荜茇酰胺对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用

目的:研究荜茇酰胺对人肺癌A549/顺铂(DDP)细胞耐药性的逆转作用。方法:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,用MTS法检测肿瘤细胞抑制率;流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、细胞周期、P-糖蛋白(P-gp)表达和肿瘤细胞内罗丹明Rht123含量的变化;Western blotting法检测多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1、DNA拓扑异构酶(Top)Ⅱ、谷胱甘肽S-转移酶(GST)-π、凋亡抑制蛋白Survivin、周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)1和蛋白激酶(PK)Cζ蛋白表达;实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin和CDK1 m RNA表达;酶标仪检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8活性。结果:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP对肿瘤细胞增殖的抑制率明显升高;与0μmol/L比较,20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP导致的细胞凋亡率和G2期/M期明显升高,P-gp表达明显减弱,Rh-123浓度明显增加,MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin、CDK1和PKCζ蛋白表达明显减弱,MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin、CDK m RNA表达明显减弱,Caspase-3、8的活性明显增强。结论:荜茇酰胺可逆转人肺癌A549/DDP细胞DDP耐药性,可能与其调节多药耐药相关基因表达有关。     

雷公藤甲素对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用及机制

目的：探讨雷公藤甲素对肺癌A549/DDP多药耐药的逆转作用及机制。方法：雷公藤甲素作用于肺癌A549/DDP细胞后,应用MTS法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞内罗丹明-123（Rhodamine-123,Rh-123）及细胞表面P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达,应用Western blot法和real time PCR检测肿瘤细胞多药耐药蛋白 （MDR1）和肺耐药相关蛋白（LRP）表达变化,应用报告基因技术检测细胞NF-κB启动子活性,应用Western blot法检测肿瘤细胞Akt磷酸化。结果：雷公藤甲素可提高肺癌A549/DDP细胞药物敏感性,经2μM和10μM雷公藤甲素作用后,顺铂逆转倍数（RF）分别为2.09倍和2.93倍,肿瘤细胞中Rh-123含量分别提高了1.38倍和2.88倍,P-gp表达分别是对照组的57.1%和32.1%,MDR1和LRP蛋白表达水平显著下降,MDR1 mRNA表达分别是对照组的64.2%和22.6%,LRP mRNA表达分别是对照组的54.8%和34.7%, NF-κB启动子活性分别是对照组的55.6%和23.6%,Akt磷酸化水平显著下降。结论：雷公藤甲素可逆转肺癌A549/DDP细胞多药耐药性,提高肿瘤细胞药物敏感性,抑制药物外排,降低细胞MDR1和LRP表达,其机制可能与抑制Akt磷酸化水平,下调NF-κB启动子活性有关。     

单端孢菌素逆转肺癌耐药A549/DDP细胞耐药性及其机制研究

目的 探讨单端孢菌素对肺癌耐顺铂细胞系A549/DDP顺铂耐药性的逆转作用及机制。方法 应用MTS法检测单端孢菌素对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测肿瘤细胞表面P-糖蛋白（P-Glycoprotein,P-pg）表达以及胞内罗丹明-123（Rhodamine-123,Rh-123）含量的变化,生化法检测细胞内SOD和GSH的水平,Western blot法和Real time PCR检测肿瘤细胞多药耐药蛋白MDR1、MRP1和Survivin表达的变化,Western blot法检测Akt磷酸化的变化,液相芯片法检测TGF-β,IL-6和IL-8的变化,应用双萤光报告基因技术检测细胞NF-κB和AP-1转录活性。结果 单端孢菌素可增加细胞对顺铂的敏感性,经5 μg·mL^-1和10 μg·mL^-1单端孢菌素作用72 h后,耐药逆转倍数（RF）为1.84和3.95倍。经5 μg·mL^-1和10 μg·mL^-1单端孢菌素作用24 h后,肿瘤细胞P-gp表达分别下降了62.6%和19.8%,细胞中Rh-123含量分别提高了183.3%和308.3%,细胞内SOD水平下降65.2%和50.1%,GSH水平下降 71.6%和46.3%,MDR1的mRNA水平下降了72.7%和52.3%,MRP1的mRNA水平下降了64.0%和22.5%,Survivin的mRNA水平下降了45.8%和14.7%,Akt磷酸化水平下降,TGF-β分泌水平下降了80.2%和51.5%,IL-6分泌水平下降了73.4%和37.2%,IL-8分泌水平下降了71.2%和43.2%,NF-κB转录活性下降42.3%和22.7%,AP-1的转录活性下降了57.4%和32.5%。结论 单端孢菌素逆转A549/DDP对顺铂的耐药性,这一作用与抑制药物外排,负调控肿瘤耐药相关蛋白的表达有关。     

