黄芪多糖对高糖腹透液诱导HMrSV5细胞凋亡的影响

目的观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对高糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HMrSV5)凋亡的影响及其抗凋亡机制。方法 (1)体外培养HMrSV5细胞株,CCK-8法检测不同浓度PDS(1.5%、2.5%、3.0%、3.5%、4.25%PDS)及不同浓度APS(50、75、100、200、300、400、500、600、800μg·mL~(-1))对细胞活力的影响,根据CCK-8检测结果筛选用于后续实验PDS及APS的合适浓度;(2)将实验分为4组:空白组、APS(100μg·mL~(-1))组、PDS(3.0%)组、PDS+APS(3.0%+100μg·mL~(-1))组,相差显微镜观察细胞形态变化,通过JC-1法测定线粒体膜电位的去极化;TUNEL技术检测各组细胞凋亡情况;(3)Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果 (1)不同浓度PDS作用下HMrSV5细胞活力均下降,呈浓度依赖(P0.01);25～100μg·mL~(-1)的APS能提高PDS对HMrSV5细胞的抑制作用,且100μg·mL~(-1)APS组最显著(P0.01)。(2)与空白组相比,PDS模型组细胞形态变小、拉长,细胞内出现空泡样变,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率增加;与PDS模型组比较,PDS+APS组细胞形态有所恢复,细胞内空泡样变减轻,线粒体膜电位水平升高,细胞凋亡率降低。(3)与空白组相比,PDS模型组Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达降低(P0.05);与PDS模型组相比,PDS+APS组Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.05)。结论 APS能改善高糖腹透液对HMrSV5细胞诱导的凋亡,其机制可能是影响与线粒体凋亡相关的Bcl-2、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。     

木瓜醇提物对大鼠类风湿性关节炎模型关节炎症及滑膜细胞凋亡的影响

目的:探讨木瓜醇提取物(CFE)对类风湿性关节炎(RA)大鼠模型的作用及机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,CFE低、中、高剂量组及雷公藤多苷片组。除正常组外,其余各组分别从每只大鼠右后足跖皮内注入完全弗氏佐剂0.1 mL,复制RA模型。灌胃给药,CFE低、中、高剂量组剂量分别为0.15,0.30,0.60 g·kg~(-1)·d~(-1),雷公藤多苷片组的剂量为0.009 g·kg~(-1)·d~(-1),正常组及模型组灌胃等体积的蒸馏水,每天1次,连续30 d。观察大鼠足肿胀度、炎症指数、脏器指数,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠滑膜组织病理变化情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠关节B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及死亡因子(Fas)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠足肿胀度、炎症指数显著升高(P0.01);血清中的促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),抗炎因子IL-10显著降低(P0.01),滑膜组织中Bcl-2表达明显升高(P0.05);与模型组比较,CFE中、高剂量组足趾肿胀程度及炎症指数显著降低(P0.01),CFE各剂量组滑膜组织增生及炎症细胞浸润等病理变化减轻,血清中的促炎因子IL-1β,IL-6,TNF-α水平明显降低(P0.05),抗炎因子IL-10明显升高(P0.05),Bax,Fas的表达量升高,Bcl-2的蛋白表达量显著降低(P0.01)。结论:CFE能够降低RA关节炎症程度,具有较好的抗RA功效,这可能与CFE诱导的关节滑膜细胞凋亡有关。     

