肠神经系统遗传缺陷与先天性巨结肠

肠神经系统(enteric nervous system，ENS)是一个复杂的胃肠道动力和感觉系统，其异常所引起的胃肠道动力疾病主要有先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease．HD)及其类缘病(主要为IND，intestinal neuronal dysplasia)、胃食管返流、消化不良综合征、便秘、慢性复发性腹痛和肠易激综合征等。这些疾病的发生是遗传因素和环境因素共同作用的     

先天性巨结肠及其同源病诊断热点讨论

目的 探讨先天性巨结肠及其同源病定义、病理诊断方法及标准.方法 记录2015年10月在武汉同济医院小儿外科召开的先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)及其同源病临床与病理国际高峰论坛峰会病理分会中的热点问题及展开的深入讨论,并进行归纳总结.结果 直肠黏膜活检AchE染色被一致认可为术前诊断的金标准.巨结肠切除术中活检是必需的,但染色方法的选择未有统一.作为传统方法,单纯HE染色的精确性受到了质疑,普遍认为需要同时进行其他染色,而具体染色方法因各自习惯而异.目前缺乏大样本的正常新生儿和儿童肠道发育各项数据,因此对于神经节细胞减少症,神经元发育不良的诊断标准尚有争论.肠神经元发育不良(intestinal neuro-nal dysplasia,IND)是不是一种疾病实体,是原发性还是继发性疾病未有定论.病理发现的各类非神经节病变目前还不清楚应该如何定义和归类,因此更要求病理专家应对其作出详尽描述.结论 国内外对巨结肠及其同源病在定义、病理诊断方法及标准上有一定共识,但部分争论热点由于缺乏理论和实践数据支撑而未有统一结论,而这些热点必将成为将来研究的新方向.     

肠神经系统的生物学标志物与先天性巨结肠的神经病理关系

先天性巨结肠 (Ｈｉｒｓｃｈｓｐｒｕｎｇ’ｓｄｉｓ ｅａｓｅ ,ＨＤ)是常见的消化道神经系统发育异常性疾病之一 ,根本特征为远端狭窄肠段无神经节细胞 ;而巨结肠类缘病(ＨＤＡｌｌｉｅｄｄｉｓｅａｓｅ,ＨＡＤ)则是临床表现酷似ＨＤ但肠神经节细胞 (ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｇａｎ ｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓ,ＩＧＣｓ)存在 ,仅在数量与质量上异常的疾病 ,常常ＨＤ伴发。已有研究表明肠神经系统 (ｅｎｔｅｒｉｃｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓ ｔｅｍ ,ＥＮＳ)的胚胎发育缺陷是ＨＤ及ＨＡＤ的根本原因[1 ] 。形成ＥＮＳ的神经元和胶质细胞来源于神经嵴细胞 …     

先天性巨结肠术后结肠传输时间测定的意义

目的　探讨先天性巨结肠 (HD)Swenson改良术后远期结肠动力功能。方法　 2 0 0 0年 6月至 2 0 0 2年对 2 2例HD行Swenson改良术后的儿童随访 ,应用简化的不透X线标记物追踪法测定其结肠传输时间 ,初步探讨结肠功能的变化。其中男 14例 ,女 8例 ;年龄 5～ 2 0岁 ,平均 10 .0岁。全部病例均经术前钡灌肠及病理检查确诊。平均随访时间为 9年 (5～ 15年 )。结果　对照组儿童的全结肠传输时间 (TCTT)、右半结肠传输时间 (RCTT)、左半结肠传输时间 (LCTT)、直肠乙状结肠传输时间 (RSTT)分别为 (2 8.7± 7.7)h、(7.5± 3.2 )h、(6 .5± 3.8)h和 (13.4± 5 .6 ) g ,与对照组相比 ,巨结肠组儿童的TCTT和RSTT显著延长 (39.4± 19.5 )h比 (2 8.7± 7.7)h ,P <0 .0 5 ;(2 8.5± 18.8)h比(13.4± 5 .6 )h ,P <0 .0 1。结论　应用多次口服标记物一次排片法测定正常儿童的全结肠传输时间为 (2 8.7± 7.7)h。先天性巨结肠Swenson改良术后儿童的TCTT和RSTT较正常儿童均显著延长。其新生“直肠乙状结肠”部位存在明显的动力异常。先天性巨结肠术后远期排便功能障碍与结肠动力异常有关。     

