肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与死亡受体结合后，可启动凋亡信号的转导。它对肿瘤细胞的高效杀伤作用使其成为最具有潜力的肿瘤治疗药物，但在TRAIL的研究领域中仍然存在许多热点问题有待解决。本文综述了近年来TRAIL认几诱导肿瘤细胞凋亡的胞内机制、抗肿瘤活性及安全性问题的研究进展。     

离子交换层析法纯化原核表达的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白

目的纯化原核表达的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白。方法将pET28a-TRIAL转入BL21(DE3),先进行硫酸铵初级分离,然后利用CM Sepharose阳离子交换柱进行离子交换层析进行纯化。结果在20℃条件下,使用0.5 mmol/LIPTG诱导8 h,TRAIL蛋白表达量达到最大;经硫酸铵初步分离和离子交换层析纯化后,从1L菌液纯化得到5.8 mg纯净的TRAIL蛋白。结论成功建立了一种原核表达TRIAL蛋白的大规模纯化方法。     

毕赤酵母工程菌高密度发酵肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的研究

目的研究重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)巴斯德毕赤酵母工程菌发酵工艺。方法首先用摇瓶对工程菌的甲醇诱导周期、甲醇浓度、pH进行研究 ,在此基础上 ,采用 5L发酵罐补料培养进行中试研究。结果人可溶性TRAIL巴斯德毕赤酵母菌在pH 6 .0、甲醇诱导浓度 1%的条件下诱导 96h ,目标蛋白质浓度最高 ,可达 72 .8mg/L。 5L发酵罐培养放大 ,可以达到 184mg/L。结论此发酵工艺可以较好地提高人可溶性TRAIL工程菌的分泌表达。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体与肿瘤治疗

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）或称凋亡素2配体（Apo2 ligand,Apo-2L）是1995年发现的TNF超家族的新成员。它的最大特点是可以选择性诱导肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡,但对正常组织和细胞没有显著毒性效应。本文从TRAIL的结构、受体、凋亡机制及其在肿瘤治疗中的应用等方面对其进行了介绍。TRAIL很可能在肿瘤治疗方面发挥重要作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体临床治疗应用前景

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)具有选择性细胞毒性,不仅诱导肿瘤细胞凋亡,还诱导肝和脑细胞凋亡,也诱导病毒感染的细胞凋亡,但对机体正常组织无毒性。TRAIL已成为全球新药研究的热点。本文从TRAIL的凋亡通路及其调控、肿瘤细胞对TRAIL抵抗的原因综述TRAIL在难治性疾病治疗中的应用。     

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的DDNA残留量检测

目的:重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTrail)是一种治疗肿瘤的蛋白药物.其质量控制中,参照2005年<中华人民共和国药典>第三部规定,单支剂量的外源性DNA含量不应超过10ng.通过纯化,我们得到重组大肠杆菌表达的rhTrail蛋白,对其进行了DNA残留检测.方法:参照固相斑点杂交和地高辛核酸探针法,利用DNA地高辛标记和检测试剂盒,制备了地高辛标记宿主DNA探针,对三个rhTrail样品进行DNA残留检测.结果:杂交膜上,宿主DNA带显色,颜色按DNA上样量高低由深至浅,呈梯度差异,三个rhTrail蛋白样品的上样带颜色均较参比的宿主DNA100pg上样带颜色浅.结论:通过换算,三个样品单支剂量的DNA残留均低于10ng,符合DNAA残留要求.     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）可溶性胞外区在大肠杆菌中的高效表达

