纳米雄黄对肺癌A549细胞增殖、凋亡及迁移的影响

BACKGROUND: Studies have found that realgar has anti-tumor effect, but its effect on proliferation, apoptosis and migration of A549 lung cancer cells is rarely reported. OBJECTIVE: To study the effect of nano-realgar on A549 lung cancer cell proliferation, apoptosis and migration. METHODS: Cultured A549 lung cancer cells were seeded onto 6-well culture plates containing 100 mg/L nano-realgar (experimental group) or normal saline (control group). Cell growth was observed under microscope for 48 hours. Cell proliferation and apoptosis were detected using MTT assay (24, 48, 72 hours of culture) and flow cytometry (24 and 48 hours of culture), respectively. Integrin β1 and cadherin expression was detected using immunohistochemical method at 24 hours of culture. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Cell growth. In the experimental group, shrunk cells that were round or oval-shaped were scattered, and cell number was reduced. In the control group, adherent cells characterized by big size, abundant cytoplasm and fusiform shape grew vigorously. Moreover, some cells were fused into pieces. (2) Cell proliferation. The absorbance values of cells were significantly lower in the experimental group than the control group at different time (P < 0.05), while the cell growth inhibition ratio was higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (3) Cell apoptosis. The end-stage apoptotic rate and total apoptotic rate of cells were both higher in the experimental group than the control group (P < 0.05). (4) Immunohistochemical detection. The A549 cell surface integrin β1 and cadherin positive densities were significantly lower in the experimental group than the control group (P < 0.05). Taken together, the nano-realgar can inhibit the proliferation, invasion and metastasis, and induce apoptosis in A549 cells.     

miR-200a对肺癌A549细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的探讨miR-200a在肺癌细胞中的表达及其对A549细胞增殖、迁移及凋亡等生物学功能的影响。方法采用RTPCR检测肺癌细胞株A549、H23、H460和永生化人支气管上皮细胞株16HBE的表达水平。采用脂质体转染法将miR-200a mimics和阴性对照序列(miR-negtive control,miR-NC)分别转染A549细胞,运用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变情况;Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用生物信息学方法预测miR-200a的靶基因。结果 miR-200a在肺癌细胞株A549、H23和H460相对表达水平均低于16HBE组,差异有统计学意义(P0.05)。miR-200a mimics和miR-NC组分别转染A549细胞,CCK-8实验显示miR-200a mimics组在第4、5天时的OD值明显低于miRNC组,差异有统计学意义(P0.05);平板克隆形成实验显示miR-200a mimics组细胞克隆形成率为(33.13±0.74)%,明显少于miR-NC组(45.57±1.27)%,差异有统计学意义(P0.05)。Transwell实验显示,miR-200a mimics穿膜细胞数为(71.60±17.90)个,少于miR-NC组[(140.20±17.88)个],差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测显示,miR-200a mimics凋亡率为(17.80±1.90)%,明显高于miR-NC组[(11.33±1.96)%],差异有统计学意义(P0.05)。生物信息学方法预测Tiam1等可能是miR-200a的靶基因。结论 miR-200a能够抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移并促进其凋亡,为肺癌的治疗提供潜在靶点。miR-200a可能通过靶基因Tiam1发挥其对肿瘤的调控作用。     

培美曲塞抑制人肺腺癌细胞系A549增殖

目的 探究培美曲塞是否通过抑制PI3K/AKT信号通路调控肺腺癌细胞增殖.方法 选取人肺腺癌细胞系A549 进行细胞复苏、培养及传代,分为对照组、低和高剂量培美曲塞干预组.CCK-8 法检测A549 细胞增殖率;流式细胞仪检测检测细胞周期和凋亡率;Western blot测定凋亡相关蛋白质和PI3K/AKT信号通路蛋白质的差异.结果 随着药物剂量和处理时间的增加,对A549 细胞的增殖抑制率明显增高(P＜0.05);A549 细胞的凋亡率也逐渐上升,(P＜0.05 或P＜0.01);Cleaved caspase-3 和Bad蛋白表达水平显著上升,而Bcl-2 蛋白表达水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01).在培养 48h时,随着培美曲塞药物浓度的增加,A549 细胞G0/G1 期比例明显增加,而S 期和 G2/M 期比例明显降低(P＜0.05 或 P＜0.01);PI3K、AKT 和 p-AKT 蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论 培美曲塞可抑制肺腺癌细胞系A549 增殖,促进凋亡,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路进行调控的.     

