采用全胚胎培养法研究酒精对胚胎发育的毒性影响

目的化学物质的毒性作用常因其在体内代谢而变化。为探讨酒精在代谢条件下的发育毒性，本研究应用植入后全胚胎培养技术研究了酒精对胚胎发育的影响。方法：孕９５天大鼠胚胎于体外条件下移植分离培养在含４０、１００、２０、４０ｍｇ／ｄｌ内含Ｓ９的即可离心大鼠血清培养基中连续培养４８小时，观察酒精对胚胎生长发育和器官形态分化的影响。结果：４０ｍｇ／ｄｌ＋Ｓ９组与对照组各指标无显著性差异，１００ｍｇ／ｄｌ＋Ｓ９组则导致胚胎的体长、ＤＮＡ、蛋白质含量及部分器官形态评分呈剂量相关的下降，但前脑、中脑评分并无影响。随染毒剂量增加，胚胎的绝大多数指标显著降低，胚胎致畸率和死亡率相应增高。结论：酒精在Ｓ９作用下转化为乙醛后，毒性作用的靶器官发生改变，表现为肢芽、心脏等器官发育异常为主，代谢产物乙醛也有一定的致畸作用。     

胚胎早期卵裂观察在胚胎发育潜能评估中的应用分析

目的探讨取卵后第一天(Day1)胚胎早期卵裂的观察在胚胎发育潜能及临床妊娠结局的预测价值。方法分析2013年5月至2014年4月179个常规IVF周期,依据受精后28±1h双原核(2pn)受精卵早期卵裂情况,分为早期卵裂组(A组)、pn消失未早期卵裂组(B组)、pn未消失未早期卵裂组(C组),比较每组优质胚胎率、可利用囊胚形成率和临床妊娠率等,其中移植结局又根据移植胚胎来源分4组,a组全移植早期卵裂来源胚胎、b组1个为早期卵裂来源胚胎、c组为pn消失未早期卵裂来源胚胎、d组为pn未消失未早期卵裂来源胚胎。结果 1.Day3评分A组、B组、C组的优质胚胎率(61.3%vs 53.1%vs32.1%),差异有统计学意义(P0.05);胚胎可利用率为(72.2%vs 65.5%vs 39.1%),差异有统计学意义(P0.05);可利用囊胚形成率(41.6%vs 37.9%vs 22.2%),差异有统计学意义(P0.05)。2.早期卵裂细胞数为2且评分≤2级的胚胎形成优质胚胎率、可利用囊胚形成率均高于早期卵裂细胞数≥3或评分≥3级的胚胎,差异有统计学意义(P0.05)。3.移植a组、b组、c组、d组的临床妊娠率为63.5%、48.3%、50.0%、44.6%,移植a组的临床妊娠率明显高于其它组别,但差异无统计学意义(P0.05)。结论早期卵裂组的优质胚胎率、可利用囊胚形成率及胚胎移植结局明显高于非早期卵裂组,提示胚胎早期卵裂的观察有助于预测胚胎发育潜能,而早期卵裂细胞数为2且评分≤2级的胚胎发育潜能高。     

胚胎密度对卵裂期优质胚胎率的影响

目的 通过调整协变量来探索培养的胚胎密度与第3天卵裂期胚胎发育结果之间的相关性.方法 回顾性分析206对夫妇1196个胚胎体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的资料.培养条件为低氧,培养液每微滴体积为30 μl.以第3天卵裂期胚胎的优质胚胎率为终点指标对胚胎质量进行评价.选择女方年龄,男方年龄,窦卵泡数,抗苗勒管激素...     

早期胚胎质量评估:提高预测胚胎发育潜能的敏感性和特异性

背景:胚胎发育潜能的评估将直接影响胚胎移植的选择和辅助生殖的临床结局。目的:对早期胚胎发育潜能评估的方法进行归纳分析。方法:由第一作者检索1990年1月至2013年12月PubMed数据库相关文献,检索词为Assisted Reproductive Technology,ART;Pre-implantation Embryo;Embryonic development viability;Evaluation methods,文献语言限制在英文。根据纳入排除标准,最终纳入63条进行分析探讨。结果与结论:形态学评估方法由于其快速、无创、简单等特点而得到广泛的应用。但随着辅助生殖技术的发展,新的胚胎评估方法成为研究的热点,形态学评分系统与实时成像分析系统相结合对早期胚胎发育过程连续观察便于选择优胚。通过分析培养液中的代谢产物变化来预测胚胎发育潜能(丙酮酸、葡萄糖、氨基酸等)、胚胎源性细胞因子(可溶性人白细胞抗原G1、血小板活化因子等);针对基因、染色体异常而产生的植入前遗传学筛查法等以期找到更有效地评估胚胎发育潜能的标记物。     

