Kontroversen bei der Standardisierung der Empfindlichkeits-prüfung von Hefen gegen Azol-Antimyotika

Zusammenfassung. Die unterschiedlichen physikalisch-chemischen Eigenschaften der therapeutisch ein-gesetzten Azol-Antimykotika erfordern ein Testverfahren, welches diesen gerecht wird. Fluconazol kann innerhalb der Gruppe der Azol-Antimykotika aufgrund seiner Hydrophilie als unproblematische Testsubstanz angesehen werden. Die extreme Hydrophobizität des Itraconazols läßt eine Übertragung der Testbedingungen für Fluconazol auf die Itraconazoltestung nicht zu. Die aktuellen Empfehlungen des NCCLS werden dieser Problematik nicht gerecht. Deshalb ist es notwendig, einen einheitlichen Standard für die In-vitro-Testung der Gruppe der Azol-Antimykotika festzulegen.
Summary. Due to the different physical-chemical conditions of the therapeutical azoles it is necessary to choose an adequate testing procedure. In the group of azoles caused by its hydrophilia fluconazole susceptibility testing can be handled easily. However it is not possible to take the same test conditions for itraconazole as for fluconazole due to the extreme high hydrophobicity of itraconazole. The current recommendations of NCCLS should be considering these problems. Therefore it is necessary to standardize susceptibility testing for all azoles possible.     

Vergleich von drei Antimykotika-Empfindlichkeitsprüfungs-Methoden für die In-vitro-Testung von Candida-Isolaten von Patienten mit HIV-Infektion

Zusammenfassung. Es wurden die MHK-Werte für Fluconazol von 90 Candida -Isolaten (56 C. albicans , 15 C. glabrata , 9 C. krusei und 10 C. tropicalis ) untersucht. Zur Antimykotika-Resistenztestung wurden die Mikrodilutionsmethoden nach dem Protokoll M27-P des NCCLS (M27-Pmicro) mit RPMI 1640-Medium sowie der Methode nach Troke & Pye mit HR-Medium (HRmicro) als auch die Agardiffusionsmethode mit dem Etest (YNB-Agar) verwendet. Die Ergebnisse mit diesen Methoden wurden mit den klinischen Befunden verglichen. Sämtliche C. albicans -Isolate von AIDS-Patienten mit Fluconazol-refraktärer Candidose hatten MHK-Werte entweder ≥ 6,25 μg/ml (M27-Pmicro) oder ≥ 25 μg/ml (HRmicro und Etest). Andererseits lagen die MHK-Werte von C. albicans -Isolaten bei AIDS-Patienten mit Fluconazol-empfindlicher Candidose teil-weise ebenfalls über diesen Endpunkten. Ein mögliches Ansprechen auf eine Fluconazol-Therapie kann somit nicht zwangsläufig von dem MHK-Wert abgeleitet werden.
Summary. The MIC values of fluconazole were determined for 96 Candida isolates (56 C. albicans , 15 C. glabrata , 9 C. krusei and 10 C. tropicalis ). The methods employed for antifungal susceptibility testing were: microdilution according to the protocol M27-P of the NCCLS (M 27-Pmicro) using RPMI 1640 medium or HR medium following Troke & Pye (HRmicro) as well as the agar diffusion method by means of the Etest (YNB agar). The in vitro results were compared with the clinical outcome of patients. All C. albicans isolates received from AIDS patients with fluconazole-refractory candidosis showed MICs of ≥ 6,25 mg/ml (M27-Pmicro) or ≥ 25 mg/ml (MRmicro) and Etest). On the other hand some MICs of C. albicans isolates from AIDS patients with fluconazole-sensitive candidosis were also beyond these breakpoints. Therefore a possible success of a fluconazole therapy cannot unequivocally be predicted from the MIC value determined in vitro.     

