硒对铅致TK6细胞遗传损伤的拮抗作用

目的 研究亚硒酸钠对铅致TK6细胞遗传毒性损伤的拮抗作用。方法 培养TK6细胞,调整细胞密度为1×106/mL,试验分3组,正常对照组、铅染毒组和亚硒酸钠干预组,采用免疫荧光染色检测细胞DNA双链断裂损伤生物标志物γH2AX、ELISA试剂盒检测细胞DNA氧化损伤生物标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和染色体畸变试验检测细胞染色体损伤情况。结果 铅染毒后,TK6细胞内γH2AX含量、8-OHdG水平和染色体畸变数明显增高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);0.01 μg/mL的亚硒酸钠干预后,细胞内γH2AX含量和染色体畸变数下降,与铅染毒组比较差异有统计学意义(P<0.01),细胞内8-OHdG水平明显下降,与铅染毒组比较差异有统计学意义(P<0.01),而与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 铅对TK6细胞有遗传毒性损伤作用,0.01 μg/mL的亚硒酸钠具有拮抗铅对TK6细胞遗传毒性损伤的作用。     

铅致人淋巴细胞DNA双链断裂作用的人群调查和体外试验

目的 用γH2AX识别抗体流式细胞术研究铅暴露致人体外周血淋巴细胞DNA双链断裂(DSBs)作用.方法 选取某蓄电池厂工人36人为铅接触组,其中高浓度组15人,低浓度组21人;同时选择厂外无职业性铅接触70人为对照组,取外周静脉血提取淋巴细胞,利用流式细胞术检测γH2AX,分析淋巴细胞中DNA DSBs水平;不同剂量、时间下醋酸铅染毒健康人外周血淋巴细胞,利用流式细胞术检测γH2AX,分析淋巴细胞中DNA DSBs水平.结果 高浓度铅接触组DNA损伤率和平均荧光强度分别为41.76％±28.57％、9.90±3.35,低浓度铅接触组分别为33.18％±30.64％、9.39±4.83,均高于对照组(分别为0.28％±0.28％、6.95±2.93),差异均有统计学意义(P＜0.05).体外试验结果显示,染毒1和2h时,除62.5 μmol/L外,125.0、250.0、500.0 μmol/L醋酸铅染毒组DNA损伤率与阴性对照组的差异均有统计学意义(P＜0.01).随着染毒剂量的增高,DNA损伤率呈现先增高后降低的趋势.结论 铅可致人淋巴细胞DNA DSBs,流式细胞术检测γH2AX是一种值得运用于检测大样本DNA DSBs水平的方法.     

醋酸铅染毒人外周血淋巴细胞诱发XRCC1、hOGG1基因表达变化的研究

目的 研究醋酸铅染毒人外周血淋巴细胞对XRCC1、hOGG1基因表达变化的影响。方法 用0、20、40和80μmol/L浓度醋酸铅染毒人外周血淋巴细胞24h, 采用qPCR法和Western-Blot法测定XRCC1、hOGG1基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 与对照组相比,醋酸铅染毒诱导人外周血淋巴细胞XRCC1、hOGG1基因的mRNA和蛋白表达水平随醋酸铅染毒浓度增加而下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 醋酸铅染毒抑制XRCC1、hOGG1基因表达水平,导致细胞对DNA损伤修复能力下降。     

Rad51基因沉默对铅诱导TK6细胞DNA双链断裂损伤修复的影响

目的 研究Rad51基因沉默后对醋酸铅染毒致人淋巴母细胞（TK6细胞）DNA双链断裂损伤的修复作用的影响。方法 构建Rad51沉默慢病毒载体及阴性对照,感染对数期TK6细胞,荧光定量PCR和Western blot验证感染效果。运用480μmol/L的醋酸铅染毒TK6细胞24 h(Control组、shRNA-NC组和shRNA-Rad51组),采用免疫荧光法检测TK6细胞的磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）的表达,Western Blot检测TK6细胞的Rad51、BRCA1、53BP1蛋白的表达。结果 shRNA-Rad51组的Rad51 mRNA表达水平和Rad51蛋白表达水平均低于Control组及shRNA-NC组（P <0.01）;shRNA-Rad51组的γ-H2AX阳性率为（27.48±1.66）%,与Control组的（14.77±1.21）%及shRNA-NC组的（14.04±1.31）%比较,差异均有统计学意义（P <0.01）;shRNA-Rad51组的BRCA1蛋白表达水平为（0.25±0.03）,与Control组的（0.55±0.04）及sh...     

