消银解毒饮及拆方对角质形成细胞COLO-16分泌血管内皮生长因子的影响

目的通过研究消银解毒饮及其拆方对角质形成细胞COLO-16分泌血管内皮长生因子（VEGF）的影响,探讨消银解毒饮治疗银屑病的作用机制。方法将36只SD大鼠随机分为消银解毒饮组、祛风除湿方组、解毒方组、凉血方组、甲氨喋呤组及对照组,给药5d后取各组大鼠含药血清,加入培养好的角质形成细胞COLO-16中,用双抗体夹心酶联免疫法测定角质形成细胞分泌VEGF的含量。结果与对照组比较VEGF含量,在5％浓度时,消银解毒饮血清组和甲氨喋呤血清组均明显下降,以消银解毒饮血清组下降显著（P〈0．01）;在10％浓度时,消银解毒饮血清组、解毒方血清组及甲氨喋呤血清组均明显下降,以消银解毒饮血清组和解毒方血清组下降显著（P〈0．01）;在20％浓度时,消银解毒饮血清组、解毒方血清组、凉血方血清组以及甲氨喋呤血清组均明显下降,以消银解毒饮血清组、解毒方血清组及甲氨喋呤血清组下降显著（P〈0．01）。结论消银解毒饮及其拆方除祛风除湿方外,其余几种含药血清对COLO-16细胞分泌VEGF均有抑制作用,解毒药物对VEGF的分泌发挥主要的抑制作用;抑制角质形成细胞分泌VEGF,可能是消银解毒饮抑制血管内皮细胞增生,治疗银屑病的又一重要作用机制。     

清热凉血养阴祛风法对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞亚群及相关细胞因子TNF-α、IL-1β的研究

目的:探讨清热凉血养阴祛风法对佐剂性关节炎大鼠外周血T淋巴细胞亚群及相关细胞因子TNF-α、IL-1β的影响。方法:取SD大鼠制成佐剂性关节炎模型,设正常组、模型组、痹颗粒组、实验组。造模后第7天起分别予痹颗粒1.88 g/(kg·d),实验方29 g/(kg·d),正常组、模型组予生理盐水3 mL/(只·d),连续灌胃3周。腹主动脉取血,用流式细胞技术检测外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+),用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血血清中细胞因子TNF-α及IL-1β。结果:实验组CD4+、CD8+T淋巴细胞,CD4+/CD8+的比值与模型组比较差异有显著性(P0.01或P0.05),CD4+淋巴细胞水平降低,CD8+淋巴细胞水平升高,CD4+/CD8+的比值降低。实验组细胞因子TNF-α及IL-1β水平与模型组比较差异有显著性(P0.01),TNF-α、IL-1β水平降低。结论:清热凉血、养阴祛风法能调节T淋巴细胞紊乱和相关细胞因子水平,对大鼠佐剂性关节炎有治疗作用。     

含红芪、黄芪玉屏风散对SAMP8小鼠脾淋巴细胞活化影响

目的比较研究含红芪或黄芪玉屏风散对快速老化模型(SAMP8)小鼠脾淋巴细胞活化的影响。方法体外实验分别以含黄芪玉屏风散、含红芪玉屏风散及等体积生理盐水灌胃青龄小鼠14d制备含药血清,将含药血清与SAMP8小鼠脾淋巴细胞共培养。体内实验分别以含黄芪玉屏风散、含红芪玉屏风散、胸腺肽溶液及等体积生理盐水灌胃SAMP8小鼠14 d后取血和脾脏制备成血清及脾淋巴细胞悬液。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清液及血清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测脾淋巴细胞中CD28分子、p38MAPK mRNA表达及蛋白质印迹法(Western blot)检测其蛋白表达。结果与空白血清组及生理盐水组比较,含药血清组上清液及血清中TNF-α含量均增高,脾淋巴细胞中CD28分子、p38MAPK mRNA及其蛋白表达量均增高。其中体外实验中含红芪玉屏风散组TNF-α含量及CD28分子、p38MAPK mRNA表达均高于含黄芪玉屏风散组(P0.01),体内实验中含黄芪玉屏风散组TNF-α含量高于含红芪玉屏风散组(P0.05),含红芪玉屏风散组CD28分子、p38MAPK mRNA表达均高于含黄芪玉屏风散组(P0.05),中药组效果均不及胸腺肽组(P0.05)。结论含红芪或黄芪的玉屏风散对SAMP8小鼠脾淋巴细胞的活化均具有增强作用,起到一定的抗免疫老化作用。     

