大鼠海马神经细胞花生凝集素和ConA受体细胞化学技术

本实验应用 PNAg和 ConAg细胞化学技术 ,对大鼠海马神经细胞膜上的相应受体进行凝集素细胞化学反应。材料与方法 :雄性 SD大鼠 4只 ,体重2 5 0～ 30 0 g。动物经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ,进行心脏灌注固定 (固定液为 4%多聚甲醛 0 .1 M PB( p H7.3)。动物静置于 4℃ ,3hr后取出大脑 ,用上述固定液后固定 3hr。取具有海马的脑组织 ,用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片。PNAg和 Con Ag的制备 :1 )枸橼酸还原法配制 7nm胶体金 ;2 )胶体金分别与 PNA和 Con A稀释液按一定比例结合 ;3)超速离心 ,4℃ ,36 0 0 0 /rpm45分钟 ;4)收…     

几种半薄切片染色法的比较与改进

半薄切片是超薄切片前的一个重要步骤。光镜检查半薄切片,可确定电镜观察部位,判断组织固定和包埋的质量。半薄切片染色法很多,我们对几种常用方法进行了一些比较和改进,现将实践中的体会介绍如下,供参考。一、方法及结果:用Epon812包埋的组织块切成1微米或1.5微米厚的半薄切片,捞到滴有蒸馏水的载片上,在烘箱内烤干,待染色。1.甲苯胺兰染色法:将染液滴于切片上,在酒精灯上加热数秒钟,勿煮沸,流水冲洗,自然干燥,树胶封固后观察。不必经酒精及二甲苯,免切片皱缩不平。如染色适度,组织染成兰色,结构清楚,而树脂无色。2.苏木精—伊红染色法:锇酸固定、树脂包埋的组织,用此法难于着色,一般须先用氢氧化钾溶液脱去树脂,然后染色.为避免氢氧化钾液对组织可能产生的损伤,我们参考Chang法改用2.5%高碘酸处理切片,并用滴     

显示大鼠下颌下腺颗粒曲管细胞方法的探讨

本应用几种方法观察研究了大鼠下颌下腺颗粒曲管（GCT）细胞，包括石蜡切片Malory染色，树脂包埋半薄切片甲苯胺蓝染色，石蜡切片、半薄切片免疫组织化学法（PAP法，免疫金银法），和透射电镜观察。应用这些方法进行比较与印证，对GCT细胞的形态结构、功能及异质性特征等提出可靠的见解。本对上述几种方法步骤的具体条件和要领进行了探讨。     

地高辛标记的cRNA探针在胰岛素mRNA原位分子杂交中的应用

采用雄性成年Wistar大鼠胰腺,用地高辛标记的cRNA探针进行原位分子杂交,以检测胰岛B细胞的胰岛素基因表达产物mRNA;同时用免疫组织化学PAP法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞,进行原位比较。1.标本制备:大鼠经4%多聚甲醛灌流固定,取胰尾,入Bouin液固定20h,常规石蜡包埋,切片厚6μm,裱在用铬矾明胶处理的载片上。2.探针标记:用RNA标记试剂盒(Boehringer Mannheim     

大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究

应用 ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究 ,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶 ( Ch AT)免疫阳性神经元。材料与方法 ,成年大鼠 1 0只 ,雌雄不限 ,体重 1 5 0克左右 ,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉 ,经左心室 0 .9%Nacl灌洗 ,4%多聚甲醛 30 0 ml( p H7.2磷酸缓冲液 ) ,灌注固定。取心房后壁 ,后固定1 2 hr,常规石蜡包埋 ,切片厚 5 μm,切片脱蜡至水 ,用 SABC法免疫组织化学反应 :切片于 3% H2 O2 1 0 min,D· W洗 3次× 2 min,0 .0 1 M枸橼酸缓冲液 ( p H6 .0 )微波修复( 1 0 0℃ )…     

