髓系白血病转基因小鼠模型骨髓免疫表型分析

目的 分析髓系白血病转基因小鼠模型的免疫表型分型特点.方法 根据小鼠骨髓各系列分化抗原表达特性,结合多色流式细胞术分析5只髓系白血病转基因小鼠和10只BL6健康对照组小鼠的骨髓免疫表型分型特点,并通过细胞周期分析进一步确认细胞增殖情况.结果 白血病转基因小鼠的骨髓细胞中Mac-1+Gr-1+细胞、c-Kit+细胞的表达率分别为(72.6±6.5)%、(20.5±4.8)%,明显高于健康对照组的(52.8±4.8)%、(2.1±0.3)%,差异有统计学意义(t值分别为6.66、12.66,P均＜0.01);而B220+、CD3+、CD41+和Ter119+细胞的表达率分别为(2.7±1.1)%、(1.2±0.3)%、(1.2±0.6)%及(2.8±1.1)%,明显低于健康对照组的(20.2±2.1)%、(6.6±1.3)%、(4.7±1.1)%及(10.6±1.2)%,差异有统计学意义(t值分别为-17.63、-8.69、-6.30、-12.28,P均＜0.01).细胞周期中的S期和G2/M期的表达率分别为(25.7±4.2)%和(21.1±4.2)%,明显高于健康对照组的(11.8±2.1)%和(8.9±1.8)%,差异有统计学意义(t值分别为8.59、7.98,P均＜0.01).结论 髓系白血病小鼠模型的髓系标志Mac-1、Gr-1及造血干祖细胞标志c-Kit的表达明显增高,而B淋巴细胞系标志(B220)、T淋巴细胞系标志(CD3)、巨核细胞系标志(CD41)和红细胞系标志(Ter119)的表达明显受抑.     

NUP98-HOXA9融合基因转基因小鼠的建立及乙烷亚硝基脲诱变的研究

目的从整体动物水平阐明NUP98 HOXA9融合蛋白在白血病发病机制中的作用。方法采用分子克隆技术构建含有NUP98 HOXA9的转基因质粒 ,经显微注射建立含有该融合基因的转基因小鼠 ,并对其细胞表型进行分析 ;采用PCR、RT PCR等技术进行转基因整合和表达检测 ;对表型正常的转基因小鼠用乙烷亚硝基脲 (ENU)诱变 ,观察转基因小鼠的表型变化。结果 5个单系的转基因小鼠在骨髓细胞中检出NUP98 HOXA9融合基因的稳定表达 ,但血常规、骨髓象及肝、脾等未见异常改变。ENU诱变后部分转基因阳性小鼠出现类似人类慢性髓系白血病的表现。结论NUP98 HOXA9融合基因产物能在转基因小鼠中表达 ,但不足以诱发白血病 ;ENU诱变结果提示转基因小鼠对ENU造成的第二次打击可提高白血病的易感性     

RT-PCR方法检测白血病中NUP98-HOX融合基因的初步研究

为了研究白血病患者体内是否有NUP98-HOXA、NUP98-HOXB、NUP98-HOXC、NUP98-HOXD融合基因，提取了骨髓中单个核细胞总RNA，用甲醛变性电泳检测其完整性；反转录合成cDNA第一链并设计了17对引物，以巢式PCR法(nested—PCR)扩增NUP98-HOXA融合基因；一步法扩增NUP98-HOXB、NUP98-HOXC和NUP98-HOXD融合基因，412bpGAPDH作为内参照引物，2％琼脂糖凝胶电泳判断PCR结果。结果表明：所提RNA完整，反转录后PCR扩增每个样本中均有内参照GAPDH的表达，但是未发现有NUP98-HOXA、NUP98-HOXB、NUP98-HOXC、NUP98-HOXD融合基因。结论：在本研究所取新疆白血病人群中没有检测到NUP98-HOXA、NUP98-HOXB、NUP98-HOXC和NUP98-HOXD融合基因。     

NUP98-HOXA9融合基因与白血病

血液系统恶性肿瘤常伴有非随机的特征性染色体易位发生，如慢性髓系白血病中的t(9；22)(q34；q11)等。近年来，一些实验室在白血病患者中相继发现并克隆了因t(7；11)(p15；p15)导致的NUP98-HOXA9融合基因。功能研究显示，NUP98HOXA9具有异常的转录活性，能使细胞恶性转化，干扰细胞的正常分化过程。小鼠模型的结果，部分解释了NUP98-HOXA9在急性髓系白血病及慢性髓系白血病急变过程中的作用，其分子机制的阐明有待深入研究。     

NUP98-HOXA9融合基因与白血病

血液系统恶性肿瘤常伴有非随机的特征性染色体易位发生,如慢性髓系白血病中的t(9;22) (q34;q11)等。近年来,一些实验室在白血病患者中相继发现并克隆了因t(7;11)(p15;p15)导致的NUP98 HOXA9融合基因。功能研究显示,NUP98-HOXA9具有异常的转录活性,能使细胞恶性转化,干扰细胞的正常分化过程。小鼠模型的结果,部分解释了NUP98-HOXA9在急性髓系白血病及慢性髓系白血病急变过程中的作用,其分子机制的阐明有待深入研究。     