厚朴酚衍生物CT2-3对结肠癌细胞的抑制作用及其机制

目的:研究厚朴酚衍生物CT2-3对结肠癌细胞的抑制作用及其机制,为CT2-3在治疗结肠癌中的应用奠定基础。方法:体外培养SW480和LoVo细胞,不同浓度(10,20,40,80μmol·L~(-1))CT2-3和厚朴酚分别干预24,48 h,采用细胞增殖-毒性检测(CCK-8)法检测CT2-3和厚朴酚对结肠癌细胞增殖的影响;采用平板克隆形成实验检测CT2-3对结肠癌细胞克隆形成能力的影响;进一步采用流式细胞术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CT2-3对结肠癌细胞凋亡和DNA损伤标志物磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)蛋白表达的影响;采用活性氧(ROS)试剂盒检测CT2-3对结肠癌细胞内ROS产生的影响;最后用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CT2-3对结肠癌细胞内线粒体凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X基因(Bax)表达的影响。结果:给药24,48 h,厚朴酚对两株结肠癌细胞SW 480和LoVo的半数抑制浓度(IC_(50))均80μmol·L~(-1),CT2-3对SW480细胞的IC_(50)分别为(54.59±1.73)μmol·L~(-1)和(29.82±1.13)μmol·L~(-1),对LoVo细胞的IC_(50)分别为(66.68±2.11)μmol·L~(-1)和(46.70±1.81)μmol·L~(-1);与空白组比较,CT2-3(20,40μmol·L~(-1))组结肠癌细胞克隆形成能力显著下降(P0.01),且呈浓度依赖性。CT2-3组凋亡细胞显著增加(P0.01),γH2AX蛋白相对表达显著增加(P0.01);CT2-3组细胞内ROS水平显著增加(P0.01);CT2-3组细胞Bcl-2 mRNA相对表达显著下调(P0.01),Bax mRNA相对表达显著上调(P0.01)。结论:CT2-3对结肠癌细胞具有显著抑制作用,其机制可能是通过激活Bcl-2/Bax信号通路使线粒体功能受损,促进ROS的产生,进一步诱导DNA损伤,从而导致结肠癌细胞凋亡。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用

目的:研究黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用,并探讨相关的作用机制。方法:利用酶解法和差速贴壁方法从出生1~3 d的正常SD大鼠的乳鼠心脏中分离得到原代心肌细胞,种于24孔板,体外培养48 h后,设置空白组、模型组、美托洛尔组及黄芪甲苷低、中、高剂量组。预先给予各组对心肌细胞有害的儿茶酚胺类物质异丙肾上腺素(ISO),造成体外原代心肌细胞损伤模型,空白组心肌细胞不加ISO;30 min后予各治疗组相应浓度的美托洛尔(2.336μg·L~(-1))及黄芪甲苷低、中、高剂量(3,10,30μmol·L~(-1))。BCA法检测总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测原代心肌细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax)及Bcl-2相关k蛋白(Bak)的表达,流式细胞学法检测各组细胞的凋亡率,Hochest/PI双染法镜下观察各组细胞细胞核的形态,从而检测细胞的凋亡情况。结果:与空白组比较,各给药组(10~40μmol·L~(-1))原代心肌细胞的活力上调(P0.05);HOCHEST/PI双染结果显示,与模型组比较,美托洛尔组及黄芪甲苷中、高剂量亮蓝色凋亡细胞明显减少;细胞流式结果显示,与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P0.01),黄芪甲苷中剂量组凋亡率下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组凋亡率下调(P0.01);Bcl-2灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bcl-2的表达上调(P0.01),黄芪甲苷低剂量组Bcl-2表达上调(P0.05),黄芪甲苷中、高剂量组Bcl-2表达上调(P0.01);Bak灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bak的表达下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组Bak表达下调(P0.05);Bax灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bax的表达下调(P0.01),黄芪甲苷高剂量组Bax表达下调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤有抗凋亡作用。     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马凋亡因子及学习记忆能力的影响

目的:探讨补阳还五汤(BYHWT)对阿尔茨海默病小鼠海马组织凋亡因子及学习记忆能力的影响。方法:40只雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组(0.001 g·kg~(-1)),BYHWT高、中、低剂量组(分别为37.06,18.53,9.26 g·kg~(-1))。C57小鼠作为空白组。连续灌胃BYHWT 30 d,进行水迷宫行为学测试后,取材。用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,海马组织中凋亡因子Bcl-2明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3明显增加(P0.01)。与模型组比较,BYHWT高、中剂量组能明显改善小鼠学习记忆能力,凋亡因子Bcl-2明显增加(P0.01),Bax和Caspase-3明显减少(P0.01)。结论:补阳还五汤能够明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习记忆能力,降低海马组织中Bax和Caspase-3的表达,增加Bcl-2的表达。     

