红花多糖对人PBMC增殖活性及NK、LAK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及对NK细胞、LAK细胞杀伤活性的影响。方法:采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,用3H-TdR法检测PBMC的增殖活性;MTT法检测NK、LAK细胞的杀伤活性。结果:SPS对PBMC增殖有促进作用,其促增殖作用呈现量效依赖性,以1.25mg.mL-1和0.625mg.mL-1剂量组促增殖作用明显(P0.05);SPS对NK细胞与LAK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用(P0.05)。结论:SPS可促进PBMC的增殖,增强NK细胞、LAK细胞的杀伤活性,增强免疫功能。     

中药多糖与过继免疫联合治疗卵巢癌

目的:观察比较中药多糖干预后的多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞在不同条件下特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的效果,探讨中药与过继免疫联合治疗卵巢癌的可行性。方法:实验分4组,CIK组、PBOC-CIK组、SKOV3Ag-PBDC-CIK组及SKOV3Ag-ADC-CIK组。联合猪苓多糖(100 mg.L-1)、茯苓多糖(100 mg.L-1)、黄芪多糖(100 mg.L-1)及多种细胞因子对卵巢癌患者外周血CIK细胞进行体外诱导和扩增,以卵巢癌细胞株SKOV3冻融抗原致敏外周血与腹水来源的DC细胞,比较单纯CIK、未经抗原负载的外周血树突状细胞(DC)活化的CIK、经抗原负载的外周血DC活化的CIK、经抗原负载的腹水DC活化的CIK对SKOV3细胞的杀伤作用,并动态观察CIK细胞的增殖情况。结果:①CIK与DC共培养可显著增加CIK增殖倍数(P<0.01);②中药多糖干预后CIK对SKOV3卵巢癌细胞株有明显杀伤作用,且杀伤率随效靶比增加而提高,细胞杀伤率分别为(9.12±0.21)%,(10.15±0.27)%,(11.20±0.34)%和(12.73±0.43)%(P<0.05);③SKVO3冻融抗原负载的外周血DC可显著增加CIK特异性杀伤卵巢癌SKOV3细胞的能力,杀伤率显著高于未负载抗原外周血DC活化的CIK细胞和单纯CIK细胞(P<0.05或P<0.01);④腹水来源DC负载抗原后所活化的CIK细胞对SKOV3细胞杀伤率,与负载抗原的外周血来源DC活化的CIK无明显差异。结论:经SKOV3肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏的DC,可促进中药多糖干预后CIK细胞扩增,增强CIK细胞对SKOV3卵巢癌细胞的杀伤作用,且卵巢癌腹水可作为过继免疫治疗中效应细胞的一个重要来源。     

葛根素对细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤结肠癌SW-620细胞的影响

目的:观察葛根素作用前后细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和结肠癌SW-620细胞生长情况及其作用前后细胞因子诱导的杀伤细胞对结肠癌SW-620细胞杀伤活性的影响,并探讨其发生机制。方法:分离健康者外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子诱导为细胞因子诱导的杀伤细胞,收集培养第8天的细胞因子诱导的杀伤细胞,不同浓度葛根素分别作用于细胞因子诱导的杀伤细胞和结肠癌SW-620细胞48小时,CCK8法检测细胞因子诱导的杀伤细胞增殖率;四甲基偶氮唑蓝法检测结肠癌SW-620细胞抑制率;流式细胞术检测葛根素作用前后细胞因子诱导的杀伤细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达;流式细胞术检测葛根素作用前后结肠癌SW-620细胞表面MICA/B分子表达;乳酸脱氢酶释放法测定葛根素对细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤结肠癌细胞株SW-620的活性影响。结果:葛根素在0.8~100μmol/L浓度范围内对细胞因子诱导的杀伤细胞生长具有促进作用,对SW-620细胞生长无明显促进作用,浓度≥100μmol/L葛根素可抑制SW-620生长;经浓度为0.8~100μmol/L的葛根素诱导后的细胞因子诱导的杀伤细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达显著高于对照组,对结肠癌SW-620细胞的杀伤活性亦显著高于对照组;经浓度为3.1~50μmol/L的葛根素作用48小时后的结肠癌SW-620细胞,其表面的MICA/B的表达不同程度增加,显著高于对照组。结论:葛根素能够促进细胞因子诱导的杀伤细胞增殖,并增强其对结肠癌SW-620细胞的杀伤活性,其机制可能与上调细胞因子诱导的杀伤细胞表面穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达有关;葛根素上调结肠癌SW-620细胞表面MICA/B的表达可能增加细胞因子诱导的杀伤细胞对结肠癌SW-620细胞的杀伤活性。     

