮抑制肿瘤细胞生长的重要机制之一     

舒林酸抑制结肠癌细胞株增殖及其转移机制的研究

目的 研究非选择性COX抑制荆舒林酸对结肠癌细胞株HT-29生长的影响及其参与引起细胞死亡的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制,激光共聚焦显微镜(LSM)及荧光显微镜观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 MTT显示舒林酸能呈剂量和浓度依赖性抑制HT-29的增殖.TUNEL染色荧光显微镜下观察凋亡细胞呈棕褐色,AnnexinV/PI染色后LSM观察凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色,FCM显示此药促进细胞的凋亡,使处于G0/G1期的细胞比例显著降低.结论 舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长,促进其凋亡,其机制可能与其阻止细胞周期的进展有关.     

阿司匹林联合奥希替尼对H1975细胞的影响

目的 探讨阿司匹林联合表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂（Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase Inhibitor ,EGFR - TKI）奥希替尼（AZD9291）对非小细胞肺癌H1975细胞株增殖的抑制作用和凋亡的影响。方法 MTT法检测阿司匹林和AZD9291单独及联合作用于肺癌细胞系H1975的吸光度值,计算细胞的增殖抑制率;荧光倒置显微镜观察Hoechst33342染色的细胞核的形态学改变;流式细胞技术检测阿司匹林和AZD9291单独及联合对H1975细胞凋亡的影响,计算细胞的凋亡率。结果 MTT结果显示阿司匹林和AZD9291单独及联合应用对H1975细胞均有抑制作用,并呈剂量依赖性。实验组与对照组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）,联合用药组对细胞的增殖抑制具有协同作用（Q＞1.15）;荧光倒置显微镜下观察发现联合用药组镜下可见大量凋亡小体,细胞核呈致密浓染;流式细胞仪检测发现阿司匹林和AZD9291单独及联合用药均能诱导细胞凋亡,且联合用药具有协同作用。结论 阿司匹林联合AZD9291对非小细胞肺癌H1975细胞株的增殖具有协同抑制作用并可诱导细胞凋亡,为临床联合用药及防治非小细胞肺癌的有效方案提供理论依据。     

亚硒酸钠与顺铂对人体T细胞增殖动力学影响

目的 探讨顺铂与亚硒酸钠对人体T淋巴细胞增殖动力学的影响及亚硒酸钠对顺铂抑制T细胞增殖可能的拮抗作用。方法 人体外周血淋巴细胞培养24h时加入0．05，0．20和0．50mg／L顺铂单独或与亚硒酸钠联合处理48h，0．05mg／L剂量的亚硒酸钠分别在开始细胞培养时加入或与顺铂同时加入；用Brdu掺入新复制的DNA和染色单体，分化染色后检测细胞周期构成和细胞周期时间。结果 3个剂量的顺铂均显阻滞细胞周期进程。延长细胞周期时间；亚硒酸钠具有促进细胞增殖、缩短细胞周期时间的效应。顺铂与亚硒酸钠共同处理细胞，预加和与顺铂同时加入亚硒酸钠均可拮抗0．05mg／L顺铂阻滞细胞周期进程和延长细胞周期时间的作用；顺铂剂量为0．20mg／L时，预加亚硒酸钠可拮抗顺铂对细胞增殖动力学的影响，同时加入则不能；顺铂剂量为0．50mg／L时，亚硒酸钠丧失这些效应。结论 0．05mg/L亚硒酸钠可促进人体T淋巴细胞周期进程，缩短细胞周期时间，并可拮抗低剂量顺铂对细胞增殖动力学的影响。细胞培养开始时加入效果更佳。