瓦他拉尼对乳腺癌耐药蛋白介导的肿瘤多药耐药的逆转研究

目的观察新型激酶抑制剂类抗癌药瓦他拉尼(vatalanib)逆转肿瘤细胞多药耐药(MDR)的效果,研究其对乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的作用,探讨其作用机制。方法应用MTS法或SRB法检测瓦他拉尼对耐药细胞与敏感细胞的细胞毒性和逆转MDR的效果;分别以罗丹明(Rh-123)、米托蒽醌(MX)、阿霉素(ADR)为P-gp、BCRP、MRP1的荧光底物,应用流式细胞术检测该药对P-gp、BCRP、MRP1外排功能的影响;应用Western blot检测该药对耐药细胞中BCRP蛋白表达水平的影响,并研究其对细胞增殖相关信号分子的影响;应用qRT-PCR检测其对耐药细胞中BCRP基因表达水平的影响;通过超速离心法制备BCRP转运蛋白的粗膜,检测瓦他拉尼对BCRP的ATPase活性的影响。结果无毒剂量的瓦他拉尼(5μmol·L-1)可有效逆转BCRP高表达的肿瘤细胞株HEK293/ABCG2对MX、ADR和托泊替康(TOPT)的耐药,而对P-gp高表达的肿瘤细胞株K562/A02和MRP1高表达的肿瘤细胞株HEK293/ABCC1的耐药无逆转作用。该药能够下调耐药肿瘤细胞的BCRP基因和蛋白的表达水平,并具有时间和剂量依赖效应,但对BCRP外排MX的功能无明显抑制作用。该药可以激活BCRP的ATPase活性,但并不改变BCRP的构象,对耐药和敏感细胞中AKT和ERK的表达及其磷酸化水平也均无明显影响。结论瓦他拉尼可有效、特异地逆转BCRP介导的肿瘤MDR,其机制可能是通过下调耐药肿瘤细胞中BCRP基因和蛋白的表达来达到逆转MDR的效果。     

Src激酶抑制剂对人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP多药耐药性的影响及机制

目的研究Src激酶抑制剂PP2对人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP多药耐药性的影响及机制。方法以5和10μmol.L-1Src激酶抑制剂PP2作用A549/DDP细胞24h后,应用Western blot考察肿瘤细胞Src磷酸化表达的变化,MTT法检测细胞的药物敏感性,流式细胞仪考察细胞P-gp表达的变化,Western blot及Real-time PCR考察肿瘤细胞MDR1蛋白及mRNA表达的变化。结果 Src激酶抑制剂PP2可下调A549/DDP细胞Src磷酸化表达,5和10μmol.L-1 Src激酶抑制剂PP2作用后,顺铂对A549/DDP细胞的药物敏感性分别提高了1.37和2.47倍,细胞P-gp表达分别为对照组的65.2%和46.4%,MDR1在蛋白水平表达显著降低,MDR1在mRNA水平的表达分别为对照组的50.24%(P<0.05)和37.6%(P<0.05)。结论 Src激酶抑制剂PP2可逆转A549/DDP细胞多药耐药性,其机制可能与降低细胞MDR1表达水平有关。     

耐阿霉素人骨肉瘤细胞株的建立及其耐药机制探讨

目的诱导并建立耐阿霉素(ADM)的人骨肉瘤细胞株并探讨其耐药机制。方法采用逐步增加药物剂量冲击诱导方法诱导人成骨肉瘤原代Saos-2细胞株;MTT法检测原代与耐药细胞株对ADM、顺铂(DDP)、甲氨蝶呤(MTX)、异环磷酰胺(IFO)、表柔比星(EPI)、比柔比星(THP)、紫杉醇(Paclitaxel,PTX)药物敏感性;利用光学显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构变化;RT-PCR和IHC法分别检测多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)基因及其相应蛋白(P-gp)、MRP的表达。结果经167d的诱导,建立Saos-2/ADM1、Saos-2/ADM4细胞株,其对ADM的耐药指数分别为原代细胞株的49.8和74.6倍;耐药细胞株对MTX、EPI、THP、PTX亦产生不同程度的交叉耐药(P<0.05),对DDP仍然敏感(P>0.05);光镜观察Saos-2/ADM1、Saos-2/ADM4细胞株细胞体积增大,多核现象较原代Saos-2细胞株明显增加;透射电镜显示Saos-2/ADM1、Saos-2/ADM4细胞株表面突起较原代Saos-2细胞株减少、且核仁增大增多;细胞生长曲线显示耐药细胞株增殖能力下降。MDR1mRNA、MRPmRNA和P-gp、MRP在各耐药细胞株表达阳性。结论MDR1 mRNA、MRP mRNA及其相应蛋白参与了耐药细胞株耐药的形成,这些骨肉瘤耐药细胞株为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下了基础。     

