Notch信号通路在肾母细胞瘤中的表达及其意义

目的 探讨Notch信号通路因子在肾母细胞瘤中的表达及其意义.方法 本研究中实验组为收集2010年6月至2014年3月在我院经手术活检诊断为肾母细胞瘤组织的标本.对照组标本为同期由于肾外伤、重复肾等疾病行手术切除获得.所有病例中,肿瘤组患儿共计31例,男17例,女14例,年龄4～144个月,平均年龄37.4个月,肿瘤分期Ⅰ期9例,Ⅱ期8例,Ⅲ期8例,Ⅳ期6例,尚无Ⅴ期病例.对照组为17例患儿,男10例,女7例,年龄23～157个月,平均年龄95.6个月.首先利用临床收集的肾母细胞瘤及非瘤肾脏组织标本,通过RT-PCR方法检测其中notch1的RNA表达水平;同时通过Western blot方法检测DAPT处理后的SK-NEP-1(人肾母细胞瘤细胞系)中Notch信号通路因子与Wnt信号通路因子,以及VEGF的表达水平并进行统计学分析.结果 不同分期WT中notch1的表达:肿瘤组notch1基因mRNA表达较对照组明显增高,且肿瘤分期越高,notch1基因的mRNA表达也相应越高;DAPT作用SK-NEP-1后的表达:分别利用不同浓度的DAPT作用于SK-NEP-1后,SK-NEP-1中Notch信号通路的notch1、Jagged1蛋白表达水平随DAPT浓度增高逐渐下降,且Wnt信号通路中的wnt1、B-catenin蛋白表达水平同样明显下降,在10μmol/L浓度DAPT时上述蛋白表达量较PBS组比较具有明显统计学差异(P＜0.05);而且利用DAPT抑制之后,SK-NEP-1中的血管内皮生长因子(VEGF)表达也明显降低.结论 Notch信号通路蛋白的高表达与肾母细胞瘤的发生及恶性程度存在关系,同时Notch信号通路作为肿瘤治疗靶点也为我们将来治疗肾母细胞瘤提供新的线索和重要依据.     

Notch信号通路与毛细支气管炎的相关性研究进展

毛细支气管炎是婴幼儿时期最常见的下呼吸道感染性疾病,其主要的病原体是呼吸道合胞病毒,是引起婴幼儿住院的主要因素之一,与哮喘的发生密切相关.但是其详细机制仍未阐明,也尚无特异性的治疗药物.近年来研究发现Notch信号通路在其发病过程中有重要作用.该文就近年来Notch信号通路与毛细支气管炎的相关性研究作一综述.     

Notch信号通路活化协同巨噬细胞对胆道闭锁肝纤维化的作用研究

目的探究Notch信号通路活化及相关炎性反应分子机制在胆道闭锁患者肝纤维化进展中的作用。方法选取2019年1月至2020年11月于天津市儿童医院确诊的20例胆道畸形患者(15例胆道闭锁,5例胆总管扩张)作为研究对象,收集临床资料及术中留取的肝活检组织样本,使用免疫组化方法检测患者肝组织内Notch信号通路的效应分子HES-1,M2型巨噬细胞标志物CD163及细胞因子IL-6、PDGF-AA的表达并进行半定量分析。结果与胆总管扩张组相比,HES-1(0.044±0.017 vs.0.143±0.027)、CD163(0.089±0.020 vs.0.259±0.111)、IL-6(0.070±0.007 vs.0.216±0.028)、PDGF-AA(0.155±0.019 vs.0.220±0.044)在胆道闭锁患者肝组织中的表达明显增加,且差异有统计学意义(P<0.05);HES-1的表达与CD163的表达呈正相关(r_s=0.687,P<0.01);HES-1、CD163、IL-6、PDGF-AA与肝纤维化程度成明显正相关(r_s=0.791,r_s=0.912,r_s=0.920,r_s=0.887,P<0.001)。结论Notch信号通路参与了胆道闭锁肝纤维化进程,并与M2型巨噬细胞有协同作用。     

癫痫持续状态大鼠海马内Notch通路对HIF-1α调控位点的研究

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及Notch信号通路下游基因HES1在发育期癫痫持续状态(SE)大鼠海马内的表达变化,探寻Notch信号通路对于HIF-1α的调控位点。方法 176只21日龄SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、戊四氮(PTZ)致SE模型组(PTZ组)、Notch信号通路特异性抑制剂(DAPT)干预组(DAPT组)。PTZ组大鼠腹腔注射PTZ溶液制作SE模型,NS组注射等剂量的生理盐水作为对照,予安定腹腔注射终止SE发作。造模成功后分别于0.5、1、2、4、8 h断头取脑分离双侧海马组织,采用RT-PCR法检测HES 1、HIF-1αm RNA的表达;于2、4、8、12、24 h断头取海马,采用Western blot法检测蛋白的表达。DAPT组在开始造模前30 min腹腔注射DAPT溶液,分别于造模成功后2 h、8 h断头取海马组织,采用RT-PCR法检测2 h时HES1、HIF-1αm RNA的表达,用Western blot法检测8 h时蛋白的表达。结果 SE后的各个时间点,大鼠海马内HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达是增高的,与同一时间的NS组相比差异有统计学意义(P?0.05);与同一时间点的PTZ组比较,DAPT组的HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论在发育期大鼠SE发作后的海马内,HES1基因可能是Notch信号通路中对HIF-1α表达的调控位点。     

