粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

TGF-β3与熊果酸抑制人结肠癌细胞增殖作用的研究

目的研究TGF-β3与熊果酸(ursolic acid,UA)抑制结肠癌细胞增殖作用的关系及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色法和流式细胞术分析不同浓度UA对HCT116细胞增殖的作用。利用Western blot和流式细胞术等方法分析UA对HCT116细胞凋亡的影响。通过RT-PCR和(或)Western blot实验分析UA在HCT116细胞中对TGF-β3、Smad2/3和β-catenin表达及磷酸化水平的影响。采用TGF-β3重组腺病毒和特异性抑制剂以及萤光素酶报告质粒分析TGF-β3介导UA抑制结肠癌细胞增殖的可能分子机制。结果UA能明显抑制HCT116细胞增殖,诱导G1期阻滞,并促进其凋亡。UA能明显降低TGF-β3的mRNA和蛋白表达水平;UA对Smad2/3的总蛋白水平无明显影响,但能明显降低Smad2/3的磷酸化水平;外源性过表达TGF-β3可部分逆转UA对HCT116细胞增殖的抑制作用,TGF-β3特异性抑制剂则增强UA对HCT116细胞增殖的抑制作用;UA降低β-catenin蛋白水平,并明显抑制Wnt/β-catenin信号转导;外源性过表达TGF-β3促进β-catenin蛋白表达,并部分逆转UA对β-catenin蛋白表达的抑制效应;TGF-β3特异性抑制剂增强UA对β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论 UA能抑制结肠癌细胞HCT116增殖并诱导凋亡,其作用可能是通过下调TGF-β3表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号转导。     

小檗碱抑制HCT116细胞生长与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究小檗碱对结肠癌细胞的增殖抑制作用与Wnt/β-catenin信号的关系。方法结晶紫染色法检测小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用,采用流式分析及West-ern blot研究小檗碱诱导HCT116细胞凋亡;Western blot检测β-catenin蛋白表达、RT-PCR法检测β-catenin mRNA表达,确定小檗碱对其表达的影响;采用外源性过表达β-cate-nin研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与β-catenin的关系。结果小檗碱处理组细胞较对照组细胞增殖明显受到抑制,并诱导HCT116细胞凋亡。小檗碱处理组全细胞、胞质及核内β-catenin蛋白水平均明显较对照组低。外源性过表达β-catenin能减弱小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用。小檗碱处理组β-catenin mRNA表达明显受到抑制。结论小檗碱能抑制HCT116细胞增殖并抑制Wnt/β-catenin信号转导,其机制可能与下调β-catenin mRNA表达有关。     

美洛昔康抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究美洛昔康(meloxicam,Mel)对人结肠癌细胞Lo Vo增殖抑制作用及其机制。方法以人结肠癌细胞株Lo Vo为研究对象,体外药物敏感试验(结晶紫染色)和流式细胞术(FCM)分析Mel对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术和HE染色检测Mel对细胞凋亡的影响;萤光素酶报告质粒检测Mel对Wnt/β-catenin通路信号转导的影响;Western blot检测Mel对细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Mel能抑制Lo Vo细胞增殖,72 h、100μmol·L-1Mel的细胞抑制率高达(57.635±3.86)%(t=10.044,P=0.001);Mel能诱导Lo Vo细胞凋亡,24 h、60μmol·L-1Mel的细胞凋亡率达到(33.6±1.7)%(t=30.166,P=0.001);Mel能降低TCF/LEF及Myc/Max报告质粒的萤光素酶活性,24 h、60μmol·L-1Mel可使TCF/LEF和Myc/Mac报告的荧光素酶活性分别降至(40.05±2.79)%(t=14.864,P=0.001)和(35.9±2.38)%(t=16.904,P=0.001);Mel能下调细胞内β-catenin蛋白水平,40μmol·L-1Mel在24、48 h时,可将β-catenin蛋白水平分别降至(71±3.78)%(t=7.353,P=0.003)、(52.66±3.57)%(t=11.724,P=0.001)。结论 Mel能抑制Lo Vo细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路信号转导,降低细胞内β-catenin蛋白水平有关。     

dalbinol通过ROS/Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的探讨天然产物dalbinol对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测dalbinol对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用;利用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡率和ROS水平;通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(4.8±0.53)、(2.5±0.43)和(0.6±0.22)μmol·L-1;Hoechst 33342染色观察到细胞皱缩、核固缩和染色质凝集等典型凋亡的形态学变化,同时dalbinol可剂量依赖性地提高细胞凋亡率,且能增加细胞内ROS水平;Western blot结果发现dalbinol通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平,上调促凋亡蛋白Bax和Bim的表达,从而促进cleaved caspase-3和cleaved PARP活化裂解,进而诱导细胞凋亡;此外,dalbinol通过抑制Dvl-2和GSK3β(p S9)的蛋白表达,从而降低总的β-catenin和胞核β-catenin的表达,但胞质β-catenin无明显变化,最终下调Wnt/β-catenin通路下游靶蛋白c-Myc和Survivin的表达水平。结论dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与提高细胞内ROS水平和抑制Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

