睾丸支持细胞对体外培养鼠胎脑皮质细胞的影响

背景:目前绝大多数研究者将目标指向功能细胞,为改善细胞的生存环境而给予一些生长因子。睾丸支持细胞能分泌大量营养物质及生长因子,且其所具有的Fas配体可降低移植入体内后宿主的免疫排斥。目的:探讨睾丸支持细胞对体外培养鼠胚胎大脑皮质细胞的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察实验,于2005-10/2007-09在首都医科大学生殖医学研究中心实验室完成。材料:健康SPF级10~15d龄雄性ICR小鼠40只,用于提取睾丸支持细胞;15d龄胎鼠40只,用于提取大脑皮质细胞。方法:将分离的大脑皮质细胞密度调整为2×109L-1,分为2组:实验组接种于预铺有70%汇合传代的睾丸支持细胞培养瓶中,加入含体积分数为0.1的FBS、1×105U/L青霉素、0.01g/L链霉素的DMEM/F12完全培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度环境下培养17d;对照组接种于预铺有0.05%多聚右旋赖氨酸的培养瓶中单独培养。主要观察指标:采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法、免疫细胞荧光法进行细胞鉴定,检测神经元、神经球数量及酪氨酸羟化酶阳性率。结果:两组细胞神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、酪氨酸羟化酶均呈阳性表达。与培养2h比较,随培养时间的延长两组贴壁神经元数均明显减少(P<0.01),但实验组各时间点贴壁神经元数均明显多于对照组(P<0.01)。实验组于培养3d出现神经球,数量多且变化较快,7d后开始呈现明显的下降趋势,至17d神经球接近消失;对照组仅可见散在巢蛋白阳性表达细胞,未出现神经球。实验组酪氨酸羟化酶阳性细胞率随培养时间的延长而逐渐升高,至11d达高峰,且各培养时间点酪氨酸羟化酶阳性细胞率均高于对照组(P<0.01)。结论:睾丸支持细胞可有效促进鼠胎脑皮质细胞的贴壁及生长,在促进神经干细胞增殖的同时诱导其向多巴胺能神经元分化。     

神经生长因子对小鼠睾丸支持细胞生理状态影响初探

目的 探索最佳的小鼠睾丸支持细胞分离、培养及鉴定方案.研究神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对小鼠睾丸支持细胞生理状态的影响.方法 通过胶原酶、胰酶等处理分离一周龄小白鼠睾丸支持细胞,通过油红O染色对分离得到的细胞进行鉴定;用加入NGF的培养基和对照培养基分别体外培养小鼠睾丸支持细胞,探索NGF对小鼠睾丸支持细胞生长情况的影响.结果 分离碍到了较高纯度的小鼠睾丸支持细胞,培养48小时后NGF组的小鼠睾丸支持细胞生长情况明显优于对照组.结论 NGF对小鼠睾丸支持细胞生长有着重要的作用.     

睾丸支持细胞的生物学特性及研究进展

背景:睾丸支持细胞已成为细胞培养技术、组织工程及器官移植领域的研究热点之一,在临床移植领域中有良好的应用前景.目的:就国内外对睾丸支持细胞的生物学特性及临床应用进展作一综述.方法:应用计算机检索CNK1和Pubmed数据库中 1998 01/2009-10关于睾丸支持细胞的文章,在标题和摘要中以"免疫豁免;移植:功能;研究进展"或"immune privilege;transplantation;function;progress of investigate"为检索词进行检索.选择文章内容与睾九支持细胞有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到215篇文献,根据纳入标准选择关于睾九支持细胞的34篇文献进行综述.结果与结论:睾丸支持细胞具有分泌多种营养因子和免疫豁免功能,为器官移植、帕金森病及糖尿病等疾病的治疗提供了新的治疗途径,对睾丸支持细胞的研究已经取得了一系列可喜的成果,将会给人类临床事业的发展作出巨大贡献,尤其随着组织工程和器官移植研究的发展,睾丸支持细胞在临床治疗中的应用必将更加广泛.     