Die In-vitro-Empfindlichkeitsprüfung von Candida-Species gegenüber Fluconazol im Mikrodilutionstest unter Einsatz von Alamar Blue

ZUSAMMENFASSUNG. Die Fluconazoltestung von Candida -Spezies erfolgte im Mikrodilutionstest mit supplementiertem HR-Medium. Zur Verbesserung der visuellen MHK-Bestim-mung wurde der Redox-Indikator Alamar Blue 10%ig dem Testmedium zugesetzt. Die gute Reproduzierbarkeit des Testverfahrens konnte mit Kontrollstümmen und Patientenstämmen nachgewiesen werden. Die Eignung dieser Methode in der Routinediagnostik zeigte sich bei der In-vitro-Empfindlichkeitsprüfung von 279 Candida -Isolaten von Patienten mit einer massiven Candida -Kolonisierung bzw. einer Endomykose.
Die Candida -Spezies variierten in ihrer Empfindlichkeit gegenüber Fluconazol. Während 96% der. C.-albi-cans -Isolate sensibel waren, fanden wir bei 55% der C.-glabrata -Stämme eine verminderte Empfindlichkeit, und 26% dieser Spezies waren resistent (MHK > 25 μg/ml). Neun der elf isolierten C.-krusei -Stämme waren Fluconazol-resistent.
Summary. The investigation of susceptibility of Candida species to fluconazole was performed in microdilution to a supplemented HR-medium. The sufficient reproducibility of the test was verified using special control isolates and isolates of patients. The excellent applicability of the method in routine diagnostics was evaluated by in vitro testing of susceptibility of 279 Candida isolates from patients being colonised or suffering from endomycoses. The Candida species showed different suceptibility against fluconazole: 96% of the C. albicans isolates were sensitive, 55% of the C. glabrata isolates had a reduced sensitivity, and 26% were resistant against fluconazole (MIC > 25 μg/ml). C. krusei isolates were highly resistant (9 of 11 strains).     

Empfindlichkeitsprüfung von Hefen gegenüber Fluconazol: Vorschlag für eine standardisierte Agardiffusions-Methode mit 25-μg-Fluconazol-Testblättchen

Zusammenfassung. Der Beitrag enthält einen Vorschlag für die standardisierte Empfindlichkeitsprüfung von Hefen im Agardiffusionstest mit 25-μg-Fluconazol-Testblättchen. Die Methodik ist das Ergebnis mehr-jähriger Bemühungen, eine zuverlässige und reproduzierbare Routinemethode für das mikrobiologische Labor zu entwickeln. In den Vorschlag sind zudem die Erfahrungen und Anregungen aus einem Ringversuch zur Empfindlichkeitsprüfung von Fluconazol mit 21 Laboratorien aus Deutschland und Österreich mit eingeflossen.
Summary. This paper gives a proposal for a standardised agar diffusion susceptibility testing method with 25 μg fluconazole discs. The methodology compiles the results of several years of work to develop a reliable and reproducible routine-method for the microbiology laboratory. In this proposal, in addition, the critics and experiences of a collaborative study for susceptibility testing of fluconazole with 21 laboratories from Germany and Austria are included.     

Der Etest®— eine Alternative zum NCCLS-Standard für die Empfindlichkeitsprüfung von Hefen?

Zusammenfassung. Im Hinblick auf die Reproduzierbarkeit können zwischen dem Etest® und der NCCLS-Methode keine gravierenden Unterschiede festgestellt werden. Bei der Frage der klinischen Korrelation existieren bisher nur Einzelbeobachtungen. Die Korrelation der Teste untereinander ist als Erreger- und Testsubstanz-abhängig bekannt. Die einfachert Handhabbarkeit prädisponiert den Etest® für die Routine. Bevor der Etest® für die Empfindlichkeitsprüing von Hefen uneingeschränkt empfohlen werden kann, sind weitere Evaluierangen erforderlich. Auch für das NCCLS-Verfahren steht eine Validierung noch aus. Andere Verfahren werden sich an diesen beiden Testsystemen messen müssen.
Summary. The Etest® and the NCCLS method are not much differing in respect to their reproducibility. Only single observations exist on the clinical correlation of both tests. The correlation between both tests are known as being dependent on the yeast species and antifungals used. Due to the easy and simple handling the Etest® is attractive for routine laboratories. The Etest® has to be more evaluated before it can be generally recommended. The NCCLS method also is not validated until now. Different test methods should be compared thoroughly with the above mentioned standard.     

