疏肝饮对内脏高敏感性大鼠结肠组织中TRPV1和CGRP表达的影响

目的观察疏肝饮对内脏高敏感性大鼠结肠组织中辣椒素受体(TRPV1)和降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法将48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、疏肝饮组和得舒特组,采用慢性避水应激法造模10天。从造模第4天起,各给药组大鼠于造模前1小时分别给予相应的药物灌胃,连续7天,第10天造模结束后,采用结直肠气囊扩张引起的腹壁撤回反射来评估内脏敏感性;取出结肠组织,采用免疫组化法分别检测TRPV1和CGRP含量。结果与正常组比较,模型组的压力阈值降低(P<0.01),说明模型组大鼠存在内脏敏感性增高;与模型组比较,疏肝饮组和得舒特组的压力阈值明显增高(P<0.05)。与正常组比较,模型组结肠中TRPV1的表达及CGRP的含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,疏肝饮组和得舒特组大鼠结肠组织中TRPV1和CGRP含量均明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论疏肝饮通过调节结肠组织中TRPV1和CGRP的表达,从而降低内脏高敏感性。     

疏肝和胃方对内脏高敏感大鼠CaMKⅡ表达的影响

目的观察疏肝和胃方对内脏高敏感钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠32只,随机分为模型组、疏肝和胃方组、雷贝拉唑组及空白对照组4组,每组8只。采用鸡卵清蛋白联合食管酸灌注建立内脏高敏感模型。免疫组化法观察各组大鼠脊髓CaMKⅡ含量的表达及阳性神经元个数。结果与空白对照组比较,模型组CaMKⅡ含量的表达、阳性神经元个数明显升高(P0.05);与模型组比较,中药组、西药组CaMKⅡ含量的表达、阳性神经元个数明显降低,差异有统计学意义(P0.01);在阳性神经元个数方面,中药组低于西药组(P0.05);在CaMKⅡ表达方面,中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论疏肝和胃方可能通过抑制Ca MKⅡ表达降低内脏高敏感。     

肠炎宁糖浆对内脏高敏感大鼠脊髓5-HT和CGRP表达的研究

目的制备内脏高敏感大鼠模型,研究5-HT和CGRP在内脏刺激信号传入过程中的作用。观察中药肠炎宁糖浆对内脏高敏感大鼠的作用机制。方法SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和治疗组,模型组和治疗组给予鸡卵清白蛋白腹腔注射制备内脏高敏感大鼠,对照组腹腔注射生理盐水。造模2周后模型组和对照组予生理盐水、治疗组予肠炎宁糖浆灌胃4周,进行5-HT和CGRP免疫组化染色并作定量分析。结果造模2周后行内脏敏感性评估,大鼠腹璧撤离反射为3分时所需的注水量,模型组较对照组明显减少（P〈0．05）。治疗4周后,模型组较对照组、治疗组明显减少（P〈0．05）。免疫组化结果：与对照组、治疗组相比,模型组脊髓后角5-HT和CGRP阳性神经纤维和神经元PI值显著增高。结论内脏高敏感大鼠脊髓5-HT和CGRP表达上调,说明5-HT和CGRP在内脏刺激信号的传入过程中起重要作用。肠炎宁糖浆可下调内脏高敏感大鼠脊髓5-HT和CGRP。     

疏肝饮对避水应激大鼠内脏痛觉过敏的调节作用

目的:研究疏肝饮及其组分对反复避水应激(RWAS)大鼠内脏痛觉过敏(VHL)的调节作用,并探讨疏肝饮是否通过调节背根神经节(DRG)中瞬时受体电位通道香草酸受体1(TRPV1)和结肠组织中P物质(SP)表达起作用。方法:应用RWAS法复制具有VHL特点的肠易激综合征(IBS)大鼠模型,观察疏肝饮及其组分对结直肠扩张(CRD)引起大鼠腹壁收缩反射(AWR)压力阈值的影响;分别应用免疫组化法和Real-time PCR法检测大鼠结肠组织中SP和DRG中TRPV1的表达变化。结果:模型大鼠引起AWR的压力阈值明显低于正常对照组,疏肝饮可以使模型大鼠引起AWR的压力阈值明显升高;疏肝饮及其组分可以降低模型大鼠结肠组织中高表达的SP和DRG中高表达的TRPV1。结论:疏肝饮可以改善RWAS大鼠的VHL,其作用机制与其调节结肠组织中SP和DRG中TRPV1的表达有关。     

