表皮生长因子促进脑梗死后室管膜下区神经干细胞迁徙机制的初步研究

目的观察表皮生长因子（EGF）对大鼠脑梗死后室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）的调节作用。方法采用肾血管性高血压大鼠复制成一侧大脑中动脉皮层支闭塞（MCAO）模型。MCAO）术后24h，64只EGF组大鼠侧脑室注入10μl EGF（0．1μg／μl），连续2d，共2μg；64只vehicle组大鼠只注入不含EGF的等量溶液。MCAO术后1、2、3和4周，免疫组化检测SVZ内巢蛋白（nestin），Western blotting检测双侧半球nestin、神经细胞粘附分子（NcAM）和瑞林蛋白（reelin）表达。结果与同期vehicle组相比，EGF组大鼠梗死灶同侧SVZ内nestin染色更强，可见从SVZ沿胼胝体向梗死灶迁徙的nestin阳性细胞带；Western blotting显示EGF促使脑梗死灶同侧nestin、NCAM和reelin更早期和更高的表达（P〈0．05）。结论EGF可能通过促使卒中后nestin、NCAM和reelin等神经可塑性物质的早期高峰表达而调节SVZ内NSCs增殖和向梗死灶迁徙。     

表皮生长因子对大鼠脑梗死后神经功能恢复的影响

目的 观察表皮生长因子（EGF）对大鼠脑梗死后神经功能恢复的影响。方法 采用肾血管性高血压大鼠制作一侧大脑中动脉皮层支闭塞（MCAO）模型。MCAO术后24 h，32只大鼠侧脑室注入10μl EGF（100μg/L），连续2d，共2μg（EGF组）；32只大鼠只注入不含EGF的等量溶液（对照组）。MCAO术后1、2、3和4w，行Bederson神经功能评分后，免疫印迹检测双侧大脑半球生长相关蛋白（GAP43）、突触囊泡蛋白（SYN）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果 与同期对照组相比，EGF组大鼠在MCAO术后1、2w神经运动功能恢复更好，脑梗死灶同侧半球GAP43、SYN和GFAP有更早期和更高表达（P<0.05）。结论 GAP43、SYN和GFAP等蛋白的早期高峰表达可能与EGF引起的早期神经可塑性改善有关。     

尿激酶溶栓治疗大鼠急性脑梗死的实验研究

目的 :观察尿激酶 (UK)静脉溶栓治疗大鼠急性脑梗死的疗效。方法 :制作改良大鼠自体血栓性大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,在MCAO后 3 0min静脉注入尿激酶 2 0 0 0 0U·kg-1(A组 )、5 0 0 0 0U·kg-1(B组 ) ,MCAO后 12h通过神经功能缺损评分、梗死体积、血管再通率、出血并发症及病理检查等比较研究不同剂量尿激酶溶栓的疗效。结果 :A、B组MCAO后 12h神经功能缺损评分增加、梗死体积减少均较对照组有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,B组较A组梗死体积小 (P <0 0 5 ) ,并发出血率 3组无显著差异。结论 :UK溶栓能显著改善脑梗死大鼠的神经功能缺损程度、使血管完全或部分再通、减少梗死体积 ,MCAO后 3 0min溶栓不增加出血性转换的发生率     

经鼻给予血管内皮生长因子对脑梗死大鼠梗死灶周区血管新生的影响

目的 观察经鼻给予血管内皮生长因子(VEGF)对大鼠局灶性脑缺血后梗死灶周区血管新生的影响.方法 采用大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分成VEGF组(12只)和生理盐水对照组(12只),分别于右侧MCAO后第3天起经鼻给予VEGF或等量生理盐水直至处死前1天;另设假手术组(6只).所有大鼠均于术后第1天起按体质量50 mg/kg经腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),每日1次,连续13 d用以标记增殖细胞,分别在MCAO后第1、7、14天行改良神经功能评分,于术后第14天经尾静脉注入异硫氰酸荧光素右旋糖酐(FITC-dextran),采用免疫荧光双标及激光共聚焦方法检测梗死侧灶周区BrdU+/vWF+表达和微血管数.结果 与对照组及假手术组相比,术后第7天及第14天经鼻给予VEGF可明显改善大鼠神经功能,术后第14天假手术组仅见少量BrdU+/vWF+细胞,VEGF组梗死灶周区BrdU+/vWF+细胞数与对照组相比显著增高(P<0.01),FITC-dextran标记显示VEGF组梗死灶周区微血管数较对照组显著增加(P<0.01).结论 经鼻给予VEGF可促进局灶性脑缺血后梗死灶周区血管再生,促进梗死后神经功能恢复.     