卷烟烟气抽提物对细胞遗传毒性及茶多酚干预作用

目的探讨卷烟烟气抽提物(CSE)对支气管上皮细胞(BEAS-2B)遗传毒性及茶多酚干预作用。方法以高、中、低3个浓度对支气管上皮细胞进行染毒,同时设立茶多酚干预组和空白对照组;采用彗星实验及γ-H2AX蛋白表达检测DNA损伤,以微核实验检测染色体损伤,并检测HPRT基因突变率。结果高剂量染毒组BE-AS-2B细胞彗星细胞数(130.5±1.6)个、彗星尾长(134.33±3.56)μm、尾部面积(7 798.43±43.45)μm2,均明显高于空白对照组(P<0.05),并呈剂量—效应关系;CSE低、中、高剂量染毒组BEAS-2B细胞中微核细胞分别为(22.4±3.2)、(38.6±1.8)、(79.6±2.4)个,均明显多于空白对照组的(6.2±1.5)个(P<0.05);CSC中、高剂量染毒组BEAS-2B细胞HPRT基因突变率分别为(0.802±0.040)‰、(1.058±0.002)‰,均明显高于空白对照组的(0.330±0.002)‰(P<0.05)。茶多酚对CSE诱发的DNA链断裂及微核细胞增多有明显抑制作用,并可有效降低HPRT基因突变率。结论 CSE具有细胞遗传毒性,茶多酚对其遗传毒性具有干预作用。     

醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用

目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差显微镜观察细胞形态;分光光度计检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,了解细胞损伤程度;免疫组化检测P53、Bax、Bcl-2的表达;PI-Hoechst33342染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度醋酸铅染毒不同时间,各染毒组细胞生长活力较对照组明显降低(P0.01),并存在浓度与时间依赖关系;醋酸铅(5、10μmol/L)染毒24 h组,形态学观察细胞密度较对照组降低,突触缩短变细,细胞间连接减少;培养上清液中染毒组LDH、MDA含量较对照组明显升高(P0.01),P53、Bax表达上升,Bcl-2表达降低;PI-Hoechst33342双重染色和流式细胞仪检测显示,染毒组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可明显抑制小鼠星形胶质细胞生长,并通过Bax/Bcl-2比值升高促使凋亡,进而影响血—脑屏障。     

二甲基甲酰胺致人肝细胞DNA的损伤效应

目的 探讨不同染毒剂量二甲基甲酰胺(DMF)在不同染毒时间下对人正常离体肝细胞DNA损伤的影响.方法 肝细胞染毒分别以PBS阴性对照组、1.56、6.25、25.00、100.00 mmol/L的DMF和100μmol/L的H2O2,染毒时间为0.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h,用γH2AX免疫荧光法观察肝细胞DNA的损伤情况.结果 不同剂量的DMF和H2O2诱导形成γH2AX焦点的细胞数量多于PBS阴性组,差异有统计学意义(P＜0.01),并且随着DMF染毒剂量的增加,形成γH2AX焦点细胞数有增多趋势;在不同染毒时间处理后,γH2AX焦点细胞数的形成除3.0 h组和0.5 h组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),余处理时间组与0.5 h比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),并且形成γH2AX焦点细胞数有减少趋势.结论 不同剂量DMF可引起DNA的损伤,并且损伤程度与剂量呈正相关,与染毒时间呈负相关,γH2AX可作为检测细胞DNA损伤程度的良好指标.     