疏肝健脾方对小鼠脊髓背跟神经元TRPV1电流通道及p-TRPV1、SP、CGRP受体表达的影响

目的探讨疏肝健脾方对小鼠脊髓背跟神经元香草酸受体亚型1(the transient receptor potential vanilloiol type 1,TRPV1)电流通道及p-TRPV1、物质P(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)受体表达的影响。方法参照血清药理学方法,正常组及疏肝健脾方低、中、高剂量组含药血清;分离并原代培养C57小鼠脊神经后角神经节(Dorsal root ganglion,DRG)细胞,通过免疫荧光法进行细胞鉴定,DRG细胞经辣椒素(Capsaicin,CAP)干预后分组(即低、中、高剂量组)予含药血清干预,利用全细胞膜片钳技术记录的DRG细胞TRPV1通道电流;采用RT-PCR及Western-blot检测小鼠DRG神经元中p-TRPV1、SP、CGRP表达变化。结果经细胞鉴定,证实成功分离小鼠DRG细胞;DRG细胞形态呈圆形,胞体较小,突起较长;结肠平滑肌细胞形态细胞形状椭圆形,束状排列,密集与稀疏处相互交错呈"峰谷"状。疏肝健脾方无法直接激活DRG神经元中的p-TRPV1通道,却可正向调控辣椒素激动的p-TRPV1电流;低、中、高剂量组DRG细胞内p-TRPV1、CGRP的mRNA及蛋白表达量随药物浓度增高逐步下降(P<0.05),SP表达mRNA及蛋白表达量随药物浓度增高逐步上升(P<0.05)。结论疏肝健脾方可通过下调p-TRPV1表达,从而抑制CGRP的表达,上调SP表达,发挥防治肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)的效用。     

疏肝饮对内脏高敏感性大鼠结肠中TRPA1及PAR2表达的影响

目的观察疏肝饮对内脏高敏感性大鼠结肠组织中TRPA1和PAR2表达的影响。方法 36只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、疏肝饮大剂量组、疏肝饮中剂量组、疏肝饮小剂量组、西药组,采用慢性避水应激法造模10天,造模第4天起,各给药组大鼠于造模前半小时分别给予药物灌胃,连续7天,第10天造模结束后,处死大鼠,取出结肠组织,采用realtime-PCR及免疫组化法分别检测TRPA1和PAR2含量。结果与正常组相比,模型组结肠中TRPA1和PAR2的含量显著增加(P0.001或P0.01);与模型组比较,疏肝饮组大、中剂量组和得舒特组大鼠结肠中TRPA1和PAR2含量均明显减少,差异有统计学意义(P0.001或P0.01)。结论疏肝饮可能通过调节结肠中TRPA1和PAR2的表达,从而降低内脏高敏感性。     

宁心安神法对腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感性影响

目的:研究心理应激法诱导腹泻型肠易激综合征(IBS)大鼠模型内脏敏感性的变化,探讨肠易激综合征的发病机制及宁肠汤治疗肠易激综合征的机理。方法:SD雄性大鼠72只随机分为正常对照组、模型对照组、得舒特组、宁肠汤低、中、高剂量组6组,观察各组大鼠在不同容量下行直肠扩张AWR评分变化,观察宁肠汤的干预作用。结果:(1)各组大鼠的体重增长变化率差异无显著性意义(P>0.05);(2)慢性束缚应激+夹尾刺激诱导IBS大鼠内脏敏感性明显增高(P<0.01)。宁肠汤能降低IBS大鼠内脏敏感性的AwR评分(P<0.05～0.01),且有一定的量效关系,以高剂量组的效果最为明显。结论:宁心安神法对心理应激致IBS大鼠的内脏高敏感性有一定的调节作用。     

芍药甘草汤对肠易激综合征大鼠内脏高敏感性的影响

目的研究芍药甘草汤对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠内脏高敏感性和结肠黏膜肥大细胞(MCs)、血清5-羟色胺(5-HT)的影响,探讨芍药甘草汤治疗IBS的可能作用机制。方法将33只大鼠随机分为正常组、模型组和中药组,每组11只。采用直肠气囊扩张刺激+直肠内醋酸刺激复合方法制作IBS内脏高敏感性模型。造模后,正常组和模型组大鼠均给予0.9%Na Cl注射液10 mL/Kg灌胃,中药组给予芍药甘草汤按生药量6.25 g/Kg灌胃,连续灌胃14天。评价大鼠腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex,AWR),观察回盲部组织MCs数量,检测血清5-HT含量。结果与正常组比较,给药后模型组大鼠的AWR降低,回盲部组织中的MCs数量、血清5-HT含量均增加(P0.05);与模型组比较,中药组大鼠AWR、回盲部组织中的MCs数量、血清5-HT含量均有改善(P0.05)。结论采用直肠气囊扩张刺激+直肠内醋酸刺激复合慢性刺激法可以引起IBS大鼠内脏敏感性增高,芍药甘草汤的作用机制可能是通过减少结肠MCs数量、5-HT含量从而降低IBS大鼠的内脏高敏感性。     