神经生长因子受体在先天性巨结肠表达的意义

目的 探讨神经生长因子受体（ＮＧＦＲ）在先天性巨结肠（ＨＤ）中的分布情况及其意义。方法 应用ＮＧＦＲ免疫组化方法对１０例３周￣２岁的ＨＤ患儿及８例对照组患儿结肠进行染色观察。结果 丰富的ＮＧＦＲ染色阳性神经纤维分布于正常结肠环肌层及粘膜下层,少量分布于纵肌层,ＮＧＦＲ染色阳性神经元分布于肌间神经丛及粘膜下神经丛;ＮＧＦＲ染色阳性神经纤维在ＨＤ无肌间神经节细胞肠段肌层及粘膜下层内明显减少或缺如,而肌     

轴突导向因子Netrin-1在先天性巨结肠中表达分布及其意义

目的 观察轴突导向因子Netrin-1在先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HD)患儿中正常段与痉挛段结肠中的表达情况,探讨其在HD发病机制中的作用.方法 对36例HD患儿的正常段肠管(对照组)与痉挛段肠管(病变组),用免疫组织化学方法检测Netrin-1在两组中的表达.结果 在对照组(正常段)肠管中肌层(纵肌、环肌)、肌间神经节及黏膜层均见Netrin-1表达,病变组(痉挛段)中肌层及黏膜层亦可见Netrin-1表达,两组间Netrin-1的表达强度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Netrin-1在HD患儿正常段和痉挛段肠管的肌层、黏膜层表达无显著差异,可能说明Netrin-1与HD的发生无明显相关性.     

肠吻合器Ikeda治疗先天性巨结肠

张氏环钳在我院已经应用 30余年[1 ] ,始终未能克服环钳器械给患儿术后带来的不便。吻合器是现代胃肠外科技术的一个进步 ,我院尚不能用于代替张氏环钳法 ,只能用于Ikeda手术。Ike da手术在腹腔内切开直肠做吻合增加了腹腔污染的机会 ,是其不足之处。本组 1 4 6例Ikeda手术是根据患儿的经济条件决定是否应用吻合器或Ikeda环钳 ,自然分成两组对比。张氏环钳、Ike da环钳和Ikeda吻合器都应用于Duhamel术式 ,设计原理相同 ,对巨结肠的疗效基本相同。比较Ikeda环钳和Ikeda吻合器的优缺点 ,目的在于对Ike da吻合器方法做一临床评价。资料与方…     

先天性巨结肠结肠组织钾离子通道的表达变化

目的 通过离子通道芯片及Western blot实验证实先天性巨结肠(Hirschsprungdisease,HD)病变肠段的钾离子通道表达与正常的结直肠存在差异.方法 2012年8月到2013年12月在哈尔滨医科大学附属第一医院手术治疗先天性巨结肠患儿30例,通过病史、直肠测压、钡剂灌肠造影、术中冰冻及术后病理等确诊为HD,术中结肠切除完成后,分别取正常及病变狭窄段肠组织,大小为1.0 cm×1.0 cm;标本置入液氮中冻存以待进一步实验.取其中6组标本,应用人类神经离子通道PCR芯片(neuronal ion channels PCR array)进行筛选表达具有差异性的钾离子通道;全部30例标本应用Western blot检测所筛选出钾离子通道的表达情况.结果采用Image-Pro Plus魔棒选取蛋白条带,利用IOD算法计算条带灰度.结果 我们将表达变化在2倍以上的基因认定为是差异表达基因,从而通过芯片筛选出表达具有差异性的钾离子通道1 5个,其中无神经节肠段表达增强1个,表达降低14个,共包括电压门控性的钾离子通道9个、大电导Ca2+激活的K+通道2个、小电导Ca2+激活的K+通道2个、内向整流性钾离子通道2个.利用Westernblot验证大电导Ca2+激活的K+通道的Maxi K通道及电压门控性钾离子通道的Kv11.1通道a亚基蛋白的表达.并经统计学分析,认定差异具有显著差异性.结论 先天性巨结肠结肠组织中确实存在表达下调的钾离子通道.     

先天性巨结肠中miR-939靶向调控SOX4表达抑制肠神经嵴前体细胞功能表型的实验研究

目的 检测MicroRNA-939(miR-939)和性别决定区相关HMG族盒蛋白4(Sry-related HMG box 4,SOX4)在先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HSCR)中的表达水平,评估miR-939在SOX4调控肠神经嵴前体细胞(enteric neural crest c...     