木犀草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响

目的探讨木犀草素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及可能机制。方法分别采用0、20、40、60μmol/L的木犀草素与非小细胞肺癌A549细胞共同培养,MTT法检测A549细胞在培养0、24、48、72 h时细胞的生存率。40μmol/L木犀草素与A549细胞共同培养48h后,流式细胞仪检测细胞凋亡能力的变化;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western Blot方法检测A549细胞Caspase-3、p-Akt、基质金属蛋白酶2、9(MMP2、MMP9)的蛋白表达变化。结果 20、40、60μmol/L木犀草素均能够显著抑制A549细胞的增殖,抑制效果具有药物浓度和时间依赖性。与对照组比较,40μmol/L木犀草素能够显著促进A549细胞的凋亡,抑制A549细胞的侵袭与迁移,上调Caspase-3的表达,抑制p-Akt、MMP2与MMP9的蛋白表达(P0.05)。结论木犀草素抑制A549细胞增殖、侵袭及迁移能力,诱导细胞凋亡,与上调Caspase-3的表达并抑制p-Akt、MMP2与MMP9的表达相关。     

雷公藤红素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨雷公藤红素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制.方法 将A549细胞随机分为对照组(0.9％ NaCl)、雷公藤红素低浓度组(1 μ mol/L)、雷公藤红素中浓度组(5 μ mol/L)和雷公藤红素高浓度组(10μmol/L).MTT实验测定各组细胞增殖能力,流式细胞仪测定各组细胞凋亡率,...     

熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制

目的 探讨熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制.方法 体外培养A549细胞,分别以0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L熊果酸处理48h后,平板克隆实验与MTT实验检测肺癌A549细胞的增殖能力;流式细胞术检测肺癌A549细胞的凋亡率;Transwell实验检测A549...     

hsa＿circ＿001988抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响NSCLC发生发展

目的：本研究探究hsa＿circ＿001988在肺癌发生发展中的作用以及机制。方法：利用circbase生信系统,选取hsa＿circ＿001988作为研究对象;原位杂交FISH和qRT-PCR检测hsa＿circ＿001988在肺癌组织和细胞系中的表达;Transwell、细胞划痕、CCK-8及TUNEL细胞凋亡检测hsa＿circ＿001988过表达和基因敲减对A549、NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及凋亡的影响;检测皮下瘤体体积和重量;PCNA免疫组化实验检测hsa＿circ＿001988过表达和基因敲减对体内细胞增殖的调控。结果：hsa＿circ＿001988在肺癌组织和各细胞系中呈低表达;hsa＿circ＿001988抑制A549细胞侵袭、迁移、增殖及促进凋亡,circ＿001988敲减后则促进NCI-H460细胞侵袭、迁移、增殖及抑制凋亡;hsa＿circ＿001988抑制皮下瘤体生长及抑制体内细胞增殖,hsa＿circ＿001988敲减后则促进肿瘤生长及细胞增殖。结论：hsa＿circ＿001988可能通过调控肺癌细胞生物学功能从而参与NSCLC发生发展过程。     

微小RNA-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA (miRNA)-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响.方法 培养A549细胞,分为miRNA-622组和miRNA-622阴性对照组(NC组),分别转染miRNA-622模拟物及miRNA-622阴性对照.使用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miRNA-622组和NC组miRN...     

膜联蛋白A2对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的：研究膜联蛋白A2（annexinA2,ANXA2）对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法：以HeLa细胞为研究对象,构建过表达载体以及ANXA2-siRNA,转染入细胞。将细胞分为正常对照组、scrambled组、ANXA2过表达组及ANXA2-siRNA组。应用real-timePCR法检测ANXA2mRNA表达水平及Westernblotting检测ANXA2蛋白表达水平。分别采用MTT法、Boyden小室法和流式细胞术观察ANXA2对HeLa细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。结果：ANXA2过表达组可以显著促进HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2-siRNA组明显抑制HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2对HeLa细胞凋亡几乎无影响。结论:沉默ANXA2对人宫颈癌细胞的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖能力和迁移能力。ANXA2可能在宫颈癌的发生发展中具有十分重要的作用,提示它有可能成为宫颈癌治疗的分子靶点。     