Intestinaler Hefepilzbefall: Ergebnisse einer 10tägigen Therapie mit Nystatin. Intestinal Yeast Colonization: Results of a Treatment with Nystatin over a Period of 10 Days

Zusammenfassung:  Von 123 Personen mit Hefepilz-positiven Stuhlbefunden, die im Rahmen einer Routineuntersuchung von Februar bis September 1984 untersucht wurden, konnten 38 Patienten, die über 10 Tage mit Nystatin (Moronal®) behandelt wurden, langfristig beobachtet werden. Bei der Kontrolluntersuchung nach 3–4 Monaten konnten bei 34% (13/38 Patienten) keine Hefepilze mehr nachgewiesen werden. Die Bestimmung der Minimalen Hemmkonzentration (MHK) läßt keine Aussage über einen Therapieerfolg zu. Bei Patienten, die bei der Kontroiluntersuchung einen Hefepilz-positiven Stuhlbefund aufwiesen, konnte eine signifikante Erhöhung der MHK der Hefepilze um 1–2 Verdünnungsstufen festgestellt werden. Resistente Stämme wurden nicht beobachtet.
Summary:  From a total of 123 persons with positive yeast findings in their feces, found during a routine medical examination carried out from February to September 1984, it was possible to observe over an extended period of time 38 patients who had received treatment with Nystatin (Moronal®) over a period of 10 days. No yeasts could be found in 34% (13/18 patients) at the control examination after 3–4 months. The determination of minimal inhibition concentration (MIC) allows no statement to be made on therapy success. In patients showing positive yeast findings in their feces at the control examination, a significant increase of the MIC of the yeasts by 1–2 dilution steps could be established. Resistant strains were not observed.     

Kriterien zur Empfindlichkeitsprüfung von Fluconazol im Mikrodilutionstest: Vorschlag für eine standardisierte Methode zur Testung von Sproßpilzen

Zusammenfassung. Für den Vorschlag zu einer standardisierten Empfindlichkeitsprüfung von Hefen gegenüber Fluconazol wurden die Laborerfahrungen der letzten Jahre sowie die Ergebnisse eines Ringversuches mit 21 Laboratorien aus Deutschland und Österreich zusammengefafßt. Die vorliegende Arbeit erläutert den Arbeitsablauf und gibt Hinweise zur Durchführung und Bewertung der Mikrodilutions-Methode.
Summary. For the proposal of a standardised susceptibility testing method of yeasts against fluconazole the laboratory experiences of the last years and the results of a collaborative study of 21 laboratories from Germany and Austria were compiled. The present paper reflects the work flow and gives advice for performing the microdilution method.     

Fluconazole susceptibility of Candida isolates from oropharyngeal candidosis

Summary. Fifty strains of Candida isolated from 38 patients with oropharyngeal candidosis were tested in vitro for fluconazole susceptibility with a disk diffusion test and for determination of minimal inhibitory concentrations (MICs). For 25 patients treated with fluconazole, the relationship between in vitro susceptibility and clinical outcome was analysed. A good correlation between in vitro results and therapeutic efficacy was found. In only one case was treatment failure associated with a susceptible strain. Mixed cultures of Candida albicans and non- albicans Candida species were not uncommon and, more interestingly, some samples contained different strains of C. albicans with varied fluconazole susceptibilities. Good agreement was observed between the two techniques used for fluconazole susceptibility testing.
Zusammenfassung. Mittels Diffusionstest und Microdilutionstest wurden Suszeptibilität und minimale Hemmkonzentrationen für Fluconazol an 50 Candida -Stämmen bestimmt, die von 38 Patienten mit oropharyngealer Candidose gewonnen worden waren. Bci 25 Fluconazol-behandelten Patienten wurde das Verhaltnis der Suszeptibilität in vitro mit dem klinischen Therapieergebnis verglichen. Zwischen beiden Parametern wurde eine gute Korrelation gefunden. Nur in einem Fall war ein Therapieversagen mit einem suszeptiblen Stamm assoziiert. Mischkulturen von Candida albicans und nicht- albicans-Candida -Arten waren nicht ungewöhnlich, und—noch interessanter—einige Proben enthielten mehrere Candida albicans -Stämme mit unterschiedlicher Fluconazol-Suszeptibilität. Auch wurde eine gute Überein-stimmung zwischen den beiden Techniken gefunden, die zur Fluconazol-Suszeptibilitäts-bestimmung eingesetzt waren.     