婴幼儿血管瘤内皮细胞凋亡研究进展

血管样病变根据生物学分类可分为血管瘤和血管畸形。血管瘤常在出生时或生后1周内出现，之后迅速增长，随后静止、消退。细胞凋亡是引起血管瘤自行消退的重要原因，已证实有多种凋亡相关基因参与血管瘤内皮细胞凋亡。本文主要综述凋亡相关基因与血管瘤内皮细胞凋亡的关系，为探讨血管瘤的发生、发展及治疗提供参考。     

PTEN对婴幼儿血管瘤内皮细胞VEGF-A/VEGFR-2自分泌环的调控作用

目的 研究PTEN在婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)中的表达,探讨其对血管瘤内皮细胞(HemEC)中VEGF-A/VEGFR-2自分泌环的影响与意义.方法 应用Real-time PCR检测增殖期IH组织与正常皮肤组织中PTEN基因表达差异,Western blot检测HemEC与正常血管内皮细胞中PTEN蛋白水平.采用腺病毒瞬时转染构建立PTEN高表达HemEC模型,观察PTEN表达变化对HemEC中VEGF-A、VEGFR-2与磷酸化VEGFR-2表达水平的影响,分析PTEN表达变化对HemEC增殖与凋亡的影响.结果 PTEN基因在IH微血管组织中的表达较正常皮肤血管组织出现显著的下调.通过对HemEC中PTEN蛋白表达量进行检测发现,与异常活化的VEGF-A/VEGFR-2信号通路相反,HemEC中PTEN蛋白表达较正常血管内皮细胞低(0.08±0.02比1.86±0.41).PTEN高表达可显著抑制VEGF的表达,并抑制VEGF-A对VEGFR-2磷酸化的激活(1.27±0.25比0.09±0.03),但对VEGFR-2蛋白表达水平无显著作用(2.32±0.51比2.35±0.42).上调PTEN后HemEC增殖能力显著降低、凋亡率显著升高.结论 PTEN通过对HemEC中VEGF-A/VEGFR-2自分泌环的调控,从而影响HemEC的增殖和凋亡状态.     

Wnt信号通路在肠道发育中的作用

Wnt信号通路在机体生长发育过程中有至关重要的作用。在肠道发育过程中,Wnt信号通路对于不同类型肠道细胞的分化、增殖、生理功能都有重要影响,其异常调控可以导致多种疾病的发生。该文就Wnt与肠道发育及其与肠道生理病理的关系进行阐述。     

神经母细胞瘤中SOX2、FoxM1表达与PI3K/AKT信号通路对其调控作用的实验研究

目的 分析神经母细胞瘤(NB) SOX2和FoxM1表达特点,初步探讨PI3K/AKT信号通路对SOX2、FoxM1调控作用.方法 收集重庆医科大学附属儿童医院2011年至2016年确诊的34例NB患儿手术切除组织标本,免疫组化(IHC)检测FoxM1蛋白表达水平并分析其与NB临床病理特征关系.20只荷瘤裸鼠数字随机均分为4组: LY294002组、LY294002对照组(C1)、IGF-1组、IGF-1对照组(C2).每2 d观察裸鼠一般情况并测量瘤体体积;HE染色观察瘤体病理形态学特征;Western blot、IHC检测瘤体组织pAKT、SOX2、FoxM1蛋白表达水平.结果 NB 组织:I-II 期FoxM1表达较III-IV期低,差异有统计学意义(P<0.05).裸鼠:干预结束后,与各自对照组相比,LY294002组裸鼠一般情况好,IGF-1组无差异.LY294002组瘤体体积(2 223.53±266.59) cm3,明显低于其对照组瘤体体积(3 239.61±519.15)cm3,差异有统计学意义(P<0.05),抑瘤率31.4%;IGF-1组瘤体体积(5 619.90±1 181.45)cm3,明显高于其对照组瘤体体积(4 118.52±749.29)cm3,差异有统计学意义(P<0.05);LY294002组裸鼠瘤体组织pAKT、SOX2蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05),FoxM1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),IGF-1组裸鼠瘤体组织pAKT、SOX2和FoxM1蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 PI3K/AKT信号通路可能通过参与上调SOX2、FoxM1表达影响NB生长.     

