HIF-1α、ROCK-2、FoxM1在醋酸铅诱导PC12细胞损伤中的表达变化

目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶-2(Rho associated coiled coil forming protein kinase-2,ROCK-2)、叉头蛋白M1(forkhead box protein M1,Fox M1)在醋酸铅[Pb(Ac)_2]诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤中的表达和意义。方法将PC12细胞暴露于不同浓度的Pb(Ac)_2(100、200、400μmol·L~(-1))24 h以诱导细胞发生损伤。采用噻唑蓝比色法检测细胞的存活率,倒置显微镜观察细胞形态的变化,乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度,采用试剂盒检测丙二醛(malondialdehvde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,Hoechst 33342单荧光染色法观察细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞HIF-1α、ROCK-2、Fox M1、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia,Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。结果 MTT实验显示Pb(Ac)_2对PC12细胞具有明显抑制作用并呈剂量依赖性,与对照组相比,Pb(Ac)_2可增加细胞内LDH漏出率,升高MDA含量,降低SOD含量,诱导细胞发生凋亡。此外,Pb(Ac)_2上调细胞HIF-1α、ROCK-2的表达,下调Fox M1的表达,提高Bax/Bcl-2的表达比例。结论 Pb(Ac)_2诱导PC12细胞发生凋亡可能与HIF-1α、ROCK-2、FoxM 1的表达以及自由基损伤有关。     

醋酸铅对PC12细胞的增殖与凋亡研究北大核心CSCD

目的探讨醋酸铅(Pb(Ac)2)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的增殖与凋亡中低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)与Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(rho associated coiled coil forming protein kinase, ROCK)信号通路的关系以及潜在的作用机制。方法 (1)将体外培养的PC12细胞分为对照组和实验组。对照组加入含血清的培养基,低、中、高剂量实验组加入100,200,400μmol·L-1的Pb(Ac)2染毒,用噻唑蓝还原法测定药物对细胞增殖率的影响,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)漏出率试剂盒检测细胞损伤程度,用DCFH-DA探针染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,以蛋白质印迹法检测细胞内HIF-1α、 ROCK-1、ROCK-2、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein, Bax)的蛋白表达。(2)采用siRNA技术沉默PC12细胞HIF-1α基因技术,将细胞分为对照组、实验组、阴性对照组、干扰组,观察细胞中HIF-1α、ROCK-1,ROCK-2蛋白表达水平的变化。结果随着Pb(Ac)2剂量的增大,药物对PC12细胞的损伤作用加深。对照组和高剂量实验组的存活率分别为(100.00±3.22)%,(47.21±4.98)%,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,中、高2个剂量实验组细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),表明Pb(Ac)2诱导细胞凋亡。Pb(Ac)2可上调细胞内HIF-1α、ROCK-1、ROCK-2、Bax/Bcl-2的蛋白表达比例(均P<0.01)。当采用小RNA干扰HIF-1α后,发现醋酸铅对PC12细胞损伤的程度降低,HIF-1α、ROCK-1、ROCK-2的蛋白表达水平下降(均P<0.01)。结论 Pb(Ac)2诱导PC12细胞发生凋亡可能与HIF-1α和ROCK信号通路的表达以及自由基损伤有关。     

胡黄连苷Ⅱ在谷氨酸诱导的PC12细胞损伤中的保护作用

目的：以谷氨酸为工具药建立氧化应激模型,观察胡黄连苷Ⅱ的保护作用并初步探讨其作用机制。方法：分别用不同浓度的胡黄连苷Ⅱ和10mmol/L的谷氨酸处理PC12细胞,通过MTT法检测细胞的活力,CDCFH染色法检测细胞氧自由基水平,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Western blot检测bcl-2表达。结果：胡黄连苷Ⅱ能明显减轻谷氨酸对PC12细胞的损伤,提高细胞的存活率,降低细胞内的氧自由基水平,上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡。结论：胡黄连苷Ⅱ对谷氨酸引起的PC12细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制或清除谷氨酸诱导的细胞内活性氧的生成,调节凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达有关。     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。     

芍药苷对6羟基多巴胺致PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨芍药苷对6羟基多巴胺(6-OHDA)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的细胞损伤保护作用及其可能机制.方法:体外培养PC12细胞,用6-OHDA建立细胞损伤模型.MTT和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定存活率;RT-PCR检测Bcl-2、Bax的mRNA表达,Hochest33342/PI双染检测细胞凋亡率.结果:25、50、100 μmol·L-1芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,降低LDH漏出率,增加Bcl-2 mRNA和减少Bax mRNA表达.结论:芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能与调节Bax、Bcl-2表达有关.     