黄芪甲苷对脂多糖诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及机制研究

目的研究黄芪甲苷对脂多糖(LPS)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及有关机制。方法采用LPS不同浓度(0.25、0.5、1、1.5、2μg·mL~(-1))及时间(15、30、45、60、120 min)诱导GES-1细胞炎症反应,筛选LPS诱导的合适浓度、时间。将GES-1细胞分为空白对照组、模型组及黄芪甲苷0.1、1、10μg·mL~(-1)浓度组;黄芪甲苷预处理2 h后,以筛选出的LPS浓度、时间诱导GES-1细胞。采用MTS法检测细胞存活率;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)的含量;采用RT-qPCR法检测细胞诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)mRNA的表达;采用Western Blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白(Erk、Jnk/SAPK、P38 MAPK)的磷酸化水平。结果选择0.25μg·mL~(-1)及30 min作为LPS诱导GES-1细胞炎症模型的浓度及时间。黄芪甲苷浓度≤100μg·mL~(-1)时对GES-1细胞存活率无明显影响。与空白对照组比较,模型组细胞的炎症因子IL-6水平明显升高(P0.01),iNOS、COX-2 mRNA表达水平明显升高(P0.01),p-P38、p-Jnk、p-Erk蛋白表达明显上调(P0.001)。与模型组比较,0.1、1、10μg·mL~(-1)不同浓度黄芪甲苷组的细胞IL-6水平均明显降低(P0.01),iNOS及COX-2(10μg·mL~(-1)浓度组)mRNA表达均明显下调(P0.01),p-P38(1、10μg·mL~(-1)浓度组)及p-Jnk(0.1、10μg·mL~(-1)浓度组)、p-Erk(0.1、10μg·mL~(-1)浓度组)蛋白表达均明显下调(P0.05,P0.01,P0.001)。结论黄芪甲苷可能通过抑制MAPK信号通路的激活来抑制LPS诱导的GES-1细胞炎症相关因子产生,从而发挥抗炎作用。     

无尾果抗类风湿关节炎的有效部位筛选研究

目的观察无尾果不同提取部位对人风湿性关节炎成纤维滑膜细胞（MH7A）相关细胞因子分泌及凋亡的 影响,初步筛选其抗类风湿关节炎（RA）的有效部位。方法采用肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导MH7A 细胞建 立类风湿关节炎滑膜细胞模型,并以无尾果总提物、水部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位和石油醚部位进行干 预。采用CCK8 法检测MH7A 细胞的增殖活性,并计算半数抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测MH7A 细胞凋 亡;ELISA 法检测TNF-α 诱导MH7A 细胞分泌白细胞介素（IL）-6、IL-4、IL-1β、血管内皮生长因子 （VEGF）、NF-κB 受体活化因子配体（RANKL）水平;Western Blot 法检测MH7A 细胞的凋亡相关蛋白表达水 平。结果无尾果总提物、水部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位和石油醚部位对MH7A 细胞的IC50 值分别为 223.9、99.4、123.7、497.9、＞1 000 μg·mL-1。与正常对照组比较,模型组细胞上清液中的IL-6、IL-1β、IL-4、 VEGF 和RANKL 含量显著升高（P＜0.01）,凋亡细胞显著增多（P＜0.01）,促调亡因子Bax、Caspase-9、 Caspase-3 和抗凋亡因子Bcl-2 的蛋白表达水平均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较,无尾果总提物组、水部 位组和正丁醇部位组均可显著诱导MH7A 细胞凋亡（P＜0.01）;显著降低IL-6、IL-1β、VEGF 和RANKL 水平 （P＜0.01）,升高IL-4 水平（P＜0.01）;水部位组和正丁醇部位组能明显上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-9 和 Caspase-3 的表达（P＜0.01）,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达（P＜0.01）。结论无尾果提取物诱导MH7A 细胞 凋亡及抗炎作用可能是其抗RA 的机制之一,水部位和正丁醇部位为其主要药效部位。     