肿瘤坏死相关凋亡诱导配体（TNF－related apoptosis-inducing ligand,TRAIL),也称为凋亡素2配体（Apoptosisin 2 Ligand,Apo2L),是肿瘤坏死因子超家族成员,能够激发肿瘤细胞选择性地发生凋亡,并对正常组织细胞几乎无毒性。TRAIL通过细胞表达受体,即死亡受体4和5（Death Receptor 4,DR4 and Death Receptor5)发挥作用,而大多数肿瘤细胞表面表达这2种受体。为了深入研究TRAIL在肿瘤治疗中的价值,我们采用RT－PCR方法克隆了TRAIL基因,并对其细胞外可溶性区域（114－281氨基酸残基）在大肠杆菌中进行了表达。重组的TRAIL可溶性蛋白占细菌总蛋白的45％以上,初步分析具有TRAIL的生物学活性。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体研究进展

目前认为，肿瘤的发生发展除了与细胞增殖失控和细胞分化异常有关外，另一个重要原因是发生转化的细胞不能正常凋亡，而细胞凋亡（又称程序性死亡）是基因编程调控的细胞自主性死亡过程。已知多种因素参与诱导和抑制细胞凋亡，而细胞表面的受体和配体相互作用在诱导凋亡中起主导作用。     

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在家蚕中的表达与鉴定

目的 以家蚕为生物反应器表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL),并检测其生物学活性.方法 将人TRAIL(93～281aa)基因重组于质粒pBacPAK8构建重组转移载体pBacAK8-TRAIL.与经线性化修饰的家蚕棱型多角体病毒(BmBacPAK)DNA共转染家蚕培养细胞株BmN,获得了插入TRAIL基因的重组病毒,重组病毒感染家蚕细胞和家蚕幼虫,使其表达人TRAIL.结果 Southern杂交表明重组病毒基因组中含有人TRAIL基因片段,RNA斑点杂交表明人TRAIL基因得到了转录,重组病毒感染家蚕细胞株(BmN)、家蚕幼虫,在细胞培养上清、细胞抽提物、幼虫的体液样品中通过Westblot分析都能检测得到表达产物的特异性条带;采用L929细胞检测TRAIL的生物学活性.结论 提示人TRAIL基因分别在家蚕培养细胞和蚕幼虫中得到高效表达,此基因杆状病毒表达系统的建立为进一步研究TRAIL奠定了基础.     

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的药代动力学和组织分布

目的研究重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)的药代动力学和组织分布。方法恒河猴单次静脉滴注rhTRAIL1,5和25mg.kg-1及iv5mg·kg-1后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定rhTRAIL在恒河猴体内的血药浓度,并采用放射性核素示踪技术结合三氯乙酸(TCA)沉淀和分子排阻高效液相色谱法测定[125I]rhTRAIL在荷瘤裸鼠组织内的含量。结果恒河猴单次静脉滴注rhTRAIL1,5和25mg·kg-1后,各剂量组的药代参数除cmax和AUC以外,均无显著差异,表现出线性动力学性质。恒河猴每天给药1次,连续7d,药物在体内没有蓄积。恒河猴静脉滴注和iv给药对药物的体内清除过程无明显影响。[125I]标记rhTRAIL后的放化纯度大于98%。荷瘤裸鼠iv给予[125I]rhTRAIL后,在各组织广泛分布,总放射性在肿瘤组织中于给药后2h达到高峰,在其他大部分组织中于给药后10min达高峰。给药后10min及2,8和24h,肿瘤/血清的酸沉放射性比值分别为0.07±0.01,0.62±0.17,0.78±0.57和1.66±0.50;给药后24h,肿瘤组织的放射性浓度高于其他组织和血清。结论在研究剂量范围内,rhTRAIL在恒河猴体内表现为线性动力学。[125I]rhTRAIL给药后在荷瘤裸鼠中广泛分布,在肿瘤组织中分布浓度较高,并主要经肾脏排泄。     

Chrysin promotes tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) induced apoptosis in human cancer cell lines