青蒿琥酯诱导人结肠癌细胞凋亡与Wnt/β-catenin信号通路的关系研究

目的研究青蒿琥酯(ART)对人结肠癌Lovo细胞增殖的影响和可能的分子机制。方法采用噻唑蓝实验(MTT)检测ART对Lovo细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术和电镜检测ART对细胞凋亡的影响,荧光素酶报告质粒检测ART对Wnt/β-catenin通路中TCF4/LEF转录活性的影响,Western blot检测ART对细胞内β-catenin、GSK-3β、cMyc以及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,ART能抑制Lovo细胞增殖,72 h、320μmol·L~(-1)ART的细胞抑制率高达(78.99±1.95)%(F=898.301,P=0.000)。ART能诱导细胞凋亡,24 h、160μmol·L~(-1)ART的细胞早期凋亡率达到(19.00±0.05)%,同时电镜观察到细胞凋亡的形态学表现。ART能降低TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性,24 h、160μmol·L~(-1)ART可使TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性降至(0.36±0.30)%(F=470.954,P<0.01);ART处理48 h后,GSK-3β和caspase-3呈浓度依赖性升高(P<0.01),而β-catenin和c-Myc蛋白水平呈药物浓度依赖性降低(P<0.01)。结论青蒿琥酯能明显抑制结肠癌Lovo细胞增殖,并促进其凋亡,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白7的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞生长的抑制作用与骨形态发生蛋白7(BMP7)的关系,及其可能的分子机制。方法利用CCK-8、流式细胞术、Western blot和Annexin V-EGFP染色等方法,分析Res对HCT116细胞增殖和凋亡的影响。利用细胞增殖抑制实验、PCR和Western blot等实验,分析Res对HCT116细胞中BMP7表达的影响,以及BMP7对Res抑制结肠癌细胞增殖的影响及可能分子机制。结果 Res能抑制HCT116细胞增殖,诱导S期阻滞并促进其凋亡;Res增加BMP7在HCT116细胞中的mRNA和蛋白表达。过表达BMP7增强Res对HCT116细胞的增殖抑制作用,并促进凋亡,而BMP7特异性抗体则明显减弱此作用;在HCT116细胞中,Res对BMPs/Smads信号无明显影响,但能降低Akt1/2/3的磷酸化水平;过表达BMP7增强Res抑制Akt1/2/3磷酸化的作用,而BMP7特异性抗体明显减弱Res的这种作用;同时,过表达BMP7能增强Res抑制PTEN磷酸化的作用,而BMP7特异性抗体明显减弱Res对PTEN磷酸化的抑制。结论 Res对结肠癌HCT116细胞有增殖抑制作用,机制可能与Res通过上调BMP7表达而抑制PTEN磷酸化,最终使PI3K/Akt信号转导下降有关。     

熊果酸诱导人急性髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的作用及机制。方法用不同浓度的熊果酸处理对数生长期的U937细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测Wnt、β-catenin、p53、Bcl-2、Bax表达,以及细胞浆凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素蛋白C(CytC)蛋白表达。结果熊果酸呈浓度依赖性诱导U937细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和细胞浆AIF、CytC表达,下调Wnt、β-catenin、p53及Bcl-2表达。结论熊果酸对U937白血病细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能为抑制Wnt/β-catenin/p53信号途径促发白血病细胞死亡。     

前列腺源性ETS因子对HCT116细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨前列腺源性ETS因子(prostate-derived Ets factor,PDEF)对HCT116细胞增殖与凋亡的影响.方法 体外培养HCT116细胞,分成空白对照组,空质粒组和重组表达质粒组,空质粒组转染不含PDEF的空载体,重组表达质粒组转染PDEF重组表达质粒.荧光显微镜下观察PDEF重组质粒表达情况;RT-PCR、Western blot检测3组细胞PDEF mRNA和蛋白的表达情况;CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 荧光显微镜下空质粒组和重组表达质粒组HCT116细胞均可观察到绿色荧光蛋白的表达,表明质粒已成功转染HCT116细胞;RT-PCR结果显示,与空质粒组相比,重组质粒组PDEF基因表达增高263倍;Western blot结果可见重组质粒组有PDEF蛋白的表达,而空质粒组和对照组没有;CCK8法检测发现PDEF基因的表达能够明显抑制HCT116细胞的增殖(P＜0.05);流式细胞仪结果显示重组质粒组细胞凋亡率显著高于对照组和空质粒组(P＜0.05).结论 在HCT116细胞中表达前列腺上皮源性ETS转录因子,可以抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡.     

