胆管上皮细胞株抑制共培养的肝癌HepG2细胞株增殖

目的通过体外共培养肝内胆管上皮细胞株(mIBEC)与肝癌细胞株HepG2,探讨mIBEC对HepG2细胞株的可能作用。方法体外共培养HepG2与mIBEC,采用CellTiter 96○R AQueous One Solution Cell Proliferation Assay分别测定并比较HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后增殖的情况;实时定量PCR法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其Ki67及caspase3 mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其caspase3蛋白表达水平。结果与mIBEC共培养后24～72 h,HepG2细胞增殖水平低于其单独培养时的水平(P<0.01),且伴有Ki67 mRNA表达的下调(P<0.05);与mIBEC共培养后,HepG2细胞caspase3 mRNA及蛋白表达水平较其单独培养时均上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mIBEC可抑制共培养的HepG2细胞增殖;caspase3激活表达上调可能是mIBEC抑制共培养的HepG2细胞增殖的机制之一。     

胆管上皮细胞株抑制共培养的肝癌HepG2细胞株增殖

[摘要]目的 通过体外共培养肝内胆管上皮细胞株(mIBEC)与肝癌细胞株HepG2,探讨mIBEC对HepG2细胞株的可能作用。方法 体外共培养HepG2与mIBEC,采用CellTiter 96R○ AQueous One Solution Cell Proliferation Assay 分别测定并比较HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后增殖的情况;实时定量PCR法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其Ki67及caspase3 mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其caspase3蛋白表达水平。结果 与mIBEC共培养后24~72 h,HepG2细胞增殖水平低于其单独培养时的水平(P<0.01),且伴有Ki67 mRNA表达的下调(P<0.05);与mIBEC共培养后,HepG2细胞caspase3 mRNA及蛋白表达水平较其单独培养时均上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mIBEC可抑制共培养的HepG2细胞增殖; caspase3激活表达上调可能是mIBEC抑制共培养的HepG2细胞增殖的机制之一。     

大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的探讨Wistar大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养的方法及其生物学特性.方法采用组织块培养法进行培养并行免疫组化鉴定,观察其形态及测定细胞活性.结果大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,体外贴壁快,在合适的条件下能够生存并保持其稳定的生物学特性.结论大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞原培养方便可行,对研究阴茎勃起及ED机制有较大帮助.     

细胞凋亡在人乳腺癌细胞拟态血管形成中的作用

目的:研究细胞凋亡对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)体外形成拟态血管的影响。方法:建立体外人工基底膜三维细胞培养模型,观察乳腺癌细胞能否形成血管样结构。用Annexin-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定血管样结构形成过程中细胞凋亡情况;加入caspase抑制剂Z-VAD-FMK和caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO后观察其对血管样结构的影响。结果:三维培养24 h时,乳腺癌细胞伸出细长突起,彼此相互连接,形成腔隙样结构;经PAS染色,可见环状PAS阳性图案,表明乳腺癌细胞在体外可以形成拟态血管。细胞三维培养后凋亡细胞数开始增多,8 h达到高峰,此后凋亡细胞数下降,24 h时凋亡细胞数与对照组相比无明显差异。Z-VAD-FMK和Ac-DEVD-CHO均能明显抑制三维培养状态下细胞拟态血管的形成。结论:在体外三维培养条件下,人乳腺癌细胞可形成拟态血管,而细胞凋亡过程是恶性肿瘤细胞拟态血管形成的关键环节之一。     

量子点对体外培养细胞影响的实验观察

目的观察量子点（QDs）对体外培养细胞的影响。方法选用小鼠巨噬细胞、人肝癌Bel-7402细胞株进行体外培养并实验,设空白对照组和5个剂量实验组,QDs终浓度为3．125、6．25、12．5、25和50μg/mL,采用MTT法观察QDs作用体外培养细胞后细胞成活情况,于酶标仪上测定OD值,并以均数进行F检验。结果量子点浓度小于6．25μg／mL时,实验组与对照组OD值比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论量子点在一定剂量内不影响体外培养细胞的生长。     

