安胃汤含药血清调节Fas/FasL信号通路促进MC细胞凋亡的影响

目的探讨安胃汤含药血清对MC细胞[MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)恶性转化]Fas/FasL信号通路相关因子及细胞凋亡影响。方法根据中药复方血清药理学实验方法,以MC细胞为研究对象,设立空白组(A组)、安胃汤组(B组)、安胃汤+阻断剂组(C组)、阻断剂组(D组)。含药血清处理12 h、24 h、48 h后的各组细胞采用流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测细胞培养液上清FasL的含量;Western blot和Real-time PCR检测Fas、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达。结果 A组细胞凋亡率比较低,B、C、D组细胞凋亡率有所增加;24h和48h时,与A组比较,B、C、D三组细胞培养液上清中FasL的含量均有所增加(P0.01);与A组相比,B、C、D三组细胞内Fas、Bax基因及蛋白表达有所升高(P0.01或P0.05),Bcl-2基因及蛋白表达有所降低(P0.01或P0.05)。结论安胃汤能促进MC细胞细胞凋亡,可能与其通过调控Fas/FasL通路,调控Bcl-2、Bax mRNA及蛋白有关。     

大戟大枣汤含药血清通过PI3k/Akt通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨大戟大枣汤含药血清通过PI3k/Akt通路对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法制备大戟大枣汤高、中、低剂量组及阴性组的含药血清,作用于体外培养的MCF-7细胞。吖啶橙-溴乙锭染色观察大戟大枣汤含药血清作用对细胞形态学的变化,Hoechst333342/PI染色分析细胞凋亡情况,免疫荧光法检测PI3k/Akt通路相关蛋白的表达,Western blot检测大戟大枣汤含药血清联合LY294002对PI3k/Akt通路相关蛋白的表达影响。结果荧光显微镜下可见大戟大枣汤含药血清作用后细胞贴壁能力下降、形态变得圆润、数量减少。与阴性对照组比较,大戟大枣汤含药血清组细胞凋亡增高(P<0.05,P<0.01),PI3k、p-Akt、p-FoxO3a蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);大戟大枣汤含药血清联合LY294002作用后,细胞中p-Akt、p-FoxO3a蛋白表达较单独使用大戟大枣汤含药血清更低。结论大戟大枣汤含药血清可通过抑制PI3k/Akt信号通路调控MCF-7细胞凋亡。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。     

消癌平注射液通过PI3K/Akt信号通路调节卵巢癌细胞增殖研究

目的研究消癌平注射液对卵巢癌细胞株Caov-3增殖作用的影响,以探讨其抗癌机制。方法 MMT法检测消癌平注射液对Caov-3细胞增殖活性的影响;相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术分析消癌平注射液对Caov-3细胞周期的影响;免疫印迹方法检测消癌平注射液对Caov-3细胞质中Akt、pAkt、p27蛋白表达的影响。结果消癌平注射液能以时间和剂量依赖方式抑制Caov-3细胞增殖,并诱导Caov-3细胞发生G0/G1期阻滞;随着消癌平注射液作用时间的延长,Caov-3细胞质中pAkt蛋白表达减少,p27蛋白表达增加。结论消癌平注射液通过抑制PI3K/Akt通路,使细胞周期发生阻滞,从而抑制细胞增殖。     

