高糖环境早期对血管内皮细胞的作用之商榷

目的:探讨高糖环境在48 h内对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的增殖以及粘附分子表达的影响,并观察在炎性刺激下高糖作用的改变。方法:用不同浓度的葡萄糖作用于HUVEC,用噻唑蓝法(MTT法)检测48 h内高糖对细胞增殖的影响。采用流式细胞术及细胞酶联免疫吸附法(cell ELISA)测定高糖作用下HUVEC表达的细胞间粘附分子(ICAM-1)的水平。脂多糖(LPS)与高糖联合刺激HUVEC后,比较其与只用LPS刺激情况下的ICAM-1的表达之间的差异。结果:25、45 mmol.L-1的葡萄糖在48 h内无抑制HUVEC增殖的作用,对其表达粘附分子的水平也无显著影响。但在LPS刺激条件下,高糖组HUVEC的增殖明显被抑制,ICAM-1水平也较正常糖浓度组显著增加。结论:在短期内高糖对HUVEC的增殖及粘附分子的表达无明显影响,而在炎症刺激存在下,高糖显著抑制其增殖、增加粘附分子的表达。     

香橙素通过PPARγ介导改善血管内皮细胞胰岛素抵抗

目的 研究鬼箭羽提取物香橙素(Aromadendrin,Aroma.)对高糖(High-Glucoes,HG)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelium cells,HUVECs)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用及机制.方法 实验随机分为5...     

高糖对原代人脐静脉内皮细胞的损伤作用及机制研究

目的 观察高浓度葡萄糖对原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)的损伤作用,并探讨其损伤机制.方法 分别用低浓度葡萄糖(LG组,5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖(HG组,35 mmol/L)培养基培养HUVECs 24、72、120 h,胆囊收缩素八肽(CCK-8)检测高糖对HUVECs存活率影响,荧光探针检测细胞活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平,蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、沉默信息调节因子1(silent mating type informationregulation 2 homolog 1,SIRT1)和一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 HG组处理72、120 h细胞存活率、Bcl-2均低于LG组,ROS水平、Bax和Bax/Bcl-2高于LG组,差异有统计学意义(P＜0.05).HG组处理HUVECs 24、72、120 hSIRT1和NO相对含量低于LG组,处理72、120 h eNOS低于LG组(P＜0.05).结论 高糖可使HUVECs存活率下降,增强细胞内氧化应激反应,提高Bax/Bcl-2比值,可能与抑制SIRT1-eNOS通路使NO生成减少有关.     

虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨虫草素对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法原代培养HUVECs,实验分为空白对照组、模型组、对照组、抑制剂A组、抑制剂B组、干预A组、干预B组和低、中、高浓度虫草素组。空白对照组给予正常糖浓度(5.5 mmol·L^-1);模型组给予40 mmol·L^-1高糖孵育48 h;对照组给予10μmol·L^-1白藜芦醇+高糖;低、中、高浓度虫草素组分别给予1,10,20μmol·L^-1虫草素+高糖;抑制剂A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+高糖;抑制剂B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+高糖;干预A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+20μmol·L^-1虫草素+高糖;干预B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+20μmol·L^-1虫草素+高糖。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷-酶联免疫吸附法检测光密度值观察细胞增殖能力,用Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶流式细胞术检测细胞凋亡率,用实时荧光定量聚合酶链反应检测沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)mRNA的表达水平,用Western Blot检测SIRT1蛋白的表达水平。结果模型组、对照组和低、中、高浓度虫草素组以及干预A组、干预B组的增殖能力(光密度值)分别为(1.38±0.11),(1.86±0.06),(1.44±0.03),(1.60±0.05),(1.70±0.08),(1.85±0.04)和(1.85±0.06),细胞凋亡率分别为(6.72±1.00)%,(0.56±0.37)%,(3.86±0.16)%,(2.64±0.23)%,(2.16±0.15)%,(1.57±0.28)%和(0.86±0.20)%,SIRT1 mRNA表达相对倍数分别为(0.24±0.05),(2.97±0.41),(0.62±0.07),(1.37±0.18),(2.14±0.35),(3.45±0.76)和(3.02±0.79)。模型组、对照组、高浓度虫草素组、抑制剂B组和干预B组的SIRT1蛋白表达分别为(0.82±0.11),(1.14±0.29),(0.98±0.13),(0.74±0.19)和(1.30±0.20)。对照组和高浓度虫草素组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预A组和干预B组的细胞增殖力及SIRT1 mRNA表达水平与高浓度虫草素组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预B组细胞凋亡率与高浓度虫草素组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预B组SIRT1蛋白表达与抑制剂B组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虫草素可能通过促进SIRT1表达,从而起到保护高糖损伤的内皮细胞作用。     