体外贴壁和微囊化生长睾丸支持细胞形态与其功能的相关性

背景:细胞体外培养一直是研究活细胞的主要方法,但体外培养细胞的形态和生长环境与体内环境有很大差异,因此,细胞的生物活性是否能准确反映体内该细胞的状态尚不清楚。目的:观察体外培养细胞的形态与其生理功能间的相关性。方法:体外培养不同生长状态的小鼠睾丸支持细胞,一种为贴壁生长状态,细胞呈扁平状;另一种为微囊化生长状态,细胞呈立体球状。分别取2种不同形态睾丸支持细胞的培养液,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,获取相应的蛋白质条带,通过蛋白质相对分子质量的计算来确认睾丸支持细胞分泌蛋白质的种类。结果与结论:贴壁生长的扁平状的睾丸支持细胞培养液中可辨别出14个条带,蛋白质相对分子质量分布在(17～158)×103之间;微囊化生长的立体球状睾丸支持细胞培养液中可辨别出10个条带,蛋白质相对分子质量分布在(17～58)×103之间。提示不同形态的睾丸支持细胞在蛋白质分泌数量和种类上都存在着差异,细胞的形态与其生理功能之间存在着明显的相关性。     

体外贴壁和微囊化生长睾丸支持细胞形态与其功能的相关性

背景：细胞体外培养一直是研究活细胞的主要方法,但体外培养细胞的形态和生长环境与体内环境有很大差异,因此,细胞的生物活性是否能准确反映体内该细胞的状态尚不清楚。目的：观察体外培养细胞的形态与其生理功能间的相关性。方法：体外培养不同生长状态的小鼠睾丸支持细胞,一种为贴壁生长状态,细胞呈扁平状;另一种为微囊化生长状态,细胞呈立体球状。分别取2种不同形态睾丸支持细胞的培养液,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,获取相应的蛋白质条带,通过蛋白质相对分子质量的计算来确认睾丸支持细胞分泌蛋白质的种类。结果与结论：贴壁生长的扁平状的睾丸支持细胞培养液中可辨别出14个条带,蛋白质相对分子质量分布在（17～158）×103之间;微囊化生长的立体球状睾丸支持细胞培养液中可辨别出10个条带,蛋白质相对分子质量分布在（17～58）×103之间。提示不同形态的睾丸支持细胞在蛋白质分泌数量和种类上都存在着差异,细胞的形态与其生理功能之间存在着明显的相关性。     

一种获得高纯度睾丸支持细胞的分离方法

背景:研究证实睾丸支持细胞具有免疫抑制功能,可以被用于在睾丸以外的部位为移植细胞提供免疫豁免环境.最近的研究还表明支持细胞分泌的多种活性物质对其他细胞有促进作用.但至今其分离纯化方法还不完整,且细胞纯度不太理想.目的:探讨一种获取高纯度睾丸支持细胞的方法.方法:迅速分离出生后20 d雄性SD大鼠睾丸生精小管,采用酶消化法将细胞悬液接种于多聚赖氨酸包被的培养板内培养7 d后,采用Tris-HCL低渗缓冲液处理生精细胞和成纤维细胞,采用FasL免疫组织化学、Hoechst33342复染鉴定睾丸支持细胞的纯度.结果与结论:支持细胞贴壁性比较强,培养24 h后,大多数细胞开始贴壁,细胞形状呈圆形或椭圆形,培养液中漂浮着较多生精细胞.培养48 h后,胞质逐渐增多,折光性减弱.三四天后支持细胞胞质铺展,细胞间隙变小.4～6 d后胞质完全铺开,细胞相互连接,铺展成膜状单层.此时,质核比为(7～9):1,细胞为多边形,其形态和胞质面积不再改变;睾丸支持细胞的纯度为(95.64±2.76)%.结果证明该方法是一种相对简便易行且经济、稳定、有效的睾丸支持细胞分离方法.     

睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞的毒性作用

目的:分析睾丸支持细胞(塞尔托利氏细胞)对异基因T淋巴的细胞毒性作用。方法:实验于2006-01/07在解放军广州军区武汉总医院实验科完成。睾丸支持细胞取材于二三周龄SPF级Wistar雄性大鼠,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。T淋巴细胞取材于体质量为200-250g的SPF级SD雄性大鼠脾脏,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。将Wistar大鼠睾丸支持细胞与异基因SD大鼠T淋巴细胞共同培养。按睾丸支持细胞含量将实验分6组:对照组(0个睾丸支持细胞 DMEM/F12培养基100μL)、睾丸支持细胞1×103组(100μL)、睾丸支持细胞1×104组(100μL)、睾丸支持细胞1×105组(100μL)、睾丸支持细胞1×106组(100μL)及FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(经0.2μg抗FasL单克隆抗体封闭过的睾丸支持细胞1×106,100μL),每组均加1×105T淋巴细胞,6复孔培养48h,应用噻唑蓝比色法测定睾丸支持细胞对T淋巴细胞的毒性作用,用酶标仪于570nm处测各孔吸光度(A值),细胞毒性百分比(%)=(对照组A值-试验孔A值)/对照组A值×100%。结果:睾丸支持细胞1×103组、睾丸支持细胞1×104组、睾丸支持细胞1×105组及睾丸支持细胞1×106组对T淋巴细胞的细胞毒性百分比显著高于对照组、FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(8.75%,20.37%,65.07%,62.96%;0,3.85%,P<0.01);睾丸支持细胞1×103组-睾丸支持细胞1×105组随睾丸支持细胞数量增加,对T淋巴细胞的毒性作用也明显增加,当睾丸支持细胞数增加至1×105,杀伤作用的增加不再显著。FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞有明显毒性作用,随着睾丸支持细胞增加,对异基因T淋巴细胞的抑制和杀伤作用也越大;但是当睾丸支持细胞达到一定数量后,其毒性作用不再增加;这种作用也可以被抗FasL单克隆抗体阻断。表明睾丸支持细胞FasL的表达是发挥免疫豁免作用的主要作用途径。     

羊睾丸提取液对小鼠受损睾丸支持细胞的修复作用

目的:探讨羊睾丸提取液对重金属致损睾丸支持细胞的修复与保护作用,以期为干预男性生育功能障碍提供新思路。方法:选用健康昆明种雄性小白鼠30只,随机将其分为对照组、模型组、给药组,每组小鼠10只。采用醋酸铅制备睾丸受损模型,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶(NADPH-d)组织化学方法结合显微图像分析,观察各组小鼠睾丸支持细胞一氧化氮合酶(nitricoxidesyn-thase,NOS)活性。结果:模型组睾丸支持细胞肿胀变性,模型组NOS活性(A值:0.146±0.023)明显低于对照组(0.298±0.031);给药组支持细胞形态接近对照组,给药组NOS活性(0.236±0.020)明显高于模型组(P<0.01)。对照组体质量明显高于模型组(P<0.01);给药组体质量明显高于模型组(P<0.05);对照组与给药组无明显差异(P>0.05)。对照组睾丸质量明显高于模型组(P<0.05);给药组睾丸质量明显高于模型组(P<0.05)。结论:羊睾丸提取液对铅等重金属所致的睾丸损伤有一定的修复和保护作用。     

黄芪对老龄小鼠脑神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

背景：衰老的细胞死亡的实质就是细胞凋亡，凋亡从某种程度上可理解为一系列基因活动的结果。因此抑制癌基因的表达即可延长细胞的寿命，延缓脑组织衰老。目的：观察老年小鼠脑神经细胞凋亡和相关基因表达的变化及黄芪的干预效应。设计：完全随机分组设计，对照实验。单位：佳木斯大学基础医学院生物化学教研室。材料：实验于2003-12／2004-05佳木斯大学实验动物中心及生物化学实验室完成。选用健康昆明种小鼠24只。其中2月龄小鼠8只（青年组），12月龄小鼠16只。将16只12月龄小鼠随机分为2组：黄苠治疗组和老年对照组，各8只。方法：①黄芪治疗组：灌胃10．8g／（kg&;#183;d）黄芪水煎剂（黄芪购于佳木斯大学第一附属医院中药局，由佳木斯市药品检验所鉴定。制成含生药浓度为2kg/L的水煎剂）；老年对照组和青年组：灌服与黄芪水煎剂体积相等的温开水。均连续干预30d。②各组小鼠连续干预30d后断头处死，立即取出脑组织，取大脑中部中性甲醛固定。余脑组织制成制成线粒体悬液，采用黄嘌呤氧化酶法及TBA化学比色法测定脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。用原位末端标记法观察老年小鼠神经细胞凋亡率（凋亡的细胞核呈黄色，为阳性细胞），并用免疫组织化学法检测相关基因bcl-2的表达。细胞液染成棕色者为基因表达阳性细胞。400倍显微镜下计数400个细胞。-：阳性细胞所占百分比〈5％；＋：阳性细胞所占百分比5％-10％；＋＋：阳性细胞所占百分比11%-50％；＋＋＋：阳性细胞所占百分比〉51％。③等级和计量资料差异比较要用秩和检验和t检验。主要观察指标：黄芪对老龄小鼠脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、脑细胞凋亡率、脑组织bcl-2基因表达强度的影响。结果：小鼠24只均进入结果分析。①脑线粒体锰超氧化物歧化酶含量：青年组和黄芪治疗组明显高于老年对照组（P〈0．05）。②脑线粒体丙二醛含量和脑细胞凋亡率：青年组和黄芪治疗组明显低于老年对照组（P〈0．01）。③脑组织bcl-2基因表达：青年组和黄芪治疗组与老年对照组比较，差异明显（P〈0．01）。结论：黄芪通过影响锰超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量及bcl-2基因表达对老年小鼠脑神经细胞凋亡有明显的抑制作用。     