~(99m)Tc-MIBI评价2-脱氧-D-葡萄糖对鼻咽癌耐药株多药耐药的逆转作用及机制

目的探讨2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)对鼻咽癌顺铂耐药株细胞(HNE-1/DDP)多药耐药(MDR)的逆转机制,观察99m锝-甲氧基异丁基异腈(99mtechnetium-methoxyisobutylisonitrile,99mTc-MIBI)细胞内的摄取变化,评价2-DG逆转肿瘤细胞多药耐药的效果。方法γ计数器检测不同浓度2-DG作用下HNE-1/DDP细胞对99mTc-MIBI的摄取清除情况以及2-DG浓度为10 mmol·L-1时HNE-1及HNE-1/DDP细胞对99mTc-MIBI的摄取清除情况。测定2-DG作用下HNE-1/DDP细胞内ATP值。Western blot检测2-DG作用下HNE-1/DDP细胞内P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达。溴化丙啶(PI)单染检测顺铂(DDP)单独及联合2-DG作用下HNE-1/DDP细胞的凋亡情况。结果 HNE-1/DDP细胞对99mTc-MIBI的清除率为54.8%,高于HNE-1细胞的清除率-41.3%(P<0.01),2-DG(10 mmol·L-1)作用后HNE-1/DDP细胞的清除率为-203.7%,较前明显降低(P<0.01)。HNE-1/DDP细胞在2-DG作用下ATP值为对照组的55.69%,且P-gp、MRP蛋白表达较对照组减少。DDP联合2-DG(10 mmol·L-1)作用24 h后HNE-1/DDP细胞凋亡率为49.4%,高于单独使用DDP时HNE-1/DDP细胞的凋亡率(22.5%)。结论99mTc-MIBI可有效检测HNE-1/DDP细胞多药耐药现象及评价2-DG的逆转效果,2-DG逆转机制可能与细胞内ATP生成抑制及相关转运蛋白表达减少有关。     

三苯氧胺对肺癌A549/DDP细胞多药耐药性的逆转作用及机制

目的探讨三苯氧胺（TAM）逆转肺癌A549/DDP细胞多药耐药性（MDR）的作用及可能机制。方法以噻唑蓝（MTT）比色法测定TAM对A549/DDP细胞的生长抑制率,流式细胞术检测TAM对A549/DDP细胞内Rho123表达的影响,选取最佳的TAM实验浓度。以MTT法检测TAM对阿霉素（ADM）、吉西他滨（GEM）、顺铂（DDP）的逆转效率,即时聚合酶链反应法检测TAM对A549/DDP细胞多药耐药基因1（MDR1）mRNA水平的变化,蛋白质印迹法检测P糖蛋白（P-gp）表达水平的变化。结果 TAM剂量在10.0μmol/L时对A549/DDP细胞毒性小且可增加细胞内Rho123的蓄积,10.0μmol/L的TAM能增加化疗药物的敏感性,对ADM、GEM、DDP的逆转倍数分别为3.0、7.2、2.0倍,使MDR1 mRNA的表达率较用药前下降35%,并可显著抑制P-gp的表达水平。结论 TAM体外可逆转A549/DDP细胞MDR,提高A549/DDP细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与抑制MDR1表达、减少细胞内药物外排有关。     

脂质体阿霉素逆转肿瘤多药耐药的活性和机制研究

目的 探讨脂质体阿霉素( PLD)逆转肿瘤多药耐药(MDR)的活性及其逆转机制.方法 以噻唑蓝(MTT)方法检测PLD对多药耐药肿瘤细胞MCF-7/ADR及KBv200的耐药逆转活性.结果 PLD在体内具有较强的逆转活性,逆转活性大于公认的强逆转剂维拉帕米的活性;在5.0μmol/L浓度下使多药耐药细胞KBv200对长春新碱的敏感性增加了45倍.PLD浓度依赖性增加(0、2.5、5.0、10 μmol/L)KBv200细胞内的罗丹明蓄积.PLD的心脏毒性、骨髓抑制以及脱发等不良反应显著降低.结论 脂质体阿霉素具有较强的逆转MDR的活性,主要通过持续向肿瘤组织聚集,肿瘤局部药物浓度升高,抗肿瘤的活性增强.     

