苯扎贝特致横纹肌溶解综合征1例

1临床资料老年男性,84岁,因"心慌、胸闷15d"于2011年5月5日入院。入院查体:生命体征平稳,慢性病容,口唇轻度紫绀,心界向左下扩大,心律失常,心房颤动节律,双下肢无水肿。入院后:三酰甘油3.29mmol/L,肌酸激酶(CK)64U/L,肌酸激酶同工酶(CK-MB)20U/L,乳酸脱氢酶201U/L,血糖9.4mmol/     

苯扎贝特与阿昔莫司联合调脂治疗观察

目的观察苯扎贝特与阿昔莫司联合调脂的治疗效果。方法合并高甘油三酯血症和低高密度脂蛋白血症的2型糖尿病患者服用苯扎贝特与阿昔莫司治疗前后血脂检测结果对比。结果血脂治疗后与治疗前相比明显下降,甘油三酯及胆固醇水平均有所下降,高密度脂蛋白水平有所升高,P〈0.05。结论苯扎贝特与阿昔莫司联合应用可使血脂各项指标均有所改善,并且是安全的。     

苯扎贝特逆转高甘油三酯血清下调内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的机制探讨

目的研究苯扎贝特逆转高甘油三酯血清（HTS）下调原代牛主动脉内皮细胞（BVEC）一氧化氮合酶（eNOS）基因表达的可能机制。方法在前期研究证实HTS下调原代牛主动脉内皮细胞（BVEC）一氧化氮合酶（eNOS）蛋白质表达的基础上,采用Western印迹法检测苯扎贝特对HTS诱导的eNOS蛋白质表达水平下调的影响;在证实其效应的基础上研究其信号转导机制。结果发现苯扎贝特可以完全消除HTS对eNOS的抑制作用,经PPARα、PI3K、MAPKK和MAPK抑制剂预处理后,苯扎贝特逆转HTS下调eNOS的蛋白质表达的作用明显减弱。结论证实了苯扎贝特可以纠正HTS对eNOS的抑制作用,其效应的发挥既通过依赖于PPARα的方式,也可以经PI3K/MAPK/MAPKK信号通路介导。     

氧化低密度脂蛋白促进内皮细胞MMP-9mRNA、LOX-1mRNA的表达及LOX-1在其中的作用研究

目的观察氧化低密度脂蛋白（OX．LDL）诱导人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶．9（MMP-9）mRNA、血凝素氧化型低密度脂蛋白受体1（LOX-1）mRNA的表达及LOX-1在表达中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,逆转录聚合酶链反应检测MMP-9mRNA和LOX-1mRNA的表达。并观察予以LOX-1的抑制剂多聚肌苷酸作用后,人脐静脉内皮细胞MMP-9mRNA表达的变化。结果与对照组比较（0．252±0．032,0．279±0．041）,OX—LDL作用后,人脐静脉内皮细胞MMP-9mRNA、LOX-1mRNA（25ng／组：0．486±0．012,0．586±0．02;50n舀／L组：0．668±0．011,0．739±0．014;100ng／组：0．817±0．030,0．872±0．003）表达明显增加,且诱导作用呈浓度-时间依赖性;与氧化低密度脂蛋白组（1．020±0．039）比较,多聚肌苷酸抑制后,MMP-9mRNA（0．872±0．046）表达明显下降。结论OX—LDL能促进内皮细胞MMP-9mRNA及LOX-1mRNA的表达,LOX-1参与了OX-LDL诱导内皮细胞MMP-9mRNA表达的过程。     