低频电磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响

目的 观察不同磁场强度、不同作用时间的低频电磁场（LFEMF）对培养的大鼠主动脉的血管平滑肌细胞（VSMC）骨桥蛋白（OPN）基因表达的影响，以探讨磁场是否能用于经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后冉狭窄（RS）的防治。方法 用含10％小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC，随机分为对照组、不同磁场强度（20，40，60mT）及作用时间（10，20，30min）实验组，应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western Blot技术结合光密度扫描分析，观察LFEMF对VSMC的OPN表达的影响。结果 各LFEMF组均明显抑制VSMC的OPN mRNA和OPN蛋白的表达，且具有磁场强度依赖性抑制作用，但无时间依赖性（P〈0．05）。结论 LFEMF能在基因水平上抑制VSMC的OPN的表达。     

肿瘤相关基因chp2在白血病细胞中表达的研究

为了探讨人类肿瘤相关基因chp2在白血病原代细胞和白血病细胞系中表达的特点，选择24例白血病患者、4种白血病细胞系及10名正常人外周血单个核细胞（PBMNC），用实时定量PCR（RQ—PCR）方法检测chp2基因的表达水平。结果显示，10例正常对照细胞chp2mRNA的表达检出率为80％，阳性的表达量为（0．744±0．682）×10^5cps／μl。白血病原代细胞和白血病细胞系chp2mRNA的表达量较正常对照组明显增高（p〈0．05），原代细胞中的7例急性髓细胞白血病（AML）、6例慢性髓细胞白血病（CML）、7例急性淋巴细胞白血病（ALL）和4例慢性淋巴细胞白血病（CLL）的表达量分别是（11．637±5.588）、（6．122±3．785）、（4．262±2．561）和（3．434±1．974）×10^5cps／μl；白血病细胞系中K562细胞、Jurkat细胞、HL-60细胞和M07e细胞的表达量为（5．243±1.852）、（4．463±1．621）、（4．137±1．837）和（2．578±1．137）×10^6cps/μl，白血病细胞系的表达量高于原代细胞。结论：人类肿瘤相关基因chp2在白血病原代细胞和白血病细胞系中表达水平明显增高，提示其在白血病细胞生长过程中发挥着重要的作用。     

血管紧张素酶抑制剂对自发性高血压大鼠颈动脉血管组织c-fos、c-myc基因表达的干预作用

目的 :探讨自发性高血压大鼠颈动脉组织中 c- fos和 c- myc基因 m RNA表达及其血管紧张素酶抑制剂对其表达的影响。方法 :自发性高血压大鼠实验前检测 m RNA的表达情况 ,实验组随机分为蒙诺组 (M组 )、科素亚 (K组 )、硝苯地平组 (Ca 组 )分别加用蒙诺 (2 mg/ kg·d) ,科素亚 (10 mg/ kg· d) ,硝苯地平 (2 mg/ kg·d)饲养 12周。用逆转录聚合酶链式反应检测两种基因的表达水平。正常雄性大鼠作为对照。结果 :SHR颈动脉中 ,两基因均有高表达 ,较 WKY有显著差异 (P<0 .0 5 )。治疗后 ,两基因在 M组中表达明显减弱 ,较 K组、Ca 组有显著差异 (P<0 .0 5 )。结论 :自发性高血压大鼠颈动脉组织中原癌基因 c- fos,c- myc等基因的高表达可能与自发性高血压大鼠血管重构有关 ,血管紧张素酶抑制剂可能通过对 c- fos,c- Myc等原癌基因表达的抑制作用逆转血管重构。     