AML1-ETO转基因小鼠的建立及初步表型分析

目的:建立AM L1-ETO融合基因转基因小鼠,在整体动物水平研究AM L1-ETO融合蛋白在白血病发病中所起的作用。方法:构建hCG/AM L1-ETO转基因质粒,通过显微注射将该质粒转入小鼠受精卵中,植入假孕母鼠输卵管,获得G0代转基因小鼠;用聚合酶链反应(PCR)方法检测融合基因的整合情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测融合基因的表达情况和组织表达谱。结果:PCR法共检出10只G0代转基因阳性小鼠,其中8个系均产下F1代小鼠,由此建立了8个AM L1-ETO转基因小鼠系。RT-PCR法证实AM L1-ETO融合基因在22系中稳定表达,但血常规、肝脏、脾脏等组织未见异常变化;对该系小鼠的组织表达谱检测表明,融合基因在肝脏、脾脏、心脏和肌肉组织存在不同程度的表达,但在脑组织中不表达。结论:AM L1-ETO融合基因能在转基因小鼠的骨髓等组织中表达,但尚不足以引发白血病,推测其他致病基因在小鼠白血病的发生中也起一定作用。     

PML—RARα转基因小鼠发生急性早幼粒细胞白血病

为了从整体水平上研究ＰＭＬ－ＲＡＲα融合蛋白的致白血病作用,建立了仅在髓系细胞中表达ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的转基因小鼠。通过表型分析发现一个单系的３只ｈＣＧ－ＰＭＬ－ＲＡＲα转基因小鼠在１－５个月时发生急性早幼粒细胞白血病,从而说明ＭＰＬ－ＲＡＲα融合基因的表达在白血病的发生中起着极为重要的作用。     

核孔蛋白98与髓系肿瘤

核孔蛋白(Nup)98锚定于核孔复合物(NPC)上,其通过染色体易位等方式形成融合基因,在多种信号分子的相互作用下,调控下游转录因子表达,从而干扰细胞的有丝分裂、基因转录及核浆运输等过程.Nup98在血液系统肿瘤,尤其急性髓细胞白血病(AML)、慢性粒细胞白血病急变期(CML-BC)、急性混合细胞白血病及急性T-淋巴细胞白血病(T-ALL)等多种髓系肿瘤的发生、发展过程中,发挥重要作用.针对Nup98的研究,将有助于研究者更深入地了解Nup98融合基因阳性髓系肿瘤的发病机制,并有可能为该类疾病靶向药物的进一步研发奠定基础.笔者拟就Nup98的结构与功能、常见的Nup98融合基因阳性髓系肿瘤、Nup98融合基因的致病机制等方面的最新研究进展进行阐述.     

急性髓系白血病干细胞表型的研究进展

迄今大部分急性髓系白血病患者都无法治愈,5年总体生存率仅为20％～30％,大部分患者是由于疾病复发所致.目前认为化疗仅能杀伤白血病原始细胞,而对白血病干细胞无效.因此这可能是白血病复发的根源.不断有新的白血病干细胞(LSCs)表型被确定,从而将LSC同正常造血干细胞区分开来,并研发出针对LSC表型的单克隆抗体.现就近几年LSCs表型的研究进展进行综述.     

hCG/RARα/PLZF转基因小鼠发生髓系增殖性疾病

绝大多数急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者具有t(15 ;17)形成的PML/RARα融合基因。另外 ,约有不到 1%的APL临床病例具有t (11;17) ,形成PLZF/RARα和RARα/PLZF两种融合基因产物。为了从生物整体水平研究RARα/PLZF对生命活动和造血功能的影响 ,了解APL的发病机制 ,我们建立了hCG/RARα/PLZF转基因小鼠 ,并对其白血病发生发展的变化进行了监测。材料和方法1　hCG/RARα/PLZF转基因小鼠的建立1.1　构建hCG/RARα/PLZF质粒 :首先将我所保存的pBlueSK RARα/PLZF质粒和pUC9 hCG质粒分别经XhoⅠ、NotⅠ双酶切得…     

急性髓系白血病相关逆转录病毒基因表达的研究

目的 探索急性髓系白血病（AML）逆转录病毒病因的可能性。方法 运用已获得的逆转录病毒6#11克隆为探针和引物,通过Northern blot和RT-PCR技术检测AML患者白血病细胞中相关逆转录病毒基因的表达情况。结果 以6#11为探针,Northern blot杂交的阳性条带在9.4kb和4.6kb左右,19例AML患者白血病细胞中18例出现了阳性条带;RT-PCR设计的引物扩增片段长度为790bp,14例AML患者白血病细胞中阳性表达11例。结论 AML患者白血病细胞中相关逆转录病毒基因呈特异性表达。     