巨噬细胞对内皮细胞凋亡的影响及通心络的干预作用

目的:研究不同亚型巨噬细胞对内皮细胞凋亡的影响及通心络的干预作用,并探讨其可能的作用机制。方法:以THP-1细胞为研究对象,实验分为5组,分别为空白组,佛波酯(PMA)组,M2组,M1组及通心络组。采用PMA(5μg·L~(-1))分别联合白细胞介素(IL)-4(100μg·L~(-1)),脂多糖(LPS,200μg·L~(-1))诱导THP-1细胞分别向M2和M1型巨噬细胞极化并给以通心络(300 mg·L~(-1))进行干预,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测其标志分子IL~(-1)0,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),IL-6的表达。取巨噬细胞培养上清作为条件培养基培养内皮细胞,采用流式细胞仪检测内皮细胞凋亡率、蛋白免疫印迹方法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与空白组比较,M2组细胞培养上清中IL~(-1)0水平显著升高(P0.01);M1组细胞培养上清中IL~(-1)0水平显著降低,IL-6及TNF-α水平显著升高(P0.01);与M1组比较,通心络组细胞培养上清中IL~(-1)0水平升高,IL-6及TNF-α水平下降(P0.01)。与M2组内皮细胞比较,M1型巨噬细胞细胞培养的内皮细胞凋亡率显著升高(P0.01),促凋亡蛋白Caspase-3,Bax蛋白的表达明显升高(P0.05,P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达显著降低(P0.01);与M1组比较,通心络组内皮细胞的凋亡率显著降低(P0.01),促凋亡蛋白Caspase-3,Bax蛋白的表达明显降低(P0.05,P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达显著升高(P0.01)。结论:通心络可以抑制巨噬细胞向M1型极化。M2型巨噬细胞培养上清对内皮细胞的凋亡无明显影响,M1型巨噬细胞培养上清可以促进内皮细胞凋亡;通心络预培养的M1型巨噬细胞培养上清培养的内皮细胞凋亡率显著下降。     

黄芩苷对幽门螺杆菌诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞(human gastric epithelial GES-1 cells)损伤的保护作用及机制研究。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入baicalin(15,30,60 mg·L~(-1))和p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580 20μmol·L~(-1)共培养。噻唑蓝(MTT)比色法测细胞增殖、流式细胞术测细胞凋亡、酶联免疫吸附法(ELISA)测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-8水平、比色法测细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2,p-p38 MAPK及total-p38 MAPK(T-p38 MAPK)蛋白表达。结果:与空白组比较,Hp可抑制GES-1细胞增殖,促进GES-1细胞凋亡,诱导GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8并增加LDH活性,增加GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与Hp感染组比较,中、高浓度baicalin组可促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01);与高浓度baicalin组比较,SB203580可进一步促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:baicalin可通过抗炎、促增殖并抗凋亡减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。     

龙葵碱对U251细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨龙葵碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法使用不同质量浓度的龙葵碱处理U251细胞,采用CCK-8法、划痕法、Transwell法、Hochest法、流式细胞术、免疫印迹法分别检测细胞增殖率、细胞迁移与侵袭、细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果龙葵碱对U251细胞的48 h半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μg/μL,其质量浓度在5～35μg/μL时,能够抑制细胞增殖(P0.05);与对照组相比,龙葵碱组抑制细胞迁移和侵袭的能力随药物质量浓度增高而增强(P0.05),同时细胞也出现明显凋亡特征,并均呈浓度依赖性;免疫印迹法显示龙葵碱可使凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达降低,Bcl-2/Bax值降低。结论龙葵碱在有效剂量(5～35μg/μL)对U251细胞增殖生长具有抑制作用,并呈浓度依赖性;龙葵碱可抑制U251细胞的侵袭与迁移,可以影响凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax值降低,从而抑制U251细胞的增殖生长。     