CyclinD1基因过表达慢病毒载体的构建和对神经干细胞增殖的影响

目的:针对小鼠cyclinD1基因构建质粒并进行慢病毒包装,转染小鼠神经干细胞,检测其表达水平。方法:根据cyclinD1基因信息,采用DNA重组技术将Nestin promoter-Ccnd1基因插入plenti6慢病毒表达载体,重组获得慢病毒载体plenti-D1;经测序鉴定后,转染293T细胞生产病毒液,并检测病毒滴度。设立空白对照组、阴性病毒对照组及过表达慢病毒感染组。将病毒转染小鼠胚胎神经干细胞,经实时荧光定量PCR和western blot法分析转染前后3组cyclinD1表达情况,MTT法检测不同MOI值对神经干细胞增殖的影响。结果:测序结果证实cyclinD1基因正确插入载体中,成功构建小鼠cyclinD1基因过表达载体。实时荧光定量PCR结果显示过表达慢病毒感染组cyclinD1 mRNA较其他2组明显升高;Western Blot鉴定cyclinD1蛋白表达成功。plenti-D1的MOI值为10、20、50时均明显促进神经干细胞增殖。结论:cyclinD1基因慢病毒表达载体能感染小鼠胚胎神经干细胞,外源基因稳定表达。cyclinD1基因过表达能促进神经干细胞的增殖。     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤后bcl-2、bax基因表达的影响

目的:探讨嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后脊髓组织bcl-2、bax基因表达的影响。方法:64只SD大鼠随机分成生理盐水组(A组)和嗅鞘细胞移植组(B组);采用AllenWD法致伤力损伤T8脊髓,B组术后即刻给予嗅鞘细胞局部注射,A组局部注射等量生理盐水。采用RT-PCR和免疫组织化学染色(SABC方法)分别检测SCI后基因bcl-2、bax的mRNA水平和蛋白表达变化。结果:B组bcl-2mRNA和蛋白较A组在各时间点的表达均明显升高,P<0.01;B组baxmRNA较A组在各时间点的表达均明显降低,P<0.01。结论:嗅鞘细胞移植可以促进脊髓损伤后bcl-2基因表达和蛋白产物的增加,抑制bax基因的表达和蛋白产物的增加,这可能是嗅鞘细胞移植对脊髓损伤具有保护作用的机制之一。     

大鼠心肌干细胞的体外分离培养和生物学特性鉴定

目的：建立稳定的大鼠心肌干细胞（Cardiac stem cells，CSCs）分离和培养方法，以及对体外培养的CSCs进行生物学特性鉴定。方法：健康Sprague-Dawley（SD）3天龄新生鼠，在无菌条件下取出心脏，尽量剪碎成1mm^3，的碎块，经胰酶及胶原酶反复消化后，所得的细碎心肌组织块种植于培养皿中原代培养，视生长情况进行传代培养，第三代细胞进行流式细胞仪表面标记鉴定。结果：从新生鼠心脏中成功地培养出心肌干细胞，具有干细胞附壁生长及不断增殖的典型特征，原代细胞长满25cm：瓶壁所需要的时间平均为（11±2）天，平均每三天需按1：2的比例传代一次。第三代CSCs流式细胞仪表面标记鉴定结果为c—kit，CD29，CD90-1为阳性；CD11b／c，CD34，CD45为阴性。结论：本方法可以对大鼠心肌干细胞进行成功的分离和体外培养。大鼠CSCs体外生长相对稳定，具有很强的扩增能力，短期内可获得大量CSCs．提示体外培养CSCs可以满足组织工程和细胞治疗的需要。     

脑胶质细胞瘤VEGF、COX—2基因蛋白表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶-2(COX-2)基因蛋白表达在脑胶质瘤发生、生长和转移过程中,以及由低恶性度肿瘤向高恶性度肿瘤的转化中的作用。方法:选用54例Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤手术后存档蜡块标本为实验标本,选用6例正常脑组织为对照。应用流式细胞术(FCM)分别定量检测Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤组织中VEGF、COX-2基因蛋白表达量。结果:Ⅰ～Ⅳ级星形细胞瘤VEGF蛋白表达阳性率分别为23.1％、46.2％、100％和100％。COX-2蛋白在星形细胞瘤中的表达量(FI值)增加,并随肿瘤恶性度的升高而增加。COX-2蛋白表达量FI值与病理组织学分级有明显相关性(P<0.01)。COX-2蛋白表达阳性率分别为78.6％、85.7％、100％和100％。COX-2蛋白表达量(FI值)与VEGF表达量(FI值)相关分析显示二者呈显著正相关(r=0.54178,P<0.001)。结论:在星形细胞瘤形成以及肿瘤由低恶性度向高恶性度演化过程中,VEGF的过度表达具有重要作用;VEGF表达的水平是预测临床预后的重要标志。     

