血管内皮生长因子及其受体KDR在前列腺癌细胞中的表达研究

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)及其受体(KDR)在前列腺癌细胞中的表达及意义.方法:免疫细胞化学和Western blot检测体外培养的LNCaP,PC-3,PC-3M,DU-145和22RV1前列腺癌细胞中VEGF及其受体KDR的蛋白表达,RT-PCR检测mRNA,ELISA检测前列腺癌细胞培养上清VEGF蛋白含量.结果:免疫细胞化学染色显示VEGF和KDR在前列腺癌细胞LNCaP,PC-3,PC-3M,DU-145和22RV1中均有表达,但表达水平略有差别.LNCaP,PC-3和DU-145细胞中VEGF和KDR蛋白表达及其mRNA的含量显著高于PC-3M和22RV1(P＜0.01).细胞培养上清中VEGF蛋白含量结果与免疫细胞化学染色结果相同.结论:VEGF及其受体KDR在前列腺癌细胞中的表达量不近相同,但二者的表达对研究前列腺癌的发生发展及其机理有重要意义.     

辛伐他汀通过YAP/TAZ抗前列腺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的:考察辛伐他汀对22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖抑制作用,并对其作用机制进行初步的探讨。方法:复苏并培养22Rv1和DU145前列腺癌细胞株,给予不同浓度辛伐他汀（2 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L）进行干预。辛伐他汀对22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖抑制作用采用MTT法检测;对22Rv1和DU145前列腺癌细胞凋亡的影响用流式检测;对22Rv1和DU145前列腺癌细胞增殖相关蛋白p-mTOR(Ser2448)、p-Akt(Ser473)、凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP以及YAP、p-YAP、TAZ表达的影响用Western Blot检测;通过过表达TAZ考察TAZ在辛伐他汀抗前列腺癌细胞增殖中的作用。结果:辛伐他汀抑制22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖,并呈浓度依赖性和时间依赖性,在分子水平,辛伐他汀浓度依赖性地抑制了p-mTOR(Ser2448)和p-Akt(Ser473)的表达;辛伐他汀浓度依赖性地诱导22Rv1和DU145前列腺癌细胞发生凋亡,并在分子水平浓度依赖性地促进了Caspase-3、Caspase-9和PARP的剪切;辛伐他汀浓度依赖性地上调p-YAP的表达,抑制TAZ的表达,过表达TAZ减弱了辛伐他汀对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用和增殖抑制作用。结论:辛伐他汀可能通过抑制YAP/TAZ诱导前列腺癌细胞凋亡,抑制前列腺癌细胞的增殖。     

抗前列腺癌多肽APP216的体外活性

目的：探讨抗前列腺癌多肽APP216对体外培养的前列腺癌细胞的杀伤作用，为抗前列腺癌新药的研究奠定基础。方法：利用MTT实验、细胞凋亡染色及流式细胞仪，检测包含有BH3、K237、DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列的多肽药物APP216对分泌PSA的前列腺癌细胞系LNCaP、22RV1及不分泌PSA的前列腺癌细胞系PC3m、DU145的杀伤作用。结果：APP216（270 μg／mL）处理48h后，前列腺癌细胞系LNCaP、22RV。的细胞生存率分别为22％和34％，72h后为10％和8％；前列腺癌细胞系PC3m、DU145的细胞生存率分别为90％和95％，72h后为87％和92％。APP216作用后，分泌PSA的前列腺癌细胞胞核呈致密浓染，或呈碎块状，有凋亡小体出现；不分泌PSA的PC3m细胞则未发现改变。APP216（270 μg／ml）处理48h后，分泌PSA的LNCaP细胞凋亡率为36．26％，不分泌PSA的PC3m细胞凋亡率仅为1．63％。结论：APP216多肽对分泌PSA的前列腺癌细胞有杀伤作用，可诱导肿瘤细胞发生凋亡；而对于不分泌PSA的前列腺癌细胞则效果不佳。证实了该多肽可被PSA特异性酶切；同时，BH3结构域可通过HIV-TAT的转导作用转入细胞内诱导凋亡。     

