重组人血管内皮抑制素对小鼠胃癌c-Myc,bFGF表达的影响

目的 通过构建荷胃癌小鼠模型研究重组人血管内皮抑制素对癌基因c-Myc和成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及可能机制.方法 20只小鼠皮下注射MFC小鼠前胃癌细胞从而构建小鼠胃癌移植瘤模型,后随机分成两组,每组10只,观察组腹腔注射0.8mg/kg重组人血管内皮抑素,对照组腹腔注射等量生理盐水.每天观察小鼠的一般情况,每3天测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线并对两实验组肿瘤体积进行比较;应用RT-PCR、Western bolt及免疫组织化学法检测两组小鼠肿瘤组织中c-Myc和bFGF的表达,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织微血管密度(MVD)的表达,并通过Spearman分析c-Myc和bFGF两者的相关性.结果 在用药的过程中,对照组小鼠随着移植瘤结节的增大而发生行为明显改变,但观察组小鼠精神、反应、活动及进食饮水均如初,未见明显不良反应.治疗后第9d开始,观察组小鼠移植瘤体积明显小于对照组(P＜0.05),在第21 d最明显(P＜0.01).RT-PCR检测显示e-Myc,bFGF mRNA相对表达量明显低于对照组(P＜0.05);Western blot检测显也显示观察组c-Myc,bFGF蛋白的表达量明显低于对照组(P＜0.05);免疫组织化学检测显示c-Myc,bFGF阳性细胞数均明显低于对照组(P＜0.05),c-Myc,bFGF平均灰度值明显高于对照组(P＜0.05);对照组平均MVD为9.2±1.3,观察组为2.9±1.0,两组之间差异亦具有统计学差异(P＜0.05).且Spearman分析得出小鼠胃移植瘤中e-Myc和bFGF mRNA存在正相关(r=0.853,P=0.000).结论 重组人血管内皮抑制素通过抑制胃癌组织c-Myc,bFGF基因表达和血管生成.     

黄芪、党参提取物对小鼠Matrigel种植体血管生成的影响

目的:研究黄芪、党参提取物对血管生成的影响,为其抗肿瘤应用提供实验依据.方法:采用b-FGF诱导小鼠腹壁Matrigel种植体方法进行血管生成实验,Matrigel 与b-FGF、肝素混合后植入C57BL/6小鼠腹壁正中区域皮下,5 d后取出,分别测量Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积,以此反应微血管的生成状况.在Matrigel种植前3d,给予不同剂量的实验药物,连用8 d进行抑制实验.结果:低剂量(≤50%,V/V)黄芪、党参提取物,能促进Matrigel种植体内的血管生成,而高剂量(≥60%,V/V)则表现出抑制现象.这种促进和抑制作用具有一定的剂量-效应关系.结论:不同剂量的黄芪、党参提取物对微血管的生成具有不同的影响,表现出中医药特有的双向调节作用.临床使用时应根据不同的目的,选择不同的药物剂量.     

红花多糖对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长及转移的影响

目的研究红花多糖（SPS）对T739小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用和对肺转移的影响,并初步探讨其作用机制。方法皮下移植Lewis肺癌细胞建立小鼠移植瘤肺转移模型,随机分为4组：对照组、SPS高、中、低剂量组,每日灌胃1次,共28次。测量各组移植瘤体积和重量,镜下观察肺转移灶数目,应用MTT法检测SPS对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用以及对T细胞增殖能力的影响。结果体外SPS对肺癌细胞增殖无抑制作用。体内SPS可促进T淋巴细胞增殖,抑制瘤细胞生长及转移,SPS各剂量组移植瘤体积、重量及肺转移灶数目与对照组比较差异显著有统计学意义（P〈0．05）。结论红花多糖具有抑制肿瘤生长及转移的作用,其作用机制可能与提高自身免疫力有关。     

CXC趋化因子配体10联合顺铂抑制LL/2肿瘤肺转移的实验研究

目的 研究CXC趋化因子配体10(CXCL10)联合顺铂对荷瘤小鼠LL/2肿瘤肺转移的治疗效果.方法小鼠Lewis肺癌LL/2肿瘤模型建立在C57BL/6小鼠上.实验小鼠随机分4组:CXCL10 顺铂组;CXCL10组;顺铂组;PBS对照组.CXCL10按25 μg/(kg·d)使用,皮下注射,连用30 d.顺铂采用腹腔内注射[5 mg/(kg·week)],于CXCL10治疗的第14、21天使用,连用2个周期.观察肿瘤体积与小鼠生存时间,观察各组小鼠肺表面的肿瘤转移结节数.结果 CXCL10治疗明显抑制了Lewis肺癌的肺转移,肺表面的肿瘤结节数少于对照组(P＜0.05).联合治疗组表现较强的抗肿瘤疗效,其肿瘤生长速度减慢,治疗效果(P＜0.01)优于顺铂或者CXCL10组(P＜0.05).结论 CXC趋化因子配体10联合顺铂更有效地抑制LL/2肿瘤肺转移和延长生存期.     