共济失调毛细血管扩张突变基因对氢醌诱导人外周血淋巴细胞DNA损伤及S期阻滞的影响

目的 探讨共济失调毛细血管扩张突变基因（ataxia telangiectasia-mutated gene，ATM）对氢醌（hydroquinone，HQ）诱导人外周血淋巴细胞（JHP）DNA损伤及细胞周期S期阻滞的影响。方法 以不同浓度的HQ（0、1、5、10 μmol/L）处理JHP 12 h后，采用流式细胞术检测细胞周期分布情况，活细胞成像技术检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）释放水平，Western blot法检测DNA损伤标志蛋白γ-H2AX、抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1以及细胞周期相关蛋白CyclinA、CDK2、CyclinE的表达；利用ATM化学抑制剂KU-60019预处理JHP 1 h，以10 μmol/L HQ处理12 h后观察上述指标的变化。结果 （1）与0 μmol/L HQ组相比，随着HQ浓度的增加，ROS释放水平逐渐升高，ATM、γ-H2AX及抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1表达水平呈剂量依赖性增加，CDK2蛋白表达呈剂量依赖性降低（P<0.05）；10 μmol/L HQ组S期细胞比例显著增加，CyclinA表达水平显著降低，与0 μmol/L HQ组相比差异有统计学意义（P<0.05）。（2）与HQ组相比，HQ+KU-60019组ROS的释放水平显著升高，S期阻滞减轻（P<0.05）；HQ+KU-60019组γ-H2AX、Nrf2、HO-1、NQO1和CDK2蛋白的表达均显著升高（P<0.05）。结论 HQ可诱导JHP的ROS释放，促进ATM蛋白、DNA损伤标志蛋白γ-H2AX以及抗氧化相关蛋白表达升高，诱导细胞发生S期阻滞；ATM表达抑制后，ROS释放增多，γ-H2AX以及抗氧化相关蛋白表达进一步升高，S期阻滞减轻。     

丙烯酰胺对小鼠脏器细胞DNA损伤及修复作用

目的研究丙烯酰胺的遗传毒性,探测其遗传毒性的靶器官。方法应用彗星试验检测50mg/kg丙烯酰胺腹腔注射染毒0、3、6、12和24h后小鼠肺、肝、脾、肾、睾丸、骨髓和外周血淋巴细胞的DNA损伤情况。结果丙烯酰胺染毒后不同时间,可引起小鼠肝、脾、睾丸、骨髓和外周血淋巴细胞彗星尾长、尾部DNA百分含量及尾矩的显著增加,随时间延长有下降趋势;未观察到对肺和肾脏细胞的明显影响。结论丙烯酰胺可以诱导小鼠多种组织细胞的DNA损伤,机体对丙烯酰胺造成的遗传损伤有一定的修复能力。     

醋酸铅致大鼠血淋巴细胞DNA损伤的研究

目的 研究醋酸铅致淋巴细胞的DNA损伤情况,了解铅的遗传毒性.方法 用不同浓度的醋酸铅分别对大鼠进行腹腔注射体内染毒24h及取正常大鼠血淋巴细胞进行体外染毒1 h,然后,采用单细胞凝胶电泳技术分别测定各血淋巴细胞DNA损伤程度.结果 体内实验组见淋巴细胞边缘不光滑,毛糙,体外实验各处理组都有明显彗尾形成,体内外实验各染毒组彗星出现率、DNA迁移长度均明显高于阴性对照组.结论 醋酸铅对大鼠淋巴细胞DNA具有一定的损伤作用.     