四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓细胞凋亡及Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达的影响

目的观察四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡及抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达的影响。方法按250 mg·kg~(-1)剂量腹腔注射环磷酰胺1次,制备血虚证小鼠模型。实验动物随机分为正常对照组,模型对照组,四物汤低剂量组(5 g·kg~(-1)·d~(-1))、四物汤中剂量组(10 g·kg~(-1)·d~(-1))、四物汤高剂量组(20 g·kg~(-1)·d~(-1))。利用血细胞计数仪、流式细胞术和蛋白免疫印迹技术分别检测各组小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡率及骨髓细胞Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达。结果与模型组相比,四物汤低剂量组和中剂量组外周血红细胞数显著升高(P0.05,P0.05)、中剂量组和高剂量组白细胞数明显增加(P0.05,P0.05)、各剂量组血红蛋白含量均显著升高(P均0.05);四物汤各剂量组小鼠骨髓细胞凋亡率均显著下降(P均0.05),四物汤中剂量组Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达量均显著增加(P0.05,P0.05)。结论四物汤可能通过上调骨髓细胞Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达,降低骨髓细胞凋亡率,提高外周血象,以发挥补血作用。     

健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:通过体内实验研究健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨其抗大肠癌复发转移的作用机制。方法:通过皮下注射结肠癌细胞CT-26构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型,随机分为模型组,健脾消癌方低(15.75 g·kg~(-1)),中(31.5 g·kg~(-1)),高(63 g·kg~(-1))剂量组及5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,分别给药14 d后,处死小鼠,剪取瘤体、称取瘤质量后剪碎瘤组织,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,并采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果:与模型组比较,健脾消癌方(15.75,31.5,63 g·kg~(-1))组瘤质量均减轻(P0.05),细胞凋亡率均升高(P0.05);B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)表达增高(P0.05),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达降低(P0.05);与健脾消癌方(15.75,31.5 g·kg~(-1))组比较,健脾消癌方(63 g·kg~(-1))组Bax,Caspase-3,Caspase-8增高明显(P0.05)。结论:健脾消癌方可通过促进小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡实现抑瘤作用,其机制可能与其调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

岭南地区子宫内膜异位症与体质相关性研究

目的观察败酱总黄酮对局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用及炎症因子的影响。方法将98只Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),脑络通组(500 mg·kg~(-1)),败酱总黄酮高、中、低剂量组(200、100、50 mg·kg~(-1))。灌胃体积为20 mL·kg~(-1),每天给药1次,连续给药7 d。末次给药后采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。采用ELISA法检测脑组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察并测定脑梗死面积百分比;免疫组织化学法检测脑组织中神经生长因子(NGF)、核因子(NF)-κBp65表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠脑组织脑梗死面积百分比、ICAM-1、IL-6、IL-1β、TNF-α、Bax、Bcl-2、Caspase-3水平以及NGF、NF-κBp65免疫阳性表达水平显著升高(P 0.01)。与模型组比较,败酱总黄酮各剂量组的大鼠脑组织ICAM-1、IL-6、IL-1β、Bax、Caspase-3含量水平均显著降低(P 0.05,P 0.01),Bcl-2含量水平及NGF免疫阳性表达水平均显著升高(P 0.01);败酱总黄酮高、中剂量组的大鼠脑梗死面积百分比、TNF-α含量水平及NF-κBp65免疫阳性表达水平均明显降低(P 0.05,P 0.01)。结论败酱总黄酮对局灶性脑缺血再灌注损伤有较好的保护作用,可以减少脑梗死面积,保护脑组织免受炎症因子的损伤,增加神经细胞营养因子保护神经元,减少神经细胞的凋亡,激活脑细胞自我保护,减少脑缺血再灌注损伤。     

