人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

人重组骨形态发生蛋白9基因修饰的兔骨髓间充质干细胞异位成骨实验研究

目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

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目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

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目的 探讨人重组骨形态发生蛋白9(human recombinant bone morphogenetic 9,rh-BMP-9)基因治疗与骨组织工程技术相结合的可行性.方法 采用阳离子脂质体介导rhBMP-9基因转染兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),荧光显微镜观察及流式细胞学检测,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定及Vbn Kossa's钙结节染色.MSCs与聚乳酸-羟基乙酸(polylactide-co-glycolide,PLGA)支架共培养,荧光显微镜及扫描电镜观察MSCs在PLGA上的粘附、生长情况.将转染与未转染rhBMP-9的MSCs分别与PLGA支架复合培养,构建组织工程化骨并回植兔肌肉内,组织植入4周后进行HE染色观察.结果 菜流式细胞仪测定质粒转染率为34.15%.转染组MSCs的ALP活性较未转染组明显增高(P<0.01),Von Kossa's钙结节染色比较转染细胞形成的钙结节明显大于未转染组.荧光显微镜及扫描电镜观察见MSCS在PLGA支架上的粘附、生长良好.异位回植术后4周组织HE染色见肌肉内有新生骨基质分泌,成骨面积定量分析转染组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 阳离子脂质体介导的质粒能稳定转染Mscs,rhBMP-9能刺激MsCs的ALP活性增强,诱导钙结节形成,rhBMP-9基因转染的MSCs作为一种新型的种子细胞,其与PUGA支架复合用于骨缺损的修复具有较强的可行性.     

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