沙尘暴细颗粒物对人外周血淋巴细胞的遗传损伤效应

目的探讨沙尘暴细颗粒物(PM2.5)对人外周血淋巴细胞的遗传损伤.方法用采集自内蒙古包头市和甘肃武威市的沙尘暴和正常天气PM2.5不同浓度(0、33、100、300μg/ml)提取物染毒人外周血淋巴细胞,用染色体畸变试验和胞质阻断法进行畸变率和微核率统计.结果包头、武威沙尘暴和正常天气PM2.5提取物的100、300μg/ml剂量组人血淋巴细胞微核率均高于其对照组(均P＜0.01).包头、武威沙尘暴300μg/ml剂量组和正常天气PM2.5提取物的100、300μg/ml剂量组人血淋巴细胞核分裂指数均低于其对照组(P＜0.05或P＜0.01);染毒剂量与微核率呈正相关,与核分裂指数成负相关.不同浓度沙尘暴PM2.5提取物染毒能引起人外周血淋巴细胞染色体结构畸变,主要表现为染色体及染色单体断裂、缺失、成环、形成双着丝粒(染色体桥)、断片等,同时也明显增加了淋巴细胞染色体畸变率,且存在剂量-反应关系(P＜0.01).结论沙尘暴PM2.5能引起淋巴细胞遗传损伤,其遗传毒性主要与染毒剂量有关.     

杀虫剂诱导人外周血淋巴细胞DNA损伤

目的:用人外周血淋巴细胞彗星试验检测乐果、甲基对硫磷、氯氰菊酯、扑灭司林等杀虫剂的遗传毒性。方法:分别用10,50,100,200μg/ml浓度的乐果、甲基对硫磷、氯氰菊酯、扑灭司林在37℃下染毒人外周血淋巴细胞0.5 h,同时用100μg/ml的过氧化氢(H2O2)作阳性对照,用磷酸盐缓冲液(PBS)作阴性对照。用彗星试验检测以上4种农药对人外周血淋巴细胞DNA损伤作用。结果:与阴性对照相比,乐果和对硫磷在100μg/ml浓度,扑灭司林和氯氰菊酯在200μg/ml浓度对人外周血淋巴细胞DNA损伤作用明显增强(P<0.01)。结论:受试的4种农药可引起DNA损伤。     

辐射对沉默ATRX的H460细胞增殖以及DNA损伤修复的影响

目的 探讨辐射对沉默ATRX的肺癌H460细胞增殖和DNA损伤修复的影响及二者的关系。方法 靶向ATRX的3个慢病毒载体转染293T细胞后,慢病毒感染H460细胞,获得ATRX低/无表达的细胞株shATRX1-H460、shATRX2-H460和shATRX3-H460,并以shControl-H460作为对照,利用Western blot检测沉默效率。分别以克隆形成实验检测细胞增殖,免疫荧光技术检测γH2AX和Rad51焦点数,同时以Western blot检测PARP1、γH2AX和Rad51蛋白的表达。结果 shControl-H460细胞中可见ATRX表达,而shATRX1-H460、shATRX2-H460和shATRX3-H460细胞中ATRX表达均出现不同程度的降低。克隆形成实验显示,shATRX2-H460和shATRX3-H460细胞的存活分数（survival fraction,SF）均较shControl-H460细胞降低。shControl-H460和shATRX3-H460细胞经4 Gy照射后1 h,γH2AX焦点最多,而3 h时Rad51焦点最多,而后均降低,与shControl-H460细胞比较,在1和6 h时shATRX3-H460细胞γH2AX焦点,以及1、3和6 h时Rad51焦点显著增加（P<0.05,P<0.001）。而且shATRX3-H460细胞中PARP1、γH2AX和Rad51蛋白在3和6 h时均较shControl-H460细胞表达增加。结论 成功地获得靶向沉默ATRX的细胞模型,辐射后细胞增殖能力降低,可能与DNA损伤修复能力降低有关。     