金水鲜胶囊联合放射治疗对 Lewis 肺癌小鼠肿瘤生长和血管内皮生长因子表达影响的研究简

目的观察金水鲜胶囊联合放射治疗（简称放疗）对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法建立Lewis肺癌移植瘤小鼠模型,随机分为6组,即空白对照组、金水鲜组、放疗组、先金水鲜后放疗组、先放疗后金水鲜组和同时金水鲜＋放疗组,每组6只。放疗剂量为2Gy,金水鲜制成悬液后灌胃给药。游标卡尺测量瘤体长短径变化。绘制肿瘤生长瞳线：采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）和免疫组织化学法检测瘤体VEGF的表达。结果肿瘤体积在接受处理后明显减小。与空白对照组相比,先金水鲜后放疗组、先放疗后金水鲜组和同时金水鲜＋放疗组肿瘤体积减小最为明显（分别为303.209mm^3±14.445mm^3,284.758mm^3±21.891mm^3,303.228mm^3±2.335mm^3）,差异有统计学意义（P〈0.05）。先金水鲜后放疗组、先放疗后金水鲜组和同时金水鲜＋放疗组与空白对照组或放疗组比较,VEGF表达阳性率降低（分别为12.97％±O.82％,15.13％±1.31％。13.62％±0.83％）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论金水鲜胶囊与放疗联用对Lewis肺癌小鼠有抑制肿瘤的作用.其机制可能是下调VEGF的表达。     

选择性环氧合酶-2抑制剂Celebrex对胰腺癌新生血管生成的影响

探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对裸鼠胰腺癌PC-3细胞移植瘤生长和肿瘤组织新生血管生成的影响,为Celebrex的临床应用提供依据.本文采用体外观测Celebrex对移植瘤生长的影响,并选用Ⅳ型胶原作为肿瘤微血管标记物,测定移植瘤中微血管密度(MVD).结果显示,治疗组移植瘤生长曲线较对照组明显低平,对照组移植瘤近似体积为0.438 cm3,治疗组为0.212 cm3(抑瘤率为51.6%,P＜0.05).对照组肿瘤组织MVD为63.87±13.67,治疗组32.25±12.99,两组间差异有非常显著性(P＜0.01).表明COX-2可能参与了肿瘤新生血管的生成,选择性COX-2抑制剂Celebrex则具有抑制肿瘤生长和对抗肿瘤新生血管生成的作用.     

复方紫杉醇注射液对 C57BL/6小鼠Lewis肺癌的作用研究

目的:研究复方紫杉醇注射液对C57BL/6小鼠Lewis肺癌的作用及其机制。方法:60只C57BL/6小鼠按体重随机分为5组,每组12只,移植皮下接种Lewis细胞。在接种后24小时,对照组给予生理盐水;实验组分别给予紫杉醇注射液大、小两种剂量,复方紫杉醇注射液大、小两种剂量,各组均腹腔注射,连续5天。停药后第6天脱颈处死动物,计算抑瘤率;用HE染色光镜观察细胞形态学的变化;用流式细胞仪(FCM)检测研究复方紫杉醇注射液诱导肿瘤细胞凋亡以及对肿瘤细胞周期的影响。结果:复方紫杉醇注射液大、小剂量组对荷瘤鼠Lewis肺癌有明显的抑制作用,且各剂量组均可诱导Lewis细胞凋亡,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);而对细胞周期的影响不太明显。结论:复方紫杉醇注射液对移植于C57BL/6小鼠的Lewis肺癌具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究

目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平。结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润。结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据。     