瓜子金皂苷丙对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷丙对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),荧光酶标仪检测细胞内活性氧(R0S)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24 h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞凋亡明显,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比之下降,线粒体膜电位降低,细胞内ROS显著增加。与MPP+处理组相比,瓜子金皂苷丙10μmol·L-1组,细胞存活率显著升高(P<0.01);细胞凋亡率下降(P<0.01);Bcl-2/Bax比率增加(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01),ROS含量减少。结论瓜子金皂苷丙可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除R0S有关。     

阿立哌唑对Aβ_(25-35)诱导的神经PC12细胞损伤的影响及机制

目的:研究阿立哌唑对Aβ淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的神经PC12细胞损伤的影响及其机制。方法:将PC12细胞随机分为正常对照组、模型组(20μmol/L Aβ_(25-35))和阿立哌唑低、中、高浓度组(5、10、20μmol/L阿立哌唑+20μmol/L Aβ_(25-35)),加入含相应药物的培养基培养48 h,每组6个复孔。MTT法检测细胞活力(光密度值),Hoechst染色法检测细胞凋亡情况,分光光度法检测细胞中天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9活性,Western blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白表达及蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型组细胞光密度值降低,凋亡率增加,Caspase-3、Caspase-9活性和Bax蛋白表达均增强,Bcl-2、PI3K蛋白表达和Akt磷酸化水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,阿立哌唑低、中、高浓度组细胞光密度值增加,凋亡率减少,Caspase-3、Caspase-9活性减弱,Bcl-2、PI3K蛋白表达和Akt磷酸化水平均增加;阿立哌唑中、高浓度组细胞Bax蛋白表达减弱(P<0.05或P<0.01)。结论:阿立哌唑可明显抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡,其作用可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

低浓度亚硝酸钠预处理对乙醇损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨低剂量NaNO2预处理对乙醇损伤PC12细胞的保护作用。方法采用400 mmol.L-1乙醇处理2 h制作PC12细胞乙醇损伤模型。细胞增殖指标采用MTT、活细胞计数法;细胞凋亡检测采用流式细胞术和Hoechst 33258/PI活细胞染色法;比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量。Western blot检测相关蛋白表达。结果用0.14 mmol.L-1 NaNO2预处理细胞24 h,再用400 mmol.L-1乙醇作用2 h,与单纯乙醇处理组相比,细胞凋亡率明显下降;SOD、CAT酶活性和GSH-Px含量升高,MDA含量下降;Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量降低,Bcl-2和HIF-1α蛋白表达量升高;一氧化氮清除剂c-PTIO可以部分逆转NaNO2的这些作用。结论低剂量NaNO2预处理能够提高PC12细胞抗氧化水平,拮抗乙醇诱导的细胞凋亡,机制与亚硝酸盐还原为NO和HIF-1α的表达增加有关。     

低浓度亚硝酸钠预处理对高浓度亚硝酸钠损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨低浓度亚硝酸钠(NaNO2)预处理对高浓度亚硝酸钠损伤PC12细胞的保护作用。方法 NaNO20.14 mmol·L-1处理PC12细胞24 h,然后用NaNO245 mmol·L-1再处理2 h制作预处理模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率,流式细胞术和Hoechst 33258/PI双染检测细胞凋亡,比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,Western印迹法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和凋亡相关蛋白表达。结果与NaNO245 mmol·L-1处理组相比,NaNO20.14 mmol·L-1预处理+NaNO245 mmol·L-1组的PC12细胞存活率增加、凋亡减少(P<0.05);细胞SOD、CAT活性和GSH-Px含量明显增加,MDA含量明显下降,促凋亡相关蛋白Bax,胱天蛋白酶9,胱天蛋白酶3表达明显下降,凋亡抑制蛋白Bcl-2和HIF-1α表达明显升高(P<0.05);加入一氧化氮特异性清除剂c-PTIO可以逆转这种现象(P<0.05)。结论低浓度NaNO2预处理增加PC12细胞抗氧化能力,拮抗高浓度NaNO2诱导的细胞凋亡,机制与NaNO2还原为一氧化氮和增加HIF-1α表达有关。     