应用小鼠体外全胚胎培养研究金葡菌L型对胚胎发育的影响

金葡菌是细菌感染性疾病中最常见的细菌之一 ,在体内外因素作用下可以缺壁变异成L型。金葡菌L型除可引起各种化脓性感染和败血症外 ,实验证明也可引起小鼠的不孕和肿瘤 ,可通过胎盘垂直感染并与子代先天畸形有一定的关系 ,但这些研究均是通过母体感染的体内试验 ,本实验采用体外全胚胎培养 (WEC)方法观察金葡菌L型对体外胚胎发育的影响。将妊娠 8 .5天龄小鼠脱颈处死 ,无菌条件下剪开子宫壁 ,分离出蜕膜团 ,在体视显微镜下剥离蜕膜组织与Reichert′s膜 ,将胚胎和卵黄囊、外胎盘圆椎一起移入培养瓶中培养。每只胚胎加入 1ml大白鼠血清培养…     

四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞嵌合体小鼠制备的影响

目的 探讨四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞(ES)嵌合体小鼠制备的影响.方法 通过2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,采用显微注射方法将ES细胞分别注入1-细胞、4-细胞、囊胚3个发育阶段的四倍体胚胎中.所用ES细胞分别为杂交系B6D2F1×129/Sv和近交系C57BL/6J,经胚胎移植和剖腹产以获得ES小鼠.结果 实...     

早期胚胎质量评估:提高预测胚胎发育潜能的敏感性和特异性CSCD

背景:胚胎发育潜能的评估将直接影响胚胎移植的选择和辅助生殖的临床结局。目的:对早期胚胎发育潜能评估的方法进行归纳分析。方法:由第一作者检索1990年1月至2013年12月PubMed数据库相关文献,检索词为"Assisted Reproductive Technology,ART;Pre-implantation Embryo;Embryonic development viability;Evaluation methods",文献语言限制在英文。根据纳入排除标准,最终纳入63条进行分析探讨。结果与结论:形态学评估方法由于其快速、无创、简单等特点而得到广泛的应用。但随着辅助生殖技术的发展,新的胚胎评估方法成为研究的热点,形态学评分系统与实时成像分析系统相结合对早期胚胎发育过程连续观察便于选择优胚。通过分析培养液中的代谢产物变化来预测胚胎发育潜能(丙酮酸、葡萄糖、氨基酸等)、胚胎源性细胞因子(可溶性人白细胞抗原G1、血小板活化因子等);针对基因、染色体异常而产生的植入前遗传学筛查法等以期找到更有效地评估胚胎发育潜能的标记物。     

形态学评分对胚胎发育潜能预测价值的探讨

目的探讨形态学评分对胚胎发育潜能预测价值。方法比较不同原核评分、不同卵裂球数及不同胚胎碎片的胚胎D5或D6囊胚形成情况。结果 D1天原核评分各组囊胚形成率及优质囊胚率无显著差异(P均0.05)。D3天不同碎片含量胚胎囊胚形成率有显著差异(P0.001)。S1组(碎片10-25%)、S2组(碎片25-50%)优质囊胚形成率显著高于S3组(碎片50%),P均0.001,S1与S2组相比,优质囊胚形成率则无显著差异(P0.05)。D3天C2组(7-9-cells)的胚胎囊胚形成率和优质囊胚率最高,与C1组(≤6-cells)相比差异有统计学意义(P0.001),但与C3组(≥10-cells)相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 D1天原核形态学评分不能有效预测胚胎发育潜能,D3天胚胎碎片少于50%,细胞数大于6的胚胎具有较高的发育潜能。     

体外延长培养筛选低评分胚胎中具有发育潜能胚胎的可行性探讨

目的探讨了体外延长培养筛选低评分胚胎中具有发育潜能胚胎的可行性。方法将来自IVF/ICSI的第三天(D3)低评分胚胎进行体外延长培养,观察囊胚形成情况。结果307枚低评分胚胎经体外延长培养后形成53枚囊胚,囊胚率为17.26%,这些囊胚来自85例患者中的33例。结论①体外延长培养能有效筛选出D3低评分胚胎中具有发育潜力的胚胎;②D3胚胎形态评分不能完全预测其发育潜力。     

低氧环境对人类胚胎体外受精发育潜能和临床结局的影响

目的探讨不同氧分压环境下（20％02＆5％O2）体外受精一胚胎移植中胚胎发育潜能与临床结局关系。方法选择2012年9月至2012年11月年在郑大三附院生殖医学中心行助孕治疗的280个周期,分别为IVF（n=200）,ICSI（n=80）。随机分组：研究组（5％氧分压）和对照组（20％氧分压）,对比两组间正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、生化妊娠率、临床妊娠率和着床率。结果实验组与对照组正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、生化妊娠率、临床妊娠率和着床率无统计学差异。结论人类早期胚胎在低氧环境下进行体外培养是有利的,可以获得更好结局。     