一氧化氮与先天性巨结肠（综述）

1987年证实一氧化氮(NO)内源性机制的存在与意义以来,NO研究很快得到生物界和医学界的重视。NO机制与消化系统的生理功能和临床病理之间存在着广泛而密切的联系。 用还原性辅酶Ⅰ依赖性黄递酶(NADPHd)组织化学、一氧化氮合成酶(NOS)免疫组织化学方法发现人胃肠道组织中均有NOS分布。NOS在胃肠壁全层均有分布,以环形平滑肌最多。NO参与的功能有:胃肠粘膜血流调节、分泌功能调节、免疫防护屏障、炎症、胃肠动力调节。 先天性巨结肠(HD)病理学上证实为肌层和粘     

Hirschsprung's disease: current management and prospects for transplantation of enteric nervous system progenitor cells

Hirschsprung's disease affects 1 in 5000 newborns and is caused by an absence of ganglion cells in a variable length of the distal gut. It commonly presents in the newborn period with life-threatening bowel obstruction requiring surgery. Despite apparently successful surgery the long-term outcomes are often unsatisfactory with some children facing a lifetime of continence issues or debilitating constipation. This article exams the reasons for this and describes advances that have occurred in the surgical management of the disease. In the last two decades rapid progress has been made in understanding the genetics and molecular pathology of Hirschsprung's disease. The potential for harnessing this knowledge to develop a stem cell based therapy for Hirschsprung's disease is discussed.     

先天性巨结肠患儿肠道组织内DPF3、Smarcd3和MEF2的表达

目的 通过对DPF3、Smarcd3及MEF2基因在先天性巨结肠(HD)患儿肠道组织内的检测,验证DPF3、Smarcd3及MEF2基因在肠道组织内的表达情况,并探讨DPF3、Smarcd3及MEF2基因在HD发病过程中的可能作用.方法 随机选取28例重庆医科大学附属儿童医院HD患儿手术标本,并根据手术标本取材的位置分为:痉挛段组和吻合口组.利用RealTime-PCR、免疫蛋白印迹法及免疫组织化学染色法从RNA和蛋白水平对DPF3、Smarcd3及MEF2基因在HD患儿肠道组织内的表达进行检测,验证DPF3、Smarcd3及MEF2在肠道组织内的表达,并分析其参与HD发病过程的可能机制.其中,利用BIO-RAD对mRNA数据半定量分析;Genesnap系统及软件对蛋白数据进行分析;免疫组织化学法及光学显微镜数码摄片进行蛋白染色分析;GraphPad Prism5绘图,SPSS(version 17.0)进行数据统计.结果 DPF3 mRNA在患儿吻合口和痉挛段的表达为1.76±1.30和1.07±0.93;蛋白的表达分别为2.31±0.62和1.95±0.57.Smarcd3 mRNA在患儿吻合口和痉挛段的表达为0.68±0.62和0.38±0.42;蛋白的表达分别为0.85±0.43和0.61±0.34;MEF2 mRNA在患儿吻合口和痉挛段的表达为1.01±0.63和0.68±0.39;蛋白的表达分别为2.29±0.38和1.83±0.76.DPF3、Smarcd3及MEF2 mRNA及蛋白在患儿痉挛段的表达较吻合口均降低(P＜0.05),且趋势相一致.DPF3、Smarcd3及MEF2在吻合口神经节细胞处可见阳性的棕色颗粒状染色,而在痉挛段未见明显染色.结论 DPF3、Smarcd3及MEF2可能参与HD的发病过程.     

先天性巨结肠多中心研究的进展与意义

本综述介绍了HD(先天性巨结肠)多中心研究的现状,总结了国际范围近年对该病的多中心研究报道,分别就HD的诊断方法、治疗方式、并发症处理及预后评估方面目前的研究成果做了详细的描述,提出了国内也可以通过多中心合作研究建立HD的规范化诊断和治疗方案,为科学诊治提供指导.     