Hederacolchiside A1通过调节PI3K / Akt / mTOR信号通路诱导肿瘤细胞凋亡

目的：Hederacolchiside A1在体外对各种肿瘤细胞表现出细胞抑制和细胞毒活性,但其机制尚不清楚。本研究主要探讨白头翁中提取分离的Hederacolchiside A1的抗肿瘤活性和机制。 方法：用MTT法检测Hederacolchiside A1对A549,SMMC-7721,BEL-7402和MCF-7细胞增殖的抑制作用。通过流式细胞术分析鉴定经Hederacolchiside A1处理的肿瘤细胞凋亡状况。 结果：根据Western blotting和JC-1染色结果：hederacolchiside A1降低肿瘤细胞线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平,并升高cleaved caspase-3蛋白表达水平。此外,hederacolchiside A1可有效地抑制磷脂酰肌醇（-3）激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平。体内研究表明,在肝癌H22移植瘤模型中,Hederacolchiside A1（3.0,4.5和6.0mg / kg,ip）可显著抑制肿瘤的重量;在人乳腺癌MCF-7移植瘤模型中,用Hederacolchiside A1（3.25,7.5和15.0mg / kg,ig）进行治疗,观察到类似的抑制活性。 结论：这些数据表明,Hederacolchiside A1可通过调节PI3K / Akt / mTOR信号传导途径诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

PI3K/Akt信号通路调节创伤愈合的机制

<正>磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)是特异性的催化磷酯酰肌醇(PI)3位羟基磷酸化,产生具有第二信使作用的激酶。丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)处于PI3K/Akt通路的中心环节,在细胞的凋亡、存活、增殖等活动中发挥重要的生物学作用。     

姜黄素通过PI3K/Akt信号通路抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究姜黄素(Cur)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)PI3K/Akt信号通路的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度Cur对SGC-7901细胞的24、48、72h的抑制作用;TUNEL检测各浓度Cur作用24h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western blot、RT-PCR法检测各浓度Cur作用SGC-7901细胞后PI3K、p-Akt、Akt蛋白和PI3K、Akt mRNA的表达。结果 CKK-8实验证明了姜黄素对SGC-7901细胞增殖具有抑制作用,且随作用浓度的增强而增强;TUNEL法检测姜黄素作用SGC-7901细胞后凋亡率的变化,发现细胞凋亡率随浓度的增强而显著增加;Western blot、RT-PCR法检测Cur作用SGC-7901细胞后,PI3K、p-Akt、Akt蛋白和mRNA的表达水平降低。结论 Cur具有抑制人胃癌细胞增殖和促凋亡的作用,其机制与抑制PI3k/Akt信号通路有关。     

PESV干预K562细胞PI3K/Akt 信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响。[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化。[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加。[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡。     

苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制研究

目的探究苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制。方法对人肺癌A549细胞进行培养,培养后分为对照组、低浓度组、中浓度组以及高浓度组,对照组中加入生理盐水,分别向低浓度组、中浓度组以及高浓度组,加入浓度为30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L的苦参碱,作用48小时后采用流式细胞仪及MTT检测法检测A549细胞凋亡情况,计算生长抑制率,并采用Western Blotting和real time PCR检测PI3K、p-AKT蛋白以及PI3K、AKT mRNA表达水平,比较四组之间的差异。结果高浓度组、中浓度组、低浓度组生长抑制率和凋亡率显著高于对照组(P0.05),且随着浓度的升高生长抑制率和凋亡率显著升高(P0.05);高浓度组、中浓度组、低浓度组PI3K、AKT mRNA及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组(P0.05),且随着浓度的升高PI3K、AKT mRNA及PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论苦参碱可诱导肺癌A549细胞凋亡,推测其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

乙酰紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的研究

目的：研究乙酰紫草素（ASK）对人前列腺癌PC-3细胞的诱导凋亡作用及相关的分子机制。方法：利用CCK-8实验检测ASK对体外培养PC-3细胞的杀伤作用;利用流式细胞术实验检测ASK处理后PC-3细胞凋亡情况;利用Western blotting检测凋亡蛋白和AKT信号通路蛋白的表达。结果：CCK-8实验证明ASK能够以时间和浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖;流式细胞术实验证明ASK能够诱导人前列腺癌PC-3细胞线粒体依赖性凋亡;Western blotting证明ASK能够有效抑制前列腺癌PC-3细胞中的AKT信号通路。结论：ASK能够有效抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖,并能够有效诱导PC-3细胞发生线粒体依赖性凋亡,其机制可能是通过调控PI3K/Akt信号通路来实现,说明ASK具有一定的抗前列腺癌的潜力。     