蟾皮中吲哚烷胺类生物碱对LPS活化的中性粒细胞抗炎活性及机制研究

吲哚烷胺类生物碱(indolealkylamines, IAAs)是蟾皮中主要的亲水性物质基础,主要包括游离型的N-甲基五羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、脱氢蟾蜍色胺和结合性的蟾蜍噻咛。该研究选择脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)活化的中性粒细胞为体外炎症模型,对蟾皮中5个IAAs单体抗炎活性构效关系及抗炎机制进行探讨。实验分组为空白组、模型组(1μg·mL~(-1) LPS)、阳性药组(100μg·mL~(-1)吲哚美辛)以及5个IAAs低、中、高剂量(50、100、200μg·mL~(-1))组。首先使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测LPS刺激后各组中性粒细胞上清液中IL-6、TNF-α、IL-1β的分泌情况,然后利用Annexin V/PI双染法观察各组中性粒细胞凋亡情况,并用Western blot法检测各组细胞中caspase-3、Bax、Bcl-2、beclin1、LC3-I、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果表明,与模型组相比,IAAs干预后可降低LPS引起的炎症因子分泌过多,且游离型IAAs(N-甲基五羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、脱氢蟾蜍色胺)活性强于结合型IAAs蟾蜍噻咛,其中蟾蜍色胺的效果最为显著。Annexin V/PI结果表明,与空白组相比,模型组可延迟中性粒细胞早期凋亡,蟾蜍色胺处理后可呈剂量依赖关系促进中性粒细胞凋亡,其机制可能与提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达有关。此外,LPS刺激后,可以激活中性粒细胞的自噬信号通路。该研究首次证明,IAAs可降低由LPS引起的中性粒细胞炎症因子的分泌。以蟾蜍色胺为例,其发挥药效的机制可能与促进中性粒细胞凋亡有关。     

安胃汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠细胞凋亡因子表达的影响

目的:研究安胃汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠细胞凋亡因子表达的影响。方法:采用MNNG法建立CAG大鼠模型,将60只大鼠随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、胃复春组(C组)、安胃汤低剂量组(D组)、安胃汤中剂量组(E组)、安胃汤高剂量组(F组)各10只,A、B两组给予3ml生理盐水灌胃,C组给予胃复春悬浊液按照0.078g/100(g·d)的剂量灌胃。D、E、F组分别给予0.5、1.0、2.0g/100(g·d)剂量的安胃汤灌胃,连续治疗4周。显微镜下观察胃黏膜组织形态的改变,使用QRT-PCR法和Western-blot法检测胃黏膜组织中Bax、Bcl-2、Fas、FasL mRNA及蛋白的表达,TUNEL法检测胃黏膜细胞凋亡指数。结果:镜下显示,B组胃黏膜明显萎缩,固有腺体萎缩消失,D、E、F组胃黏膜结构完整度呈递增趋势,固有腺体萎缩程度降低,数目增加,明显优于B组。与B组相比,C、D、E、F组的Bcl-2 mRNA相对表达量和蛋白表达量升高,Bax、Fas、FasL mRNA相对表达量和蛋白表达量降低(P0.05);与C组相比,E、F组的Bcl-2mRNA相对表达量和蛋白表达量升高,Bax、Fas、FasL mRNA相对表达量降低(P0.05)。与B组相比,C、D、E、F组凋亡指数均下降(P0.05);与C组相比,D、E、F组凋亡指数均下降,且随着剂量的升高,下降程度更明显(P0.05)。结论:安胃汤治疗CAG大鼠,能够通过调节Bax、Bcl-2、Fas、FasL等细胞凋亡因子水平,抑制胃黏膜细胞凋亡,改善胃黏膜萎缩,效果与安胃汤剂量正相关。     