致敏树突状细胞抗乳腺癌作用的实验研究

目的 探讨负载肿瘤抗原DC诱导的CTLs对乳腺癌细胞的杀伤作用.方法 以负载肿瘤细胞抗原的DCs体外诱导CTLs,用ELISA法检测IFN-γ和IL-12的表达水平,用LDH法检测CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用.结果 负载肿瘤抗原DC组IFN-γ和IL-12的浓度高于未致敏DC组、抗原组及单核细胞对照组(P＜0.05),且负载抗原DC组所刺激的CTLs的杀伤作用也强于未致敏DC组、抗原组及单个核细胞组(P＜0.01)及对照的HT-29组(P＜0.01).结论 采用乳腺癌细胞冻融抗原体外致敏DC,诱导产生肿瘤抗原特异性CTLs具有显著的抑瘤效应,实验证明致敏DC治疗乳腺癌是一种有效的方法 ,有望成为乳腺癌免疫治疗的新疗法.     

野西瓜总皂苷诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的初步研究

[目的]探讨野西瓜总皂苷(CsS)对人肝癌HepG-2细胞的杀伤作用和诱导凋亡的作用.[方法]四甲基偶氮唑蓝(MTr)法研究CSS对HepG一2细胞的杀伤作用;荧光显微镜观察细胞凋亡形态;碘化吡啶(PI)单染经流式细胞仪检测CSS对HepG-2细胞周期及凋亡的影响.[结果]CSS对HepC-2细胞的生长增殖具有抑制作用;经CSS作用后.HepG-2细胞在出现特征性凋亡形态特征,并出现了G1期阻滞,G2期比例下降,高剂量组出现了G2期消失的现象,50 mg/L剂量作用48 h,凋亡细胞比率高达66.652%.[结论]CSS对人肝癌HepG-2有明显的杀伤和诱导凋亡作用,并出现细胞周期的改变.     

去甲斑蝥素杀伤HeLa细胞机制研究

目的研究去甲斑蝥素(NCID)杀伤肿瘤细胞的机制。方法用流式细胞光度术测量 NCTD 对细胞 DNA 复制的作用;用同步化 HeLa 细胞检测 NCTD 作用的时相性;间接免疫荧光显示胞质微管结构的改变及与 M 期阻滞、细胞死亡的相关性。结果 NCTD 不抑制细胞 DNA 复制,不杀伤 G_1期、S 期细胞;5、10μg/ml时,使胞质微管改变、M 期阻滞、畸形率升高,强烈杀伤 HeLa 细胞。2μg/ml 时,不杀伤细胞,仅促进增殖。结论 NCTD 具有刺激细胞增殖和杀伤肿瘤细胞的双向作用,并呈剂量依赖性。临床应用须达到足够剂量方有抗癌效果。     

六味地黄汤对细胞诱导的杀伤细胞体外扩增及抗骨肉瘤细胞的影响

目的:探讨六味地黄汤对不同人群来源的多种细胞诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)细胞增殖及其对骨肉瘤细胞毒活性的作用。方法:实验分为6组,通过向10名健康男性的外周血单个核细胞(PBMC)中分别加入在白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-1(IL-1)、抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)及不同浓度中药血清,诱导CIK细胞,检测其形态及表型,测定CIK细胞对骨肉瘤细胞的细胞毒性作用。结果:单纯中药含药血清对CIK无诱导作用,细胞因子联合含药血清培养的CIK增殖倍数明显高于无药血清和无血清培养(P<0.05),而在联合培养中中剂量中药的CIK增殖速度高于低和高剂量血清培养(P<0.05),且对CIK细胞CD3+CD5 6+表达最为稳定;各组对骨肉瘤细胞均有一定杀伤作用,其中联合培养含药血清中剂量培养CIK细胞对骨肉瘤细胞杀伤效果最好。结论:单纯六味地黄汤含药血清对CIK细胞基本无诱导作用,联合细胞因子有促进CIK细胞的体外扩增作用,对骨肉瘤细胞有较强的杀伤活性,但与浓度相关。     