豚鼠耳蜗内Corti氏器NOS免疫组织化学研究的体会

内耳骨迷路埋藏在颞骨岩部内 ,对内耳的免疫组化研究技术关键在于脱钙 ,既要制作出完整的耳蜗切片 ,又要保存抗原。特别是一氧化氮合酶 ( NOS)本身是一种蛋白质 ,更容易受温度和酸度的影响。本实验选用中性脱钙剂对内耳进行脱钙 ,改良石蜡包埋法进行石蜡包埋切片 ,取得了良好效果。现介绍如下 :1 .实验材料与方法 :( 1 )取豚鼠1 0只 ,快速断颈处死 ,沿外耳颞侧暴露出内耳 ,取出螺旋器 ,先从蜗底以 5号针刺一小孔 ,再吸取适量的 4%多聚甲醛固定液 (用p H7.4的 0 .1 M PB配制 )自蜗顶注入膜蜗管内 ,将螺旋器放入 4%多聚甲醛固定液内继续固…     

小鼠肾脏发育中凋亡细胞的超微结构变化

1　材料和方法1 1　动物取昆明小鼠 ,雌雄比例 3∶1同窝饲养 ,以雌鼠阴道精栓出现为第 1日计算胎鼠胚龄。部分孕鼠分笼饲养 2 0日后 ,每天早八时观察分娩情况 ,新生仔鼠按生后计算日龄。选取 1 4、1 8日胎鼠各 4只 ,生后 1、7、1 4日龄仔鼠各 4只为观察对象。1 2　光镜和电镜标本制作　在冷操作条件下切开胎鼠和仔鼠腹部 ,取左肾于 2 5 %戊二醛内固定。胎鼠做全肾树脂包埋 ,仔鼠肾脏经肾门做矢状面切开 ,皮质和髓质分别进行树脂包埋。ＬＫＢ Ｖ型超薄切片机半薄连续切片 ,甲苯胺蓝染色 ,按Ｋｏｓｅｋｉ判断光镜下凋亡细胞后制超薄切片 ,…     

免疫细胞化学在细胞病理学中的应用

免疫细胞化学（ICC）在细胞病理学中是一很有用的辅助诊断方法。目前在甲醛固定的石蜡包埋切片和冷冻组织切片中应用的抗体也多数能应用于乙醇或甲醛固定的细胞涂片。免疫细胞化学常用的标本制备方法有4种：直接涂片（CS）法、细胞离心涂片法（cytospin）、细胞块石蜡包埋（CB）法和液基薄层制片法。CS法和细胞离心涂片法由于涂片背景有较多的血细胞、细胞碎片及大量蛋白液,往往出现高背景着色。蛋白质聚集在细胞周围,     

电镜树脂包埋液配方的选择与应用

用于透射电镜样品的包埋液 ,数年来一直延用几种固定的配方 ,即常用的81 2、国产树脂 6 1 8、Spurr等等 ,各种包埋剂各有其优缺点。Spurr包埋剂 :粘度低 ,浸透容易 ,包埋聚合时间短 ,硬度及韧性均很好 ,经免疫标记的样品 ,常用此液进行包埋。另外还可用于难以浸透、硬度高、致密性较高组织。但此包埋液价格昂贵 ,不宜作为常规的包埋液来使用。81 2包埋液 :粘度低 ,韧性好 ,易切出较大的超薄切片 ,但组织包埋块易吸潮 ,不易保存 ,包埋液的价格也较高。国产树脂 6 1 8:价格便宜 ,购买方便 ,组织块不易吸潮 ,保存方便 ,切割性能较好。但此包埋…     

应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交检测胰岛素mRNA

成年雄性Ｗｉｔａｒ大鼠，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针在胰腺切片上进行原位杂交，以检测胰岛Ｂ细胞胰岛素基因表达产物ｍＲＮＡ；同时并用免疫组织化学法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞，进行比较，胰腺经４％多聚甲醋灌注固定，经Ｂｏｕｉｎ液再固定２０ｈ，常石蜡包埋和切片，经胰岛素ｃＲＮＡ探针杂交的胰腺切片中胰岛Ｂ细胞和核仁呈阳性反应，阳性信号为蓝色颗粒，胰岛其他细胞及胰腺泡细胞为阴性，方法照切片中均无阳性信     