辛伐他汀下调OX—LDL诱导的NRK52E细胞LOX-1表达和ROS生成

目的 探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的NRK52E细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（lectin-like ox-LDL receptor,LOX-1）表达和活性氧生成的作用.方法 体外培养NRK-52E,同步化后分为三组：（1）空白对照组（NRK52E细胞＋0μg/ml ox-LDL）;（2） ox-LDL组（NRK52E细胞＋50 μg/ml ox-LDL）;（3）辛伐他汀组（NRK52E细胞＋10μmol/L辛伐他汀＋50 μg/mlox-LDL）,用Western blot测定LOX-1蛋白表达,激光共聚焦检测ROS的表达.结果 （1）正常NRK52E细胞表达LOX-1非常低,50 μg/ml ox-LDL明显刺激NRK52E细胞表达LOX-1增加6.80倍,加用10 μmol/L辛伐他汀后,ox-LDL刺激的NRK52E细胞LOX-1表达降低65％;（2）正常NRK52E细胞内ROS生成很少,50 μg/ml ox-LDL可明显刺激NRK52E细胞内ROS生成增多了4.86倍,加用10μmol/L辛伐他汀后,ox-LDL刺激的NRK52E细胞ROS生成减少60％.结论 辛伐他汀可下调ox-LDL诱导的NRK52E细胞LOX-1表达和ROS生成,从而保护肾脏.     

葡萄糖对人外周血内皮祖细胞凋亡的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养条件下的健康人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）凋亡的影响.方法 经密度梯度离心法分离出健康成年人外周血中的单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）,在体外诱导分化后,用FITC标记的荆豆凝集素Ⅰ（Dil-acLDL）和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（FITC-UEA-1）双染色鉴定为内皮祖细胞.观察不同浓度的葡萄糖对所获取的内皮祖细胞凋亡的影响.结果 11.1 mmol/L葡萄糖干预组较5.6 mmol/L葡萄糖干预组的凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）;25.5 mmol/L葡萄糖干预组的凋亡率较5.6 mmol/L葡萄糖干预组的差异有统计学意义（P＜0.05）,且随干预时间的延长凋亡率增加（P＜0.05）.结论 高浓度葡萄糖能增加体外培养条件下人外周血内皮祖细胞的凋亡,且这种作用呈时间依赖性.     

苯体外诱导小鼠骨髓细胞凋亡的研究

目的 观察苯对离体小鼠骨髓细胞的凋亡诱导作用。方法 荧光染色法检测细胞形态;DNA凝胶电泳法观察DNA裂解片段;流式细胞仪测细胞DNA含量法检测细胞凋亡率。结果 荧光染色法检测显示苯诱导小鼠骨髓细胞出现典型的凋亡特征形状;DNA凝胶电泳检测出苯诱导终浓度为15、25mmol/L,诱导时间为3h,电泳图谱呈现典型的DNA梯型条带;流式细胞仪检测DNA含量结果表明苯诱导小鼠骨髓细胞凋亡呈剂量－效应和时间－效应关系。结论 在体外培养条件下,苯是一种小鼠骨髓细胞凋亡诱导剂。     

苯并(a)芘对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的探讨苯并（a）芘（BaP）对小鼠肝细胞Fas／Fas—L凋亡信号通路的影响。方法ICR小鼠灌胃染毒，染毒剂量分别为0，5，10，20，40mg／kg，采用免疫组织化学法检测肝细胞Fas、Fas—L、caspase-3基因表达情况，应用吖啶橙／溴化乙啶（AO／EB）荧光双染法检测肝细胞凋亡情况。结果BaP各剂量染毒组肝细胞凋亡发生率及Fas、Fas—L、caspase-3基因表达阳性率与对照组比较差异均有统计学意义（P〈O．05）。结论BaP可诱发小鼠肝细胞发生凋亡。Fas／Fas—L信号通路改变是引起肝细胞凋亡发生的重要途径之一。     