益气解毒法与补肾解毒法对艾滋病患者TLRs通路及下游炎症因子的影响

目的:利用益气解毒方及补肾解毒方含药血清,干预艾滋病患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),研究其对Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)信号转导通路及下游炎症因子的影响。方法:应用益气解毒方、补肾解毒方的大鼠含药血清及空白对照组血清干预艾滋病患者PBMCs后,收集各组细胞。Real Time PCR检测细胞TLR1～TLR10、干扰素-α(interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α) mRNA表达。结果:与空白对照组比较,补肾解毒方含药血清能显著上调艾滋病患者PBMCs的TLR3 mRNA表达,其余各组对TLRs mRNA的表达无显著影响;益气解毒方和补肾解毒方含药血清均能显著上调艾滋病患者PBMCs的IFN-αmRNA表达,对TNF-αmRNA的表达无显著影响。结论:补肾解毒法能够调节TLRs信号转导通路,调节艾滋病患者的免疫功能,可能与上调TLR3表达,促进IFN-α分泌有关。     

犀角地黄汤多糖组份含药血清对巨噬细胞释放TNF-α的影响

目的：探索犀角地黄汤控制全身性炎症反应的部分机制。方法：制备犀角地黄汤水煎剂中多糖组份,分别以大、中、小剂量和生理盐水（NS）罐服小鼠,连续给药7天后收集动物含药血清,采用ELISA法检测含药血清在体外对正常的和脂多糖（LPS）活化的小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。结果：在加LPS的样品中,同NS对照组比较：与犀角地黄汤水煎剂和犀角地黄汤多糖组份一定剂量组含药血清共同培养的小鼠腹腔Mφ释放TNF-α的水平明显降低（P〈0.05或P〈0.01）,且具有剂量差异性（P〈0.05）;而在未加LPS的样品中,同NS对照组比较,其TNF-α的水平明显升高（P〈0.05或P〈0.01）,其中犀角地黄汤多糖组份具有剂量差异性（P〈0.01）。结论：犀角地黄汤水煎剂中多糖组份含药血清对LPS活化的Mφ释放TNF-α具有抑制作用,而对未经LPS活化的Mφ释放TNF-α具有促进作用,这可能与该方调控全身性炎症反应的机制有关。     

凉血活血胶囊含药血清对微血管异常生成的影响

目的观察临床治疗银屑病的经验方凉血活血胶囊含药血清对微血管异常生成的作用,探讨其治疗银屑病的作用机制。方法以鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)为模型观察凉血活血胶囊含药血清对血管生成的影响;采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导的人真皮微血管内皮细胞株(human dermal microvascular endothelial cells,HDMEC)异常增生模型,以cck-8比色法测定凉血活血胶囊含药血清对其增生的影响;采用transwell细胞迁移、体外管腔形成方法观察凉血活血胶囊含药血清对HDMEC迁移及管腔形成能力的影响。结果与相同浓度的空白血清组相比,5%、10%、15%的凉血活血胶囊含药血清均在不同程度上抑制CAM血管新生(分别P<0.05,P<0.01);对HDMEC增生也表现出一定的抑制作用(分别P<0.05,P<0.01);均可抑制HDMEC的迁移(P<0.01);并可显著抑制HDMEC的管腔形成(P<0.01)。结论凉血活血胶囊含药血清可抑制CAM血管新生、对异常HDMEC的增生、迁移、微血管管腔形成均有抑制作用,提示凉血活血胶囊作用于血管异常生成环节,可能是临床治疗银屑病的作用机制之一。     

消银解毒饮对银屑病血热证外周血淋巴细胞中IL-4、IFN-γ的调控作用

目的 研究消银解毒饮对银屑病血热证外周血淋巴细胞中白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)的调控作用.方法 采用随机对照原则,将入选银屑病血热证患者与正常健康人分别抽取静脉血,分离其外周血淋巴细胞,并与人永生化角质形成细胞混合接种培养24 h.加入5种不同组别动物药理血清,分为蒸馏水组、消银解毒饮组、凉血方组、解毒方组、甲氨蝶呤组培养48 h.用四唑盐比色实验测定药物对人永生化角质形成细胞增殖率,双抗体夹心法测定药物对细胞分泌IL-4、IFN-γ的影响.结果 消银解毒饮能调控外周血淋巴细胞分泌IL-4(P＜0.05)升高和IFN-γ(P＜0.05)下降,从而抑制角质形成细胞的活化增殖,诱导细胞凋亡,且效果优于单组中药,其中凉血类药可能在促进淋巴细胞分泌IL-4方面起主要作用,解毒类药在抑制淋巴细胞分泌IFN-γ方面起主要作用.结论 消银解毒饮可能通过对银屑病血热证外周血淋巴细胞中某些细胞因子如IL-4、IFN-γ的免疫调节来达到抑制角质细胞增殖的作用.     