大鼠肾上腺细胞体外培养观察及鉴定

目的:探讨大鼠肾上腺细胞体外培养时的生长特征及分泌功能,从而为寻找到肾上腺细胞最佳细胞移植时限提供实验依据.方法:通过肾上腺细胞的体外分组原代培养,取不同培养时间(0、2、4、6、7、10 d)的肾上腺细胞.倒置相差显微镜下定性观察肾上腺细胞的形态,细胞贴壁生长及其分布情况;定量检测肾上腺细胞增殖情况及其存活率;酶联免疫分析法测定培养液中皮质酮的浓度,放射免疫分析法测定培养液中皮质醇和醛固酮的浓度.比较分析肾上腺细胞分泌功能的动态变化.结果:正常大鼠肾上腺细胞体外原代培养48 h后,在显微镜下见肾上腺细胞贴壁.细胞增大,胞体呈圆形或多角形,胞体大,胞浆透亮,4 d后生长旺盛,数量增多,细胞成活率达95.94%,2周后细胞出现皱缩和破碎,开始衰老.体外培养的肾上腺细胞培养液中,皮质醇浓度随时间的延长而增加,但第4天以后增加速度缓慢,进入一个平台期.皮质酮、醛固酮浓度在第2、4、6、7 d逐渐上升.第7 d达峰值.随后第10 d浓度开始下降,与高峰值相比,有显著差异(P<0.01),而皮质醇略升高.结论:体外培养的大鼠肾上腺细胞具有分泌皮质激素的功能;大鼠体内所含糖皮质激素主要为皮质酮,皮质醇虽然有变化.但其含量非常低.     

关于Caco-2细胞构建肠粘膜屏障模型的相关研究

目的 通过用Caco-2细胞的体外培养,建立肠粘膜屏障的模型。方法 通过对Caco-2细胞在体外transwell小室中连续培养21 d,并对培养的细胞进行形态学观察、跨膜电阻测定、inulin-FITC通透率测定,评估肠屏障模型是否构建成功。结果 通过体外连续培养Caco-2细胞形成了致密单层,可见细胞层单层排列,相互融合,边界清晰,细胞间紧密连接清晰可以见,21 d TER值为496.32±6.02(Ω·cm2),inulin-FITC的通透率<0.5%。结论通过细胞形态学观察,跨膜电阻测定及inulin-FITC的通透率显示Caco-2细胞体外构建肠屏障模型成功,此模型对于相关疾病的研究具有一定意义。     

成年兔心耳组织体外培养扩增心肌细胞的生物学特性研究

目的探讨成年兔心耳组织体外培养扩增心肌细胞的生物学特性.方法选新西兰成年兔11只,分别取少量心耳组织,酶解法制成细胞悬液,体外培养.于培养0、12、26、40 d进行细胞计数;培养12、26 d测定细胞染色体含量;培养0、40 d,取部分细胞行免疫组化染色检查,计算心肌细胞百分比;培养26 d,电镜检查细胞的超微结构;培养12 d,取部分细胞置-80℃冷冻保存,8周后快速解冻,体外继续培养观察.结果细胞计数分别为(0.54±0.06)×107、(7.38±0.73)×107、(58.00±16.14)×107、(24.91±11.86)×107;DNA 含量测定S期细胞分别为22.2%、56.5%;免疫组化判定心肌细胞的比例分别为82%±11%、87%±18%;电镜下可见心肌细胞肌原纤维的横纹;冷冻的心肌细胞快速解冻后,体外培养可继续生长扩增.结论成年兔心耳组织来源的心肌细胞,在有限的体外传代培养过程中,数目可扩增,其亚显微结构和成分基本稳定.     