Ox-LDL通过LOX-1促进NRK52E细胞摄取脂质的实验研究

目的 探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）刺激肾小管上皮细胞摄取脂质中的作用.方法 体外培养NRK52E,加入不同浓度（0,25,50,100μg/ml）的ox-LDL及预先与LOX-1阻滞剂多聚肌苷酸（polyinosonic acid,poly I）和爱兰苔胶（carrageenan）作用2 h,再加入50μg/ml的ox-LDL,24 h后用Realtime-PCR测定LOX-1 mRNA的表达水平,Western blot测定LOX-1蛋白表达,用油红O法测定细胞内脂质聚集情况.结果 在25～100μ/ml范围内随着ox-LDL浓度的增加,LOX-1 mRNA和蛋白的表达增加,分别为0 μg/ml的2.13、10.14、20.81倍和2.53、12.18、21.45倍,各组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;而随着LOX-1 mRNA和蛋白的表达增加细胞内脂质聚集也增加,分别为0μg/ml的3.2,6.4和12.5倍（P〈0.05）;polyI或carrageenan使50μg/ml的ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达分别下降（48%,47%）和（72%,65%）,同时细胞内脂质聚集减少41%和49%,LOX-1与细胞内脂质呈正相关（r=0.97,P〈0.05）.结论 ox-LDL诱导NRK52E细胞表达LOX-1,又通过LOX-1促进脂质在细胞内聚集从而损伤细胞,这种诱导作用可被LOX-1的阻断剂部分阻断.     

Ox-LDL通过LOX-1促进NRK52E细胞摄取脂质的实验研究

Objective To investigate the effect of lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1 ( LOX-1 ) in NRK52E intaking lipid induced by oxidized low density lipoprotein ( ox-LDL). Methods NRK-52E was incubated with ox-LDL (0,25,50, and 100 g/ml ) for 24 hours or pre-treated with the chemical blocker of LOX-1 receptor- polyI or carrageenan, and then exposed to 50 μg/ml of ox-LDL. LOX-Ⅰ mRNA was examined by real-time PGR. LOX-1 protein was assessed by Western blot analysis. Lipid deposit was examined by oil red O. Results LOX-1 mRNA expression in 25,50,100 μg/ml ox-LDL group was 2. 13, 10. 14, 20. 81 times of that in 0 g/ml ox-LDL group ( P <0. 05 ,respectively). LOX-1 protein expression in 25,50,100 μg/ml ox-LDL group was 2. 53,12. 18,21.45 times of that in 0 μg/ml ox-LDL group( P <0. 05 ,respectively). Following the increased LOX-1, lipid intake increased. Pre-treatment with Poly Ⅰ or carrageenan, LOX-1 mRNA expression deceased by 48% or 47%, LOX-1 protein deceased by 72% or 65%, lipid intake induced by 41% or 49% ( P <0.05 ,respectively). Lipid had a close relationship with LOX-1 ( r = 0. 87, P < 0. 05). Conclusion Ox-LDL induced NRK52E to express LOX-1 and promoted NRK52E to intake lipid, and this effect could be partly blocked by LOX-1 blocker.     

氧化型低密度脂蛋白促进巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1表达及辛伐他汀干预研究

目的：观察氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠腹腔巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）表达的影响，探讨LOX-1在泡沫细胞形成中的作用。方法：无菌分离、培养大鼠腹腔巨噬细胞，分别以终浓度10mg／L，25mg／L，50mg／L，75mg／L，100mg／L ox—LDL与巨噬细胞共孵育24h，以RT—PCR和Western blotting检测LOX-1基因表达水平；以终浓度75mg／L ox—LDL与巨噬细胞分别共孵育0．5h，3h，6h，12h，24h和36h后检测LOX-1表达水平；以不同浓度辛伐他汀预处理巨噬细胞后，再与ox-LDL共培养，检测LOX-1基因表达。结果：ox-LDL终浓度为10—75mg／L时，随着浓度增大，LOX-1mRNA和蛋白表达均增强，75mg／L时达高峰，ox-LDL 100mg／L时LOX-1表达显著降低（均P〈0．05）；自ox-LDL与巨噬细胞共孵育6h开始，LOX-1表达逐渐增强，24h达高峰，36h时LOX-1表达下降（均P〈0．01）；不同浓度辛伐他汀均使LOX-1表达降低，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：ox-LDL在一定范围内以剂量和时间依赖方式增强大鼠腹腔巨噬细胞LOX-1表达，LOX-1在巨噬细胞摄入ox-LDL的过程中可能具重要作用，辛伐他汀可抑制巨噬细胞LOX-1表达。     