阿里红多糖对卡氏肺孢子菌肺炎大鼠外周血TNF-α、sICAM-1和IL-8和脾脏T细胞亚群的影响

目的探索阿里红多糖对卡氏肺孢子菌肺炎大鼠外周血清中TNF-α、s ICAM和IL-8 3种细胞因子含量及大鼠脾脏T淋巴细胞亚型分布的影响。方法建立SD大鼠PCP动物模型并随机分为5组,设立PCP模型对照组及阿里红多糖(Fomes Officinalis Polysaccharides,FOP)低(14 mg/kg)、中(28 mg/kg)、高剂量(56 mg/kg)治疗组,以复方新诺明作为阳性药物对照组,并设立空白SD大鼠为正常对照。ELISA检测各实验组大鼠外周血清中TNF-α、s ICAM-1和IL-8 3种细胞因子含量,流式细胞术分别检测PCP模型组和高剂量FOP组大鼠脾脏T淋巴细胞中CD4+T和CD8+T细胞百分比。结果各剂量阿里红多糖均能显著下调PCP大鼠外周血清中TNF-α、s ICAM-1的表达,且下调作用随FOP剂量增加而加大,组间结果比较差异有统计学意义(TNF-α:F=3 567.47,P0.01;s ICAM-1:F=5 845.48,P0.01);低剂量FOP组大鼠外周血清中IL-8含量高于PCP模型组,中剂量FOP组大鼠外周血清中IL-8含量低于PCP模型组(F=6.971,P0.01),高剂量FOP组大鼠外周血清中IL-8含量与PCP模型组相比显著下降,但与SMZ-TMP阳性药物对照组相比差异无统计学意义(F=0.003,P0.05);高剂量FOP组大鼠脾脏T细胞亚群分布中CD4+T细胞百分比显著增高,与PCP模型组大鼠相比差异有统计学意义(F=903.316,P0.01)。结论阿里红多糖对PCP的治疗机制主要与其对机体免疫功能的调节作用有关,可能通过上调CD4+T细胞百分比和下调机体外周血清中PCP发生相关炎性介质的表达有关。     

乳双歧杆菌M8对免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响

目的：探讨给予乳双歧杆菌M8后免疫抑制模型大鼠淋巴细胞亚群百分比、T淋巴细胞转化增殖活性、血清免疫球蛋白和细胞因子表达水平，阐明乳双歧杆菌M8对免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响。方法：50只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、低剂量乳双歧杆菌M8组、中剂量乳双歧杆菌M8组和高剂量乳双歧杆菌M8组，每组10只。各组大鼠适应性灌服益生菌乳双歧杆菌M8 6 d，第7天开始除空白对照组外，其余4组大鼠每日给予环磷酰胺（CTX），连续3 d，构建大鼠免疫抑制模型，造模完成后低、中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠给予0.01、0.10和1.00 g乳双歧杆菌M8，空白对照组和模型对照组大鼠灌服等体积无菌生理盐水。流式细胞术检测各组大鼠全血淋巴细胞亚群（CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞）百分比，CCK-8法检测各组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性，ELISA法检测各组大鼠血清免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白G （IgG）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果：与空白对照组比较，模型对照组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞百分比明显降低（P<0.05）；与模型对照组比较，高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠全血CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞百分比明显升高（P<0.05或P<0.01），B淋巴细胞和NK细胞百分比明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较，模型对照组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性降低（P<0.01）；与模型对照组比较，中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠T淋巴细胞转化增殖活性升高（P<0.01）。与空白对照组比较，模型对照组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平降低（P<0.01）；与模型对照组比较，中和高剂量乳双歧杆菌M8组大鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论：灌服乳双歧杆菌M8可以提高免疫抑制模型大鼠的特异性和非特异性免疫应答调控能力，乳双歧杆菌M8对免疫抑制大鼠免疫调节有一定促进作用。     

黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3 T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

慢性丙型肝炎病变程度与血清TNF-α水平、TNF-α基因多态性的关系

目的研究汉族慢性丙型肝炎(简称慢丙肝)病变程度与血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、TNF-α启动子基因多态性(-857C/T,-308G/A,-238G/A)的关系。方法以102例汉族慢丙肝患者为研究对象,按肝功能实验室检查异常程度〔全国病毒性肝炎防治方案(2006)〕分为轻度(44例)、中度(34例)和重度(24例),ELISA法测定其血清TNF-α水平,PCR-RFLP检测TNF-α-857C/T、-308G/A、-238G/A位点的基因型;分析病变程度和血清TNF-α水平、基因多态性三者的关系。结果慢性丙型肝炎患者空腹血清TNF-α水平高于健康对照组(P=0.000),轻度组低于中、重度组(P=0.012,P=0.001),而重度与中度组间比较差异无统计学意义(P=0.252);轻度组TNF-α-857T等位基因频率高于重度组(P=0.004),轻、中、重度组TNF-α-308G/A,轻、中重度TNF-α-238A/G等位基因频率分布差异无统计学意义(P=0.016,P=0.935)。结论慢性丙型肝炎患者血清TNF-α水平高于正常人,随病情的加重有升高的趋势,慢丙肝轻度组TNF-α-857TT等位基因频率高于重度组。     

急性冠脉综合征患者外周血CD4+CD28-T淋巴细胞异常增殖

目的：研究急性冠脉综合征患者促炎症细胞因子和CD4+CD28－T淋巴细胞的变化。方法：ELISA检测外周血清以及培养的PBTC上清中促炎症细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）及干扰素γ（IFN-γ）的水平,流式细胞仪检测CD4+CD28－T淋巴细胞的数量。结果：UAP组和AMI组外周血清以及培养的PBTC上清中TNF-α和IFN-γ的水平比正常对照组、CPS组和SAP组均显著增加（均P<0.001）。CD4+和CD8+T细胞分别在五组间差异无显著性意义（均P＞0.05）,而CD4+CD28－T淋巴细胞比例在UAP组和AMI组比正常对照组、CPS组和SAP组显著增加（ P<0.001）。结论：ACS和促炎症细胞因子增加以及CD4+CD28－T淋巴细胞的增殖有关。     

悬雍垂腭咽成形术对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者体内炎性反应因子的影响

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)患者炎性反应因子水平及悬雍垂腭咽成形术(uvulopalatopharyngolasty,UPPP)治疗对OSAHS患者炎性反应因子水平的影响。方法经多导睡眠图(PSG)监测确诊为OSAHS患者33例(男27例,女6例),中位年龄41(20～58)岁。健康对照组〔呼吸暂停低通气指数(AHI)<5〕行PSG筛查除外OSAHS27例(男22例,女5例),中位年龄42(18～59)岁。全部OSAHS患者接受UPPP手术治疗,6个月后复查各项指标。各组均于PSG监测后采空腹静脉血,放射免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10),免疫透射比浊法检测血清C-反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)。结果与对照组比较,OSAHS组血清IL-6、INF-α及CRP物质的量浓度增高,血清IL-10质量浓度减低,差异有统计学意义(P均<0.05)。UPPP手术后AHI、血氧饱和度小于0.9时间占睡眠时间百分比(SLT90%)、最长呼吸暂停时间(LAT)、氧减指数(ODI)下降及夜间最低血氧饱和度(SaO2min)升高,血清IL-6、TNF-α质量浓度下降,差异均有统计学意义(P均<0.05);血清CRP、IL-10质量浓度与术前比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论OSAHS患者体内存在炎性反应因子失衡。UPPP手术治疗可一定程度改善缺氧,但不能完全纠正体内炎性反应因子失衡,手术后仍需辅助持续气道正压通气(CPAP)治疗。     