社会交往对大鼠局灶性脑梗死灶周围SYN表达的影响

目的观察社会交往环境对局灶性脑梗死大鼠突触膜糖蛋白(Synaptophysin,SYN)表达的影响。方法SD大鼠75只。将实验动物随机分为假手术对照组(5只)和大脑中动脉阻塞组(MCAO)(70只)。MCAO组大鼠采用电凝法造成右侧大脑中动脉阻断(MCAO)模型后,再随机分为独居组(30只)、社会交往组(40只)。于不同时间点分批处死大鼠,用免疫组化染色观察梗死灶周围皮质SYN阳性表达。结果MCAO后梗死灶周围皮质SYN阳性表达均高于假手术对照组,并且随时间的推移,其表达进一步增高。社会交往组在1、2、3周SNY表达均明显优于独居组和对照组。结论社会交往能促进梗死灶周围SYN的表达。     

不同时机开颅去骨瓣减压治疗恶性大脑中动脉区梗死的实验研究

目的比较高血压大鼠一侧大脑中动脉主干闭塞后不同时间点进行开颅去骨瓣减压术的疗效。方法将168只易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)随机分为1、4、12、24h手术组,每组各32只,分别于MCA闭塞后1、4、12、24h开颅手术。另40只作为假手术对照组。使用线栓法复制MCA梗死模型。比较各组大鼠病死率、梗塞灶体积和神经功能评分,以评估不同时间点手术的疗效。结果1、4、12和24h手术组大鼠术后病死率分别为15.6%、12.5%、15.6%和28.1%,均低于假手术对照组(52.5%)(P均小于0.05)。1、4和12h手术组术后1、2周神经功能评分均低于同期对照组和24h手术组(P<0.05),4、8周各手术组神经功能评分均低于同期对照组(P<0.05)。1、4、12h手术组术后1、2周梗塞灶体积小于同期对照组和24h手术组(P<0.05),1、4、12h手术组4、8周的梗塞灶体积小于同期对照组,24小时手术组术后第1、2、8周梗塞灶体积小于对照组(P<0.05),1h手术组4周和12h组4、8周的梗塞灶体积小于24h手术组(P<0.05)。结论大鼠大脑中动脉主干闭塞后1～24h内开颅去骨瓣减压均可降低病死率。12h内手术者术后神经功能恢复较好。     

不同饲养环境对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围VEGF表达的影响

目的观察不同环境设置对局灶性脑梗死大鼠行为学恢复及梗死灶周围血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,为临床应用tr 6234丰富环境、探索学习等不同环境进行脑卒中康复治疗提供基础理论支持和实验依据。方法将实验动物随机分为假手术对照组(15只)和大脑中动脉阻塞(MCAO)组(90只)。手术组用电凝法造成右侧MCAO模型。MCAO组大鼠于MCAO手术后,再随机分为社会交往组(30只)、探索学习组(30只)、和丰富环境组(30只)。社会交往组5只一组,群居于标准笼;探索学习组10只一组,居于迷宫笼;丰富环境组30只居于丰富环境笼。MCAO各组分别于术后1d、3d、7d、14d、28d随机选取5只,假手术组于术后1d、3d、7d随机选取5只大鼠处死,剖颅取脑,石蜡包埋,切片,免疫组化染色,测定VEGF在脑梗死灶周围皮质的表达情况。结果 VEGF的表达,社交组MCAO术后1d可见梗死灶周围VEGF略有表达,3d表达略有增加(P<0.05)。MCAO各组可见术后第2w时表达增高明显,且均高于假手术组,(P<0.05)。随时间推移,至MCAO后28d时,丰富环境组、探索学习组及社会交往组VEGF表达略有下降。在14d时,丰富环境显著高于探索学习及社会交往组(P<0.05)。结论丰富环境、探索学习可上调局灶性脑梗死后大鼠梗死灶周围皮层VEGF的表达,这种上调可能是丰富环境、探索学习促进大鼠行为学功能恢复原因。     

瑞替加滨对大鼠局灶性缺血再灌注损伤的保护机制

目的研究M型钾离子通道开放剂瑞替加滨(retigabine,RTG)对大鼠局灶性缺血再灌注损伤的影响。方法选取SD大鼠110只,随机分为假手术组(10只,Sham组),模型对照组(20只,MCAO组),治疗组(80只,RTG组)。按照给药时间再将RTG组分为0h、1h、3h及6h4个亚组,每组20只。采用线栓-再通法建立大鼠模型,于脑缺血2h后恢复灌注。RTG组经尾静脉注射瑞替加滨10.5mg/kg,假手术组和缺血再灌注组给予等量生理盐水。比较脑梗死体积变化,并进行神经功能评分,检测各组大鼠缺血半影区星形胶质细胞的增殖和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达,观察梗死皮质区域神经元的存活数量。结果 Sham组未发现脑梗死病灶,无神经功能损伤,Caspase-3阳性细胞及星形胶质细胞少见,脑皮质含有大量神经元。MCAO组和RTG组均可见大脑中动脉供血区梗死灶及神经功能损伤,但RTG治疗组梗死体积及神经功能评分均较MCAO组明显减少(P0.05),RTG6h组较其他给药组大鼠脑梗死体积及神经功能评分增加(P0.05)。MCAO组大鼠梗死周围区Caspase-3阳性细胞数、星形胶质细胞明显增多,梗死区神经元数量明显减少,但RTG各组大鼠梗死周围区Caspase-3阳性细胞数、星形胶质细胞均较MCAO组明显下降(P0.05),梗死区神经元的存活数量明显增加(P0.05),RTG0h组、RTG1h、RTG3h组最为明显。结论瑞替加滨对缺血性脑卒中具有脑保护作用,其机制可能是降低神经细胞的兴奋性,减轻缺血半影区的炎症反应,从而抑制细胞凋亡。瑞替加滨的脑保护作用具有时间依赖性,即超过一定的时间窗,脑保护作用会减弱。     