胰岛素样生长因子-1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对氯化钴（CoCl2）诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤 PC12细胞凋亡的作 用及机制。方法 取对数生长期的 PC12细胞,分别以 10、20、40、80 μmol/L的 CoCl2溶液和 100、200、400 μg/L的 IGF- 1溶液处理细胞,CCK-8法检测细胞活力,得出 CoCl2和 IGF-1最佳干预浓度。根据选定的实验条件,应用 CoCl2处理 PC12细胞建立 HIE细胞模型,实验分为对照组、CoCl2处理组、IGF-1+CoCl2处理组。分组处理 24 h后采用 CCK-8法 检测细胞存活率;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞 Bax、Bcl-2及 Caspase-3的蛋白的表达 水平。最后在上述实验的基础上,设 CoCl2处理组、CoCl2+IGF-1处理组、HIF-1α抑制剂 2-甲氧雌二醇（2-MeOE2）+ CoCl 2组和 CoCl2+2-MeOE2+IGF-1组,Western blot观察 IGF-1、2-MeOE2及两者共用对 PC12细胞 HIF-1α及 Bax的表 达水平的影响。结果 CCK-8检测结果显示,40 μmol/L CoCl2和 200 μg/L IGF-1为最佳干预浓度。利用以上浓度分 组干预细胞 24 h后,与 CoCl2组相比,IGF-1+CoCl2处理组细胞存活率明显提升,TUNEL阳性细胞数和细胞比例降低, 同时抗凋亡蛋白 Bcl-2表达上调,促凋亡蛋白 Bax、Caspase-3,HIF-1α表达下调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。 应用 2-MeOE2对细胞进行预处理后,CoCl2+2-MeOE2组与 2-MeOE2+IFG-1组 HIF-1α和 Bax蛋白表达差异无统计 学意义,但均较 CoCl2+IGF-1组明显下调（P＜0.01）。结论 IGF-1可抑制 CoCl2诱导的 PC12细胞凋亡,其保护作用 可能与 HIF-1α表达下调有关。     

对氨基水杨酸钠对铅诱导体外培养PC12细胞凋亡的影响

目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对铅诱导PC12细胞凋亡的影响。方法 PC12细胞培养至其对数生长期后,正常对照组和正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组细胞于正常培养液中培养24 h后弃培养液,前者加入正常培养液、后者加入PAS-Na继续培养24 h。醋酸铅模型组及醋酸铅+PAS-Na 20,100和500μmol·L~(-1)组先与醋酸铅(终浓度10μmol·L~(-1))共培养24 h后弃培养液,再加入相应浓度PAS-Na继续培养24 h。用MTT法测定细胞存活率,试剂盒方法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Hoechst33342荧光染色检测凋亡率,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测PC12细胞早期凋亡率,Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和P53蛋白水平。结果与正常对照组比较,醋酸铅模型组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡形态变化典型,细胞早期凋亡率增高(P<0.05),细胞内GSH含量降低(P<0.01),P53蛋白水平升高(P<0.01),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01);正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组上述指标未见明显变化。与醋酸铅模型组比较,醋酸铅+PAS-Na组细胞存活率增高(P<0.05),细胞凋亡率和早期凋亡率均降低(P<0.05),细胞内GSH含量增高(P<0.01),P53蛋白水平和Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05)。结论 PAS-Na对铅致PC12细胞凋亡有一定的拮抗作用,其机制可能与PAS-Na抗脂质过氧化损伤和降低Bax/Bcl-2比值有关。     

