缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化

目的：研究缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化。方法：用压缺氧法复制大鼠缺氧性肺动脉高压模型,用右心导管法测量平均肺动脉压,称量法计算右心室肥大指数,HE染色结合形态计量分析进行缺氧性肺血管重塑观察,Tunel法行肺动脉平滑肌细胞凋亡检测。结果：缺氧7d大鼠平均肺动脉压开始升高,肺动脉出现缺氧性肺血管重塑;缺氧14d及21d平均肺动脉压进一步升高,缺氧性肺血管重塑更明显,右心室肥大指数增加。对照组及缺氧3d、7d、14d、21d组肺动脉平滑肌细胞凋亡指数差异无显著意义。平均肺动脉压与WA％（血管壁横断面积与血管横断面积比值）及右心室肥大指数呈正相关,WA％与肺动脉平滑肌细胞凋亡指数之间无直线相关关系。结论：缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖同时不伴有凋亡水平的显著变化。     

二十二碳六烯酸对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)在动物整体水平的抗大鼠肺动脉高压作用及其对肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧DHA处理组,每组7只。大鼠缺氧肺动脉高压模型采用慢性间歇性低氧方法建立,通过右心导管法测定大鼠平均肺动脉压,精确称左右心室质量计算右心室指数,测定肺动脉平滑肌细胞凋亡率和Caspase3、Caspase9活性。结果:与常氧组比较,低氧组大鼠平均肺动脉压和右心室指数均明显升高(PPPP结论:DHA具有抗大鼠肺动脉高压作用,其机制与促进肺动脉平滑肌细胞凋亡有关。     

瞬时感受器电位香草酸受体1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞内钙升高中的作用

目的观察记录低氧条件培养的人肺动脉平滑肌细胞中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)对细胞内Ca2+浓度(用340nm/380nm的荧光强度比值表示)的影响,探讨TRPV1在低氧性肺动脉平滑肌细胞增生中的作用。方法应用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、流式细胞周期测定以及细胞内Ca2+浓度测定的方法检测细胞增生及细胞内Ca2+浓度变化。结果低氧能明显促进人肺动脉平滑肌细胞的增生,升高人肺动脉平滑肌细胞内静息Ca2+浓度,显著加强环并偶氮酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发的库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),上述效应均可被TRPV1阻断剂Capsazepine(CPZ)所抑制。结论在人肺动脉平滑肌细胞中,TRPV1可能是低氧所致细胞内Ca2+浓度增加、CCE增强和细胞过度增生的重要途径或调制因素。     

兔血管内皮细胞与平滑肌细胞体外增殖的相互影响

目的　研究在体外培养条件下血管内皮细胞条件培养基（ECCM）、内皮素-1（ET-1）、内皮素转化酶抑制剂phosphoramidon对血管平滑肌细胞（SMC）增殖的影响,同时研究了血管平滑肌细胞条件培养基（SMCCM）对血管内皮细胞（EC）增殖方面的影响. 方法　EC和SMC均来源于兔主动脉,在获得了EC和SMC的条件培养基（CM）后,分别用两者以及ET-1进行实验,细胞的增殖率通过3H掺入法进行测定. 结果　ECCM和ET-1可明显促进SMC的增殖,并呈现剂量依赖性. 其最大效应分别为(190±11)% (100% ECCM)和(166±9)% (100 ng*L-1 ET-1). 而phosphoramidon存在条件下的ECCM使其分裂作用降低了(33±2)%. SMCCM抑制EC的增殖,这种抑制作用并非剂量依赖性,其最大的抑制效应为基本水平的(78±3)%. 结论　ECCM和ET-1可促进SMC的增殖作用. phosphoramidon可明显地抑制ECCM对SMC的增殖作用.同时SMCCM对EC的增殖起抑制作用.     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组,应用MTT比色法、3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果同年轻组比较,老年组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,增殖细胞核抗原(PCNA)增加;同常氧组比较,缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入先受抑制,后明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,PCNA增加。结论衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖,衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。     

Effects of the Medium Conditioned by Endothelial Cells under Hypoxic Condition on the Phenotype of Porcine Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells

ProfessorNormalpulmonaryvesselwallcellsarerelativelyquiescent,andinthe'which,thePASMCsareinthecontractilephenotype['].Chronichypoxicassaysho.wedthatPASMCscanmodulatephenotypesrangingfromthecontractileonetothesyntheticone,andthenproliferateandsynthesizeincreasedamountofextracellularmatrix.IthasbeenknownthatthephenotypemodulationisaprerequisitefortheproliferationofSMCslz].ThepurposeofthisexperimentistoinvestigatewhetherhypoxiahasanyeffectsonphenotypeofPASMCs.1MATERIALSANDMETHODS1'…     

阿托伐他汀对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨阿托伐他汀对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖凋亡的影响。方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、低氧组和干预组Ⅰ、Ⅱ。干预组Ⅰ、Ⅱ每日低氧前分别给予阿托伐他汀1.5mg/kg或3.0mg/kg灌胃。建立常压低氧大鼠模型,应用增殖细胞核抗原（PCNA）及原位缺口末端标记法（TUNEL）对PASMCs进行增殖与凋亡分析。结果各组大鼠PASMCs增殖和凋亡细胞同时存在。与对照组比较,低氧组大鼠PASMCs增殖指数（PI）显著增高、凋亡指数（AI）显著下降（P值均〈0.01）;而与低氧组比较,两干预组大鼠PASMCs的PI显著降低、AI明显增加（P值均〈0.05）。结论阿托伐他汀对低氧大鼠PASMCs具有抑制增殖、促进凋亡的作用。     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法 将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组。应用MTT比色法、^3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果 同年轻组比较，老年组PASMCs的生长曲线明显抬高，^3H-TdR掺入明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，增殖细胞核抗原(PCNA)增加；同常氧组比较，缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高。^3H-TdR掺入先受抑制，后明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，PCNA增加。结论 衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖．衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。     

Effect of Yifei Huoxue Granule (益肺活血颗粒) on the proliferation of rat pulmonary artery smooth muscle cells upon exposure to chronic hypoxic conditions in vitro

Objective:To investigate the inhibitory effect of Yifei Huoxue Granule （益肺活血颗粒,YFHXG） on the hypoxia-induced proliferation of rat pulmonary artery smooth muscle cells（PASMCs） and its mechanism of decreasing pulmonary arterial pressure.Methods:Twenty male Sprague-Dawley（SD） rats were randomly divided into four groups:saline,and 0.66,3.30 and 16.50 g/kg of YFHXG groups,the saline and different concentrations of YFHXG were given twice daily for 7 days,respectively.Serum-pharmacology method was used in the preparation of YFHXG serum.Tissue block anchorage was employed in the primary culture of rat PASMCs.The PASMCs were randomly divided into normoxia group,hypoxia group,and hypoxia+YFHXG group （0.66,3.30 and 16.50 g/kg doses of YFHXG-treated serum groups,exposed to hypoxic condition）.PASMCs in normoxia and hypoxia group were cultured with saline serum,hypoxia+YFHXG groups were cultured with different concentrations of YFHXG serum.Cell viability was assessed with 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5- diphenyltetrazolium bromide（MTT） assay.Cell cycle was analyzed using flow cytometry.In addition,hypoxia inducible factor-1-alpha（HIF-1α） protein expression was evaluated by immunocytochemistry analysis,the concentration of intracellular reactive oxygen species（ROS） and Ca²⁺ were determined by laser scanning confocal microscopy（LSCM）.Results:MTT assay and flow cytometry showed that hypoxia could directly activate the proliferation of PASMCs,while YFHXG dose-dependently inhibited hypoxia-induced proliferation of rat PASMCs.Immunocytochemistry showed that hypoxia enhanced HIF-1αprotein expression,and LSCM showed that hypoxia significantly increased intracellular ROS and Ca²⁺,while YFHXG decreased the expression of HIF- 1αand attenuated the hypoxia-induced increase in intracellular concentration of ROS and Ca²⁺.Conclusions: YFHXG could inhibit hypoxia-induced proliferation of rat PASMCs,which may decrease pulmonary arterial pressure and vascular remodeling.The anti-hypoxia effect of YFHXG may be explained by its regulation of HIF-1α expression and of the levels of intracellular ROS and Ca²⁺.     