染色质组装因子1,b亚单位在急性髓系白血病细胞中的表达研究

目的 探讨染色质组装因子1,b亚单位（chromatin assembly factor 1,subunit b,CAF1b）在急性髓系白血病（AML）中的表达情况及其特异性.方法 建立流式细胞术检测胞内蛋白的方法,测定AML细胞株KG1a及正常人、特发性血小板减少性紫癜（ITP）、AML、急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）、多发性骨髓瘤（MM）患者的骨髓单个核细胞中CAF1b的表达情况,利用WinMDI 2.9软件分析流式数据,并行统计分析,比较之间的差异.结果 AML患者骨髓单个核细胞和KG1a细胞CAF1b的表达率分别为（21.40±2.91）％、（27.87±1.48）％,均明显高于正常人、ITP、ALL、CML-CP、MM患者（P均＜0.05）.结论 CAF1b在AML有核细胞中表达特异性增高,提示其可能为AML特异性肿瘤抗原.     

微小RNA在急性髓细胞白血病中的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸残基的非编码RNA,在细胞分化、增殖、凋亡等方面都有重要作用.近年来,miRNA已成为相关研究的热点,并且其与多种癌症的关系已经得到证实.研究结果表明,miRNA的异常表达与急性髓细胞性白血病(AML)密切相关.笔者就miRNA在AML中的最新研究进展进行综述.     

吲哚美辛诱导慢性髓细胞白血病细胞凋亡的研究

目的　观察和确定吲哚美辛 (IN)对慢性髓细胞白血病 (CML)细胞凋亡的诱导作用 ,并部分揭示其分子机制 ,以期筛选一种新的抗白血病药物。方法　以CML细胞株K5 6 2及来自 6例初治Ph CML患者骨髓原代培养细胞为研究材料 ,在不同时间点 ,用不同浓度的IN进行干预 ,利用细胞形态学、流式细胞仪、DNA电泳、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)等技术 ,确定IN对CML细胞凋亡和增殖的影响。结果　①IN能诱导K5 6 2细胞和原代培养的CML细胞凋亡 ,并有抑制白血病细胞增殖的作用 ;②IN对足叶乙甙诱导K5 6 2细胞凋亡具有协同作用 ;③IN能下调K5 6 2细胞中bcl 2mRNA水平表达 ,对baxmRNA水平无明显影响。结论　IN能诱导CML细胞凋亡和抑制白血病细胞增殖 ,IN对足叶乙甙的抗白血病效应具有增敏作用。bcl 2基因表达下调可能为IN诱导CML细胞凋亡的重要机制之一。     

慢性粒细胞白血病慢性期与急变期基因表达差异的研究

目的　研究慢性粒细胞白血病 (CML)不同临床阶段的基因表达差异 ,为阐明CML演变的可能机制提供依据。方法　应用DNA芯片技术 ,对CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞的基因表达差异进行了检测。结果　在检测的 1176个基因中 ,有 6 8个基因显示急变期较慢性期明显上调 ,其中转录因子 16个 (2 3.5 % ) ,细胞表面抗原 15个 (2 2 .1% ) ,细胞调节蛋白 13个 (19.1% ) ,其它 2 4个(35 3% )。在差异表达的基因中 ,有 17个基因仅在急变期表达 ,而在慢性期不表达 ,11个 (16 .2 % )与G蛋白基因有关。结论　CML慢性期与急变期骨髓单个核细胞基因表达谱存在显著差异 ,基因高表达是CML急变期的特征之一。G蛋白相关基因在CML急变过程中可能起着重要作用。     

急性髓系白血病患者NPM1基因突变分析

目的研究成人急性髓系白血病（AML）患者的NPM1基因第12外显子突变的发生率及临床特征。方法采用PCR扩增产物直接测序法或毛细管电泳法检测101例成人AML患者（M0 1例，M1 17例、M2 25例、M3 23例、M4 7例、M5 25例、M6 3例）NPM1基因第12外显子的突变情况，了解NPM1基因突变阳性患者的临床特征。结果101例AML患者中共检出32例（31．7％）具有NPM1基因突变，其中M 01例、M1 9例、M2 7例、M4 2例、M5 13例。59例正常核型AML患者中27例（45．8％）发生NPM1基因突变，明显高于异常核型组（42例中5例，11．9％）（P〈0．001），且多见于M1和M5。NPM1基因突变型患者年龄相对较大（P〈0．05），外周血白细胞高，CD34和CD117表达水平低（P值均〈0．05）。对突变型患者的序列分析发现5种已知的NPM1基因突变类型（分别是A、B、D、NM、PM型突变），在1例患者中还发现了一种新型突变（暂命名为S型）。结论NPM1基因第12外显子的突变多见于正常核型AML患者，M1和M5患者更为多见，突变患者年龄较大，外周血白细胞数量高，并与CD34和CD117低表达相关。