胰岛素样生长因子结合蛋白5与汉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖的关系研究

目的研究汉防己甲素(tetrandrine,Tet)抑制结肠癌细胞增殖作用及其可能的分子机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞术检测不同浓度Tet对结肠癌Lo Vo细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞术分析Tet对Lo Vo细胞凋亡的促进作用。利用Western blot检测Tet对IGFBP-5的表达影响。采用荧光素酶报告质粒,IGFBP5以及IGFBP5 siRNA的重组腺病毒,研究Tet抑制结肠癌细胞增殖的分子机制。结果Tet能明显抑制Lo Vo细胞增殖,并能诱导G1期阻滞,同时促进Lo Vo细胞凋亡。Tet呈浓度依赖性降低Lo Vo细胞中IGFBP5的表达水平。与对照组相比,Tet明显抑制TOPluc报告质粒的转录活性,外源性过表达IGFBP5能部分逆转这种抑制作用;Tet明显下调Lo Vo细胞中c-Myc表达水平,外源性过表达IGFBP5能部分逆转,但沉默IGFBP5表达不能逆转Tet对c-Myc表达水平的抑制作用。结论 Tet能抑制结肠癌细胞Lo Vo的增殖,并诱导凋亡,这种作用可能与Tet通过下调IGFBP5表达进而抑制Wnt/β-catenin信号有关。     

汉防己碱对人膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的分析汉防己碱(Tet)对人膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,并初步探讨其分子机制。方法利用结晶紫染色和克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭;Hochest 33258染色和Western blot检测细胞凋亡;Western blot检测Wnt/β-catenin信号的活化情况。结果汉防己碱可抑制人膀胱癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡。汉防己碱可抑制DVL蛋白表达,抑制GSK3β在9位丝氨酸的磷酸化,并降低β-catenin及其下游靶分子Cyclin D1和c-Myc的蛋白水平。结论汉防己碱可抑制人膀胱癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与其对Wnt/β-catenin信号的抑制作用有关。     

和厚朴酚抑制结肠癌细胞增殖与骨形态发生蛋白7关系的研究北大核心CSCD

目的研究和厚朴酚(honokial,HNK)对人源结肠癌细胞HCT116增殖的影响及其可能分子机制。方法采用结晶紫染色、流式细胞术检测和厚朴酚对HCT116细胞增殖和细胞周期的影响;Western blot分析和厚朴酚对增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指标Bcl-2的影响;Western blot及半定量PCR分析和厚朴酚对HCT116细胞中内源性骨形态蛋白7(BMP7)表达的影响;利用BMP7过表达腺病毒及抗体,通过结晶紫定量和Western blot,分析和厚朴酚联合应用BMP7腺病毒与抗体对HCT116细胞增殖的影响。结果和厚朴酚呈浓度和时间依赖性地抑制HCT116细胞增殖、诱导细胞凋亡、使细胞阻滞于G_2期,并上调PCNA的蛋白表达水平,下调Bcl-2的蛋白表达水平;和厚朴酚可上调HCT116细胞中BMP7的mRNA及蛋白表达水平;外源性BMP7过表达腺病毒可促进和厚朴酚的增殖抑制和促凋亡作用,而BMP7抗体可抑制此作用。结论和厚朴酚能够抑制HCT116的增殖并促进凋亡,其机制可能与上调BMP7的表达有关。     