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的:探讨拳参正丁醇提取物-413(Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)细胞凋亡的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组(0.1 mg·kg~(-1)),PBNA-413中剂量组(0.3 mg·kg~(-1)),PBNA-413高剂量组(1.0 mg·kg~(-1))。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果:大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高(P0.05,P0.01),PBNA-413处理后ST段及T波降低(P0.01),以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P0.01)。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论:PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

目的研究川芎嗪、黄芪甲苷及二者不同浓度配伍对过氧化氢(H_2O_2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤模型的保护作用及机制。方法建立H2O2诱导HUVECs损伤模型,将细胞分为17组:空白对照组,模型组(H_2O_20.2 mmol·L~(-1))、川芎嗪低、中、高(40,80,160μg·m L~(-1))剂量组,黄芪甲苷低、中、高(10,20,40μg·m L~(-1))剂量组,川芎嗪+黄芪甲苷两两配伍组。噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对氧化损伤HUVECs增殖的影响,筛选出最佳配伍比例。检测最佳配伍组丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Western Blot检测p-Akt/Akt蛋白的表达,RT-PCR检测Akt m RNA的表达。结果与模型组相比,川芎嗪中剂量组、黄芪甲苷各剂量组及其配伍组均能不同程度提高细胞存活率(P0.05,P0.01,P0.001),且川芎嗪(80μg·m L~(-1))+黄芪甲苷(40μg·m L~(-1))剂量组细胞存活率最高,选为最佳配伍组;川芎嗪(80μg·m L~(-1))+黄芪甲苷(40μg·m L~(-1))剂量组能降低细胞MDA含量(P0.001),提高细胞SOD活力(P0.001),降低细胞凋亡率(P0.01),上调p-Akt/Akt蛋白及Akt基因m RNA的表达(P0.001)。结论川芎嗪(80μg·m L~(-1))+黄芪甲苷(40μg·m L~(-1))剂量组对H_2O_2诱导的HUVECs氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的HUVECs凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

大黄水提物对成年雌性大鼠子宫中Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察长期灌胃大黄对成年雌性大鼠子宫中Bcl-2、Bax表达的影响。方法雌性Wistar大鼠90只,随机分为正常对照组,大黄水提取物1.0 g·kg-1和2.0 g·kg-1剂量组,各剂量组再分为给药30,40,50,60d组,每组10只,采用免疫组化法检测子宫组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与正常对照组比较1.0 g·kg-130,40,50d组Bax表达有所升高,Bcl-2表达有所降低,但差异无统计学意义(P0.05),1.0 g·kg-160d组Bax表达显著高于正常对照组(P0.05),Bcl-2表达显著低于正常对照组(P0.05);与正常对照组比较2.0 g·kg-130d组Bax表达有所升高,Bcl-2表达有所降低,但差异无统计学意义(P0.05),2.0 g·kg-140,50,60d组Bax表达显著高于正常对照组(P0.05或P0.01),Bcl-2表达显著低于正常对照组(P0.05或P0.01);给药40,50,60d,1.0 g·kg-1和2.0 g·kg-1剂量组相同给药时间比较Bcl-2、Bax表达差异具有统计学意义(P0.05或P0.01);1.0 g·kg-1剂量组,给药30d与60d组Bcl-2、Bax表达差异具有统计学意义(P0.05),其他各组Bcl-2、Bax表达差异无统计学意义(P0.05)。2.0 g·kg-130d与50,60d组,40d与50,60d组比较Bcl-2、Bax表达差异具有统计学意义(P0.05),其他各组Bcl-2、Bax表达差异无统计学意义(P0.05)。结论长期应用大黄对成年雌性大鼠子宫中Bcl-2、Bax的表达具有一定的影响,其影响程度具有明显的剂量及时间依赖关系。     