HA117编码蛋白、P-gp和bcl-2在儿童急性白血病中的表达及意义

目的 探讨HA117编码蛋白、B细胞白血病/淋巴瘤-2（bcl-2）和P-糖蛋白（P-gp）在急性白血病（AL）患儿骨髓单个核细胞中的表达及临床意义.方法 通过免疫组织化学（SP）方法检测37例AL患儿中HA117编码蛋白、bcl-2、P-gp的表达情况,以15例非恶性血液病患儿为对照.结果 （1）AL组患儿HAll7编码蛋白、bcl-2及P-gp的阳性表达率分别为64.86％、62.16％和37.84％;AL组HA117编码蛋白表达阳性率明显高于对照组（P =0.033）;三种蛋白在急性髓细胞白血病组和急性淋巴细胞白血病组表达阳性率差异无显著性.（2）HA117编码蛋白在初诊组表达阳性率明显高于对照组（P =0.021）,而完全缓解组与对照组比较差异无显著性（P =0.098）.（3）AL患儿HAll7编码蛋白与bcl-2的表达水平呈正相关性（P=0.0001,r=0.593）.结论 新基因HA117可能参与了儿童AL的耐药机制,对儿童AL的预后有一定的预示作用,并在肿瘤的发生、发展和耐药中可能与抗凋亡基因bcl-2存在协同作用.     

ATRA耐药基因HA117相关蛋白在四种恶性肿瘤的表达及临床意义

目的探讨ATRA耐药基因HA117相关蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌及神经母细胞瘤组织中的表达特点及临床意义。方法以肠腺癌标本20例、肺癌标本23例、乳腺癌标本21例以及神经母细胞瘤标本20例手术切除组织为实验组;以巨结肠手术切除扩张段近切H缘的正常结肠组织10例、手术切除的肺癌癌旁组织9例、乳腺癌癌旁组织11例及神经母细胞瘤瘤旁组织14例为对照组;应用免疫组化S-P法检测HA117蛋白在上述组织切片中的表达,并结合临床资料进行回顾性分析。结果HA117在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织中阳性表达明显高于非癌组织,差异具有统计学意义（P〈0．05）;HA117蛋白的阳性表达与肠腺癌、肺癌及乳腺癌患者的肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移无明显相关性（P〉0．05）,与神经母细胞瘤的病理分型和淋巴结转移有显著相关性（P〈0．05）。结论HA117蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织的高表达提示这四种恶性实体肿瘤对ATRA具有较强的耐药性。     

神经生长因子及其受体在先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端表达的下调

目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体(TrkA、P75NTR)在先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)患儿直肠末端的表达,探讨对其肠神经系统发育的影响.方法 收集2011年1月至2013年1月遵义医学院附属医院诊治的ARM患儿直肠末端标本30例.其中,男24例,女6例;高位ARM 15例,中位ARM 6例,低位ARM 9例;手术年龄2 d～13个月,平均1.4个月.一期腹会阴肛门成形8例;分期肛门成形13例,包括:腹腔镜辅助肛门成形7例,腹会阴肛门成形2例,后矢状入路肛门成形术4例,会阴肛门成形9例.肛门成形术中取直肠末端标本,运用苏木素/伊红(HE)染色计数直肠末端黏膜下及肌间神经丛数量,免疫组织化学(IHC)及实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NGF及其受体(TrkA、P75NTR)在低位ARM和中高位ARM患儿直肠末端的表达情况.结果 HE染色:低位ARM患儿直肠末端黏膜下及肌间神经丛分布密集,神经丛面积大,节细胞数量多;中高位ARM患儿神经丛分布明显稀疏,神经丛数量较低位ARM患儿明显减少(1.30±0.82vs5.60±1.36)个,两相比较,差异有统计学意义(P＜0.01).IHC:NGF、TrkA、P75NTR主要在直肠末端黏膜下及肌间神经丛表达,NGF主要定位于胞核,TrkA主要定位于胞核及胞质,P75NTR主要定位于胞核、胞膜.NGF、TrkA、P75NTR在低位ARM患儿直肠黏膜下、肌间神经丛大量表达,其积分光密度(IOD值)分别为43.48±7.11、18.83±3.65和23.39±3.64;NGF、TrkA、P75NTR在中高位ARM患儿直肠末端表达明显减少,其积分光密度(IOD值)分别为3.70±1.21、8.49±2.68和7.17±2.28,两相比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).qRT PCR:NGF、TrkA、P75NTR mRNA在低位ARM患儿直肠末端的相对表达量分别为(172.22±104.38、148.78±72.45和122.83±35.45);明显高于中高位ARM患儿(80.38±43.10、73.95±47.43和75.15±20.23),两相比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 NGF及其受体TrkA、P75NTR可能参与并影响ARM患儿直肠末端肠神经系统的发育.     