盖玻片培养细胞原位树脂包埋冷冻剥离法

在电子显微镜样品制备中,对培养细胞、冷冻切片载片的树脂包埋及石蜡切片脱蜡——树脂再包埋技术已有许多学者作过报道,而对盖玻片培养、悬浮细胞进行树脂包埋、剥离的方法,虽也有学者介绍过,但操作较复杂,且包埋后不易分离盖玻片。作者参照加拿大渥太华市立医院电镜室应用的“POP     

抗血管内皮细胞单克隆抗体的制备及免疫组化鉴定

本文报道用临床手术切除的肝癌标本制备细胞悬液直接免疫BALB/c小鼠与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,在筛选过程中获得一株抗血管内皮细胞的单克隆抗体。杂交瘤细胞株已体外连续培养四个月,至今分泌抗体稳定。抗体能直接用于常规福尔马林固定的石蜡包埋的切片染色,不需胰酶消化。此抗体经A.B.C法免疫组化染色鉴定证明,对全身各脏器血管内皮细胞定位     

内耳切片标本制作

内耳制片的方法在有关组织切片技术的书籍中均有介绍,以火棉胶或石火棉胶双重包埋为主,多选用含汞的固定液,H-E片染,手续繁杂,不易切出较薄的标本。1984年曾小鲁等用抽气等办法实现了常规石蜡包埋和H-E整块染色,效果较理想。多年来,我们应用了此方法,并做了些研究和改进,现介绍如下:     

锇酸固定组织的包埋后免疫电镜胶体金标记方法的改进

目的建立一种适用于中枢神经系统蛋白质抗原定位的包埋后免疫电镜胶体金标记方法。方法利用还原锇酸固定大鼠脑组织切片,首先在冰冻漂浮切片上用NaIO4确定待检抗原的可修复性,然后在亲水树脂Technovit7100包埋的半薄切片寻找使抗原得以最大程度修复的最佳NaIO4浓度,最后在超薄切片上进行相应抗原的免疫胶体金标记。结果NaIO4对不同抗原的修复作用明显不同。对于可修复抗原,低浓度NaIO4即可以使其充分修复。低浓度NaIO4处理组织可使组织超微结构保持完好,并可使胶体金高密度标记。     

塑料包埋制片技术在骨髓诊断中的应用

塑料包埋制片技术在骨髓诊断中的应用周荣妹骨髓活检标本常用传统的石蜡包埋及ＨＥ染色法，经脱钙和长时间的固定，常使细胞形态失真和某些物质的丧失，从而影响了结果判定。至８０年代初，国外用塑料包埋薄切片技术处理骨髓活检标本，细胞收缩小，能切出１～２μｍ的满意...     

胰岛B细胞、A细胞的快速双染

组织学特殊染色技术及免疫组织化学技术已广泛应用于基础医学和临床医学的科研工作中。本快速染色法即用组织学醛品红染色法和免疫组织化学 SP法在同一张切片上对胰岛 B细胞和 A细胞进行了双重染色 ,取得较好的效果 ,现作简单介绍。取大鼠胰腺 ,Bouin液固定 ,石蜡包埋 ,切 5 μm厚切片。双染步骤如下第一步 ,胰岛 B细胞的醛品红染色 :切片脱蜡到水 ;入 0 .2 5 %浓硫酸和 0 .2 5 %高锰酸钾等量混和液中 3min;蒸馏水洗后入 5 %草酸 2 min;蒸馏水洗 ;再经 70 %酒精后入醛品红染液 1 5 min;70 %酒精分色后 ,蒸馏水洗。第二步 ,胰岛 A细胞的免…     