老年高血压及血脂与低密度脂蛋白受体基因的关系

目的：探讨老年高血压及血脂与低密度脂蛋白受体（LDLR）基因HineⅡ多态性的关系。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法测定高血压组126例，对照组150例的LDLR基因型。结果：LDLR包括CC、CT、TT三种基因型。高血压组C等位基因频率高于对照组（P〈0．01）。结论：高血压组C等位基因频率高于对照组，提示低密度脂蛋白受体基因可能与老年高血压相关。     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变

目的 分析一家族性高胆固醇血症(FH)家系低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变类型,明确其突变位点,探讨LDLR基因突变类型与其临床表型的关系以及FH发病的分子病理学机制.方法 先证者及家系成员进行血脂测定,并行心电图、心脏和全身大血管彩色多普勒超声等检查,之后采用聚合酶链反应(PCR)联合变性高效液相色谱(DHPLG)技术结合扩增产物直接序列分析,检测LDLR基因启动子和全部18个外显子片段,结果与GenBank公布的该基因正常序列比对,找出突变,并检索FH突变数据库(www.ucl.ac.uk/fh).采用PCR结合限制性内切酶技术,检测载脂蛋白B100(ApoB100)基因Q3500R位点突变,以排除家族性ApoB100缺陷症(FDB).结果 先证者LDLR基因第13外显子存在c.1864 G→A错义突变,使得所表达的氨基酸由天冬氨酸→天冬酰胺(Asp622Asn);该外显子同时发现c.1959 C→T(Val 653Val)同义突变.在其母亲及外祖母LDLR基因中均发现上述两种突变,其父亲及外祖父也发现Val653Val的同义突变.克隆测序验证上述两种突变.结论 国内首次发现Asp622Asn突变;该突变可能是FH发病的分子病理学基础,并导致其严重的临床表型.PCR联合DHPLC技术可用于FH可疑人群的确诊.     

白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白所致细胞损伤的防护作用

目的探讨白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)所致PC12细胞损伤的保护作用。方法白藜芦醇预处理细胞,再加入不同浓度oxLDL,通过噻唑蓝(MTT)实验、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、TUNEL实验及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase3)活性测定,观察白藜芦醇对细胞存活率、细胞膜通透性、细胞核及Caspase3活性的影响。结果10mg/LoxLDL组细胞存活率、LDH释放率、TUNEL阳性细胞数、Caspase3活性分别为(62±3)%、(23±3)%、(26±5)%和(0811±0049)mol·min-1·μg-1;10mg/LoxLDL+50μmol/L白藜芦醇组分别为(84±7)%、(13±4)%、(12±4)%和(0553±0048)mol·min-1·μg-1,两组比较差异有统计学意义。结论白藜芦醇具有减轻oxLDL致PC12细胞的毒性作用;对PC12细胞具有神经保护作用。     

瑞舒伐他汀对人单核-巨噬细胞组织因子表达的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对氧化修饰低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的人单核-巨噬细胞组织因子（TF）表达影响及可能机制。方法据实验要求分空白对照组、OX-LDL组、多聚肌苷酸组、瑞舒伐他汀组。RT-PCR检测各组血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）mRNA,TFmRNA表达,ELISA检测各组TF蛋白表达。结果OX-LDL组与空白对照组比较,LOX-1mRNA、TFmRNA表达增加[（3．25156±0．15772）VS（1±0）;（2．522451±0．138967）VS（1±0）],其差异均有统计学意义（P〈0．01）。多聚肌苷酸组、瑞舒伐他汀组与OX-LDL组比较,LOX-1mRNA、TFmRNA表达减少[（2．95139±0．157253）VS（3．25156±0．15772）、（2．877343±0．156558）VS（3．25156±0．15772）;（1．811956±0．169699）VS（2．522451±0．138967）、（1．687701．4-0．174647）vs（2．522451±0．138967）],其差异均有统计学意义（P〈0．05）。ox-LDL组与空白对照组比较,TF蛋白表达增加[（207．7233±1．154701）VS（184．8467±0．871799）],差异有统计学意义（P〈0．01）。多聚肌苷酸组、瑞舒伐他汀组与OX-LDL组比较,TF蛋白表达均减少[（197．8733±1．505003）vs（207．72334-1．154701）、（202．95674-2．722744）VS（207．7233±1．154701）],差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LOX-1可能介导OX-LDL诱导的人单核-巨噬细胞TF表达增加。瑞舒伐他汀可通过下调单核-巨噬细胞LOX．1mRNA的表达下调TFmRNA表达,从而下调TF蛋白表达。     

氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞基因表达

目的 通过研究氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein。Ox-LDL)诱导血管内皮细胞基因表达谱的改变，为阐明氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞功能障碍及动脉粥样硬化形成的分子机制提供科学依据。方法 采用含有4000条全长已知人类基因cDNA，以及96条参照基因cDNA克隆制作的基因表达谱芯片，筛查氧化型低密度脂蛋白(100mg／L)作用6h对人脐静脉血管内皮细胞的基因表达谱改变的影响。结果 Ox-LDL可诱导3条基因表达下调，5条基因表达上调。结论 氧化型低密度脂蛋白的早期作用即可诱导内皮细胞相关基因的表达改变；首次发现氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞H731蛋白，ST2蛋白，CyclinB1(细胞周期蛋白B1)和KDRF(KM-102-derived reductase-like factor。KM-102源性还原酶样因子)等基因表达的改变，为揭示氧化型低密度脂蛋白引起血管内皮细胞功能障碍的机制提供线索。     

镁对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用

为探讨镁对内皮细胞的保护作用 ,用一次性密度梯度超速离心法制备人低密度脂蛋白 (LDL) ,以共轭二烯法和改良八木法检测Mg2 +(0 3、0 6、1 2和 2 4mmol L)对Cu2 +介导LDL氧化反应潜伏期和氧化修饰程度的影响。另将传至 2～ 3代的人脐静脉内皮细胞分为正常对照组、ox LDL对照组、补镁组和ox LDL +Mg2 +组 ,改良八木法测定细胞脂质过氧化物水平 ,黄嘌呤氧化法测定细胞外SOD活性 ,DTNB法测定含硒和不含硒GSH Px活性。结果显示 ,(1)Mg2 +各剂量组明显延长Cu2 +介导LDL氧化反应潜伏期 ,0 3和 0 6mmol LMg2 +显著降低TBARS的生成 ;(2 )与ox LDL组相比 ,ox LDL +Mg2 +各剂量组TBARS生成量显著下降 ,SOD活性显著升高 ,含硒GSH Px酶活力显著升高 ,不含硒GSH Px活力显著升高。提示镁抑制LDL的氧化修饰 ,补镁能降低细胞脂质过氧化物水平 ,增强抗氧化酶的的活性     

不同剂量瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导的人单核-巨噬细胞组织因子表达的影响及机制

目的 研究不同剂量瑞舒伐他汀对氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核-巨噬细胞组织因子(TF)表达的影响及可能机制.方法 实验分七组:空白对照组、ox-LDL对照组、多聚肌苷酸组、不同剂量(0.01、0.1、1、5μmol/L)瑞舒伐他汀组.RT-PCR检测各组血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA、TF mRNA的表达水平,ELISA检测各组TF蛋白含量的表达.结果 不同剂量瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导后人单核-巨噬细胞LOX-1 mRNA、TF mRNA和TF表达的影响:七组之间比较,差异均有统计学意义(F =91.334,58.833,103.552,P＜0.05).ox-LDL组与空白组比较,LOX-1 mRNA、TF mRNA、TF的表达均增加[(3.25156±0.15772) vs(1±0);(2.522451±0.138967) vs(1±0);(207.7233±1.154701)ng/L vs(184.8467±0.871799) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.05);多聚肌苷酸组、各瑞舒伐他汀组与ox-LDL组比较,三者表达均下降,且不同剂量瑞舒伐他汀组表达呈剂量依赖性减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);不同剂量瑞舒伐他汀组之间进行两两比较时,各组间差异有统计学意义(均P ＜0.05).结论 LOX-1介导的ox-LDL可使人单核-巨噬细胞TF表达增加,瑞舒伐他汀可通过ox-LDL途径,且呈剂量依赖性下调单核-巨噬细胞LOX-1 mRNA、TFmRNA的表达,使TF蛋白表达减少.