细胞染色法测定PDD,PYM,5—Fu及PP,PF方案对口腔颌面部鳞癌？…

采用原代培养细胞染色法，对２９例口腔颌面部鳞状上皮癌新鲜标本，进行了体外药物敏感性测定。结果显示该法具有体外药物敏感性测定特殊的优点，并与临床治疗疗效间有很好的相关性。本法简单，价廉，快捷及易于操作，有一定的临床应用价值。     

胡桃醌对宫颈癌caski细胞的细胞毒作用的研究

目的探讨胡桃醌对宫颈癌caski细胞增殖的影响。方法将宫颈癌caski细胞专代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的胡桃醌,并设空白对照组,用MTT比色法观察胡桃醌对体外培养的宫颈癌caski细胞生长的抑制作用,光学显微镜观察细胞形态学变化。结果MTT比色法测定显示,胡桃醌作用于宫颈癌caski细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性。结论胡桃醌能抑制体外培养的宫颈癌caski细胞的增殖。     

接骨中药对培养成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

目的:为比较常用接骨单味中药对体外培养成骨细胞的作用.方法:应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察常用接骨单味中药对体外培养成骨细胞的增殖、ALP表达及矿化结节形成的影响. 结果:这8个单味中药对早期增殖期的成骨细胞除当归外均无明显的促增殖和分化的作用;而当归组和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成.结论:单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖及分化的功能.     

表皮生长因子及胶原网架对培养成纤维细胞的影响

目的：观察表皮生长因子（EGF）及胶原网架对体外培养的皮肤成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：酶消化法分离大鼠皮肤FB,以含有10%新生牛血清的DMEM培养液进行培养,采用细胞计数、MTT法、组织学方法测定细胞增殖能力和形态变化。结果：培养液中EGF浓度大于5 μg•L^-1时,FB的增殖活性随EGF浓度的增加而增加,在 20 μg•L^-1浓度时达到最大。植入胶原网架中的FB,随着培养时间的延长,细胞数量增加缓慢。结论：EGF对FB的增殖具有促进作用,而胶原网架对FB的增殖速率具有一定的调节作用。     

肝细胞生长因子对冠状动脉平滑肌细胞增殖迁移的影响

为观察肝细胞生长因子(HGF)对牛冠状动脉平滑肌细胞(BCASMC)增殖、迁移的影响,分离和培养BCASMC,采用四甲基偶氮唑蓝法观察HGF对BCASMC增殖的作用,倒置显微镜观察BCASMC的迁移。结果显示,对照组、HGF组BCASMC的D值相差显著(P<0.05),HGF组的BCASMC增殖率为45.2％,且迁移明显。提示HGF能促进BCASMC的增殖和迁移。     

IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响

目的研究单独应用胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成兔的关节软骨细胞体外增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增的理论提供新思路。方法通过细胞形态学,细胞计数、细胞计量检测成兔关节软骨细胞的存活及增殖。结果成兔关节软骨细胞增殖活跃。结论在IGF-1的单独作用下成兔关节软骨细胞在体外增殖能力明显增强。     

脐血单个核细胞体外扩增的实验研究

目的 :采用集落刺激因子体外扩增脐血单个核细胞 (CBMC) ,研究集落刺激因子对CBMC增殖活性的影响。方法 :用RPMI1 640培养液加入集落刺激因子IL - 3、SCF、GM -CSF及其组合 ,体外扩增CBMC ,健康成人外周血单个核细胞 (PBMC)作为对照组。结果 :加入不同集落刺激因子体外培养CBMC与PBMC后 ,增殖活性均有不同程度的升高 ,以加入IL - 3、SCF、GM -CSF组最为显著 ;CBMC的增殖活性与PBMC比较有显著性差异 (P<0 .0 5)。结论 :集落刺激因子可在体外扩增CBMC ,IL - 3、SCF、GM -CSF之间有明显的协同作用 ;与PBMC相比 ,CBMC有更高的增殖潜能     