N-去硫酸肝素对胃癌碱性成纤维细胞生长因子基因表达和血管形成的影响

目的 研究N-去硫酸肝素对人胃癌组织原位移植NOD-SCID小鼠转移模型的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因表达、血管形成和肿瘤转移影响.方法 建立人胃癌组织原位移植NOD SCID小鼠胃癌转移模型.移植后一周,20只小鼠随机分成两组,分别静脉注射生理盐水(0.9%氯化钠组)与10 mg/kg N-去硫酸肝素(N-去硫酸肝素组),每周两次,共3周.第6周处死动物,观察肿瘤转移情况,免疫组织化学检测肿瘤组织微血管密度表达,荧光定量PCR检测肿瘤组织bFGF基因mR-NA表达.结果0.9%氯化钠溶液组10只小鼠9只有肿瘤转移,N-去硫酸肝素组10只小鼠只有2只转移,两组间差异有统计学意义(P《0.05).未发现出血等不良反应.0.9%氯化钠溶液组平均微血管密度为9.1士3.4,N-去硫酸肝素组为4.7±1.8,两组间差异有统计学意义(t=3.617,P《0.05).荧光定量PCR测定显示,N.去硫酸肝素组bFGF mRNA(2.60±0.56%)相对表达量较0.9%氯化钠溶液组(30.65±6.84%)低,两组差异有统计学意义(t=4.08,P《0.01).结论 N-去硫酸肝素通过抑制肿瘤组织bFGF基因表达和血管生成,抑制肿瘤转移.N-去硫酸肝素无明显出血等不良反应.     

IL-17D 调控肺脏NK 细胞募集及黄芪的促进作用

目的:探讨IL-17D 调控肺脏NK 细胞的募集机制及中药黄芪的促进作用。方法:采用尾静脉注射B16 黑色素瘤细胞建立小鼠肺肿瘤转移模型,分别经IL-17D 或黄芪处理后,应用流式细胞术和RT-PCR 法检测各组小鼠肺脏IL-17D 表达状态及其NK 细胞含量的变化。结果:小鼠肺转移瘤模型中IL-17D 表达水平及其肺脏NK 细胞含量急剧下降,经IL-17D 处理后可明显上调肺脏NK 细胞含量、降低肺脏肿瘤克隆形成。同时,CXCL9、IL-15 等与NK 募集和功能相关的细胞因子表达明显上调。中药黄芪可促进肺脏IL-17D 表达水平,同时上调肺脏NK 细胞含量,抑制肺脏肿瘤克隆的形成。结论:IL-17D 可调控NK 细胞的肺脏募集;中药黄芪可通过上调IL-17D 的表达,从而增强NK 的肺脏募集能力,促进肺脏抗肿瘤免疫效应。     

硫修饰脂质体包裹VEGF反义寡核苷酸对肺癌血管生成及转移的抑制作用

目的：探讨硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸对肺癌血管生成和转移的抑制作用。方法：将硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸（ASODN）、正义寡核苷酸（SODN）、错义寡核苷酸（MODN）加入培养的Lewis肺癌细胞中，采用免疫组织化学方法检测肺癌细胞中VEGF蛋白表达，观察经ODN处理的条件培养基对牛主动脉内皮细胞增殖的影响。另外，复制小鼠Lems肺癌模型40只，随机分为对照组、VEGFASODN组、VEGFSODN组及VEGFMSODN组，每组10只，接种肿瘤细胞24小时内，给予脂质体、VEGFASODN、VEGFSODN、VEGFMSODN皮下注射，每周2次，连续4周。检测皮下肿瘤的变化和肺转移率，并用免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管密度（MVD），超声检测肿瘤组织Ps、砌变化。结果：ASODN能够下调肺癌细胞中VEGF蛋白的表达，经ASODN处理的条件培养基能显著抑制牛主动脉内皮细胞的增殖。ASODN组小鼠肿瘤生长及肺转移受到显著抑制，MVD、PS、RI与其它各组相比有明显差异（P〈0．01）。结论：硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸能够显著抑制肺癌血管生成，进而抑制肿瘤生长及转移。     

人经血来源间充质干细胞对小鼠A549肺癌化疗效果的影响研究

目的：探讨人经血来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MenSCs)对小鼠A549肺癌化疗效果的影响。方法：取20只BALB/C裸小鼠建立肺癌模型,随机分为实验组和对照组各10只;对照组仅给予化疗干预,实验组则于化疗期间将某机构赠予的MenSCs经DiI荧光标记后于鼠尾静脉(3×105/只)进行注射。肺癌造模后14 d,两组小鼠均断颈椎处死并收集其肿瘤,比较两组小鼠瘤体体积、瘤体质量、抑瘤率及双肺湿重、肿瘤转移率、肿瘤转移个数、抑制转移率差异。结果：20只BALB/C裸小鼠均进行统计,无脱落报告。20只小鼠接瘤后第7天在右前肢腋下均可触及瘤体长出,两组小鼠瘤体生长曲线比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组小鼠的平均瘤体体积和平均瘤体质量比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);抑瘤率为8.4%。实验组小鼠双肺湿重、肿瘤转移率及肿瘤转移个数均显著低于对照组小鼠,差异有显著性(P<0.05);抑制转移率为71.8%。结论：MenSCs协同化疗在抑制小鼠肺癌肿瘤转移方面有一定效果。     