米非司酮对胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响及其机制

目的：考察米非司酮对单用或合并使用胰岛素和地塞米松诱导的胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法：1）将常规培养的人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,胰岛素（5×10^-6、5×10^-1和5×10^-8mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5和3×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6和1．5×10^-7mol·L^1）组。培养24或48h后,测定各组细胞葡萄糖消耗量,以考察人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗的形成情况,并通过胰岛素刺激和模型持续时间研究进一步验证造模效果。2）将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6、1×10～×10^-7mol·L^1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-5mol·L^1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组。分别加入不同浓度的药物培养24或48h,然后对各组细胞葡萄糖消耗量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位进行测定,以考察细胞功能状态变化。结果：1）胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）作用24h可诱导人脐静脉内皮细胞发生胰岛素抵抗并可维持24h,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）作用48h可诱导细胞的胰岛索抵抗并可维持36h,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6molL^-1）共同作用48h可诱导细胞的胰岛素抵抗并可维持24h。2）地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组,以及胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组人脐静脉内皮细胞的葡萄糖摄取量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位分别显著高于地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组和胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）组;胰岛素（5×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^-1）组细胞的上述指标则与胰岛素（5××10^-7mol·L^-1）组无显著性差异。结论：胰岛素、地塞米松单独使用及合用均可诱导人脐静脉内皮细胞出现胰岛素抵抗并持续一定时间;米非司酮可改善地塞米松及地塞米松＋胰岛素诱导的胰岛素抵抗内皮细胞的功能紊乱,而对胰岛素诱导的胰岛素抵抗无改善作用。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

蛹虫草提取物对高糖诱导内皮细胞衰老的影响

目的：探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物（CME）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老的影响。方法：用高糖（40mmol／L）诱导建立HUVECs衰老体外模型,以冬虫夏草提取物（CSE）（50μg／mL）为阳性对照,观察CME（12．5～100μg／mL）对内皮细胞衰老的干预作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;SA—β-半乳糖酐酶（SA—β—gal）染色法检测细胞衰老特异性的SA—β—gal活性;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内活性氧（ROS）含量。结果：经高糖干预24、48、72h后,HUVECs增殖活性OD值明显低于对照组;而且在高糖孵育96h后,SA—β-gal染色阳性细胞率明显增加;孵育48h后,处于G0／G1期细胞的百分率和ROS相对水平明显增加（P〈0．01）。与高糖组相比,CME（25～50μg／mL）孵育48和72h后细胞OD值显著提高（P〈0．05）;CME（12．5～100μg／mL）孵育96h后SA-β-gal染色阳性细胞率显著降低（P〈0．01）;孵育48h后Go／G1期的细胞百分率（P〈0．01）、细胞内ROS水平显著降低（P〈0．05）;CME25、50／μg／mL效果优于CME12．5、100〉g／mL（P〈0．05）,且与CSE50ptg／mL作用相近（P〉0．05）。结论：蛹虫草乙酸乙酯提取物可促进内皮细胞生长增殖,可能与其降低细胞内ROS水平,减轻细胞氧化应激损伤有关,从而减轻内皮细胞衰老。     

可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat对高糖环境下人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat(以下简称CIN)对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:以33.3 mmol/L的葡萄糖作用于HUVECs细胞复制氧化应激损伤模型。将HUVECs细胞分为正常组、高糖组和高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组,采用MTT法检测细胞活力,计算细胞存活率;另将HUVECs细胞分为正常组、正常+CIN 1μmol/L组、高糖组、高糖+CIN 1μmol/L组,采用硫代巴比妥酯法、黄嘌呤氧化酶法检测细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)m RNA的表达。结果:与正常组比较,高糖组细胞存活率降低(P<0.05);与高糖组比较,高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组细胞存活率升高(P<0.05),且呈浓度依赖性,但高糖+CIN 1μmol/L组与高糖+CIN 10μmol/L组间细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,高糖组细胞中MDA含量增加、SOD活性降低、ICAM-1和VCAM-1 m RNA表达增强(P<0.05),但正常+CIN 1μmol/L组细胞上述指标无明显变化(P>0.05);与高糖组比较,高糖组+CIN 1μmol/L组细胞中MDA含量降低、SOD活性增强、ICAM-1和VCAM-1 m RNA表达减弱(P<0.05)。结论:CIN对体外高糖诱导的HUVECs细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。     