光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞 PC3M的生长抑制作用

目的：探讨光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞PC3M的抑癌作用。 方法：用生长抑制试验和流式细胞技术观察给予金丝桃素后PC3M细胞的增殖、细胞周期和凋亡的变化。 结果：不同浓度的金丝桃素在体外可显著抑制PC3M细胞增殖（P<0.05）,药物浓度为0.5、1.0和2.0 mg•L^-1时,抑制率分别为21%、50%和91%;细胞周期出现S期阻滞,由S期进入M₂期的比例为零,并诱导PC3M细胞凋亡。 结论：金丝桃素可抑制前列腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

目的 比较伤科常用单味接骨中药含药血清对成骨细胞生物学功能的影响。方法 应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法和RT-PCR法，比较伤科常用单味中药当归、自然铜、骨碎补和续断对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶分泌、矿化结节形成和mRNA表达的影响。结果 单味中药当归对早期增殖期的成骨细胞有明显的促增殖和分化的作用；当归和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成；当归和续断能上调BMP-2和IGF-ImRNA的表达。结论 单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖和分化的功能。     

瘦素对体外培养子宫内膜异位细胞生长的影响

目的:探讨瘦素对体外培养的子宫内膜异位细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外原代培养人异位子宫内膜细胞、在位内膜细胞及正常内膜细胞,应用MTT比色法(四甲基偶氮唑蓝比色法)检测瘦素对三种细胞增殖情况的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:除了异位内膜组细胞在1ng/mL浓度瘦素下与对照组相(0ng/mL)比无明显差异外,1、10、100ng/mL浓度的瘦素作用于三种细胞与对照组比较均有明显促进细胞增殖的作用(P<0.05)。三组细胞在不同浓度的瘦素(1、10、100ng/mL)作用下与对照组比较均明显的抑制细胞凋亡,并随剂量增加凋亡率呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05)。结论:瘦素能促进子宫内膜异位、在位细胞及正常内膜细胞的增殖并抑制其凋亡。     

鼠胸腺细胞在发育时期的体外培养

用淋巴细胞转化实验和免疫细胞化学方法,观察鼠胸腺细胞在体外培养时的生长增殖。观察发现:胎鼠第14至16天时胸腺细胞在加胎牛血清和白细胞介素-2(IL-2)的 KC_(2000)培养液中。易于成活。胎鼠第17天和18天及生后第1、3、5、7、9、11、13、、15、、17天的鼠胸腺细胞,在不加胎牛血清,只加 IL-2的 KC_(2000)培养液中均能生长增殖,而且发育全过程中出现了两个增殖高峰;第一个增殖高峰在胎鼠第17天;第二个增殖高峰在生后第7天。鼠胸腺细胞在体外生长时期呈现了抗原抗体反应,说明体外培养的鼠胸腺细胞能出现增殖和分化。     

结缔组织生长因子及抗体对体外培养鸡滑膜细胞增殖活性的影响

目的：研究不同浓度结缔组织生长因子（CTGF）及其抗体对鸡肌腱滑膜细胞增殖活性的影响.方法：以来亨鸡屈趾肌腱腱周滑膜组织为材料,经体外分离、培养和鉴定后,加入不同浓度的CTGF（浓度为0,5,10,20,50,100,200,500 ng/ml）及CTGF抗体（浓度为0,1,2,4,8,16,32,64 μg/ml）分组培养滑膜细胞,并以CCK-8染色法检测滑膜细胞的增殖情况.结果：滑膜细胞增殖在CTGF浓度为5 ng/ml至200 ng/ml时,呈逐步递增趋势,各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;而在200 ng/ml及500 ng/ml浓度组间差异无统计学意义（P＞0.05）,加入浓度为4,8,16,32 μg/mlCTGF抗体时,滑膜细胞增殖呈逐步递减趋势,各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;而CTGF抗体浓度为0,1,2 μg/ml和浓度为32,64μtg/ml时,各组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：CTGF可促进体外培养的鸡肌腱滑膜细胞增殖,最佳浓度为200 ng/ml;CTGF抗体对滑膜细胞增殖活性可产生一定程度的抑制作用.