姬松茸菌孢多糖对小鼠NK、LAK细胞活性影响的实验研究

目的:通过姬松茸菌孢多糖对自然杀伤NK、LAK细胞活性的影响研究,研究姬松茸菌孢多糖对机体非特异性免疫的提高作用机制。方法:NK、LAK细胞活性测定均采用MTT比色法。结果:姬松茸菌孢多糖对小鼠NK细胞杀伤作用具有增强作用,且与剂量呈正相关;姬松茸菌孢多糖对小鼠LAK细胞杀伤作用具有增强作用,但与剂量相关性不明显。结论:姬松茸菌孢多糖对机体非特异性免疫的提高作用与增强NK、LAK细胞的活性都有相关性。     

茜草提取物对宫颈癌HeLa细胞杀伤动力学研究

目的：研究茜草提取物对宫颈癌HeLa细胞的杀伤动力学。方法：采用体外细胞培养方法，观察茜草提取物对HeLa细胞的杀伤作用。结果：观察结果表明，茜草提取物对HeLa细胞生长有明显的抑制作用，IC50为23．5μg／ml，其作用表现出时间依赖性。结论：茜草提取物有直接细胞毒作用，可用于恶性肿瘤的治疗。     

野西瓜总生物碱诱导HepG2细胞凋亡与[Ca2+]i变化的相关性

目的 探讨野西瓜总生物碱(Capparis spinosa alkaloid,CSA)对人肝癌HepG2细胞的杀伤和诱导凋亡的作用机制.方法 MTT法研究CSA对人肝癌HepG2的杀伤作用;荧光显微镜观察HepG2细胞形态;流式细胞仪研究CSA对HepG2细胞的凋亡诱导作用;激光共聚焦显微镜检测CSA对HepG2细胞内[Ca~(2+)]i的影响.结果 CSA对人肝癌HepG2有明显细胞毒性作用,并且有剂量依赖性,IC_(50)为142.82 μg/mL;HepG2细胞在CSA作用后出现特征性凋亡形态特征,凋亡细胞比率明显高于自然凋亡率;且阻断细胞由S期向G_2期的移行,CSA明显升高HepG2细胞[Ca~(2+)]i,并与药物质量浓度呈量效正相关.结论 CSA对人肝癌HepG2有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能与CSA造成肿瘤细胞内钙离子超载有关.     

茜草提取物对宫颈癌HeLa细胞杀伤动力学研究

目的:研究茜草提取物对宫颈癌HeLa细胞的杀伤动力学.方法:采用体外细胞培养方法,观察茜草提取物对HeLa细胞的杀伤作用.结果:观察结果表明,茜草提取物对HeLa细胞生长有明显的抑制作用,IC50为23.5μg/ml,其作用表现出时间依赖性.结论:茜草提取物有直接细胞毒作用,可用于恶性肿瘤的治疗.     

白藜芦醇对人γδT细胞生长和杀伤功能的影响

目的探讨白藜芦醇对人外周血γδT细胞生长和杀伤功能的影响。方法用异戊烯焦磷酸法体外扩增人γδT细胞,不同浓度的白藜芦醇作用γδT细胞后,MTT法检测γδT细胞生长情况,流式细胞术检测给药前后γδT细胞杀伤功能相关标志物颗粒酶B、穿孔素和CD107a的表达。结果人外周血单核细胞(PBMC)培养10 d后,γδT细胞比例从扩增前的3.12%增至80.46%;白藜芦醇浓度为0.2～12.5μmol/L时能促进γδT细胞生长,其中以1.56μmol/L作用最明显,使细胞增殖率高出对照组约15.90%;白藜芦醇1.56μmol/L可上调γδT细胞杀伤功能相关标志物颗粒酶B、穿孔素、CD107a表达,随着给药浓度增高,γδT增殖及其颗粒酶B、穿孔素、CD107a表达逐渐降低。结论白藜芦醇在一定浓度范围内可促进γδT细胞增殖,且增强γδT细胞杀伤功能相关标志的表达,这可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