兔抗小鼠胚胎干细胞免疫血清对8-细胞胚胎发育的影响

目的 制备兔抗小鼠胚胎干细胞免疫血清,观察其对小鼠胚胎发育的影响。方法 用小鼠胚胎培养基稀释兔抗血清,分别稀释至50倍、100倍、200倍,用其对小鼠8-细胞胚胎进行培养,通过胚胎致密化、囊胚率、胚胎体外贴壁生长、细胞计数、胚胎移植和免疫荧光染色观察胚胎发育状况。 结果 形态学上50倍稀释的抗血清能够抑制8 细胞胚胎的发育甚至使其死亡;100倍稀释的抗血清能够延迟8 细胞胚胎的致密化,并使得胚胎在囊胚化过程中出现空泡化的现象;200倍稀释的抗血清作用不明显。未作免疫处理的兔血清与空白对照组差异不显著。100倍稀释的抗血清能够显著抑制囊胚内细胞团（ICM）的发育、囊胚细胞分布紊乱、胚胎细胞数目减少以及囊胚畸形率增加。虽然囊胚的碱性磷酸酶和Oct4均呈阳性,但经胚胎移植后都不能正常发育。 结论 兔抗小鼠胚胎干细胞免疫血清能够抑制小鼠胚胎致密化过程和囊胚内细胞团的发育,使囊胚出现空泡化,细胞分布紊乱,抑制胚胎着床。     

玻璃化冷冻人不同发育时期的胚胎对其发育潜能的影响

目的分析使用玻璃化冷冻法对人D3卵裂期细胞及囊胚进行冷冻,对胚胎发育潜能的影响。方法从2013年3月至2015年12月180周期358枚胚胎行解冻胚胎移植,将胚胎分为卵裂组及囊胚组,统计解冻后存活率,移植后着床率、妊娠率、流产率及多胎妊娠率。结果 D3卵裂组与囊胚组解冻后存活率没有差异,但移植后发育潜能卵裂组明显低于囊胚组。结论冷冻解冻移植囊胚期的胚胎比卵裂期的胚胎更有发育潜能。     

人类胚胎早期发育潜能的研究

目的　本研究采用卵裂球分离技术获取不同发育阶段人类早期胚胎单个卵裂球 ,对分散的人类早期胚胎单个卵裂球进行体外培养。对其进一步发育和分化进行研究 ,发现其影响因素。结果　 2 0个 4-细胞、2个 3-细胞人类早期胚胎分散后获得单个卵裂球 83个 ,经体外培养后有 35个发育成为扩张囊胚。结论　 4-细胞人类胚胎卵裂球具有发育成为完整囊胚的能力     

代谢组学在预测胚胎发育潜能中的研究进展

体外授精-胚胎移植技术发展20多年来,促排卵及胚胎培养技术有了很大进步,但是活婴出生率通常低于50%。而多个胚胎移植提高了多胎等相关风险,因此业界提倡单胚胎或单囊胚移植。准确评估胚胎的活力对实现该目标至关重要。目前除了胚胎形态学评级,对胚胎代谢的相关研究也反应了胚胎的活力。本文综述了国内外近年来对胚胎代谢的相关研究,为更好选择高活力胚胎,降低多胎率,减少多胎带来的母婴风险提供新的思路。     

冷冻保存时间与解冻后胚胎发育潜能的关系

目的探讨冻存时间对胚胎发育潜能的影响。方法将2013.8-2016.5我院行程序化冷冻胚胎复苏移植的胚胎按冻存时间分为三组,组1为冻存≤12个月,组2为13-60个月,组3为≥60个月,进行胚胎复苏和发育潜能的比较。结果三组胚胎存活率、完整率和继续发育、囊胚形成和优囊率均无统计学差异(P0.05)。结论冻存时间对胚胎复苏和发育潜能并无影响。     

精子浓度及受精时间对于受精结局和胚胎发育潜能的影响

目的通过对比分析体外受精(IVF)过程中不同受精浓度、不同受精时间多精受精、胚胎质量及发育潜能的差异,探讨体外受精过程中合适的受精浓度和精卵孵育的时间。方法选择首次行IVF并且获卵数大于12个的周期,将卵子随机分为数目相当的两组,分别采用低、高两种浓度的精子受精,低浓度采用0.15×10~6/ml,高浓度采用0.5×10~6/ml的精子浓度进行受精。根据受精时间的不同,分为短时受精低浓度组(A1组)、短时受精高浓度组(B1组),过夜受精低浓度组(A2组)和过夜受精高浓度组(B2组)。分别比较不同受精方式下各组间正常受精率、多精受精率、优质胚胎率、囊胚形成率之间的差异。结果各组间正常受精率、多精受精率、优质胚胎率、囊胚形成率均无统计学差异(P0.05)。结论受精浓度在一个比较大的范围内,无论短时受精还是过夜受精,多精受精率及胚胎发育潜能都不会随着受精浓度的增加而发生变化,体外受精多精受精率的增加可能更多的来源于非精子浓度的因素。     