慢性酒精中毒对大鼠腺垂体LH细胞的影响

本实验选用 Wistar大鼠 ,实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别于喂养 3个月、6个月和 18个月时麻醉下经心脏用 4%多聚甲醛行全身灌流。取脑垂体 ,Bouin液固定、脱水、石蜡包埋 ,5μm厚切片常规脱蜡处理。用鼠抗人L H抗体 (1∶ 40 0 0 ) ,SP系列试剂盒免疫组织化学方法染色。40倍接物镜下用测试网格分别计数免疫染色阳性细胞总数、强阳性细胞数。选择细胞轮廓完整、没有重叠的细胞 ,用镜下测微尺测量阳性细胞的最长径及最短径 ,取其平均值作为细胞的直径。结果如下 :1对照组免疫染色阳性细胞的直径随年龄增长无明显变化。 3个…     

三色染色法和免疫细胞化学法显示培养的神经轴索及雪旺细胞

本研究目的在于用三色染色法和免疫细胞化学反应显示培养的周围神经中的轴索及雪旺细胞。将大鼠背根神经节体外培养于聚吡咯膜上 2周 ;用苏木精、固绿 FCF、变色素 2 R及磷钨酸等配制的染色液染色 ;或用抗 S-10 0蛋白和抗神经微丝蛋白抗体进行免疫细胞化学法反应。结果证明 ,在三色染色法中神经节神经元发出的长突起呈蓝绿色 ,细胞核呈红色或紫红色 ,胞质呈浅灰色。免疫细胞化学反应证明神经节发出的长突起为轴索 ,紫红色核和浅灰色胞质的细胞为雪旺细胞。本文结果提示 ,三色染色法能区别显示培养的周围神经组织中的轴索及雪旺细胞。     

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对脊髓损伤后大鼠GDNF表达的影响

目的探讨微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对脊髓半横断损伤后大鼠胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的表达影响。方法成年SD大鼠80只随机分为4组,微囊组（n=25）、细胞组（n=25）、单损组（n=25）、正常组（n=5）。术前制备兔坐骨神经细胞混悬液以及将其微囊化,微囊组、细胞组和单损组大鼠在脊髓半横断伤后,立即在损伤处分别植入10μl微囊化坐骨神经组织细胞1、0μl坐骨神经组织细胞以及10μl生理盐水。于术后2 d7、d1、4 d、21 d2、8 d（每个时相取5只大鼠）取出损伤部位脊髓组织,正常组（每个时相取1只大鼠）则取相应节段脊髓。组织石蜡包埋后切片,行免疫组织化学染色观察GDNF的表达变化。结果 GDNF阳性染色主要见于神经元细胞及胶质细胞的胞浆内。大鼠脊髓损伤后上述细胞2 d后表达开始上升2,1 d达到最高。微囊组与单损组、细胞组比较差异有显著性（P〈0.05）。结论微囊化兔坐骨神经组织细胞移植于大鼠损伤脊髓后,可以抑制炎症反应,促进GDNF的表达,有利于大鼠运动功能恢复。     

可溶酸性胶原的制作与临床应用

本文自制的猪皮可溶酸性胶原,经UV—3000紫外分光光度计测定,其最大吸收光谱为225nm;用SDS—PAGE凝胶园盘电泳测定其分子量,低于人体血清白蛋白;经氨基酸分析,该胶原的甘氨酸含量为37％,脯氨酸为14％。应用猪皮可溶酸性胶原作底物培养表皮细胞的成功率为90％,而用玻璃平皿仅为8.6％,二者相比p<0.001。实验证明可溶酸性胶原培养表皮细胞的理想浓度为0.33～1mg/ml,每60cm~2平皿加入2ml最好。在胶原上培养成功的表皮细胞片,电镜观察胶原与表皮细胞之间有基底膜形成。培养29天的表皮细胞片组织切片,HE染色有8—0层表皮细胞。在四氟乙烯膜上涂胶原培养成功的表皮细胞片,便于移植。当细胞连片时,可将四氟乙烯膜从平皿中取出,既可防止刮膜时的机械损伤,而又不用DispaseⅡ酶分离取膜,从而防止表皮片皱褶和缩小。由于用四氟乙烯膜和胶原作底物,移植时间可提早到培养后5～13天,此时正处于基底细胞增殖期,DNA含量较高,移植容易成活。移植后28～30天,局部可以上皮化,经组织切片证明有完整表皮层。