树突状细胞对自体自然杀伤细胞体外扩增及功能的影响

本研究探讨树突状细胞（DC）对自体自然杀伤（NK）细胞体外扩增和功能的影响及其机制。用干细胞培养液（SCGM）在37℃、5％CO2、饱和湿度培养条件下以rhIL-2体外扩增NK细胞10天后，将自体DC与NK细胞以5：1（5：1组）和1：1（1：1组）的比例混合继续培养。14、21天时计算5：1组、1：1组和对照组的NK细胞扩增倍数，流式细胞术测定细胞表面CD3、CD56／16的表达，MTT法检测NK细胞的功能，ELISA法检测各培养组上清液中TNF-α和IL-12p70的含量。结果表明：14天时5：1、1：1组和对照组的扩增倍数分别为29．25±4．01、21．23±2．91和16．26±1．58，3组间比较差别有统计学意义（P〈0．05）。同组不同时间比较，14天时扩增倍数最高（P〈0．05）。14天时3组CD3^-、CD56／16^＋表达率分别为（64.6±7.8）％、（50．6±8.7）％和（34．8±5．1）％，5：1组表达率最高（P〈0．05）。14天时3组对K562细胞的杀伤率分别为（87.4±6．8）％、（75.4±6．3）％和（63．7±3.8）％，5：1组杀伤活性明显高于其它2组（P〈0．05）。5：1组上清液中TNF—α和IL-12p70的含量均分别高于其它各组（P均〈0．05）。结论：DC与NK细胞混合培养，能以比例依赖的方式增加NK细胞的扩增倍数，增强NK细胞的功能。DC增加NK细胞的扩增倍数与DC分泌的IL-12有关，NK细胞功能增强与NK细胞分泌的TNF—α增高有关。     

反义P^53基因和mdm2基因对裸鼠致瘤性的影响

目的;研究反义Ｐ＾５３基因和ｍｄｍ２基因对裸鼠致瘤性的影响,为肺腺癌基因治疗提供新思路和新方法。方法：将含有反义Ｐ＾５３基因和ｍｄｍ２基因及空载体的逆转录表达载体通过脂质体介导分别转染ＧＬＣ－８２细胞,经Ｇ４１８筛选得到抗性克隆。采用流式细胞仪测定细胞周期,软琼脂培养集落形成试验观察集落形成。     

Bcl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨Bcl-2基因在脓毒症大鼠心肌细胞凋亡中的意义.方法:以盲肠结扎并穿刺法制作脓毒症大鼠模型,用电镜和TUNEL法检测其心肌细胞凋亡变化,用免疫组化方法检测Bcl-2蛋白,用RT-PCR法检测其心肌细胞的Bcl-2基因mRNA的表达.用SPSS10.0软件完成统计分析.结果:一定时间内脓毒症大鼠心肌细胞凋亡数均明显高于正常对照组和假手术对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达阳性细胞数和mRNA表达量均较正常对照和假手术组明显降低(P＜0.05),其变化均与TUNEL法检测凋亡的结果一致(P＜0.05).结论:细胞凋亡可能是脓毒症中心肌损害的机制之一.Bcl-2基因的改变可作为脓毒症病情改变的标志.     

VEGF反义RNA促骨髓瘤细胞凋亡及抑制内皮细胞形成血管作用的体外研究

本研究探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）反义RNA对人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及内皮细胞ECV304体外血管形成的影响和以VEGF反义RNA进行多发性骨髓瘤（MM）基因治疗的可行性。将VEGF121反向克隆入真核表达质粒pIRES2-EGFP构建重组质粒AS-VEGF，酶切、测序鉴定。用此真核表达重组质粒转染人骨髓瘤细胞系U266，G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR、Westernblot法分别检测阳性克隆中VEGFmRNA和蛋白的表达；利用MTT法、流式细胞术检测转染细胞增殖、凋亡的变化；利用基质胶中内皮细胞ECV304的网络形成检测血管形成。结果表明：获得了携带反义VEGF基因的真核表达重组质粒AS-VEGF；VEGF121反义RNA部分阻断了U266细胞中VEGF的表达，转染重组质粒的U266细胞VEGFmRNA和蛋白表达都较对照组细胞有明显减少，细胞的增殖受到抑制，凋亡增加。转染重组质粒的细胞培养上清在基质胶中作用ECV304细胞后的血管形成较对照组亦有明显减少。结论：VEGF反义RNA可以下调VEGF表达，从而抑制骨髓瘤细胞系U266增殖，增加其凋亡并抑制血管形成。