Inhibition of bFGF gene expression and tumor angiogenesis of orth otopic implantation of human gastric carcinoma by N-desulfated heparin]

OBJECTIVE: To investigate the effect of N-desulfated heparin on tumor metastasis, tumor angiogenesis and basic fibroblast growth factor(bFGF) gene expression of orthotopically implanted human gastric carcinoma in NOD-SCID mice. METHODS: Human gastric cancer SGC-7901 tissues were orthotopically implanted into the stomach of the NOD-SCID mice. Twenty mice were randomly divided into two groups which received either intravenous injection of 0.9% NaCl solution(0.9%NaCl solution group) or 10 mg/kg N-desulfated heparin (N-desulfated heparin group) twice a week for three weeks. Mice were sacrificed six weeks after tumor implantation. Tissues from stomach and other organs were obtained for histopathological evaluation. The intratumoral microvessel density (MVD) in tumor was evaluated immunohistochemically. Real time PCR was used to detect bFGF mRNA expression. RESULTS: The tumor metastasis rates were 9/10 in 0.9% NaCl solution group and 2/10 in N-desulfated heparin group(P<0.05).MVD was 9.1+/-3.4 in 0.9% NaCl solution group and 4.7+/-1.8 in N-desulfated heparin group (t=3.617,P<0.05). bFGF mRNA expression was lower in N-desulfated heparin group(2.60+/-0.56%)than that in 0.9% NaCl solution group(30.65+/-6.84%). CONCLUSION: N-desulfated heparin can inhibit the metastasis of gastric cancer through inhibiting tumor bFGF gene expression and tumor angiogenesis with no obvious anticoagulant activity.     

紫杉醇联合奥沙利铂对非小细胞肺癌模型小鼠的治疗作用

目的观察紫杉醇联合奥沙利铂对荷瘤裸鼠非小细胞肺癌治疗效果以及对PDCD5和XIAP表达的影响。方法制备裸鼠肺癌荷瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为空白组、0.9%氯化钠溶液组、奥沙利铂组、紫杉醇组和紫杉醇联合奥沙利铂组;q-PCR检测各组PDCD5和XIAP基因表达水平;Western bolt分析各组PDCD5和XIAP蛋白表达情况;对比分析各组肿瘤组织重量。结果紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5 mRNA表达水平最高(P0.01),XIAP mRNA表达水平最低(P0.01);紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5蛋白表达最高(P0.01),XIAP蛋白表达最低(P0.01);对比各分组肿瘤组织重量,紫杉醇联合奥沙利铂组肿瘤质量最小(P0.01)。结论紫杉醇联合奥沙利铂化疗能显著增加PDCD5表达和降低XIAP表达,能使已发生的非小细胞肺癌组织质量显著减少。     

Vascular endothelial growth factor immunoneutralization plus Paclitaxel markedly reduces tumor burden and ascites in athymic mouse model of ovarian cancer

Ovarian cancer is characterized by rapid growth of solid intraperitoneal tumors and production of large volumes of ascites. Our previous studies of intraperitoneal ovarian carcinoma in an athymic mouse model demonstrated that a monoclonal antibody (mAb) to human vascular endothelial growth factor (VEGF) could prevent ascites formation. Although ascites was almost completely inhibited, tumor burden was variably reduced. To develop more effective therapy, we assessed the combination of a human VEGF mAb plus paclitaxel. Four groups of female athymic nude mice were inoculated intraperitoneally with OVCAR3 cells. Two weeks after inoculation, one group was treated with a human VEGF mAb intraperitoneally twice weekly plus paclitaxel intraperitoneally three times weekly for 6 weeks. The second group was treated with VEGF mAb alone. The third group was treated with paclitaxel alone. The remaining group was treated with vehicle only. Tumor burden in the VEGF mAb plus paclitaxel and paclitaxel alone groups was reduced by 83.3% and 85.7% and 58.5% and 59.5%, respectively, in two separate experiments, compared to controls. VEGF mAb alone caused no significant decrease in tumor burden, nor did treatment of mice inoculated intraperitoneally with HEY-A8 cells, a non-VEGF-secreting ovarian cell line. Virtually no ascites developed in the combined treatment group or the group treated with VEGF mAb alone. Paclitaxel alone reduced ascites slightly, but not significantly. Morphological studies demonstrated that VEGF immunoneutralization enhanced paclitaxel-induced apoptosis in these human ovarian cancers. Thus, combination therapy with inhibitors of VEGF plus paclitaxel may be an effective way to markedly reduce tumor growth and ascites in ovarian carcinoma.     