Susceptibility of Trichophyton rubrum to griseofulvin

Two hundred and seventy isolates of Trichophyton rubrum from 182 patients were subjected to susceptibility testing with griseofulvin according to Granade & Artis. A slight modification of the method concerning homogenization procedures gave better growth of controls in our investigation. In 245 cases an MIC could be determined. Among these isolates, seven strains from six patients presented MICs between 2 and 3 micrograms griseofulvin per ml, a value which, according to Artis et al., is to be considered as relatively resistant. The other isolates proved to be more susceptible to griseofulvin. Three of the patients showed no indication of therapeutic failure of griseofulvin treatment. The other three patients had onychomycoses of long standing and had been treated with griseofulvin previously with little or limited success. It is our conclusion that griseofulvin susceptibility testing is not a reliable instrument in explaining failure of griseofulvin therapy in Trichophyton rubrum mycoses.     

Aspergillus chevalieri (Mangin) Thom and Church: a new opportunistic pathogen of human cutaneous aspergillosis

Three cases of opportunistic cutaneous aspergillosis caused by Aspergillus chevalieri are described. The lesions were erythematous and hyperkeratotic with vesicopapular eruptions and scaling. Histopathology revealed granulomatous reaction showing polymorphonuclear leucocytes around fungal hyphae, which were broad, septate, branched and aggregated in the epidermal area. Oxiconazole and amorolfine, with a minimum inhibitory concentration of 10 μg ml^-1, were the most active drugs against A. chevalieri 'in vitro'. A. chevalieri is, for the first time, documented as opportunistic pathogen of man.
Zusammenfassung. Es werden drei Fälle opportunistischer, kutaner Aspergillosen beschrieben, verursacht durch Aspergillus chevalieri. Die Läsionen hatten erythematösen Charakter, waren hyperkeratotisch mit vesikopapulären Eruptionen und Schuppung. Histopathologisch zeigte sich eine granulomatöse Reaktion mit polymorphonukleären Granulozyten in der Nachbarschaft von Pilzhyphen, die großlumig, septiert, verzweigt und aggregiert im epidermalen Bereich lokalisiert waren. Oxiconazol und Amorolfin mit MHKs von 10 μg ml^-1 in vitro erwiesen sich als die gegen A. chevalieri wirksamsten Antimykotika. Somit wird A. chevalieri zum ersten Mal als opportunistischer Erreger beim Menschen dokumentiert.     

The medically important dematiaceous fungi and their identification

Dematiaceous fungi include a large group of organisms that are darkly pigmented (dark brown, olivaceous, or black). In most cases the pigment is melanin, and specifically, dihydroxynaphthalene melanin. The diseases produced include chromoblastomycosis, eumycotic mycetoma, and phaeohyphomycosis. Phaeohyphomycosis is a new classification for a diverse group of previously known entities grouped together on the basis of finding dematiaceous hyphal and/or yeast-like forms in tissue; tissue involvement may be superficial, cutaneous and corneal, subcutaneous, or systemic. Identification of these fungi is based mostly upon morphology. Important structures include annellides (Phaeoannellomyces, Exophiala), phialides (Phialophora, Wangiella), adelophialides (Phialemonium without collarettes, Lecythophora with collarettes), differentiation of conidiophores (Xylohypha versus Cladosporium) and conidial hilum, septation and germination (Bipolaris, Drechslera, Exserohilum). Useful laboratory tests include the 12% gelatin test (controversial), nitrate assimilation (W. dermatitidis is negative, most other species are positive), and determination of temperature maxima (especially 37 degrees C for E. jeanselmei, 40 degrees C for W. dermatitidis and B. spicifera, 42 degrees C for X. bantiana, and 45 degrees C for Dactylaria constricta var. gallopava and Scedosporium inflatum).