β-榄香烯联合高温对肺腺癌A549细胞作用的实验研究

目的:观察榄香烯联合高温对人肺腺癌A549细胞的协同杀伤作用。方法:用MTT法检测高温处理或常温处理细胞对榄香烯的敏感性。采用15μg/mL榄香烯或60μg/mL榄香烯联合42℃高温处理1.5h或常温处理,使用流式细胞仪检测细胞周期,透射电镜观察细胞形态学改变。结果:高温作用后,榄香烯对A549细胞的IC50从35.43μg/mL降低至28.68μg/mL;MTT法检测显示低浓度榄香烯联合高温对A549细胞具有明显的协同杀伤作用,细胞呈现凋亡形态,可见凋亡小体,同时有细胞坏死。结论:低浓度榄香烯联合高温对A549细胞有协同细胞毒效应。     

六味地黄丸入血成分对自杀基因杀伤B16细胞的增效作用

目的 探讨六味地黄丸主要入血成分对自杀基因系统(HSV-tk/GCV)杀伤黑色素瘤B16细胞的增效作用及作用机制。方法 采用MTT法检测六味地黄丸主要入血成分丹皮酚、马钱素、莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸和獐牙菜苷5种化合物及其混合组分对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞的影响;入血成分混合组分处理脾淋巴细胞后培养上清对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞的影响;荧光显微镜观察及流式细胞术结合荧光示踪法分析含药淋巴细胞上清对细胞间缝隙连接通讯(GJIC)功能的影响及Western blot分析缝隙连接蛋白(Cx43)表达;MTT法检测含药淋巴细胞上清对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞的增敏作用。结果 HSV-tk/GCV联合丹皮酚、马钱素、莫诺苷、5-羟甲基-2-糠酸和獐牙菜苷5种化合物及5种化合物的混合组分,均未显示其对自杀基因的杀伤有直接增效作用;而混合组分处理脾淋巴细胞后培养上清对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞具有协同增效作用,并呈一定的量效关系。含药淋巴上清可明显促进Cx43表达,改善B16细胞间缝隙通讯功能。含药淋巴上清对HSV-tk/GCV的B16细胞杀伤敏感性则无明显影响。结论 六味地黄丸主要入血成分可能刺激脾淋巴细胞产生某些活性物质,并对HSV-tk/GCV杀伤B16细胞起增效作用,这些淋巴细胞产生的免疫活性物质可能才是六味地黄丸对肿瘤自杀基因疗法增效作用的药效物质基础;其增效机制可能与改善B16细胞间GJIC相关。     

胃安康对小鼠免疫功能的影响

目的：研究中药复方胃安康（WAK）对小鼠免疫功能的影响，以探讨其抗肿瘤作用机理。方法：通过给小鼠灌胃WAK，观察其对免疫低下小鼠迟发性超敏反应，溶血素生成及对小鼠NK细胞，LAK细胞杀伤活性的影响。结果：WAK可明显增强免疫低下小鼠的DTH，提高血浆溶血素水平，增强NK及LAK细胞杀伤活性。结论：WAK可通过提高机体的免疫功能来发挥抗肿瘤作用。     

脾虚肿瘤患者免疫功能的研究

按中医理论,采用免疫指标(T 细胞亚群、NK 细胞活性及唾液 SIgA 等)及荧光激活细胞分类仪 FACS_(420),研究了脾虚证肿瘤患者的免疫功能,发现其 Th 淋巴细胞减少,NK 细胞杀伤和结合功能降低,唾液的 SIgA 升高,部分病例经有健脾补肾作用的升血汤治疗后,唾液 SIgA 降至正常,NK 细胞杀伤功能明显提高,Th 淋巴细胞有恢复趋势。为中医证型本质研究和中医药在肿瘤治疗中免疫调节作用提供了新资料。     

大蒜油诱导细胞凋亡的实验研究

我们在证明大蒜油具有明显提高荷瘤小鼠生命率和抑瘤率等一系列实验研究的基础上，又用现代技术证明了其抗癌作用的某些机理。本文利用ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术等方法研究了大蒜油对人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。研究表明该药在一定剂量的范围作用６小时诱导ＨＬ－６０细胞凋亡表现出典型的细胞凋亡特征。     