PDGF在低氧内皮细胞条件培养基促猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

为了探索低氧条件下猪肺动脉内皮细胞 (PAEC)对猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖调控关系 ,应用MTT比色法 ,DNA荧光测定法观察了外源性 PDGF促 PASMC增殖作用 ,以及 Suram in抑制 PDGF促增殖作用的效应 ,并在此基础上研究了猪肺动脉内皮细胞条件培养基 (HECCM)中 PDGF促 PASMC增殖的作用。结果表明 ,HECCM促 PASMC增殖作用的效应可被 Suramin部分抑制 ,由此证明 ,PDGF是低氧刺激 PAEC产生的一种促 PASMC增殖的重要因子。     

Both Hypoxic Endothelial Cell Conditioned Medium and Hypoxia Elevate Intracellular Free Calcium in Pulmonary Artery Smooth Mu

ＢｏｔｈＨｙｐｏｘｉｃＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌＣｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄＭｅｄｉｕｍａｎｄＨｙｐｏｘｉａＥｌｅｖａｔｅＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＦｒｅｅＣａｌｃｉｕｍｉｎＰｕｌｍｏｎａｒｙＡｒｔｅｒｙＳｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅＣｅｌｌｓＨＵＱｉｎｇ－...     

缺氧对冠状动脉内皮及平滑肌细胞环氧合酶和血栓素A_2合成酶基因表达的影响

用放免及斑点杂交法研究缺氧对培养的冠状动脉内皮细胞（CAEC）和平滑肌细胞（CASMC）的环氧合酶（COX）和血栓素A2合成酶（TxS）基因表达的影响。实验表明在缺氧时，CAEC和CASMC中COX-1表达增加，总光密度比常氧对照组分别高3倍和1．8倍；COX-2及TXS表达无明显变化。CAEC及CASMC条件培养液中6-ketc-PGF1a含量明显升高，而TxB2与对照组无明显差异。结果提示，缺氧致冠状动脉舒张反应中可能有内皮和平滑肌细胞COX-1基因表达及PGI2生成增多的作用。     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中Gax基因表达及细胞增殖的影响

目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低氧处理后的大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达3。H-TdR掺入法观察低氧处理后PASMCs增殖情况。结果RT-PCR、免疫细胞化学和W estern blot检测证实低氧(2.5%O2)处理后的PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达逐渐降低;与常氧组比较,低氧组Gax mRNA和蛋白的表达显著下降3。H-TdR掺入法测定结果示PASMCs3H-TdR掺入量在低氧6 h开始增加,随着低氧时间延长,3H-TdR掺入量逐渐增加,至低氧24 h时3H-TdR掺入量最高。结论低氧可下调大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达并诱导PASMCs增殖,提示Gax基因在低氧性PASMCs增殖过程中可能起着重要作用。     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞表达信号转导及转录激活因子基因表达的影响

目的：研究低氧对肺动脉平滑肌细胞中信号转导及转录激活因子（STATs）基因表达的影响。方法：低氧处理培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞，采用半定量RT－PCR方法检测常氧组、低氧2、6、12h组的STAT3和STAT5基因的表达水平。结果：低氧培养2h组肺动脉平滑肌细胞中STAT3、STAT5 mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，与正常组比较均有明显差别。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组。结论：低氧增强培养的肺动脉平滑肌细胞中STATs基因的表达，在低氧所致的肺肺动脉收缩等疾病中可能发挥重要作用。     