败酱总黄酮对局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用及炎症因子的影响

目的观察败酱总黄酮对局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用及炎症因子的影响。方法将98只Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),脑络通组(500 mg·kg~(-1)),败酱总黄酮高、中、低剂量组(200、100、50 mg·kg~(-1))。灌胃体积为20 mL·kg~(-1),每天给药1次,连续给药7 d。末次给药后采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。采用ELISA法检测脑组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察并测定脑梗死面积百分比;免疫组织化学法检测脑组织中神经生长因子(NGF)、核因子(NF)-κBp65表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠脑组织脑梗死面积百分比、ICAM-1、IL-6、IL-1β、TNF-α、Bax、Bcl-2、Caspase-3水平以及NGF、NF-κBp65免疫阳性表达水平显著升高(P 0.01)。与模型组比较,败酱总黄酮各剂量组的大鼠脑组织ICAM-1、IL-6、IL-1β、Bax、Caspase-3含量水平均显著降低(P 0.05,P 0.01),Bcl-2含量水平及NGF免疫阳性表达水平均显著升高(P 0.01);败酱总黄酮高、中剂量组的大鼠脑梗死面积百分比、TNF-α含量水平及NF-κBp65免疫阳性表达水平均明显降低(P 0.05,P 0.01)。结论败酱总黄酮对局灶性脑缺血再灌注损伤有较好的保护作用,可以减少脑梗死面积,保护脑组织免受炎症因子的损伤,增加神经细胞营养因子保护神经元,减少神经细胞的凋亡,激活脑细胞自我保护,减少脑缺血再灌注损伤。     

葛根素对肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的:研究葛根素对肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:选取120只实验用大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶提取物100 mg·kg~(-1)治疗组、葛根素(100,50,25 mg·kg~(-1))治疗组;采用夹闭双侧肾蒂血管45 min后恢复血流再灌注的方法制备肾缺血再灌注大鼠模型;再灌注后立即通过ip给药,每天1次,疗程2周。治疗完成后,称量体重和肾脏质量并计算肾脏指数,测定血清中尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),尿酸(UA)含量,PAS染色法观察肾脏组织形态学变化;末端标记法(TUNEL)染色法观察细胞凋亡状况并计算凋亡指数(AI);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定肾脏组织蛋白激酶B(AKT),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达,并计算Bax/Bcl-2;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肾脏组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达并进行半定量分析;酶联免疫法测定血浆中血浆C-反应蛋白(CRP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素~(-1)β(IL~(-1)β),白细胞介素-6(IL-6),细胞间黏附分子~(-1)(ICAM~(-1))水平。结果:与模型组比较,葛根素(100,50 mg·kg~(-1))治疗组大鼠肾脏指数明显降低(P0.05,P0.01),血清中BUN,SCr,UA含量明显降低(P0.05,P0.01);葛根素各治疗组肾脏组织病理性形态学变化呈不同程度改善,肾小球细胞凋亡状况呈不同程度好转,均以100 mg·kg~(-1)治疗组效果最为显著,葛根素100,50 mg·kg~(-1)治疗组肾小球细胞AI显著降低(P0.05,P0.01),肾脏组织中Bax mRNA表达明显下调且Bcl-2 mRNA表达明显上调(P0.05,P0.01),Bax/Bcl-2明显降低(P0.01),且100 mg·kg~(-1)治疗组AKT mRNA表达显著上调(P0.01);Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。葛根素(100,50 mg·kg~(-1))治疗组大鼠血浆中CRP,TNF-α,IL-6水平均明显降低(P0.05,P0.01),且100 mg·kg~(-1)治疗组IL~(-1)β,ICAM~(-1)含量水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论:葛根素具有抑制肾缺血再灌注大鼠肾脏组织细胞凋亡、改善肾功能的作用;其作用机制可能与葛根素能够有效上调AKT基因表达、抑制Caspase-3蛋白表达,下调Bax基因表达、上调Bcl-2基因表达,并降低Bax/Bcl-2,降低炎症因子表达、抑制炎症反应有关。