汉防已甲素抑制人结肠癌细胞增殖与TGF-β1的关联机制研究

目的研究汉防已甲素(tetrandrine,Tet)抑制人结肠癌细胞增殖与TGF-β1的关系。方法利用细胞增殖抑制实验、定量PCR、流式细胞术、Annexin V-EGFP染色以及Western blot实验,分析Tet对HCT116细胞增殖和凋亡的影响;利用定量PCR、Western blot、细胞增殖抑制和免疫荧光实验,分析在结肠癌细胞中Tet抗结肠癌作用与TGF-β1的关系,以及TGF-β1介导Tet抗结肠癌作用可能的分子机制。结果与对照组相比,Tet抑制HCT116细胞增殖、诱导G1阻滞和细胞凋亡;Tet增加TGF-β1在HCT116细胞中的m RNA和蛋白表达水平,TGF-β1增强Tet抑制HCT116细胞增殖和促进其凋亡,抑制TGF-β1明显减弱Tet的这种作用;Tet降低Akt1/2/3的磷酸化水平,抑制PI3K增强Tet对结肠癌细胞增殖的抑制作用;TGF-β1增强Tet对Akt1/2/3磷酸化的抑制作用,而Tet降低Akt1/2/3磷酸化水平的作用可被TGF-β1抑制剂部分逆转;沉默PTEN促进Akt1/2/3磷酸化,但TGF-β1能翻转沉默PTEN对Akt1/2/3磷酸化的促进作用。结论 Tet能抑制结肠癌细胞增殖和促进凋亡,机制可能与其通过促进TGF-β1表达,抑制Akt1/2/3磷酸化有关。     

芹菜素调控Wnt信号通路对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的　探讨芹菜素对Wnt/β-catenin 信号通路的调控及其对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。方法　在经芹菜素处理的人卵巢癌细胞系HO8910 中,通过实时PCR 和Western blot 检测Wnt/β-catenin 通路相关蛋白及下游蛋白的表达;采用Transwell 法检测细胞体外迁移和侵袭能力;利用Luciferase 双荧光素酶报告系统检测Wnt/β-catenin 通路的活化情况。结果　芹菜素作用24 h 能够有效抑制HO8910 细胞的迁移和侵袭能力,降低β-catenin 和E-catenin 的mRNA 相对表达量和蛋白表达水平。芹菜素对Wnt/β-catenin 信号通路中相关蛋白及下游靶蛋白具有调控作用（P<0.0001）。结论　芹菜素可以通过抑制人卵巢癌细胞中Wnt/β-catenin 信号通路,下调促转移靶蛋白的表达,抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力。     

经典Wnt/β-catenin/TCF7L2信号通路在1型糖尿病心肌病中的作用

目的探讨Wnt/β-catenin/TCF7L2信号通路在1型糖尿病小鼠心肌病中的作用。方法利用7～8周龄♂C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素,建立1型糖尿病模型,糖尿病小鼠成模4周后,随机分为糖尿病组、β-catenin通路抑制剂i CRT14(2. 5、5 mg·kg~(-1))组。连续腹腔给药8周后,HE染色检测心脏细胞形态;免疫组化及Western blot检测β-catenin、TCF7L2蛋白表达;荧光定量PCR检测β-catenin、Tcf7l2、Nppa、c-Myc mRNA表达。结果糖尿病组心肌细胞排列相对紊乱、细胞核大小不规则; Western blot和免疫组化结果显示,糖尿病组小鼠心脏β-catenin、TCF7L2表达升高,心肌细胞核内β-catenin、TCF7L2表达明显增多; q PCR显示,β-catenin/TCF7L2通路下游基因c-Myc、心肌肥大基因Nppa表达上调。i CRT14组小鼠心肌细胞排列相对规则,形态趋于正常;β-catenin、TCF7L2蛋白表达降低,核内表达减少;肥大基因Nppa、下游基因c-Myc mRNA表达明显减低。结论 Wnt/β-catenin/TCF7L2通路活化在糖尿病心肌病发生、发展中发挥重要作用,β-catenin抑制剂能明显减缓1型糖尿病小鼠心肌病的进程。     

shRNA沉默STAT3基因对结肠癌细胞增殖及顺铂敏感性的影响

目的 构建携带信号转导与转录激活子3（STAT3）基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体,观察pGPU6/GFP/Neo- STAT3重组质粒对HCT116细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法 设计并构建稳定转录shRNA STAT3的质粒,采用脂质体法转染结肠癌HCT116细胞,Western blot法检测转染后STAT3蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖变化。重组质粒联合顺铂作用于HCT116细胞后,MTT法检测细胞存活率。结果 成功构建了pGPU6/GFP/Neo-STAT3重组质粒,测序证实重组质粒构建正确。重组质粒转染HCT116细胞后,细胞增殖明显受抑制,STAT3蛋白表达降低。重组质粒联合顺铂治疗后,细胞增殖活性显著降低。结论 shRNA STAT3重组质粒能明显降低HCT116细胞中STAT3蛋白的表达,抑制细胞增殖,提高结肠癌细胞对顺铂的敏感性。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖研究