mTOR/p70S6K通路在缺氧/复氧诱导的分化后PC12神经细胞凋亡中的作用

目的探讨缺氧/复氧(H/R)诱导的分化后肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)通路的关系。方法实验分为正常对照(Con)组、H/R组、H/R+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、H/R+雷帕霉素(Rapa)组、NAC组及Rapa组。应用MTT法检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,用活性氧试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)生成,Western blot检测Bax、Bcl-2、p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)的表达。结果H/R诱导分化后PC12神经细胞凋亡,Bax表达增加,Bcl-2表达降低,NAC或Rapa显著抑制H/R所致的细胞凋亡,逆转Bax及Bcl-2表达的变化;H/R增加分化后PC12神经细胞内ROS水平,NAC显著抑制H/R所致细胞内ROS水平的增加,而Rapa对细胞内ROS水平无明显影响;H/R增加分化后PC12神经细胞p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)的表达,NAC或Rapa显著抑制H/R所致细胞p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)表达的增加。结论 H/R可能通过升高细胞内ROS水平,进而激活mTOR/p70S6K信号通路,诱导分化后PC12神经细胞凋亡。     

橙皮苷对高脂高糖诱导胰岛 β 细胞损伤的保护作用

目的探讨橙皮苷(hesperidin,HSD)对于高脂高糖诱导小鼠胰岛β细胞损伤的保护作用及机制。方法HSD预处理后,高脂高糖处理MIN6细胞。CCK-8法、Hoechst 33258荧光染色法检测MIN6细胞增殖与凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2的表达;RT-PCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β的表达;ELISA检测小鼠胰岛的胰岛素分泌功能。结果高脂高糖培养抑制MIN6细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl-2/Bax比值,增加炎症因子TNF-α、IL-1β的表达并且抑制了小鼠胰岛的胰岛素分泌;当HSD预处理后,MIN6细胞活力增加,Bcl-2/Bax比值增加,炎症因子TNF-α、IL-1β的表达有不同程度的降低,小鼠胰岛的胰岛素分泌增加。结论HSD减少了高脂高糖诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡和炎症因子分泌,改善小鼠胰岛素分泌。     

藁本内酯对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

研究藁本内酯对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的保护作用。采用MTT比色法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/propidium iodide(PI)双染法流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率;Fluo-3/AM荧光染色法检测钙离子含量;Western blot法检测线粒体和胞浆中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达。结果显示,谷氨酸具有细胞毒性,其半数抑制浓度(IC50)为15 mmol·L-1;不同浓度藁本内酯(1、5、15μmol·L-1)预处理可显著提高细胞存活率。与正常对照组相比,谷氨酸单独给药组的细胞凋亡率为13.39%;藁本内酯给药组(1、5、15μmol·L-1)使细胞的凋亡率分别减少到9.06%、6.48%和3.82%。并且藁本内酯可以显著减少谷氨酸所致的钙离子内流,Western blot结果显示,藁本内酯可能通过减少线粒体Cyt C的释放,抑制Caspase-3活性,同时升高Bcl-2/Bax比值来保护谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡。结果表明,藁本内酯对谷氨酸诱导PC12细胞的凋亡具有保护作用。该保护作用可能与抑制细胞内钙离子内流及阻断Cyt C从线粒体释放入胞浆有关。     

香菇多糖诱导鼠肝癌H22细胞凋亡机制的初步探讨

目的:初步探讨香菇多糖诱导鼠肝癌H22细胞发生凋亡的效应及机制.方法:体外实验以不同浓度的香菇多糖作用于鼠肝癌H22细胞,通过PI单染色法检测细胞周期变化,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧水平,Fluo-3/AM染色法检测细胞内钙离子浓度.体内实验通过对肿瘤组织做病理切片,H-E染色观察细胞凋亡形态特征,免疫组化法检测蛋白分子Bcl-2及Bax的表达.结果:香菇多糖能够诱导H22细胞凋亡并呈剂量依赖关系,同时将细胞阻滞于G2/M期,荧光显微镜的定性观察表明香菇多糖能升高细胞内活性氧水平和钙离子浓度,H-E染色结果显示肿瘤组织中可见散在分布的凋亡细胞,免疫组化结果表明经香菇多糖处理后肿瘤组织中Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.结论:香菇多糖可能通过上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调原癌基因Bcl-2蛋白水平表达,将肿瘤细胞阻滞于G2/M期,进而启动细胞内凋亡程序,出现一系列凋亡细胞特有的形态学特征和生化特征,从而发挥抗肿瘤作用.     