新型鬼臼毒素衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制研究

目的 探讨新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg诱导人肺腺癌细胞A549细胞凋亡及其调控机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术测定细胞周期细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳和微管蛋白组化染色,Western 印迹法检测凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达.结果 新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖性抑制作用,细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现G2/M期阻滞;10Ⅲg作用48 h后DNA电泳可见明显的梯状条带;10Ⅲg能破坏A549细胞的细胞骨架,与依托泊苷相比有明显促进微管解聚现象;10Ⅲg浓度为10-6 mol/L时能显著促进Bax、Caspase-3蛋白的表达.结论 新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg通过诱导A549细胞发生G2/M期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与抑制细胞微管解聚及诱导细胞凋亡有关.     

曲古柳菌素A对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:检测不同浓度的组蛋白去乙酰化酶抑制剂古曲柳菌素A(TSA)对A549细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨TSA抑制A549肺癌细胞的分子机制.方法:以流式细胞术分析,Annexin V/PI 法,免疫印迹研究 TSA 对A549 细胞的细胞周期、凋亡及Bax蛋白水平变化的影响.结果:TSA处理后,100nmol/L和400nmol/L引起细胞G0/G1及G2/M期阻滞.Annexin V/PI法显示TSA可诱导细胞凋亡.Bax蛋白的表达随着TSA浓度的增高而增强.结论:不同浓度的TSA对A549细胞周期阻滞影响不同,低浓度可诱导细胞凋亡.     

EMP1对喉癌hep2细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的研究EMP1在喉癌中的作用。方法选取51例喉癌标本及其癌旁组织,构建EMP1过表达载体,转染人喉癌Hep-2细胞系,应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术及Transwell法分别检测细胞的增殖、凋亡及迁移情况,明确EMP1过表达后对喉癌细胞产生的生物学效应。结果 EMP1过表达后,Hep2细胞的增殖能力明显减弱,细胞克隆形成数目平均值明显减少,细胞的凋亡率平均值明显上调,穿过小室滤膜的细胞数平均值明显下调。即喉癌细胞的增殖能力及迁移能力减弱,凋亡增强。结论 EMP1基因在喉癌的发生发展中发挥抑癌基因的作用。     

环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 培养肺腺癌A549细胞,分为阴性对照（si-NC）组及circ0004771小干扰RNA（siRNA）组（si-circ0004771组）,将si-NC和circ0004771 siRNA分别转染入相应组A549细胞中。si-NC组和si-circ0004771组细胞转染后,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测2组细胞circ0004771、miR-339-5p的表达水平,通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力,通过EdU实验检测2组细胞增殖能力,通过Transwell小室实验检测2组细胞迁移和侵袭能力。结果 si-NC组和si-circ0004771组A549细胞circ0004771基因的相对表达水平分别为3.07±0.07和0.68±0.04,miR-339-5p相对表达水平分别为1.14±0.13和2.33±0.07,差异均有统计学意义（t=51.34、13.96,P值均<0.001）。si-NC组和si-circ0004771组A549细胞在培养前（0 h）和培养后24、48 h的吸光度值分别为0.21±0.02、0.35±0.05、0.65±0.04和0.21±0.01、0.33±0.04、0.59±0.05,差异均无统计学意义（P值均>0.05）;而在培养后72 h si-circ0004771组吸光度为0.92±0.15, 小于si-NC组的1.32±0.04,差异有统计学意义（t=4.46,P=0.011）。EdU实验中,si-circ0004771组细胞阳性率为47.97%±4.68%,低于si-NC组的58.61%±2.15%,差异有统计学意义（t=3.58,P=0.023）。转染后si-circ0004771组的细胞迁移率、侵袭率分别为52.27%±2.92%、55.33%±6.29%,均低于si-NC组的99.79%±4.23%、98.67%±5.72%,差异均有统计学意义（t=16.26、8.83,P值均<0.001）。结论 下调肺腺癌A549细胞circ0004771的表达水平,可以降低A549细胞的活力和增殖能力,可抑制A549细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与上调miR-339-5p的表达有关。     