Total parenteral nutrition in mice bearing a metastatic carcinoma: tumor growth,metastasis and immunologic parameters

The role of dietary manipulation of tumor growth, metastasis and immunologic parameters was studied in mice bearing Lewis lung carcinoma. Fourteen days following subcutaneous tumor implant, groups with tumor and their non-tumor bearing counterparts were assigned to one of the following feeding protocols: total parenteral nutrition (TPN), per oral (PO) intake of the parenteral diet, an oral casein diet (CAS), or electrolyte infusion plus the casein diet (ELECT). Intakes of energy and nitrogen were similar among all groups. Mice were killed 12 days later and peritoneal macrophages were tested for phagocytic activity. Tumor growth and metastasis were decreased from both infusion regimens with minimal loss of body weight as compared with casein fed mice. PO mice also showed lower tumor weight but metastasis was as great as in the casein group. Non-tumor-bearing infused mice showed depressed thymic weight, but thymic weight was not further reduced in tumor-bearing infused mice. PO feeding afforded no such protection in the presence of the carcinoma. Splenomegaly was observed in tumor-bearing mice on all regimens, but mice maintained on the parenteral diet demonstrated the largest proportion of macrophages containing nuclear debris. Analysis of free macrophages indicated no effect of diet regimen on non-immune phagocytic activity in both tumor-free and tumor-bearing mice. Possible alteration of splenic macrophage intracellular digestive capacity or phagocytic activity was suggested as a result of TPN.     

重组人血管内皮抑素联合放疗对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及VEGF表达的影响

目的:研究重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,YH-16,恩度)对不同放射剂量治疗的Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:制作Lewis肺癌细胞接种肿瘤的动物模型,并将60只模型小鼠随机分为5组:A,空白对照组(不予任何治疗);B,小剂量多次放疗组(1Gy/f,隔日一次,共4次);C,大剂量单次放疗组(4Gy/f,共1次);D,小剂量多次放疗联合恩度组(放疗前4天起每天右侧腹股沟区皮下注射恩度0.1ml,共15天,放射剂量为1Gy/f,隔日一次,共4次);E,大剂量单次放疗联合恩度组(放疗前4天起每天右侧腹股沟区皮下注射恩度0.1ml,共15天,放射剂量为4Gy/f,共1次)。分别给予上述处理后计算抑瘤率,并用免疫组化SP法测定各组VEGF的阳性表达率。结果:与C、E组比较,B、D组的抑瘤作用及VEGF表达下降明显(P<0.05),尤以D组抑瘤更强(P<0.05)、VEGF下降最多(P<0.05)。结论:放疗前使用恩度可使Lewis肺癌小鼠对放疗的敏感性增加,其机制可能与下调VEGF的表达有关。     

益气活血解毒方对小鼠Lewis肺癌生长转移及血管生成的作用

目的：研究益气活血解毒方对小鼠Lewis肺癌生长及自发性肺转移的作用并探讨其作用机制。方法:复制小鼠Lewis肺癌模型并随机分组,腹腔注射给药 10 d 后，观察抑瘤率，HE染色观察瘤组织病理学变化，免疫组化法检测瘤组织增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；给药 20 d 后，观察肺转移瘤结节数、瘤组织微血管密度（MVD），免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果:益气活血解毒方能减少小鼠Lewis肺癌肿瘤重量和肺转移灶数，高低剂量(24 mg·kg^-1·d^-1,12 mg·kg^-1·d^-1)抑瘤率分别为48.29%、37.26%，肺转移结节数分别为1.67、3.50，对照组为6.44；并能抑制肿瘤细胞PCNA的表达，降低肿瘤组织微血管密度,抑制肿瘤细胞及血清中VEGF的表达。结论:益气活血解毒方能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制VEGF表达,减少肿瘤血管生成有关。