二苯乙烯苷对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤的抗凋亡作用

目的:探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-O-β-D-glucoside,TSG)对H2O2诱导的PC12细胞损伤的抗凋亡作用。方法:本实验分为正常对照组、H2 O2处理组和H2 O2+TSG(0.1,1,10和50μmol.L-1)预处理组。采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡程度,Western Blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果:与正常对照组相比,细胞经H2O2诱导处理后,细胞存活率降低,LDH释放增加,Hoechst染色显示凋亡细胞增多,细胞核呈固缩突亮或碎块状致密浓染,Western Blotting显示促凋亡蛋白Bax表达升高,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bcl-2与Bax的比值降低。不同浓度TSG预处理能改善H2O2所致的细胞存活率降低,减轻细胞凋亡程度,减少促凋亡蛋白Bax的表达以及增加抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:TSG可抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与抗凋亡有关。     

神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探索神经妥乐平对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响及其潜在机制.方法 用CCK-8法检测细胞存活率,以流式细胞术检测细胞氧化损伤的发生、细胞内活性氧的生成及线粒体膜电位的变化,荧光显微镜观察细胞内活性氧的产生,qRT-PCR测定Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 PC12细胞存活率随H2O2浓度的增加而逐渐下降.其中,450μM H2O2处理细胞24 h后细胞存活率、凋亡率、坏死率明显降低;细胞内活性氧水平表达明显升高;线粒体膜电位JC-1红/绿荧光比值下降;Bax和Caspase-3的mRNA表达升高,而Bcl-2的mRNA表达下降,以上指标与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而预先给予0.01UN/ml的NTP处理细胞12h可明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率和坏死率,减少细胞内活性氧生成并提高线粒体膜电位,抑制Bax和Caspase-3的mRNA表达,促进Bcl-2 mRNA的表达,以上指标与H2O2组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NTP能抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平、维持线粒体膜电位的高能状态和抑制促凋亡基因表达、促进抗凋亡基因表达有关.     

苦参碱对PC12细胞的毒性及线粒体损伤机制

目的研究苦参碱(MT)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的毒性作用及其机制。方法用MT 2,4和8 mmol·L-1分别作用PC12细胞8,16,24和48 h,MTT法测定细胞存活率。PC12细胞经上述浓度的MT作用24 h后,采用Hoechst33342荧光染色法观察细胞形态变化,采用羟胺法和硫代巴比妥酸(TBA)法分别检测PC12细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(MMP)的改变,Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶原3、胱天蛋白酶原9、活化的胱天蛋白酶3、Bax和Bcl-2蛋白水平。结果随着作用时间及浓度的增加,MT对PC12细胞的抑制作用逐渐增强。MT作用24 h后,与正常对照组相比,MT 2,4和8 mmol·L-1组的细胞数减少,出现染色质凝集和部分破裂的现象,且给药组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);细胞内ROS和MDA含量显著增加(P<0.05,P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),且MMP降低;细胞内胱天蛋白酶原9、胱天蛋白酶原3和Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01,P<0.05),活化的胱天蛋白酶3和Bax蛋白水平显著上升(P<0.05,P<0.01);且Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01)。结论 MT对PC12细胞具有一定毒性作用,其机制可能与细胞内活性氧堆积而引起线粒体途径诱导细胞凋亡有关。     

依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞氧化应激的保护作用

目的研究依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法以500μmol.L-1硝普钠诱导PC12细胞氧化应激损伤,MTT法测定细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹检测Bax和Bcl-2表达变化。结果依达拉奉在25μmol.L-1能增加氧化应激损伤细胞活力,在75μmol.L-1其保护作用达到峰值,能明显改善细胞形态结构,减少早期凋亡细胞数目,升高细胞Bcl-2/Bax比值。结论依达拉奉对硝普钠诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与依达拉奉清除NO,抑制线粒体凋亡通路有关。     

瓜子金皂苷己对连二亚硫酸钠致氧糖剥夺/复供诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法以连二亚硫酸钠合并无糖Earle’s液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342/PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membranepotential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值。结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关。