德士康对前列腺癌激素非依赖型细胞株细胞周期的抑制作用

目的探讨中草药混合制剂德士康(暂定名)对雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC 3、DU145细胞周期的抑制作用和机制.方法MTT法检测用药后细胞增殖的改变,流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的改变,Western blot方法分析细胞周期相关蛋白表达的改变.结果德士康可抑制PC-3、DU145细胞的生长,PC-3、DU145分别主要受阻于G1期和G2/M期.用药组p16Ink4a蛋白表达增高,Rb磷酸化蛋白表达降低,伴有非磷酸化Rb蛋白的相应增多;而p21waf1、p27Kip1和细胞周期蛋白cyclin D1的表达均无明显改变.结论德士康可能是通过影响p16Ink4a蛋白的表达,改变细胞周期蛋白依赖蛋白激酶的活性,最后作用于Rb,抑制其磷酸化而发挥作用,从而抑制PC-3、DU145细胞的生长,具有应用于临床治疗的前景.     

雄激素受体调控的lncRNA ARLNC1对前列腺癌细胞增殖、克隆、迁移和细胞周期的影响

目的:探讨雄激素受体(androgen receptor, AR)调控的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ARLNC1对前列腺癌细胞增殖、克隆、迁移和细胞周期的影响。方法:选取正常前列腺上皮细胞株WPMY-1和前列腺癌细胞株PC3、VCaP、22RV1、DU145和LNCaP为研究对象,qRT-PCR分析lncRNA ARLNC1的表达水平;双氢睾酮(DHT)以时间和浓度依赖的方式刺激LNCaP细胞,分析lncRNA ARLNC1的转录水平;采用数据库预测和双荧光素酶报告基因系统分析雄激素受体与lncRNA ARLNC1的关系;将LNCaP细胞分为sh-NC和sh-lncRNA ARLNC1组,采用CCK-8分析细胞增殖,检测细胞克隆和迁移能力;流式细胞仪分析细胞周期变化,Western blot分析细胞周期蛋白CyclinD1、CDK6、p27的表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞相比,lncRNA ARLNC1在雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP、VCaP、22RV1)中的表达水平明显增加,而在雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC3、DU14...     

Hsa-miR-145联合槲皮素对人前列腺癌LNCaP细胞侵袭、迁移的影响

目的:研究Hsa-miR-145(人微小RNA-145,miR-145)联合槲皮素对人前列腺癌(LNCaP)细胞侵袭、迁移的影响,并探讨其机制.方法:将一定浓度的miR-145模拟物经脂质体包裹转染前列腺癌(LNCaP)细胞,并联合不同浓度的槲皮素,采用MTT法检测单用miR-145、单用槲皮素及miR-145联合槲皮素对前列腺癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,Transwell 及伤口愈合实验检测细胞侵袭、迁移的能力,Western blot检测细胞蛋白表达水平.结果:单用槲皮素的IC50为104.5 μmol/L,槲皮素与随机序列联合使用IC50为87.69 μmol/L,槲皮素与miR-145 模拟物联合使用IC50为37.92 μmol/L,药物增敏倍数为2.75.miR-145联合槲皮素促进LNCaP细胞早期凋亡,其早期凋亡率达11.4%,miR-145模拟物联合槲皮素作用于LNCaP细胞24、48小时后,伤口愈合率分别为16.7%、34.8%.槲皮素联合miR-145 模拟物组侵袭细胞数为(26±3)个,而转移数为(56±4)个.结论:Hsa-miR-145能增强LNCaP细胞对槲皮素的敏感性,槲皮素组联合miR-145 模拟物能促进LNCaP细胞早期凋亡,并能显著抑制LNCaP细胞侵袭、迁移的能力,其机制可能与下调E-cadherin、snail蛋白,上调N-cadherin蛋白的表达有关.     