银杏内酯B抑制高糖诱导内皮细胞凋亡及机制研究

目的探讨银杏内酯B对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及相关的分子机制。方法使用脐静脉血管内皮细胞作为细胞模型,分为对照组、高糖组、银杏内酯B处理组。用Transwell实验检测内皮细胞迁移,AnnexinⅤ试剂盒检测细胞凋亡,荧光试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测Bax,Bcl-2,caspase-3的表达以及p53的磷酸化。结果高糖(30 mmol·L~(-1))处理组内皮细胞迁移数量明显降低,迁移率为(66.6±15.6)%,而银杏内酯B(0.6 g·L~(-1))处理增加了内皮细胞的迁移数量,迁移率为(94.8±11.4)%。高糖处理导致内皮细胞ROS水平增高2.75倍,与高糖处理组比较,0.6 g·L~(-1)银杏内酯B完全抑制了高糖诱导的ROS产生。流式细胞仪分析表明,高糖刺激内皮细胞凋亡率为(53.8±2.6)%,银杏内酯B处理组内皮细胞凋亡率为(44.0±3.1)%。对凋亡相关蛋白的分析表明,高糖组Bax、caspase-3表达增加,Bcl-2表达降低,银杏内酯B处理抑制了Bax、caspase-3表达,并增加了Bcl-2表达。此外,高糖处理增加了内皮细胞p53表达及磷酸化,而银杏内酯B抑制高糖刺激的p53活化。结论银杏内酯B能抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,改善内皮细胞迁移功能,对高糖引起的内皮细胞损伤具有保护作用。     

木香乙醇提取物对高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制

目的 观察木香乙醇提取物(ESL)对高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及相关机制。方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为空白组、模型组(25 mmol·L^-1葡萄糖)、不同浓度ESL组(25、50、100、200μg·m L-1 ESL)。ESL预处理2 h后,模型组与ESL组均经葡萄糖诱导24 h,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β及细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管细胞黏附分子(VCAM)-1、E选择素(E-selectin)含量。通过单核细胞黏附实验观察HUVEC与人髓系白血病单核细胞(THP-1)黏附情况。采用小干扰RNA(siRNA)转染技术沉默细胞中的血红素加氧酶(HO)-1基因后观察ESL抗炎作用的变化。Western blot法检测细胞中HO-1、NF-E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达。结果 与空白组相比,模型组细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1和E-selectin含量均显著升高(P <0.05)。与模型组相比,不同浓度ESL组TNF-α、IL-6、IL-...     

高糖、高脂诱导大鼠肝脏胰岛素抵抗评价

目的:比较高糖、高脂等不同饮食诱导大鼠肝脏胰岛素抵抗模型的差异.方法:SD大鼠分成4组,分别给予普通、高糖、高脂、高糖高脂饲料,12周后检测各组空腹血糖水平、葡萄糖耐量、空腹血清胰岛素水平(FI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、肝糖原含量及肝脏葡萄糖转运体2(GLUT2)、葡萄糖转运体4(GLUT4)表达水平.结果:口服糖耐量试验中,高脂组、高糖高脂组血糖曲线下面积分别为(91.6±5.5)和(106.1±4.6)mmol·min·L-1,较对照组明显增大(P<0.05或0.001).高脂组的FI与HOMA-IR分别为(20.2±0.9) μIU·L-1和(5.1±0.3),高糖高脂组则分别为(31.4±2.0) μIU·L-1 和(8.2±0.7),均较对照组显著升高(P<0.05或0.001).高糖高脂组的肝糖原含量为(1.3±0.0) mg·g-1,也较对照组显著增多(P<0.01).高脂组和高糖高脂组的GLUT2表达分别为(75.8±4.0)%和(60.0±4.5)%,均比对照组明显降低(P<0.05或0.001);高糖、高脂、高糖高脂组的GLUT4表达分别为(60.6±5.2)%,(72.3±3.8)%,(57.1±2.9)%,同样较对照组显著降低(P<0.001).结论:高糖结合高脂饮食更适合胰岛素抵抗模型的制备.     