温下方逆转A549/DDP细胞的多药耐药及对膜表面蛋白表达的影响

目的运用血清药理学方法,体外研究温下方对A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用及机制。方法正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549/DDP细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测温下方含药血清对A549/DDP细胞的逆转作用;运用免疫荧光技术,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测肺耐药相关蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果温下方含药血清能明显逆转A549/DDP细胞的多药耐药,增敏倍数为2～2.5倍。并可明显降低P-gp、LRP、MRP蛋白表达。结论温下方通过降低P-gp、LRP、MRP的表达以增强A549/DDP对化疗药的敏感性,逆转肺腺癌细胞的多药耐药。     

姜黄素固体脂质纳米粒单用或与顺铂联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究姜黄素固体脂质纳米粒(Cur-SLN)单用或与顺铂(DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:单用试验,分组为空白对照组、Cur组、Cur-SLN组(均以Cur计,终浓度为10、20、40、60、80μmo·lL-1);联用试验,分组为空白对照组、DDP组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组,各组DDP终浓度为1、2、3、4、5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1,检测上述各组分别对SKOV3细胞作用24、48、72h后细胞的生长抑制率。另设立空白对照组、DDP组、Cur组、Cur-SLN组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组(DDP终浓度均为2.5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1),检测各组对SKOV3细胞作用24h后细胞凋亡率及细胞周期调控因子Cyclin E、CDK2的表达。结果:相同浓度下,与Cur组比较,Cur-SLN组作用不同时间后细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,DDP+Cur组和DDP+Cur-SLN组细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05),且DDP+Cur-SLN组明显高于DDP+Cur组(P<0.05);与空白对照组比较,5个药物组细胞阻滞主要发生在G2期,细胞凋亡率和Cyclin E、CDK2表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),且DDP+Cur-SLN组明显高于其他组(P<0.05)。结论:Cur-SLN对人卵巢癌SKOV3细胞有明显的生长抑制及促凋亡作用,且与DDP联用有协同效果。     

长春瑞滨联合顺铂治疗148例晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的:观察国产长春瑞滨(NVB)联合顺铂(DDP)治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效.方法:盖诺25 mg/m2,d1.8;DDP40 mg/m2,d1,2,21～28天为1周期,至少治疗2周期.结果:CR 15例,PR 56例,SD 46例,PD 31例,有效率为44%.不良反应主要为骨髓抑制和消化道反应.结论:NVB加DDP联合化疗治疗晚期NSCLC疗效较高,不良反应可耐受,可作为晚期NSCLC一线治疗方案.     

顺铂不同剂量联合长春瑞滨治疗非小细胞肺癌的临床研究

目的:对比研究顺铂(DDP)不同剂量联合长春瑞滨(NVB)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者化疗中的疗效和不良反应。方法:123例Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者,采用不同剂量DDP联合长春瑞滨进行分组对照研究,分为低剂量DDP组(n=67)与高剂量DDP组(n=56)。低剂量DDP组给予NVB25mg.m-2,静脉滴注,第1、8天;DDP20mg.m-2,静脉滴注,第1～5天。高剂量DDP组给予NVB25mg.m-2,静脉滴注,第1、8天;DDP60mg.m-2,静脉滴注,第1～2天。21d为一周期。化疗2周期后评定疗效。结果:高剂量DDP组与低剂量DDP组的有效率分别为41.1%、28.4%(P>0.05);高剂量DDP组白细胞减少总发生率为87.5%,明显高于低剂量DDP组的71.6%(P<0.05);2组Ⅲ～Ⅳ度白细胞减少发生率无显著性差异(P>0.05)。结论:DDP高剂量组与低剂量组的临床疗效相当。高剂量顺铂组毒性反应的发生率显著高于低剂量组,但严重毒性反应的发生率相近。     