血清TNF-α与2型糖尿病合并代谢综合征的相关性研究

目的探讨血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平与2型糖尿病及代谢综合症的相关情况及其可能的作用机制。方法首都医科大学宣武医院2004年5月至2006年11月住院的257例2型糖尿病患者,病史在6个月以上,排除急慢性感染及其他内分泌疾病,肝功能正常。将病例组根据有无合并代谢综合征分为2型糖尿病合并代谢综合征组(MS组,174例)和2型糖尿病不合并代谢综合征组(NMS组,83例),另设健康对照组43例。检测3组血清TNF-α水平,测定C反应蛋白(CRP)、白介素-1(IL-1)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、纤维蛋白溶解酶原激活因子抑制物-1(PAI-1)和血脂并进行分析,比较病例2组间大血管病和脂肪肝患病率的差异。通过放射免疫法测定TNF-α。采用SPSS 11.5进行统计分析。结果①MS组的血清TNF-α水平明显高于NMS组(P<0.01),且2组TNF-α水平均高于对照组(P<0.01或P<0.05)。②MS组和NMS组大血管患病率分别为60.9%和45.8%,2者间差异有统计学意义(P<0.05)。MS组和NMS组脂肪肝患病率分别为39.1%和15.7%,2者间差异有统计学意义(P<0.01)。③将糖尿病组作为整体,简单直线相关分析显示,血清TNF-α水平与三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、C肽、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8呈正相关。多元逐步回归分析显示,腰臀比(WHR)、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IL-1、IL-2、IL-6作为独立危险因素影响血清TNF-α水平(标准化系数分别为0.652、0.112、0.139、0.077、0.064和0.158,P值分别为0.000、0.001、0.035、0.008、0.035和0.000)。结论TNF-α参与2型糖尿病的发生,代谢紊乱状态和炎症对合并症的发生有重要作用。     

肺结核病患者外周血前炎性因子及细胞亚群凋亡的研究

目的探讨前炎性因子及CD4＋T淋巴细胞凋亡在结核病免疫病理过程中的作用及临床意义。方法对45例肺结核患者采用免疫酶联吸附法检测血清中的TNF-α及IL-10水平,分离外周血单核细胞标记后用流式细胞仪测定CD4＋T淋巴细胞凋亡率,并进行相关性分析。结果肺结核患者血清中的TNF-α及IL-10水平明显高于健康对照组（P〈0.05）,其外周CD4＋T淋巴细胞凋亡率明显高于健康对照组（P〈0.05）;涂阳组外周血CD4＋T淋巴细胞凋亡率与涂阴组和健康对照组差异有显著性（P〈0.05）;复治组外周血CD4＋T淋巴细胞凋亡率显著高于初治组和对照组;外周血CD4＋T淋巴细胞凋亡率与TNF-α及IL-10水平呈正相关（P〈0.05）。结论外周血CD4＋T淋巴细胞凋亡率与TNF-α及IL-10水平呈正相关,均参与了对结核杆菌感染的免疫病理过程。     

中药芪参活血颗粒在重度脓毒症治疗中的作用

目的探讨中药芪参活血颗粒在重度脓毒症治疗中的作用。方法采用多中心、前瞻、随机、对照队列研究方法,对2005年至2006年北京地区5所医院167例脓毒症患者进行治疗,入选患者按信封随机法分为单纯西药治疗组(85例)和中西医结合治疗组(82例),分析比较2组之间炎性反应因子、凝血指标、病情危重程度评分、住ICU时间及28d病死率的差异。结果1)中西医结合组治疗后IL-6、TNF-α和D-dimer水平较单纯西药组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);2)中西医结合治疗组患者住ICU时间较单纯西药组患者明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);3)2组之间Marshall评分、APACHEⅡ评分差异无统计学意义;4)中西医结合组28d病死率为24.4%,低于单纯西医治疗组(38.8%),差异有统计学意义(P=0.048);5)临床应用芪参活血颗粒治疗重度脓毒症未发生严重不良反应。结论应用中药芪参活血颗粒进行中西医结合治疗重度脓毒症可显著降低炎性反应因子IL-6及TNF-α水平,降低凝血指标D-dimer水平,缩短住ICU时间,提高28d生存率。     