血根碱通过调控PI3K/Akt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨血根碱对胰腺癌细胞凋亡的影响及其信号通路调控机制。方法:不同浓度血根碱(2,4,6μmol·L~(-1))处理小鼠胰腺癌Panc02细胞不同时间(24,48,72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测血根碱对细胞生长抑制作用的影响;采用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒通过流式细胞仪检测血根碱对Panc02细胞凋亡影响;采用花青染料(JC-1)探针试剂盒荧光染料分析检测线粒体膜电位的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),总磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)的表达情况。结果:与空白组比较,不同浓度的血根碱作用同一时间后,随着药物浓度的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05),与空白组比较,同一浓度作用不同时间后,随着时间的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率无明显升高,与空白组比较,血根碱4,6μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率均明显升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组时红绿荧光无变化,血根碱4,6μmol·L~(-1)组红色荧光减弱,绿色荧光增强,Panc02细胞线粒体膜电位降低;与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组处理的Bax,Bcl-2,p-PI3K,p-Akt,Akt和PI3K蛋白表达均无变化,血根碱6μmol·L~(-1)组Bax蛋白表达增高,Bcl-2及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白p-PI3K,p-Akt表达降低(P0.05)。结论:血根碱通过抑制PI3K/Akt信号通路有效地诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径发生凋亡。     

臭牡丹含药血清通过PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞的影响

目的:从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路角度探讨臭牡丹含药血清对肝癌MHCC97-H细胞的影响及可能的机制。方法:臭牡丹15%含药血清作用于MHCC97-H细胞,细胞增殖/毒性法(CCK-8)观察臭牡丹含药血清对细胞增殖的影响,以筛选最佳作用时间和浓度; Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对PI3K/Akt信号通路中关键蛋白中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN),磷酸化Akt(p-Akt)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测臭牡丹含药血清作用于细胞72 h后对核转录因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的影响。结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。其中高剂量组抑制作用最为明显,在24,48,72 h的最大抑制率分别达到28%,32%,43%;流式细胞术结果显示,与空白组比较,随着臭牡丹含药血清浓度的增加,细胞的生长均受不同程度抑制,细胞的凋亡比例亦相应增加,72 h干预组抑制作用显著(P 0. 01),臭牡丹含药血清组各时间段最大凋亡率达19. 48%,19. 72%(P 0. 05); Western blot结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清干预下各组PTEN表达量均升高(P 0. 05),PI3K,p-Akt蛋白表达均减少(P 0. 05); Real-time PCR结果显示,与空白组比较,臭牡丹含药血清可以下调NF-κB mRNA表达,上调TNF-αmRNA的表达(P 0. 05)。结论:臭牡丹含药血清可以有效抑制MHCC97-H肝癌细胞增殖并促进其凋亡,可能与PI3K/Akt信号通路并影响其关键因子有关。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。     

电针通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路调节抑郁大鼠糖代谢紊乱

目的:探讨电针“足三里”改善应激后抑郁大鼠糖代谢紊乱的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组,每组10只。采用慢性束缚应激复制抑郁大鼠模型。电针组造模期间同时进行双侧“足三里”电针干预,每次30 min,每日1次,持续4周。造模前后记录大鼠体质量并计算体质量增加量;造模结束后行糖水偏好实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学;生化法检测大鼠血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平;HE染色、PAS染色观察大鼠肝脏组织病理形态及肝糖原含量;Western blot法检测肝脏组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、糖原合成酶激酶-3(GSK3β)、p-GSK3β蛋白表达量。结果:与空白组相比,模型组大鼠体质量增加量、糖水偏好指数降低(P<0.01),游泳不动时间延长(P<0.01),血清中葡萄糖含量及糖化白蛋白水平升高(P<0.05),肝脏组织中p-Akt蛋白表达量及p-Akt/Akt比值降低(P<0.001),p-GSK3β蛋白表达量及p-GSK3β/GSK3β比值升高(P<0.01,P<0.00...     

安胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠PI3K/Akt信号传导通路的影响

目的:从PI3K/Akt信号传导通路角度探讨安胃汤对慢性萎缩性胃炎模型大鼠疗效的作用机制。方法:采用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)慢性萎缩性胃炎大鼠模型,应用安胃汤进行干预;运用HE染色观察安胃黏膜组织形态改变;采用实时荧光定量PCR方法、Western blot检测PTEN、PI3K、Akt、PDK1、XIAP基因表达及其蛋白含量的水平。结果:安胃汤能够明显改善CAG大鼠胃组织的病理变化,该方可以明显上调PTEN基因以及其蛋白含量的表达,下调PI3K、Akt、PDK1、XIAP基因以及其蛋白含量的表达。结论:安胃汤能够明显改善CAG大鼠胃组织的病理变化,具有明显的抗CAG作用,其作用机制可能通过提高PTEN基因及蛋白的表达,降低PI3K、PDK1、Akt基因及蛋白表达,抑制CAG大鼠胃黏膜细胞P13K/Akt信号传导通路,降低XIAP基因及蛋白,促进胃黏膜细胞凋亡,可能是安胃汤防治CAG的关键机制之一。     

桦木酸通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及自噬

目的 研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的调控作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,确定最佳给药时间及给药浓度,用于后续实验;设置空白组、桦木酸低、中、高浓度组。采用苏木素-伊红（HE）染色观察桦木酸对SW620细胞形态的影响。采用Annexin-V/碘化丙啶（PI）双染法检测SW620细胞凋亡率。分别采用Hoechst33258染色及细胞自噬染色（MDC）观察细胞凋亡和自噬体发生情况。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）,微管相关蛋白Ⅰ轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、自噬关键分子酵母Atg6同系物-1（Beclin-1）、p62、磷酸化（p）-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果 桦木酸以浓度、时间依赖性的方式抑制SW620、HT29、HCT116细胞的活性;与桦木酸给药24 h比较,W620、HT29、HCT116细胞给药48 h细胞活性明显降低（P<0.05,P<0.01）,给药48 h的半数抑制浓度（IC₅₀）显著降低（P<0.01）,其中SW620细胞给药48 h的IC₅₀最小。HE染色、Hoechst33258染色显示,桦木酸组可见浓度依赖性细胞凋亡;MDC染色可见细胞自噬体数量增加。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组Bax、Caspase-9、cleaved Caspase-3、LC3Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,桦木酸中、高浓度组Beclin-1蛋白表达显著升高（P<0.01）;桦木酸低、中、高浓度组p62、p-Akt、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 桦木酸对SW620细胞活性有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导人结肠癌细胞SW620的凋亡及自噬有关。     

芹菜素通过PI3K/Akt和MAPK信号通路诱导人大肠癌CL187细胞凋亡

目的 观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法 选择人大肠癌CL187细胞,利用芹菜素（0、30、45、60 mg·L^-1）进行干预后,采用噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芹菜素对CL187细胞胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）观察芹菜素对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中Akt、磷酸化（p）-Akt及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,芹菜素组细胞存活率显著降低,细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）;与空白组比较,芹菜素组细胞克隆数和克隆形成率显著降低,克隆形成抑制率显著升高（P<0.01）;不同浓度芹菜素干预CL187细胞48 h,与空白组比较,在荧光显微镜下可观察到细胞核固缩,染色质凝聚,细胞荧光反应增强等典型的细胞凋亡特征;与空白组比较,芹菜素组（45、60 mg·L^-1）抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01）,芹菜素组促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,芹菜素组促凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平明显上调（P<0.05,P<0.01）,芹菜素组（45、60 mg·L^-1）促凋亡蛋白Bax蛋白表达显著上调（P<0.01）,芹菜素组抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,芹菜素组（60 mg·L^-1）Akt蛋白表达显著下调（P<0.01）,芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著下调（P<0.01）,芹菜素组JNK、p-JNK蛋白表达明显上调（P<0.05,P<0.01）,芹菜素组（60 mg·L^-1） p38 MAPK蛋白表达明显上调（P<0.05）,芹菜素组p-p38 MAPK蛋白表达显著上调（P<0.01）,芹菜素组p-Akt/Akt明显降低（P<0.05,P<0.01）,芹菜素组p-ERK1/2/ERK1/2显著降低（P<0.01）,芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-JNK/JNK明显升高（P<0.05,P<0.01）,芹菜素组p-p38 MAPK/p38 MAPK显著升高（P<0.05,P<0.01）。结论 芹菜素可抑制大肠癌CL187细胞增殖并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和调控MAPK信号通路相关蛋白的表达有关。     