婴儿眼睑眶周血管瘤的综合治疗

目的 探讨治疗婴儿眼睑眶周血管瘤的方法。方法 采用手术切除大部分瘤体，直视下平阳霉素局部注射残余瘤体的方法，综合治疗眼睑眶周血管瘤。结果 1998年～2002年采用综合方法治疗婴儿眼睑眶周血管瘤11例，临床效果好。无组织损伤所致并发症，随访2年，无复发。结论 婴儿眼睑眶周部位的血管瘤，如果生长迅速，会影响容貌和眼部发育，甚至出现功能障碍，应尽早治疗，手术切除加直视下平阳霉素注射残余瘤体是治疗婴儿眼睑眶周血管瘤的理想方法。     

Notch基因在儿童急性白血病中的作用及机制

哺乳动物Notch受体包括Notchl～ Notch4四种,Notch配体分为Delta和Jagged两个家族,包括Delta l、Delta 3、Delta 4、Jagged1和Jagged2五种.Notch信号传导通路是由受体、配体及许多下游靶基因组成的复杂网络结构,与细胞增生、分化、凋亡密切相关,且在不同组织及细胞类型中起着抑癌或致癌作用.该文主要介绍Notch信号通路的调控及其在儿童急性白血病中的作用.     

牵张应力对儿童骨髓间充质干细胞体外增殖与向成骨分化的影响

目的观察周期性牵张应力对儿童骨髓间充质干细胞（MSCs）体外增殖活性与向成骨分化的影响。方法分离并培养儿童骨髓间充质干细胞，利用体外装置对3～6代细胞加载不同大小的牵张应力，相差显微镜观察细胞形态分布的变化，分别用细胞计数法、四甲基偶氮唑（MTT）和流式细胞仪检测细胞增殖、细胞周期及凋亡情况，同时检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）的活性。结果牵张应力干预MSCs后，细胞形态变长，沿受力环切线方向规则排列，细胞增殖能力增强，细胞周期比例改变，增殖指数增大，细胞凋亡则没有明显差别，ALP、OC的活性显著增强。结论适当的周期性牵张应力可以提高MSCs的增殖能力并促使细胞向成骨分化。     

TSP-1和NF-κB信号通路在普萘洛尔对血管瘤内皮细胞抑制机制中的作用

目的 探讨凝血酶敏感蛋白-1 (thrombospondin-1,TSP-1)和核因子κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)信号通路在普萘洛尔对血管瘤内皮细胞抑制机制中的作用,完善普萘洛尔治疗血管瘤机制,为其临床治疗提供新靶点.方法 手术获取增生期血管瘤标本,孵育消化制成细胞悬液,流式细胞仪分选出CD31阳性血管瘤内皮细胞传代培养.加入不同浓度普萘洛尔(0、25、50、100、150、200、250μmol/L)溶液,培养24 h、48 h及72 h后,分别加入CCK-8培养液和BrdU标记液,酶标仪检测450nm处吸光度判定细胞活性和增殖情况;Westem blot检测普萘洛尔干预前后TSP-1及NF-κB通路蛋白表达情况;细胞荧光双标后,激光共聚焦显微镜观察干预前后TSP-1和NF-κB通路激活失活情况.所有数据应用SPSS 13.0统计软件进行分析.结果 流式细胞仪分选CD31阳性细胞率达98.0％.加入普萘洛尔后,随着培养时间延长,细胞活性和增殖状态受抑越明显.普萘洛尔浓度达100～150μmol/L时,细胞活性和增殖开始明显受抑,和对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),以72 h时为著;TSP-1及其受体CD36表达量随着普萘洛尔浓度的增加逐渐增多,而NF-κ Bp65及p-IκBα、p-IKKβ表达量开始逐渐减少(P＜0.05).两个通路存在负向调控,TSP-1逐渐激活时,NF-κBp65逐渐失活.结论 普萘洛尔可能通过促进TSP-1诱导的血管生成抑制和/或阻断NF-κB介导的促血管生成来治疗婴幼儿血管瘤,两个通路存在负向调控作用.     