康泰胶囊对内脏高敏感性模型大鼠的治疗作用及机理研究

目的:探讨康泰胶囊对乙酸法复制大鼠内脏高敏感性模型大鼠的治疗作用和作用机理。方法:将五窝新生SD大鼠随机分为正常组、模型组、康泰胶囊低、中、高剂量组、泽马可组,后五组大鼠从出生后第8~21 d,每天给予直肠内醋酸刺激,复制内脏高敏感大鼠模型,并分别在出生后第6周及8周进行直肠扩张,评价其腹部收缩反射(AWR)阈值,从第9周开始,分别给予蒸馏水、生理盐水、康泰胶囊1.52、3.04、6.08 g/kg、泽马可4 mg/kg灌胃,每日一次,连续两周,治疗后再次评价其腹部收缩反射(AWR)阈值,并检测大鼠一氧化氮(NO)、五羟色氨(5-HT)含量及结肠5-HT4受体表达。结果:康泰胶囊能够升高内脏高敏感性大鼠AWR阈值,升高血中NO含量,降低血清5-HT的水平及增加结肠粘膜5-HT4受体表达。结论:康泰胶囊对内脏高敏感性大鼠有较好的治疗作用,其作用机制可能与其影响机体内NO、5-HT等物质有关。     

菝葜提取物对肠易激综合征大鼠血浆SP、CGRP含量的影响

目的:探讨菝葜提取物对肠易激综合征(IBS)大鼠血浆P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)含量的影响,探讨其作用机制。方法:采用乳鼠结肠PTCA球囊刺激法造IBS大鼠模型,分为模型组、空白组、阳性药组、菝葜提取物高、中、低剂量组,给药3周后,应用放射免疫法分别检测IBS大鼠血浆SP、CGRP含量变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠血浆SP、CGRP水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);给药组大鼠血浆SP、CGRP水平降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:菝葜治疗IBS的作用机制可能是通过降低血浆SP、CGRP水平实现的。     

疏肝和胃方对非糜烂性胃食管反流病模型大鼠内脏敏感性外周机制的影响

目的:观察疏肝和胃方对非糜烂性胃食管反流病(NERD)模型大鼠食道内脏高敏感外周机制的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为空白对照组,生理盐水对照组,模型组,奥美拉唑组,疏肝和胃方组。除空白对照组外其余各组用腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)基础致敏联合食管酸灌注的方法复制NERD大鼠模型,连续给药14天后,观察各组大鼠食管组织超微结构变化、食管组织P物质及CGRP的含量变化。结果:与模型组比较,奥美拉唑组及疏肝和胃方组均能降低NERD模型大鼠P物质及CGRP表达(P<0.05),电镜显示NERD中药组食管组织核仁清晰,染色均匀;细胞间隙均匀。结论:疏肝和胃方可改善NERD大鼠的超微结构变化,下调食管组织中P物质及CGRP的表达,达到降低食道内脏敏感性的目的。     

舒肝健脾复方对内脏高敏感模型大鼠的治疗作用

目的探讨舒肝健脾复方对内脏高敏感模型大鼠的治疗作用，并探讨其治疗肠易激综合征（IBS）的机理。方法采用新生大鼠肠道化学刺激法建立大鼠内脏高敏感模型，测定用药前后大鼠腹部收缩反射阈值（AWR），以及血清、结肠组织中5-羟色胺（5-HT）含量变化。结果舒肝健脾复方能显著提高大鼠AWR，能降低大鼠血清、结肠组织中5-HT含量。结论大鼠新生期肠道内的慢性炎症刺激，可以在成年后引起慢性内脏敏感性增高，舒肝健脾复方可以有效提高IBS内脏高敏感大鼠对直结肠扩张的感觉阈值，其作用机理可能与降低血清、结肠组织中5-HT含量有关。     

温和灸对大鼠后三里穴局部形态及CGRP、SP、VIP表达的影响

目的:探讨温和灸对大鼠后三里穴施灸局部的温通效应及生物学基础。方法:以高脂血症模型大鼠后三里穴为观察对象,运用HE染色法和免疫组化法,观察温和灸热刺激下,后三里穴局部皮肤形态结构以及皮肤组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)表达的变化。结果:温和灸组与对照组比较,后三里穴局部皮肤组织形态结构明显发生变化,角化层极薄或消失,表皮层断裂不完整,真皮层胶原纤维排列疏松;施灸后穴位局部皮肤CGRP较多表达在真皮层结缔组织,SP较多表达在毛囊,VIP较多表达在真皮层结缔组织以及表皮中。结论:温和灸热刺激可以改变后三里穴局部形态结构、影响后三里穴局部皮肤中CGRP、SP、VIP的分布表达,这些效应可能与艾灸以温促通的生物学基础相关。     