新藤黄酸通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的:探讨新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制。方法:MTT试验检测新藤黄酸对B16细胞增殖抑制的作用;采用Hochest 33258荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;透射电镜观察新藤黄酸对B16细胞的超微结构的改变;Western blot法检测PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,p-mTOR,PTEN蛋白的变化以探讨新藤黄酸诱导B16细胞凋亡的分子机制。结果:新藤黄酸对黑色素瘤细胞B16生长和增殖有明显地抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加和作用时间的延长细胞活力明显下降;Hochest 33258染色结果显示,新藤黄酸处理的细胞中呈现明显的凋亡特征;透射电镜观察发现新藤黄酸作用B16细胞后,细胞发生明显凋亡的形态学变化;Western blot检测表明p-PI3K蛋白表达呈时间依赖性下降;p-Akt蛋白表达呈时间依赖性下降,而PI3K,Akt蛋白表达量基本不变,p-mTOR蛋白的表达随着时间的延长有所下降,PTEN蛋白的表达呈时间依赖性增加。结论:新藤黄酸在一定的时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

异硫氰酸苯乙酯抑制PI3K/Akt通路激活从而促进肺癌细胞凋亡

目的：观察异硫氰酸苯乙酯（PEITC）诱导肺癌NCI-H446细胞凋亡的分子机制。方法：体外培养NCI-H446细胞,分别用10,30和50μmol/L PEITC作用24h,MTT法和流式细胞术分别检测细胞的增殖与凋亡;Western blot检测Akt磷酸化、细胞内凋亡相关蛋白bcl-2及Bax的含量。结果：不同PEITC处理后,可显著抑制NCI-H446细胞增殖,并诱导其凋亡。PEITC处理后,细胞内bcl-2含量显著高于对照组,同时,bax含量有所降低。PEITC也能抑制NCI-H446细胞中Akt的磷酸化水平。结论：PEITC可能通过影响PI3K/Akt的活性而发挥促凋亡作用。     

葛根素通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调节HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:观察葛根素对胰岛素抵抗Hep G2细胞内磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号分子的影响。方法:通过0.5 mmol·L~(-1)棕榈酸联合9×10~(-4)U·L~(-1)胰岛素孵育24 h诱导Hep G2胰岛素抵抗细胞模型,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率以确定葛根素给药浓度。实验设正常组、模型组和葛根素各剂量组(40,80,160,320μg·L~(-1))。葡萄糖检测试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖的含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量,肝糖原测定试剂盒测定Hep G2细胞内肝糖原含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内PI3K,Akt,磷酸化(p)-Akt,GSK-3β,p-GSK-3β的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组Hep G2细胞葡萄糖消耗率明显下调(P0.05),细胞内糖原含量减少(P0.05),细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量增加(P0.05),PI3K和p-Akt蛋白表达下降(P0.05),GSK-3β蛋白表达增加(P0.05);与模型组比较,葛根素可呈剂量依赖性增加细胞葡萄糖消耗率(P0.05),增加细胞内肝糖原含量(P0.05),降低细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量(P0.05),增加PI3K蛋白表达,上调Akt蛋白磷酸活化水平(P0.05),下调GSK-3β蛋白表达并增强其磷酸失活水平(P0.05)。结论:葛根素可通过增强PI3K/Akt/GSK-3β信号转导过程,增加肝细胞内糖原含量从而改善Hep G2细胞的胰岛素抵抗状态。