波生坦对高糖诱导静脉内皮细胞血管表达的影响

目的研究波生坦对高糖诱导静脉内皮细胞血管表达的影响。方法提取健康剖腹产孕妇脐静脉内皮细胞,在体外人工培养、分化、制成细胞悬液并培养。将内皮细胞随机分为3组:正常组、模型组、实验组。正常组加入正常糖浓度5.5 mmol·L^-1;模型组加入糖浓度30 mmol·L^-1;实验组在模型组的基础上加入波生坦0.1 mmol·L^-1,各组培养24 h。用荧光实时定量PCR法检测人体静脉内皮细胞血管的内皮生长因子(VEGF)、转录活化因子3(STAT3)、Toll样受体4(TLR4)水平,用免疫印迹法检测人体静脉内皮细胞的磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(pE RK1/2)表达水平。结果模型组加入高糖0,12,24 h后,VEGF水平分别为0.14±0.02,0.25±0.04,0.41±0.07,pE RK1/2水平分别为0.50±0.07,1.27±0.24,1.92±0.16,加糖24 h后与加糖前比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。加入药物24 h后,实验组、模型组和正常组VEGF水平分别为0.07±0.01,0.41±0.07,0.26±0.03;这3组的TLR4分别为0.70±0.07,1.94±0.32,1.28±0.12;这3组的p ERK1/2分别为0.66±0.05,1.92±0.16,0.92±0.02,模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论波生坦可以有效减少高糖诱导静脉内皮细胞血管VEGF的表达,其机制可能与波生坦抑制ERK信号通路有关。     

新型PPARγ激动剂CMHX008对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞纤维化的影响及机制

目的本研究以罗格列酮为对照,探讨新型PPARγ激动剂CMHX008对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞纤维化标志的影响及机制。方法罗格列酮和CMHX008处理高糖培养的HK-2细胞,CCK-8法检测不同药物浓度处理后的细胞存活率;免疫印迹法检测纤维化标志蛋白和磷酸化PPARγ(Ser273)的表达;qRT-PCR检测纤维化指标mRNA的表达;划痕和Transwell侵袭实验检测HK-2细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 CCK-8法结果显示,3μmol·L~(-1)罗格列酮和3μmol·L~(-1) CMHX008对HK-2细胞均无明显细胞毒性;免疫印迹法显示,给予罗格列酮和CMHX008能逆转高糖条件下PPARγ(Ser273)磷酸化的上调,减少TGF-β1、α-SMA的表达,增加E-cadherin的表达;划痕和Transwell实验显示,罗格列酮和CMHX008可以抑制高糖引起HK-2细胞迁移和侵袭能力的增强。结论与罗格列酮类似,新型PPARγ激动剂CMHX008能抑制高糖引起的HK-2细胞纤维化标志物的上调,减弱细胞的迁移和侵袭能力,提示CMHX008有改善糖尿病引起肾脏纤维化的作用,其机制可能与抑制PPARγ(Ser273)磷酸化有关。     

卡托普利与黄芪注射液对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察卡托普利、黄芪注射液及两者合用对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）株凋亡的抑制作用,初步探讨其机制。方法将HUVEC分为11组：①正常对照组（Normal）;②H2O2模型组（Model）：细胞培养基中加入2.00 mmol&#8226;L 1H2O2孵育4 h;③卡托普利低、中、高浓度组：细胞培养基中加入0.5,5.0,50.0 μg&#8226;mL 1卡托普利预处理24 h,再加入2.00 mmol&#8226;L 1H2O2孵育;④黄芪注射液低、中、高浓度组：细胞培养基中加入0.1,1.0,10.0 mg&#8226;mL 1黄芪注射液预处理24 h,再加入2.00 mmol&#8226;L 1H2O2孵育;⑤两药合用低、中、高浓度组：细胞培养基同时加入具有上述3种终浓度卡托普利和黄芪注射液混合液预处理24 h,再加入2.00 mmol&#8226;L 1H2O2孵育。流式细胞术测定内皮细胞凋亡率,吖啶橙溴化乙啶荧光染色（AO EB染色）观察细胞凋亡形态,Western blotting检测Bcl 2表达。结果与H2O2模型组比较,正常对照组、卡托普利各浓度组和黄芪注射液中、高浓度组早期凋亡率明显降低（P＜0.05或P＜0.01）;正常对照组、卡托普利和黄芪注射液中、高浓度组总凋亡率均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）, Bcl 2含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。各浓度联合用药组与单独用药组比较,早期凋亡率、总凋亡率明显降低,Bcl 2含量明显升高,均差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。结论不同浓度卡托普利、黄芪注射液及两药合用可降低H2O2诱导的HUVEC凋亡率,增强Bcl 2表达,且呈一定浓度依赖性。相同浓度两药联用作用优于单药组。     