印记基因对胚胎发育的影响

在哺乳动物中,有一部分特别的基因,它们由于受到印记而只表达单一亲本的基因,这种表遗传的修饰现象就是基因组印记,这与经典孟德尔遗传学定律不同,有许多的印记基因,在一亲本表达,而在另一亲本沉默.基因印记属于表遗传修饰范畴,DNA甲基化是一种重要的表遗传修饰,主要的修饰部位发生在DNA的CpG岛,它参与了细胞的分化,基因组的稳定等多种细胞生物学过程.在胚胎的发生、发展过程中印记基因的作用贯穿始终.基因组印记经历了一系列的擦除、重建与维持过程,为胚胎的发生、发展奠定了基础,基因印记对原始生殖细胞核的全能性、配子的成熟、胚胎的生长发育、胎盘的结构和功能,以及出生后个体的生长发育均有重要意义.印记基因的异常,将会对胚胎的发生以及发育产生深远的影响.该文基于国内外对印记基因的研究,结合最新的一些研究进展,就印记基因对胚胎发育的影响作了一系列综述.     

桉叶油对大鼠胚胎发育的影响

目的 探讨桉叶油对SD大鼠胚胎发育的影响。 方法 取SD孕鼠25只,随机分成3个实验组（桉叶油高、中、低剂量）、溶剂对照组（花生油）和阳性对照组（环磷酰胺）,每组5只。实验组和溶剂对照组分别在大鼠妊娠第10天用300、200、100mg/kg 的桉叶油和花生油2ml/只灌胃,每天1次,连续5d。阳性对照组于孕第13天腹腔注射环磷酰胺1次（12.5mg/kg）。各组孕鼠于孕19d处死取胚胎,记录孕鼠的体重、子宫重、卵巢重和胎盘重;统计胚胎植入的总数、吸收胎数、活胎数和死胎数;观察胚胎外形,并测量胎鼠体重、身长和尾长。 结果 桉叶油灌胃SD孕鼠后,孕鼠的体重、子宫重、卵巢重及胎盘重与溶剂对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。胚胎植入总数、吸收胎数、活胎数及死胎数与溶剂对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。桉叶油各组活胎鼠平均体重、身长及尾长均较溶剂组高,但只有高剂量桉叶油组胎鼠平均体重（2.318±0.606）与溶剂组（1.462±0.397）比较有明显差异（P<0.05）,其余指标与溶剂组比较无明显差异（P＞0.05）。阳性对照组胎鼠平均体重、尾长明显低于溶剂组,且有差异（P<0.05）。阳性对照组胎鼠平均身长低于溶剂组,但统计学分析无差异（P＞0.05）。 结论 本实验条件下,桉叶油对SD孕鼠胚胎无毒性,环磷酰胺对大鼠胚胎有毒性。     

半乳糖对小鼠胚胎发育的影响

目的研究半乳糖对妊娠小鼠胎盘组织脂质过氧化和抗氧化酶的影响，探讨半乳糖对小鼠胚胎发育的影响及其机理。方法将75只妊娠小鼠随机分为4组，即半乳糖低、中、高浓度组（20％、35％和50％）和正常对照组，分别从妊娠第1d开始喂不同浓度半乳糖（20％、35％、50％）及正常食物，观察妊娠结局，记录总胎鼠数、活胎数、吸收胎数和死胎数。测定35％半乳糖组孕鼠胎盘组织中超氧化物歧化酶（SOD）的活性及脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量。采用放免法（RIA）测定35％半乳糖组孕鼠及对照组孕d5、d9、d13和d15血清孕酮（P）和雌二醇（E2）水平。结果（1）35％半乳糖可使妊娠小鼠血清孕酮和雌二醇水平较对照组显著下降（P〈0．05）（2）35％半乳糖使妊娠小鼠胎盘组织中SOD活性较对照组显著降低，MDA含量较对照组显著升高（P〈0．01）（3）随着半乳糖浓度增高，妊娠小鼠活胎率明显下降，吸收胎率和死胎率明显升高（P〈0.05）。结论半乳糖致妊娠小鼠胎盘组织中抗氧化能力下降，氧化水平增强，破坏胎盘的抗氧化系统的平衡状态，造成胎盘组织氧化损伤，使发育中的胚胎失去血液供应和营养，最终导致胚胎发育受阻，孕体被排出或吸收。