1,2-二氯乙烷致小鼠血淋巴细胞遗传毒性研究

目的研究1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)对小鼠血淋巴细胞DNA和骨髓细胞染色体的损伤作用,探讨1,2-二氯乙烷的遗传毒性。方法采用单细胞凝胶电泳和微核试验方法,分别检测1,2-DCE不同染毒剂量(50,100,200,400 mg/kg)小鼠外周血淋巴细胞DNA和骨髓细胞染色体损伤情况。结果除50 mg/kg剂量组外,小鼠血淋巴细胞的彗星细胞率及尾长、骨髓细胞微核率随1,2-DCE染毒剂量的增加而增加(P<0.01)。其中,400 mg/kg剂量组彗星细胞率、平均尾长、微核率分别为45.5%,(37.24±3.17)μm,12.0‰,显著高于阴性对照组和50 mg/kg剂量组(P<0.01)。染毒剂量与彗星细胞率、平均尾长、微核率之间存在着剂量-反应关系(R彗星率=0.980 2,R彗尾长=0.976 6,R微核率=0.975 1,P<0.01)。结论1,2-DCE可导致小鼠血淋巴细胞DNA损伤和骨髓细胞染色体异常。表明1,2-DCE具有细胞遗传毒性。     

氯化锂的遗传毒性研究

目的 观察氯化锂的遗传毒性特征并对其毒性作用机制作初步探讨。方法 以氯化锂为受试物,人外周血淋巴细胞及昆明种小鼠为受试对象,进行人体外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）试验,昆明种小鼠体细胞遗传毒性试验及组织中ＬＰＯ、ＧＳＨ－Ｐｘ、ＳＯＤ含量的测定。结果 氯化锂染毒后体外培养人外周血淋巴细胞ＳＣＥ率增加（Ｐ〈０．０１）;经口灌胃染毒后,小鼠骨髓细胞染色体畸变率,骨髓细胞微核率,胎肝转移微核率增     

二氯乙烷对小鼠DNA损伤的器官特异性及时效关系研究

为了研究 1,2 二氯乙烷 (DCE)的遗传毒性、探测其致癌的靶器官 ,应用组织匀浆提取细胞核进行彗星试验 ,检测了DCE灌胃染毒 3、8、2 4h后对小鼠肝、肺、肾、脾、骨髓、睾丸、胃、肠、膀胱和外周血淋巴细胞的DNA损伤作用及修复动力学改变。实验结果 :1)DCE在小鼠体内遗传毒性的靶器官是肝、肺、肾、骨髓、结肠及胃粘膜细胞和外周血淋巴细胞 ;2 )DNA损伤和修复的动力学改变在器官间存在较大的差异 ,DNA损伤明显且修复较慢的器官或组织 (肺、胃和血液系统 )与其致癌的靶器官有较好的一致性。提示 :体内多器官的彗星试验对确定体内遗传毒性和预测致癌的靶器官是非常有用的 ;对暴露DCE的生物和人群 ,外周血淋巴细胞在彗星试验的拖尾 ,可作为体内DNA损伤效应的生物标志。     

杭州市PM2.5对BEAS-2B细胞的生物学效应研究

目的 观察杭州市不同地区PM2.5对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）的生物学效应。方法 采集杭州市下城区和淳安县的PM2.5样品,通过超声冻干提取后将不同浓度PM2.5样品作用于BEAS-2B细胞,24 h后观察其生物学效应。用CCK-8法检测细胞活力,根据实验结果,将细胞分成空白对照组、25μg/ml浓度组和100μg/ml浓度组。采用γH2AX免疫荧光法和免疫印迹法分别检测γH2AX焦点损伤及γH2AX蛋白表达情况,免疫荧光实验采用平均焦点数和焦点阳性细胞率作为DNA损伤的评价指标;用DCFH-DA探针法观察细胞内ROS生成。结果 CCK-8实验结果显示,下城区和淳安县的PM2.5样品在25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml浓度时能显著降低细胞活力（P<0.05）,而2.5μg/ml～10μg/ml低浓度作用则未对细胞造成影响。用25μg/ml和100μg/ml浓度PM2.5样品处理细胞后,细胞内γH2AX平均焦点数、焦点阳性细胞率、γH2AX蛋白以及ROS表达均有显著增加（P<0.05）。结论 PM2.5能使BEAS-2...     