卡托普利对冠心病患者胰岛素抵抗的临床研究

目的:了解卡托普利对冠心病患者胰岛素抵抗的改善情况。方法:将88例冠心病患者随机分为A组和B组。两组均接受冠心病常规治疗,A组在此基础上口服卡托普利。观察血糖、血脂、胰岛素、胰岛素敏感指数(IAI)、外周胰岛素敏感度(SI)等指标。结果:服用卡托普利的A组治疗后,空腹血糖、TC、TG、LDL均下降(P<0.05);两组治疗后各时段胰岛素与本组治疗前比较,差异无显著性(P>0.05);A组患者服用卡托普利后,IAI与SI均较治疗前升高(P<0.05)。结论:卡托普利可改善冠心病患者胰岛素抵抗。     

二甲双胍激活Sirt3信号抑制高糖诱导内皮细胞衰老的实验研究

目的: 研究二甲双胍抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)衰老的作用与机制。方法: 传代培养HUVECs,高糖刺激HUVECs 48 h建立血管内皮细胞衰老模型,采用噻唑蓝法(MTT)检测HUVECs活力,2',7'-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老水平。使用Sirt3抑制剂3-TYP作用HUVECs后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p53、PAI-1及Sirt3的蛋白表达水平。结果: 与正常对照组相比,高糖组中HUVECs的活力降低,细胞内ROS的水平和MDA含量增加,IL-6、TNF-α的分泌量增加,衰老阳性细胞的百分比增加,二甲双胍干预后能明显改善高糖诱导HUVECs的上述变化。3-TYP能显著逆转二甲双胍对p53、PAI-1、Sirt3蛋白表达的调控作用。结论: 二甲双胍对高糖诱导的HUVECs衰老具有明显改善作用,其作用机制与激活Sirt3密切相关。     

齐墩果酸衍生物对胰岛素抵抗的改善作用及机制

目的研究齐墩果酸衍生物Bio对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用,并探讨其作用机制。方法通过高浓度胰岛素诱导HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模型。采用葡萄糖氧化酶法,检测不同浓度化合物对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗的影响。RT-PCR测定化合物对PPARγmRNA转录水平的影响。Western blot检测化合物对PPARγ蛋白表达的影响。结果 HepG2细胞经1.72×10-5mol·L-1的胰岛素诱导后,葡萄糖消耗量明显降低(P<0.05),胰岛素抵抗模型建立成功。10-5、10-6、10-7mol·L-1的Bio均可增加HepG2胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗(P<0.05),增加率分别为135%、62%、39%。RT-PCR检测显示Bio可提高胰岛素抵抗细胞PPARγmRNA的表达。Western blot结果显示Bio可上调胰岛素抵抗细胞中PPARγ蛋白的表达。结论 Bio对HepG2细胞的胰岛素抵抗具有改善作用,其作用机制与上调PPARγ的表达相关。     

高甘油三酯血清对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的:研究单纯高甘油三酯血清(HTGBS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤作用。方法:体外培养HUVEC,观察不同浓度的HTGBS对血管内皮细胞活力(MTT法测吸光度A值)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性,丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的影响。运用WesternBlot和酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测各组细胞中血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白的表达和细胞培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)的含量。结果:5%浓度的HTGBS对血管内皮细胞有明显的损伤作用,显著降低细胞活力、NO含量和SOD、NOS活性(P<0.01),显著升高血管内皮细胞中LDH、iNOS活性和MDA含量(P<0.01),并且5%HTGBS显著诱导细胞HO-1蛋白的表达并增加细胞培养液中CO的生成量(P<0.01)。结论:HTGBS体外诱导HUVEC氧化损伤,使细胞活力和抗氧化能力显著降低,增加其通透性及脂质过氧化程度,影响内皮细胞分泌功能并能诱导HO-1蛋白表达代偿性升高。     

糖维康对胰岛素抵抗大鼠氧化应激的拮抗作用

目的 研究方药糖维康(TWK)对胰岛素抵抗大鼠氧化应激的拮抗作用.方法 采用高脂高糖饲料喂养法制备胰岛素抵抗大鼠的动物模型,同时给予不同剂量的TWK干预,实验10周后测定大鼠的血糖、血清中胰岛素等,计算胰岛索的敏感指数(ISI).结果 15.0、7.5 g(生药)·kg~(-1)TWK及78 mg·kg~(-1)盐酸二甲双胍(Met)+15 g(生药)·kg~(-1)TWK可使胰岛素抵抗大鼠的谷胱什肽降低至正常水平(P>0.05),78 mg·kg~(-1) Met+15 g(生药)·kg~(-1)TWK还可使血清中SOD恢复至正常水平(P>0.05).结论 TWK对胰岛素抵抗大鼠的氧化应激具有拮抗作用.