Neurexin、Neuroligin基因在人类及鼠类动物肠神经系统的表达及意义

目的 探讨Neurexin和Neuroligin基因在人类及鼠类动物肠神经系统(ENS)是否有表达,以及对ENS突触结构与功能的作用,探查其在先天性巨结肠各段的表达特征及意义.方法 首先制备小鼠、大鼠、豚鼠、正常人体肠管肌间神经丛铺片,通过双重免疫荧光细胞染色,证明Ne-urexin、Neuroligin基因是否在肠神经系统表达,再采用免疫组织化学技术对20例先天性巨结肠狭窄段,移行段和扩张段肌间神经丛铺片标本染色,判断Neurexin、Neuroligin基因的表达情况.结果①Neurexin、Neuroligin蛋白在小鼠、大鼠、豚鼠、人体的肠肌间神经丛与神经细胞标记Hu在同一细胞表达;而Neurexin蛋白与突触前标记物synaptophysin,Neuroligin蛋白与突触后标记物PSD95也在同一神经组织出现;②Neurexin、Neuroligin蛋白在先天性巨结肠扩张段表达最多,移行段明显减少(P<0.05),病变段无表达;同一组织Neurexin和Neuroligin的表达无明显差异(P>0.05).结论 Neurexin、Neuroligin基因在鼠齿类动物及人体肠神经系统都有表达,不仅在胞体,而且在轴突、树突都有表达,Neurexin在突触前表达,Neuroligin在突触后表达.它们对肠神经系统突触的结构功能起重要作用,与一些胃、肠道动力性疾病有密切关系,是导致先天性巨结肠蠕动功能丧失的重要原因.     

不同类型无神经节细胞巨结肠乳鼠模型的建立与鉴定

目的 建立不同类型无神经节细胞巨结肠乳鼠实验动物模型,为进一步研究该病的发病机制及相关分子生物学机制提供可靠模型.方法 将6～8日龄SD大鼠4窝(每窝10只乳鼠)随机分为实验组(包括短段型组、常见型组、长段型组)及对照组.对照组乳鼠经肛门推注9 g/L盐水,实验组分别采用经肛门置入不同长度的导管,推注不同剂量、不同浓度苯扎氯铵(BAC)的方法进行处理.分别于处理后2、4、6、8周行大体观察,取全段结肠及直肠,固定、包埋、切片后行HE染色,通过免疫组织化学染色检测蛋白基因产物9.5(PGP9.5)的表达以鉴定模型建立成功与否,确定病变累及肠管的范围.通过免疫荧光技术观察狭窄肠段与相应部位正常肠段c-kit标记的Cajal间质细胞(ICC)的表达.结果 实验组大鼠处理后4周逐渐出现腹胀,粪便颗粒变小.8周处死后解剖发现肠管出现痉挛狭窄,狭窄近端粪便潴留;组织学检查可见处理段肠管肠神经节细胞基本消失,且不同的实验处理方法造成病变累及的肠段明显不同.对照组无上述改变.与对照组相比,实验组c-kit标志的ICC在狭窄段的表达明显减少.结论 经肛门灌注不同浓度、不同剂量BAC的方法成功建立了短段型、常见型、长段型3种类型无神经节细胞巨结肠的乳鼠实验模型,该方法建立的模型稳定、可重复性好,为深入研究先天性巨结肠的发病机制提供了一个可靠的模型基础.     

Coexistent neuroblastoma and Hirschsprung's disease —Another manifestation of the neurocristopathy?

Abnormalities of neural crest development may be manifested in a wide variety of ways ranging from von Recklinghausen's disease to Sipple's syndrome — pheochromocytoma and medullary thyroid carcinoma. We report here yet another manifestation — coexistent multiple neuroblastomas and Hirschsprung's disease in a newborn. In a review of the English literature we have found the combination of neuroblastoma and Hirschsprung's disease recorded only once previously [2]. However, the relationship between the two diseases was not discussed. The two diseases may be at the extremes of a spectrum of neural crest developmental pathology, i. e., Hirschsprung's representing a deficiency and neuroblastoma representing malignant proliferation of cells of neural crest origin.