经静脉移植骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑梗死Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的　观察经静脉移植骨髓基质细胞(MSCs)治疗大鼠局灶性脑梗死时bcl- 2蛋白的表达。方法　体外培养及扩增骨髓基质细胞后,将实验大鼠2 4只分为3组:第1组(n=8)单纯大脑中动脉闭塞(MCAO)组;第2组(n=8) ,MCAO后4 8h经尾静脉注射生理盐水1ml;第3组(n=8) ,MCAO后4 8h经尾静脉注射1×10 7个MSCs。神经功能严重程度评分日一次进行。所有动物均在MCAO后第8天处死。用免疫细胞化学方法体外鉴定骨髓基质细胞;免疫组织化学染色显示鼠脑内bcl- 2蛋白表达情况。结果　原代培养2 0 d后可分离得到骨髓基质细胞,在5代以前生长形态相对稳定。与对照组相比,实验组大鼠的神经功能严重程度评分有明显改善(P<0 .0 0 1) ,且脑内bcl-2表达增加(P<0 .0 0 1)。结论　经静脉移植骨髓基质细胞可明显改善大鼠局灶性脑梗死后神经功能恢复,并可上调脑内bcl- 2蛋白表达水平。     

动脉栓塞法复制局灶性脑缺血模型的影响因素探讨

目的　提高栓塞法大鼠局灶性脑缺血 (MCAO)模型的成功率和稳定性 ,探讨大鼠体重、栓子体积、插管深度与MCAO模型成功的关系。方法　采用 2× 2× 2析因设计 ,通过检测神经功能缺损评分和脑梗死体积进行分析。结果　栓子体积、插管深度的两水平之间有显著性差异 (P <0 .0 1) ,大鼠体重两水平之间无差异 (P >0 .0 5 ) ;栓子体积和插管深度之间有显著性交互作用 (P <0 .0 5 ) ,其余两两因素之间以及三者之间无交互作用 (P >0 .0 5 )。结论　最佳造模方案是大鼠体重 2 80～ 30 0g、动脉血栓子≈ 1.0 μl、导管插入颈内动脉入口 1.5cm ,该方案制作的MCAO模型成功率高 ,梗死面积稳定 ,重复性好。导管进入大脑中动脉的深度是模型成功的关键。     

脑卒中后自然恢复的观察

我们共收集了６４例病后３天内就诊的脑卒中患者。随访中，１４例死亡，对其余５０例用ＢａｒｔｈｅｌＩｎｄｅｘ（Ｂ．Ｉ）进行了就诊时及病后１月、２月、４月、６月、１２月的日常生活活动能力（ＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＤａｉｌｙＬｉｖｉｎｇＡＤＬ）的评定，结果发现：（１）ＡＤＬ各项功能完全独立率为５０％；（２）除上楼、洗澡外，其余各项功能均在病后２月内快速恢复；（３）Ｂ．Ｉ十个项目组成了一个有难易恢复排列的等级表；（４）就诊时的Ｂ．Ｉ分值高低及尿失禁为预示卒中恢复的重要指标。     

Functional recovery after facial nerve crush is delayed in severe combined immunodeficient mice

The goal of the current study was to determine if T and B lymphocytes play a role in functional recovery after peripheral nerve injury. The time course of behavioral recovery following facial nerve crush injury at the stylomastoid foramen was established in scid mice which lack functional T and B cells and reconstituted scid mice as compared to wild-type mice. The average time necessary for recovery of full eye blink reflex and vibrissae movements in wild-type mice was 10.3+/-0.2 and 9.9+/-0.34 days, respectively. In contrast, recovery of full eye blink reflex and vibrissae movements took 14.8+/-0.54 and 12.3+/-0.41 days, respectively, in scid mice. Reconstitution of scid mice with whole splenocytes resulted in functional recovery times similar to wild-type, with eye blink reflex recovery and vibrissae movement being 10.5+/-0.3 and 10.0+/-0.0 days, respectively. These results suggest that the delayed behavioral recovery time observed in scid mice may be due to the absence of T and B lymphocytes.