目的 探讨葛根素(puerarin)对人子宫颈癌细胞株HeLa的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0,12.5,25,50)处理48 h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞凋亡的影响.Western blotting 检测葛根素对HeLa细胞Wnt,β-catenin ,Bax,Bcl-2,p53和p21表达水平影响.结果 葛根素对 HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,呈明显的剂量-效应依赖性;葛根素明显促进HeLa细胞凋亡;Western blotting检测显示,经葛根素处理72 h后,Wnt,β-catenin ,Bcl-2,p53和p21表达明显下降,呈浓度依赖性.结论 葛根素可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin 信号通路相关.     

二烯丙基二硫上调RORα抑制人胃癌细胞Wnt/β-catenin通路靶基因

目的观察DADS上调RORα对人胃癌MGC803细胞Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达的影响。方法RT-PCR、Western blot与免疫共沉淀检测Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达。荧光素酶报告基因检测c-Myc基因启动子活性。结果 RT-PCR与Western blot显示,DADS处理后各组RORαmRNA与蛋白表达上调(P<0.05),而沉默RORα较对照组明显下调(P<0.05)。DADS处理后各组Wnt1 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05)。沉默RORα较对照组Wnt1 mRNA与蛋白明显上调(P<0.05)。DADS处理前后各组β-catenin mRNA与蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。免疫共沉淀显示,DADS处理组RORα与β-catenin结合明显增加,而沉默组与β-catenin结合明显减少(P<0.05)。DADS可明显下调核内β-catenin与p-β-catenin(P<0.05),而沉默RORα可明显上调β-catenin与p-β-catenin(P<0.05)。同时,DADS可明显下调TCF-4表达(P<0.05),而沉默RORα可明显上调TCF-4(P<0.05)。DADS可明显下调Axin、c-Myc、c-Jun mRNA与蛋白表达(P<0.05),而沉默RORα作用相反(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示,DADS处理后,各组c-Myc启动子活性明显低于处理前(P<0.05)。沉默组c-Myc启动子活性明显高于对照组(P<0.05)。结论 DADS可上调RORα抑制Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达。     

白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞生长的研究

目地探讨白藜芦醇抗肿瘤活性的作用机制。方法本研究使用白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HCT116后,通过细胞生长实验和MTT增殖实验来探讨其对HCT116细胞生长、增殖的影响;通过免疫印迹实验检测β-catenin的表达水平和Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达,检测白藜芦醇对Wnt信号通路活化的影响。结果白藜芦醇能显著抑制HCT116的生长增殖,降低β-catenin的表达水平,抑制Wnt信号通路靶基因c-Myc和cyclinD1的表达。结论白藜芦醇通过抑制Wnt信号通路从而抑制肿瘤生长,本研究为白藜芦醇抗肿瘤机制提供了新的思路和方向。     

白细胞介素 -18抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)通过调控Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路影响肝癌细胞增殖及凋亡的作用机制.方法 培养肝癌细胞株HepG2、Bel-7402与正常肝细胞株L02,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测细胞IL-18 mRNA及蛋白表达.预实验中筛选出HepG2细胞为实验细胞,分别转染pcDNA、pcDNA-IL-18,Western blotting验证转染效率.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)与膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色实验分别检测HepG2细胞增殖及凋亡情况.qRT-PCR与Western blotting分别检测HepG2细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平.HepG2细胞中转染IL-18过表达质粒后再加入Wnt/β-catenin通路激活剂(SKL2001),并检测其对HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 与L02细胞相比,肝癌HepG2、Bel-7402细胞中IL-18 mRNA及蛋白表达均显著降低[(1.02±0.12)比(0.39±0.09)/(0.45±0.12);(0.41±0.14)比(0.11±0.13)/(0.19±0.14)](P<0.05);IL-18过表达后HepG2细胞吸光度[24 h(0.31±0.10)比(0.27±0.13);48 h(0.63±0.12)比(0.39±0.14);72 h(0.98±0.18)比(0.54±0.15)]、Bcl-2及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平均明显低于pcDNA组,而细胞凋亡率[(6.93±0.22)％比(20.54±3.97)％]及Bax蛋白表达水平均明显升高;SKL2001可激活Wnt/β-catenin信号通路进而逆转IL-18对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的促进作用.结论 IL-18可下调肝癌细胞β-catenin表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路进而减弱肝癌细胞增殖能力并提高细胞凋亡水平.