铅对乳鼠成骨细胞活力和功能标志物及形态学的影响

目的 研究铅对乳鼠颅骨成骨细胞活力、分化、特异的功能标志物及形态学的影响,以探讨铅对骨骼发育的毒作用机制.方法 分离并培养Wistar胎鼠颅骨原代成骨细胞,加入不同浓度Pb(Ac)2(0、0.1、0.5、1、5、10、50、100μmol/L),分别培养24、48、72 h,用噻唑蓝(MTT)法检测成骨细胞活力;对-硝基苯磷酸盐(pNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活力;考马斯亮蓝法测定细胞蛋白含量;放射免疫法测定培养液及细胞骨钙素水平;倒置相差显微镜观察铅对细胞光镜形态的影响.结果 100μmol/L醋酸铅染毒组成骨细胞细胞活力下降,染毒72 h时更明显.0.5～100μmol/L醋酸铅染毒组ALP活力均低于对照组(P＜0.05).50、100μmol/L醋酸铅染毒组蛋白质水平低于对照组(P＜0.05).各染毒组细胞内骨钙素水平无明显差异;培养液中分泌型骨钙素水平随染铅浓度的增加呈显著下降趋势(P＜0.05).光镜下可见醋酸铅对成骨细胞有毒性作用.结论 醋酸铅对成骨细胞有毒性作用,可影响其光镜下结构;铅在达到较高剂量时可引起成骨细胞一般指标(细胞活力和蛋白质含量)的改变;而较低剂量即能引起特异性功能标志物(ALP和骨钙素)损伤,可能是铅影响成骨细胞乃至骨骼系统发育的机制之一.     

冬凌草甲素抑制胃癌SGC-7901细胞增殖诱导DNA损伤相关蛋白表达的实验研究

目的探索冬凌草甲素对胃癌细胞增殖及DNA损伤相关蛋白表达的影响。方法MTT法检测冬凌草甲素对胃癌细胞的增殖活性的影响;Western blot检测H2AX、γH2AX、ATM、phospho-ATM、phospho-P53、P53、phospho-CHK2等DNA损伤相关蛋白表达的变化;免疫荧光检测冬凌草甲素对phospho-ATM和γ-H2AX焦点形成的影响。结果 MTT结果显示冬凌草甲素能够抑制胃癌细胞增殖,具有剂量依赖关系;Western blot结果显示γH2AX、phospho-ATM、phospho-P53、P53、phospho-CHK2蛋白水平呈剂量依赖性增高;免疫荧光结果发现phospho-ATM、γH2AX焦点随着药物浓度增大而增多。结论冬凌草甲素可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导DNA损伤及相关蛋白表达,且具有剂量依赖性,但DNA损伤信号通路详细机制有待进一步研究。     

CS2诱导人淋巴细胞DNA损伤的再研究

目的应用SCGE方法检测CS2体外染毒对人外周血淋巴细胞DNA损伤,探求损伤的剂量-效应关系.方法将未处理的人外周血淋巴细胞作为阴性对照组,用50μmol/L H2O2染毒的人外周血淋巴细胞作为阳性对照组,将不同浓度CS2染毒的人外周血淋巴细胞设为7个剂量组进行SCGE实验.结果只有2500μmol/L组及阳性对照组淋巴细胞存活率与对照组比较出现统计学差异(χ2=11.77,17.14;P=0.000,0.001).不同CS2染毒组及阳性对照组与阴性对照组比较,除250μmol/L组外,其余各染毒组淋巴细胞DNA损伤加重,表现在彗头直径变小,彗尾长度增加.DNA拖尾率在较低染毒剂量组逐渐增高,出现一定剂量-效应关系,较高剂量组(1000μmol/L以上)未见有随剂量增加拖尾率增加的趋势.结论CS2体外染毒对细胞存活影响不大;低剂量表现有淋巴细胞DNA损伤的剂量-效应关系;较高剂量染毒虽有较严重损伤,但损伤未表现出明显剂量-效应关系.