二藤合剂氯仿提取物对类风湿性关节炎T细胞的免疫调节作用

【目的】观察二藤合剂氯仿提取物对活化的类风湿性关节炎(RA)患者T细胞表达CD69以及Jurkat细胞周期的影响．推测其可能的细胞免疫调控机制。【方法】培养Jurkat细胞，加入二藤合剂各提取物培养72h，四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测增殖率，筛选有效部位；无菌抽取RA患者全血，与不同浓度二藤合剂氯仿提取物或染料木黄酮预孵30min后，再加植物血凝素(PHA)培养24h，采用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率；培养Jurkat细胞，加不同浓度的二藤舍剂氯仿提取物或氨甲喋呤(MTX)继续培养48h，流式细胞术检测细胞周期。【结果】二藤合剂各提取物中以氯仿提取物抑制Jurkat细胞增殖作用最强；10mg／L和20mg／L的二藤合剂氯仿提取物可显著抑制PHA刺激下RA患者的T细胞，尤其是CD4T细胞表达CD69；10mg／L浓度的氯仿提取物主要将细胞增殖周期抑制在G1期，与MTX作用于S期有明显区别。【结论】二藤合剂氯仿提取物可抑制RA患者T细胞尤其是CD4T细胞的早期活化，阻止T细胞能量和原料合成，从而阻断其DNA合成过程，减少细胞向G2期的转化，为其用于RA的治疗提供了实验依据。     

Silencing the expression of Cbl-b enhances the immune activation of T lymphocytes against RM-1 prostate cancer cells in vitro

BackgroundThe ubiquitin ligase Cbl-b potently modulates T lymphocyte immune responses and is critical in modulating tumor-induced immunosuppression. The influence of Cbl-b in modulating T lymphocyte activity against prostate cancer remains ill defined. We have determined the effects of silencing Cbl-b expression in T lymphocytes and their subsequent cytotoxic activity against prostate cancer cells.MethodsT lymphocytes were isolated from the spleens of C57BL/6 mice. Lipofectamine-directed transfection of T lymphocytes with specific small interfering RNA (siRNA) silenced Cbl-b expression, which was confirmed by Western immunoblotting. The siRNA species were chosen that promoted the greatest transfection efficiency and dampened Cbl-b expression in T lymphocytes. The expression of CD69, CD25, and CD71 by the transfected T lymphocytes was determined by flow cytometry. T lymphocyte proliferation was assessed by CCK-8 assay. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to measure the secretion of interleukin (IL)-2, interferon (IFN)-γ, and tumor necrosis factor (TNF)-β. The objective was to compare the cytotoxic activity of transfected T lymphocytes and nontransfected (i.e., negative control) T lymphocytes against the murine prostate cancer cell line target RM-1 in vitro.ResultsWe selected a specific siRNA that decreased T lymphocyte Cbl-b expression to 15%. The siRNA-transfected T lymphocytes showed higher proliferation; higher CD69, CD25, and CD71 expression (p < 0.001); and higher IL-2, IFN-γ, and TNF-β secretion (p < 0.05), compared to the nontransfected cells. Transfected T lymphocytes were also more potent at killing RM-1 prostate cancer cells, compared to the negative control in vitro.ConclusionSilencing Cbl-b significantly enhanced T lymphocyte function and T lymphocyte cytotoxicity activity against a model prostate cancer cell line in vitro. This study suggests a potentially novel immunotherapeutic strategy against prostate cancer.     

小乌桂颗粒剂含药血清对CIA大鼠膝关节成纤维滑膜细胞体外增殖的干预研究

目的通过观察小乌桂颗粒剂含药血清对胶原诱导关节炎（CIA）大鼠成纤维滑膜细胞（CIA-FLS）体外增殖的影响,探讨其治疗类风湿关节炎（RA）的可能机制。方法采用鸡Ⅱ胶原建立CIA大鼠模型,运用关节炎指数评分法及病理切片炎症程度评分系统对其进行评价。组织块培养法体外分离培养CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS。实验分为空白对照组、甲氨蝶呤（MTX）组及高、中、低剂量小乌桂颗粒剂含药血清组5组,分别干预CIA-FLS24、48、72h,MTT法检测其增殖情况,ELISA检测干预前和各组细胞上清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的水平。结果高、中剂量小乌桂颗粒剂含药血清组和MTX组干预CIA-FLS24、48、72h均可明显抑制其增殖,细胞培养上清中TNF-α、MMP-1水平明显降低,与干预前及空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;低剂量小乌桂颗粒剂含药血清组干预CIA-FLS48、72h可明显抑制CIA-FLS增殖,细胞培养上清中TNF-α水平明显降低,其干预CIA-FLS24、48、72h细胞培养上清中MMP-1水平均明显降低,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论小乌桂颗粒剂含药血清可能通过抑制FLS增殖,并抑制FLS分泌TNF-α、MMP-1来减轻滑膜炎症反应,该过程是其发挥治疗RA的可能机制。