中药肠吉安对肠易激综合征内脏高敏感模型大鼠的作用及其机制

目的 研究5－羟色胺转运体（SERT）与内脏高敏感的联系,探讨中药复方肠吉安对内脏高敏感大鼠的治疗作用及其机制。 方法 制备肠易激综合征的内脏高敏感模型,将雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、肠吉安高剂量组及肠吉安低剂量组。在造模第10周开始灌胃给药或生理盐水共10天,干预后通过腹肌回缩反射（AWR）半定量评分测定大鼠内脏敏感性;取脑、肠组织,应用Western Blot及real time PCR方法检测各组织SERT表达;通过免疫组化方法对各组织5 HT进行半定量分析。 结果 (1)模型组AWR评分显著高于对照组,肠吉安高、低剂量组治疗后评分降低（P<0.05）。(2)模型组结肠、脑中缝背核SERT的mRNA及蛋白表达较对照组显著降低（P<0.05）,肠吉安高、低剂量组结肠SERT蛋白表达较模型组显著增加（P<0.05）。(3)模型组结肠5 HT含量明显高于对照组,肠吉安治疗后含量较模型组显著降低（P<0.05）,模型组及肠吉安高、低剂量组中缝背核5-HT含量则显著低于对照组（P<0.05）。 结论 中药复方肠吉安可以通过改变肠道SERT表达及5 HT含量来改善肠易激综合征的内脏高敏感。     

舒肝活血化痰方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清瘦素、胰岛素抵抗指数的影响

目的探讨舒肝活血化痰方对非酒精脂肪性肝炎大鼠胰岛素抵抗(IR)的作用。方法采用高脂饮食复制高脂血症脂肪性肝炎大鼠模型,用舒肝活血化痰方治疗,以东宝肝泰作对照,观察其对模型大鼠肝功能、血脂、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、血清瘦素(LEP)和胰岛素抵抗指数(FIRI)的影响。结果舒肝活血化痰方显著改善肝功能(P<0.01或P<0.05),降低血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),同时升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量(P<0.01或P<0.05),并有显著降低肝组织Hyp含量(P<0.05)及血清LEP、FIRI(P<0.01或P<0.05)的作用。结论舒肝活血化痰方可能通过改善LEP及FIRI,抑制肝脏的脂肪贮积、减轻肝损伤和阻止脂肪性肝纤维化的发生发展。     

健脾安肠丸对腹泻型肠易激综合征结肠组织SP、VIP、CGRP的影响

目的:研究健脾安肠丸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)结肠组织SP、VIP的影响。方法:采用大黄灌胃与束缚配合的方法制备IBS-D大鼠。将60只成年SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、健脾安肠丸大剂量组、健脾安肠丸小剂量组和匹维溴铵组。采用ELISA法检测大鼠结肠组织中P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的含量。结果:模型组大鼠大便形状的评分值较正常组明显增高(P0.01),而健脾安肠丸大剂量组和匹维溴铵组较模型组分值显著下降(P0.01,P0.05);大剂量、小剂量健脾安肠丸和匹维溴铵均能减少模型大鼠结肠SP、VIP含量,提高CGRP含量。结论:健脾安肠丸能有效地缓解腹泻型肠易激综合征,其疗效可能与减少SP、VIP和增加CGRP的释放有关。     

枳术丸煎剂与枳术汤对大鼠P物质的影响

目的探讨枳术丸与枳术汤对正常大鼠血浆P物质(SP)及肠组织SP的影响。方法正常大鼠分5组,灌胃给药7 d后采集标本,放免检测血浆及肠组织SP含量。结果枳术丸与枳术汤均能升高大鼠血浆SP及肠组织SP含量,呈一定的量-效关系,但枳术丸与枳术汤二者无显著差异。结论升高血及胃肠组织SP含量是枳术丸与枳术汤促进胃肠运动作用的机制之一。     

降钙素基因相关肽、P物质在电针缓解便秘型肠易激综合征中的作用

目的:观察电针对便秘型肠易激综合征大鼠(C-IBS)结肠组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)蛋白表达的影响,探讨针刺治疗C-IBS的可能机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针大肠俞组、电针上巨虚组,每组8只。采用冰水灌胃法复制C-IBS模型。造模成功后电针治疗,每天1次,连续7d。观察各组大鼠粪便性状并进行粪便性状评分,同时检测粪便含水量;采用Western blot法检测大鼠结肠CGRP、SP蛋白表达量。结果:模型组粪便性状评分和粪便含水量明显低于正常对照组(P0.01),电针大肠俞组和电针上巨虚组大鼠粪便性状评分和粪便含水量均明显高于模型组(P0.01,P0.05)。模型组结肠中CGRP、SP蛋白的含量明显高于正常对照组(P0.01),电针大肠俞组和电针上巨虚组大鼠结肠中CGRP、SP蛋白含量均明显低于模型组(P0.01)。结论:CGRP、SP在电针缓解C-IBS内脏高敏感性中起重要作用。