色素上皮衍生因子在神经母细胞肿瘤中的表达及促分化作用的研究

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）在神经母细胞肿瘤中的表达情况及在分化中的作用。方法采用免疫组织化学方法对23例神经母细胞瘤（NB）、17例节细胞神经母细胞瘤（GNB）、18例节细胞神经瘤（GN）的标本进行PEDF免疫染色分析，每张切片采用显微数字分析系统进行定量，统计指标为免疫染色评分（immunostaining score，ISS），ISS=阳性染色面积×阳性染色面积的平均光密度／整个视野面积。进一步采用Western印迹对4例NB、3例GNB进行PEDF定量分析。以β-actin为内参照，统计指标为PEDF／Actin比值。NB、GNB和GN中PEDF表达差异性的比较采用Kruskal—Wallis法和Nemenyi法检验；采用Spearman等级相关进行PEDF表达强度与神经母细胞肿瘤成熟程度相关性分析。NB和GNB中的PEDF／β-actin比值比较采用t检验。结果免疫组织化学显示随着NB向GNB发育过程中，PEDF的表达量逐渐增加（P=0．000），PEDF的表达强度与神经母细胞肿瘤的成熟程度呈正相关（rs=0．889，P=0．000）。GNB中PEDF／Actin的比值较NB中高（P=0．045）。结论PEDF可能为神经母细胞肿瘤内源性促分化因子，诱导原始神经母细胞向成熟的节细胞分化，可应用于消灭微小残留灶的维持治疗中，前景令人鼓舞。     

Notch信号途径在儿童结核病中的作用研究

目的 研究Notch信号途径相关分子在儿童结核病中的表达情况,探讨其在儿童结核病发生中的作用。方法 选取2017年6月至2018年12月确诊的结核病患儿62例为病例组,另选取健康儿童64例为健康对照组,采集外周静脉血2 mL,应用实时荧光定量PCR法检测白细胞中Notch信号途径相关分子（受体Notch1~4,配体Jagged1、2和DLL1、3、4,下游靶基因Hes1和Hey1） mRNA水平。结果 与健康对照组相比,病例组患儿白细胞中Notch1、2和DLL4 mRNA水平均显著升高（P < 0.05）;病例组患儿白细胞中其他信号分子Notch3、4,Jagged1、2,DLL1、3,Hes1和Hey1 mRNA水平与健康对照组相比,差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 Notch1、2和DLL4 mRNA水平在结核病患儿中表达明显升高,但下游靶基因表达无明显变化,提示儿童结核菌感染后Notch1、2与其配体DLL4相互作用启动Notch信号途径,可能通过作用于其他靶基因在儿童结核病中发挥作用,需进一步研究探讨。     

ATRA诱导神经母细胞瘤SMS-KCNR分化与N-myc癌基因表达

目的 观察全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导神经母细胞瘤（ＮＢ）细胞分化时Ｎ－ｍｙｃ癌基因的变化以及与时间的关系。方法 用不同浓度的ＡＴＲＡ处理ＮＢ细胞系ＳＭＳ－ＫＣＮＲ,用相差显微镜观察细胞形态学改变。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法检测ＮＢ细胞分化前后Ｎ－ｍｙｃ癌基因的ｍＲＮＡ表达水平。结果 用１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ的ＡＴＲＡ处理２４～１２０ｈ,ＮＢ细胞的胞体减小,神经突起延长。在加ＡＴＲＡ２４ｈ后,     

微小RNA与磷酸肌醇-3激酶／蛋白激酶B信号通路在心脏发育中的作用

微小RNA具有调控细胞增殖、分化和生物体生长发育等功能.磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在细胞增殖、分化和器官组织发育也起重要作用.了解微小RNA与磷酸肌醇-3激酶／蛋白激酶B信号通路分别在心脏发育中的作用及两者之间关系将有助于进一步地阐述心脏发育畸形及其相关疾病的发病机制.     

脐血CD3AK细胞培养上清液对白血病细胞株HL-60细胞的影响

目的在体外实验中,研究脐血CD3AK细胞培养上清液（cord blood CD3AK supematant,CS）对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法以不同浓度的CS（10％CS、15％CS、20％CS）作用于不同时间（3d,6d和9d）的HL-60细胞为实验对象,应用细胞计数法结合锥虫蓝拒染法研究CS诱导的HL-60增殖情况。应用流式细胞仪分析CS作用前后细胞周期及细胞表面分化标志CD11b的变化,光学显微镜下观察细胞形态变化,氯化硝基唑蓝（NBT）还原实验研究细胞的NBT还原阳性百分率,从而研究HL-60细胞的分化。应用电子显微镜观察细胞凋亡,原位末端标记法研究CS作用前后HL-60细胞的凋亡变化。结果随CS作用时间的延长和剂量的增加,细胞增殖速度逐渐减慢。细胞周期分析显示,CS作用后G0期和G1期显著增多,S期显著减少,G2期和M期无明显变化,说明CS使细胞阻滞在G0和G1期。随CS作用时间的延长,细胞体积逐渐增大,3d后被诱导的细胞表面开始表达分化标志物CDm并出现细胞核型变化,NBT阳性细胞增多,随cs浓度的增加和作用时间的延长,这些变化越明显。20％CS诱导72h后,被诱导的细胞出现凋亡,随诱导时间延长,凋亡细胞增多。结论CS能抑制HL-60细胞的增殖,诱导HL-60细胞分化和凋亡。