甘草多糖对人外周血γδT细胞的免疫调节作用

目的:研究甘草多糖(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma polysaccharide,GP)对人外周血γδT细胞增殖、分泌细胞因子、杀伤肿瘤细胞的免疫调节作用。方法:采集正常人静脉抗凝血,加入淋巴细胞分离液,密度梯度离心法分离人单核细胞层,经IPP扩增后得到γδT细胞,采用不同质量浓度的甘草多糖(终质量浓度分别为25,50,100 mg.L-1)。CCK-8法检测甘草多糖对γδT细胞增殖的影响,ELISA法检测甘草多糖对γδT细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,CCK-8法检测甘草多糖对γδT细胞杀伤功能的影响。结果:甘草多糖能促进γδT细胞增殖,呈剂量依赖关系;甘草多糖作用后,γδT细胞分泌的IFN-γ和TNF-α明显增多(P<0.01),且呈剂量依赖关系;甘草多糖作用后,γδT细胞对肿瘤细胞HepG2的杀伤能力明显增强(P<0.05)。结论:甘草多糖能够促进人外周血γδT细胞增殖、分泌细胞因子及杀伤肿瘤细胞,这为研究甘草多糖的抗肿瘤及免疫调节机制提供了新的依据。     

大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞的杀伤作用

目的:观察大蒜有效部位及其组合物对人胃癌MKN45细胞杀伤的作用。方法:采用体外大鼠脾淋巴细胞增殖实验和MTT法测定细胞杀伤作用,筛选出具有免疫增强作用和细胞毒作用的大蒜有效部位进行组合,并对大蒜有效部位及其组合物对肿瘤细胞杀伤作用进行对比,运用正交试验筛选出大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞杀伤作用的最佳配比。结果:大蒜总多糖+大蒜总皂苷(2#+5#)对大鼠淋巴细胞增殖具有明显的促进作用,大蒜油、大蒜总多糖、大蒜总皂苷(1∶1∶1)的联合应用,其杀伤肿瘤细胞的作用(IC50 13.3μg.mL-1)明显优于同等剂量的2个有效部位组合及大蒜油的单独用药(IC50 35μg.mL-1)。对MKN45细胞杀伤作用的顺序为大蒜油>大蒜多糖>大蒜总皂苷,3个有效部位组合最佳配比为大蒜油∶大蒜多糖∶大蒜总皂苷1∶2∶1。结论:3个部位联合应用对肿瘤细胞的杀伤作用最强,并且组合物最大优势是在扶正、祛邪的同时,可能减少大蒜油的刺激性。     

何首乌不同分离部位对人正常肝L02细胞和 肝癌HepG2细胞的杀伤作用

目的:考察何首乌不同分离部位对入正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用,寻找能明显杀伤肝癌细胞但对正常肝细胞生长影响较小的分离部位,并初步探讨其对2种细胞不同作用的机制.方法:何首乌70％乙醇提取物经AB-8型大孔树脂吸附,依次用水、50％乙醇和95％乙醇洗脱得到何首乌乙醇提取物的水洗脱部位(RW)、50％乙醇洗脱部位(R50)和95％乙醇洗脱部位(R95);体外培养人正常肝L02细胞及肝癌HepG2细胞,用含何首乌各分离部位的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,MTT检测及倒置镜下观察约物对L02及HepG2细胞生长的影响,筛选具有区别杀伤作用的部位,考察其剂量和时间作用效应.进一步通过Giemsa染色观察药物作用后细胞核的变化,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况.结果:MTT和倒置镜下镜检结果均表明,R50对L02细胞和HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用.Giemsa染色和流式细胞术结果表明,R50诱导2种细胞凋亡的程度不同:试验的各个时相下HepG2中凋亡细胞的比例均明显高于L02细胞(HepG2细胞中凋亡细胞的比例在24,48,72 h分别为83.62％,60.52％,74.49％,L02细胞中凋亡细胞的比例则分别为31.02％,20.57％,25.32％,2种细胞阴性对照组中凋亡细胞的比例在各个时相均小于5％),但对2种细胞的细胞周期没有明显影响.结论:何首乌提取物的R50部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用,区别杀伤作用的本质是药物诱导2种细胞凋亡的程度不同.