负性协同刺激分子B7-H1和B7-H3在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨受体酪氨酸激酶Axl及其配体Gas6蛋白在前列腺癌细胞系和前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌病理特征的关系。方法：收集自2007年2008年在第二军医大学长海医院泌尿外科接受手术或病理穿刺的前列腺癌组织标本45例和良性前列腺增生组织标本32例。 Western blotting分析前列腺癌细胞系LNCaP、PC3及DU145中Axl及其配体Gas6的表达;免疫组化方法检测前列腺癌及良性前列腺增生组织中Axl及其配体Gas6的表达。结果：Western blotting检测结果显示,高侵袭性前列腺癌细胞DU145和PC3中Axl的表达显著强于低侵袭性细胞LNCaP,Gas6的表达在3个细胞系中无明显差异。 免疫组化结果显示,前列腺癌组织中Axl蛋白强阳性表达显著高于良性前列腺增生组织（68.9％ vs 21.9％,P<0.01）;前者Gas6蛋白的表达也显著高于后者（53.3% vs 15.6％,P<0.01）。前列腺癌组织中,Axl和Gas6蛋白的强阳性表达与Gleason评分及远处转移密切相关（P<0.05）。结论：前列腺癌组织中Axl和Gas6高表达,该两者的表达与前列腺癌恶性程度及肿瘤转移密切相关     

MLN4924对紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究MLN4924对紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响,从而为紫杉醇耐药前列腺癌的临床治疗提供新的理论依据。方法:不同浓度的MLN4924作用紫杉醇耐药的前列腺癌细胞PC3-TxR和DU145-TxR 48和72小时后,采用MTS检测细胞活力。Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、CDT1、p27以及EMT标志物水平。结果:MLN4924能够显著抑制PC3-TxR和DU145-TxR细胞的增殖,并且具有时间和浓度的依懒性。Western blot结果显示MLN4924作用后显著增加细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、CDT1和p27的表达。结论:MLN4924能够显著抑制紫杉醇耐药的前列腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可通过上调p27蛋白表达促进紫杉醇耐药的前列腺癌细胞凋亡。     

霞草苷Ⅱ通过PI3K/AKT和ERK/MAPK通路下调CXCR4表达抑制DU145细胞侵袭

目的 观察霞草苷Ⅱ(OldhamianosideⅡ)对前列腺癌DU145细胞侵袭性的影响,检测器官特异性转移相关蛋白CXC趋化因子受体4(CXC-chemokine receptor4,CXCR4)表达的变化,并探讨其可能作用通路.方法 应用细胞划痕实验,观察霞草苷Ⅱ对DU145细胞迁移的影响;Transwell小室法,观察霞草苷Ⅱ对DU145细胞体外侵袭性的影响;免疫细胞化学方法观察DU145细胞CXCR4表达变化;Western blot检测CXCR4表达及AKT、ERK1/2的磷酸化水平.结果 细胞划痕实验显示,1 mg/L霞草苷Ⅱ处理的DU145细胞和对照组比较,细胞迁移明显减慢;体外侵袭实验结果显示,基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)可明显增加DU145细胞的穿膜数量,霞草苷Ⅱ可抑制SDF-1诱导的DU145细胞侵袭;免疫细胞化学结果显示,经霞草苷Ⅱ处理后CXCR4表达下调;Western blot结果表明,霞草苷Ⅱ下调CXCR4表达,降低AKT、ERK1/2的磷酸化水平.结论 霞草苷Ⅱ通过PI3 K/AKT和ERK/MAPK通路下调CXCR4表达,影响SDF-1/CXCR4反应轴,进而抑制细胞的迁移和侵袭.     

双氢睾酮耦联Ki67多肽核酸对激素非依赖性前列腺癌细胞的抑制作用

目的:探讨双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)耦联Ki67多肽核酸(peptide nucleic acids,PNAs)对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞Ki67表达、细胞生长及凋亡的影响方法:人工合成针对Ki67基因的多肽核酸并与DHT耦联(DHTPNAs)后转染PC-3细胞,采用RT-PCR、免疫细胞化学、Western blotting检测PC-3细胞Ki67抗原的表达,CCK8法检测PC-3细胞增殖,原位末端标记法(TUNEL)检测PC-3细胞凋亡,以上实验均以以PNAs组、DHT组为对照组.结果:DHT-PNAs、PNAs均能抑制非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3的Ki67表达,诱导PC-3细胞凋亡,使细胞生长受抑,并且均具有浓度依赖性.DHT-PNAs作用强度明显强于相同剂量的PNAs,3μmol/L DHT-PNAs即可达到9 μmoL/L PNAs的作用强度.结论:DHTPNAs能有效增强PNAs阻抑PC-3细胞Ki67表达、诱导细胞凋亡及抑制细胞生长的作用.