肝再生磷酸酶-3抗体联合培美曲塞促进人肺腺癌细胞系A549的凋亡

目的探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)抗体和培美曲塞(Pem)单用及联用对人肺腺癌细胞系A549增殖、迁移和凋亡的影响。方法不同浓度PRL-3抗体处理A549细胞;CCK-8法测细胞增殖抑制率;Transwell小室法检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western bolt检测PRL-3、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果1)与对照组相比,PRL-3抗体随浓度增加,对A549细胞增殖的抑制作用增加(P<0.05);2)联合用药组对A549细胞增殖和迁移能力的抑制作用优于单药组(P<0.05);3)联合用药组A549细胞凋亡率34.63%±1.65%高于PRL-3抗体组17.24%±1.15%和培美曲塞组15.32%±1.82%(P<0.05);4)与单药组相比,联合用药组PRL-3、P-ERK及VEGF蛋白表达下降更显著(P<0.05)。结论PRL-3抗体联合培美曲塞可抑制A549细胞增殖、迁移并诱导凋亡,效果优于单药。其作用机制可能与抑制PRL-3、P-ERK和VEGF蛋白表达相关。     

雷帕霉素对顺铂作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、侵袭、黏附及自噬凋亡的影响

目的:研究雷帕霉素（Rap）对顺铂（DDP）作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、迁移、黏附及其自噬凋亡的影响。方法:培养人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞株,利用MTT方法分别检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞增殖抑制率的影响;Transwell方法检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;黏附实验检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;流式细胞术检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞凋亡的影响;Westernblotting检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞自噬标志蛋白beclin-1和LC3表达的影响。结果:与Rap或DDP单独作用组相比,Rap和DDP联合作用能够同时显著抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、体外侵袭能力及细胞黏附能力,并能够促进细胞凋亡和自噬标志蛋白beclin-1和LC3的表达（均P＜0.05）。结论:Rap能够通过促进细胞自噬而增强DDP的作用,进而抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞的增殖、侵袭、黏附并促进细胞凋亡作用,具有协同作用。     

葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响

目的 探讨葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响。方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,将其分为对照组(DMSO)、10、20、40μmol/L葛根素组。各组细胞以不同浓度药物处理48h后,MTT实验与平板克隆实验检测HepG2细胞增殖能力变化;流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡情况;Transwell实验检测HepG2细胞迁移能力变化;Western blot方法检测葛根素对HepG2细胞TGF-β1、Smad3、基质金属蛋白酶2/9(matrix metalloproteinase2/9, MMP2/9)的影响。结果 与对照组比较,不同浓度葛根素均能抑制HepG2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡（P<0.05）。Western blot结果显示,葛根素能够降低HepG2细胞中TGF-β1、Smad3与MMP2/9的表达（P<0.05）。结论 葛根素抑制HepG2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡。     

RNA干扰抑制乙酰肝素酶对肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨抑制乙酰肝素酶表达对人肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 构建靶向人乙酰肝素酶基因短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达质粒(pshRNA-Hpa),用脂质体将其转入A549细胞,建立稳定转染细胞株系,经逆转录.PCR和Western blot法检测转染效率后,分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell侵袭实验和流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI双染法)检测其对A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.采用Western blot法检测转染后磷酸化蛋白激酶B(PKB/Akt-Ser473)的表达.结果 转染pshRNA-Hpa的A549细胞乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达明显低于未处理A549细胞,抑制率分别为54.09%和48.26%,细胞增殖速度减缓,侵袭能力降低,流式细胞术显示早期细胞凋亡率达(12.53±0.34)%,较空白对照组、空载体转染细胞组和阴性对照组明显增加(P＜0.01).同阴性对照质粒相比,转染pshRNA-Hpa的A549细胞Akt-Ser473的磷酸化水平降低52.15%.结论 靶向乙酰肝素酶重组shRNA质粒pshRNA-Hpa能有效抑制A549细胞乙酰肝素酶的表达,并可能通过下调磷酸化蛋白激酶B途径抑制细胞的增殖侵袭、促进细胞的凋亡.     

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

目的:探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-timePCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Westernblot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果:Real-timePCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Westernblot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论:miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。     

沉默SETDBI对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 探讨沉默组蛋白赖氨酸甲基转移酶SETDB1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响.方法 qRT-PCR方法与Western blot方法检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中SETDB1的表达.采用稳定转染方法筛选出沉默SETDB1基因的SW480细胞,克隆形成实验及流...