Chrysin exists widely in plants, honey and propolis. The anti-cancer property of chrysin has been demonstrated though the molecular mechanism is not clear. In this study, we found that pre-treatment with chrysin could promote the cell death induced by TRAIL according to the morphological changes and appearance of sub-G1 peak in four human cancer cell lines. In HCT-116 cells, the results of flow cytometry analysis showed that the percentage of sub-G1 reached (38.89 ± 3.78) % when pre-treatment of chrysin was used at 40 μM, but that was only (2.53 ± 0.10) % in the untreated group and (13.22 ± 0.20) % in TRAIL alone group. The differences between the combination and the untreated or TRAIL alone group were all significant (P < 0.05) and dose-dependent effect was obvious. Similar results were obtained in CNE1 cells. In the search of molecular mechanisms, we found that pre-treatment with chrysin could increase TRAIL-induced degradation of caspase 3, caspase 8, PARP proteins. Z-VAD-fmk, which is a pan-caspase inhibitor, could inhibit the apoptosis enhanced by the combination of chrysin and TRAIL. All data indicate that chrysin can enhance the apoptosis induced by TRAIL, and the apoptosis is caspase-dependent and related to the activation of caspase 8.     

肿瘤对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐受机制及增敏实验的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来发现的凋亡分子,能选择性诱导转化细胞、肿瘤细胞和病毒感染细胞发生凋亡,而对大多数正常细胞几乎没有毒性。但如果TRAIL在肿瘤中介导的凋亡信号传递受阻或者出现其他信号传导通路的激活,就可引起肿瘤对TRAIL的耐受。如果TRAIL蛋白与化疗药物或其他方法联合应用,就可以上调DR4、DR5、caspase3、caspase8或Bax等促凋亡因子的表达,或下调Bcl-XL、cFLIP等凋亡抑制因子的表达,从而克服肿瘤细胞对TRAIL的耐受或提高对TRAIL的敏感性。本文主要概述肿瘤细胞对TRAIL的耐受机制及克服耐受、增强肿瘤细胞凋亡敏感性的实验研究进展。     

转基因牛乳中重组人乳铁蛋白的仿生亲和纯化

目的从转基因牛乳中亲和纯化重组人乳铁蛋白。方法从仿生亲和介质库中筛选亲和配体,进行重组人乳铁蛋白的纯化研究。结果筛选出可以特异性结合重组人乳铁蛋白的固定化β-丙氨酸亲和配体,从转基因牛乳中一步纯化的重组人乳铁蛋白纯度为95.2%,蛋白回收率可达81.9%。经放大实验表明该亲和纯化工艺适合工业上大规模纯化乳铁蛋白。结论固定化β-丙氨酸可从转基因牛乳中纯化出高纯度重组人乳铁蛋白,工艺适合工业化生产。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在再生障碍性贫血患者中的表达及意义

目的通过检测再生障碍性贫血(AA)患者骨髓单个核细胞表面肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的表达,探讨TRAIL在AA造血干细胞凋亡中的作用。方法采用流式细胞术对12例AA患者(AA组)、11例AA治疗后缓解患者(缓解组)、12例正常对照者(对照组)骨髓单个核细胞表面TRAIL的表达进行检测。结果 AA组、缓解组、对照组TRAIL均有表达;AA组TRAIL的阳性表达率(5.8±3.3)%高于缓解组(2.4±2.0)%和对照组(3.2±2.2)%(P<0.05);缓解组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TRAIL在AA患者骨髓单个核细胞表面的表达阳性率增高,提示TRAIL介导的细胞凋亡可能在AA的发病机制中发挥一定的作用。     

药物载体用于递送肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）是肿瘤坏死因子家族的成员之一,可与肿瘤细胞膜表面过度表达的死亡受体4或5结合,特异性诱导肿瘤细胞凋亡,且对正常细胞无明显影响,因此被认为是临床最有发展前景的蛋白药物之一。然而,由于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体存在体内稳定性差和生物利用度低等缺点,限制了其在临床中的应用。运用药物载体对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体进行递送,成为目前解决此弊端的有效策略。本综述简要介绍了近年来药物载体在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体递送方面的研究进展。