人参皂苷Rh2与P13K/AKT信号通路抑制剂LY294002对乳腺癌细胞转移和侵袭的影响

目的：研究人参皂苷Rh2（GensenosideRh。）与磷脂酰肌醇-3-激酶／丝苏氨酸蛋白激酶（P13K／AKT）信号通路抑制剂LY294002对乳腺癌细胞转移和侵袭的影响。方法：试验分为对照（空白培养液）组、人参皂苷Rh2（80μmol／L）组、LY294002（50gmol／L）组与人参皂苷Rh2（80gmol／L）＋LY294002（50gmol／L）组。人参皂苷Rh：与LY294002体外作用于人乳腺癌细胞MCF7／Adr,Westernblot法检测细胞基质金属蛋白酶（MMP）2、P-糖蛋白（P-gP）、丝苏氨酸蛋白激酶（AKT）、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶（p-AKT）蛋白表达;黏附试验观察细胞与基底膜的黏附力,Transwell法观察细胞侵袭能力和迁移能力。结果：与对照纽比较,人参皂苷Rh2组、LY294002组与人参皂苷Rh2＋LY294002组p—AKT、P—gP、MMP．2蛋白表达显著减弱,细胞与基底膜的黏附力、细胞迁移能力与侵袭能力显著减弱（P〈0．05）;人参皂苷Rh2＋LY294002组与人参皂苷Rh2组、LY294002组比较以上指标差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：抑制P13K／AKT信号通路可有效降低MCF7／Adr侵袭迁移能力,P13K／AKT通路是调控乳腺癌侵袭迁移的重要信号通路之一。     

急性白血病患者体外药敏结合多药耐药基因MDR1、MRP及LRP与临床疗效的相关性研究

目的:分析体外药敏结合多药耐药基因MDR1、MRP及LRP与急性白血病患者临床疗效间的相关性,并研究三者间的内在联系,为临床个体化给药提供依据。方法:前瞻性收集2010年2-7月收住我院血液科的急性白血病患者35例,同时采用ATP-TCA对其进行体外药敏试验和RT-PCR对其进行多药耐药基因MDR1、MRP及LRP的检测。结果:体外药敏与临床疗效的总符合率85.7%,阴性符合率50.0%,阳性符合率90.3%,灵敏度93.3%,特异度40.0%。MDR1、MRP及LRP均表达阴性者23例,占65.7%,MDR1、MRP及LRP均表达阳性者2例,占5.7%,其中MDR1阴性者有效率93.3%,MDR1阳性者有效率40.0%(P<0.01);MRP阴性者有效率89.7%,MRP阳性者有效率66.7%(P>0.05);LRP阴性者有效率92.6%,LRP阳性者有效率62.5%(P<0.05)。23例体外药敏敏感且MDR1、MRP及LRP均为阴性的患者中有21例临床缓解,临床有效率为91.3%(21/23),2例体外药敏耐药且MDR1、MRP及LRP均为阳性者无1例临床缓解,临床有效率为0(0/2)。结论:同时进行体外药敏和MDR1、MRP及LRP的检测可更好地预测急性白血病患者的预后,并作为急性白血病患者个体化给药的实验室依据。     

罗格列酮对高糖环境中大鼠系膜细胞转化生长因子β1制作用的研究

目的：观察罗格列酮对高糖培养基中大鼠系膜细胞转录激活蛋白-1（AP-1）活性及转化生长因子β1（TGF—β1）表达的抑制作用,探讨罗格列酮对肾脏的直接保护作用及相关机制。方法：将大鼠系膜细胞分为对照组（C组,普通MEM培养基,含5．6mmol·L^-1葡萄糖）、高糖组（H组,30mmol·L^-1高糖MEM培养基）、甘露醇组（M组,24．2mmol·L^-1甘露醇＋C组）、大剂量罗格列酮干预组（RH组,H组＋20μmol·L^-1罗格列酮）、小剂量罗格列酮干预组（RL组,H组＋10wmol·L-1罗格列酮）;N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC-抗氧化剂）干预组（N组,H组＋5mmol·L^-1NAC）。48h后,采用EMSA检测AP-1的活性,RT—PCR和ELISA法检测TGF—β1 mRNA及蛋白含量。结果：对照组和甘露醇组AP-1和TGF-β1的表达无明显差别,高糖组AP-1活性、TGF—β1 mRNA及蛋白水平较对照组明显升高,采用NAC和罗格列酮（20tLmol·L^-1）干预后,两者表达均较高糖组明显下降。结论：罗格列酮可通过抑制AP—1活性而降低高糖所诱导的TGF-β1表达,这可能是罗格列酮发挥直接肾脏保护作用的机制之一。