低氧大鼠肺血管中血小板衍化生长因子α，β受体基因表达的变化

肺血管构形重建是慢性低氧性肺动脉高压的重要发病学环节。肺血管壁细胞增生、肥大，细胞外间质成分堆积及部分非肌性化小动脉肌性化致肺血管壁增厚、管腔狭窄、弹性下降，使肺动脉高压得以维持。在调控间质细胞增殖中，血小板衍化生长因子（PDGF）的作用尤引人注目。动脉粥样硬化、高血压、血管成形术后再狭窄等体动脉增生性病理过程中，有关PDGF及其受体的作用有较多报道。基于Northern分子杂交结果显示出低氧大鼠肺组织PDGF受体基因表达增强［”，本研究进一步用原位杂交技术动态观察了低氧性肺动脉高压形成过程中肺组织PDGF－a，…     

不同低氧环境对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨不同低氧环境对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖活性的影响.方法 将原代培养的大鼠PASMCs分为常氧组(21% O2,5% CO2)、低氧组(10% O2,85% N2,5% CO2)、缺氧组(1% O2,94% N2,5%...     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺动脉一氧化氮合酶的实验研究

目的：研究大鼠肺动脉中一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）的含量及分布变化与慢性缺氧性肺动脉高压（ｈｙｐｏｘｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ, ＨＰＨ）发生的关系。方法：采用ｅＮＯＳ多克隆抗体,对慢性ＨＰＨ 大鼠的肺组织进行免疫组织化学分析,观察缺氧组及对照组大鼠各级肺动脉中ｅＮＯＳ含量及定位;同时应用分光光度计测定缺氧组及对照组大鼠血浆中ＮＯ的间接浓度。结果：正常大鼠肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞均含有较高的ｅＮＯＳ表达,且各级肺动脉中ｅＮＯＳ含量差异无显著性;缺氧组大鼠各级肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞ｅＮＯＳ含量均较对照组显著减少;缺氧组大鼠血浆ＮＯ间接浓度较对照组明显降低。结论：大鼠肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞ｅＮＯＳ含量下降及血浆ＮＯ浓度下降参与慢性ＨＰＨ 的形成。     

低氧通过Ca~(2+)-NFAT信号通路促进肺动脉平滑肌细胞增生

目的通过观察低氧对肺动脉平滑肌细胞增生的影响及作用机制,探讨低氧在肺动脉高压发病过程中的作用,为肺动脉高压的进一步干预治疗提供可靠的理论依据。方法培养人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cell,HPASMCs)并分为以下几组:正常对照组、低氧组(24h、48h、72h)、低氧并处理组(低氧48h并在细胞外液中加入EDTA2mmol/L或VIVIT4μmol/L)。分别应用细胞计数法检测细胞的增生情况、荧光钙成像法测定细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)、激光共聚焦显微镜观察活化T细胞核因子c3(nuclear factor of activated Tcells,NFATc3)在细胞核内外分布的变化。结果低氧呈时间依赖性促进HPASMCs增生;低氧处理的细胞静息[Ca2+]i和库容性钙内流(capacitative calcium entry,CCE)显著升高,NFATc3的核转位增多。EDTA(Ca2+螯合剂)或VIVIT(NFAT特异性抑制剂)能够明显抑制低氧诱导的细胞增生现象。结论低氧能促进HPASMCs的增生,其机制可能是通过增加静息[Ca2+]i和库容性钙内流,使HPASMCs内的Ca2+异常升高并导致NFATc3转位至核内,进而促进与增生有关的基因的表达。     

肺、脑动脉内皮和平滑肌细胞急性缺氧时某些第二信使的变化

目的研究急性缺氧时细胞内第二信使系统的变化。方法培养猪肺、脑动脉内皮细胞与平滑肌细胞,测定在急性缺氧时胞浆游离钙、磷酸肌醇和环核苷酸的变化。结果肺动脉内皮细胞缺氧时有Ｃａ内流增加、ＩＰ３和ｃＡＭＰ无明显变化,ｃＧＭＰ于缺氧４ｍｉｎ升至高峰,随即回降;而脑动脉内皮细胞缺氧时不仅有Ｃａ内流,且有内钙释放、ＩＰ３和ｃＡＭＰ增多,ｃＧＭＰ浓度在缺氧８ｍｉｎ时仍继续上升。肺与脑动脉平滑肌细胞间缺氧时第二信使的变化,仅有ｃＧＭＰ不同。结论内皮细胞的异质性可能与两血管反应性差异有关。