活骨胶囊含药血清对软骨细胞金属蛋白酶分泌的影响

为研究活骨胶囊对软骨细胞金属蛋白酶分泌的影响作用,取24孔软骨细胞培养板分为含空白兔血清组、兔血清对照组、活骨胶囊组、西乐葆组及兔血清 IGF-1 3ng·ml-1组、兔血清 IGF-1 10ng·ml-1组,除空白兔血清组外其他各组各孔中同时分别加入100U·ml-1 IL-1β,培养5天后收集各孔上清液,采用ELISA法检测MMP-1、MMP-13、TIMP-1水平.结果表明活骨胶囊含药血清可调节由IL-1β诱导软骨细胞产生的MMP及TIMP-1分泌水平,使其处于平衡状态.     

抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的探讨抗骨增生胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖、分化及骨保护蛋白(OPG)和核因子-кB受体活化子配体(RANKL)蛋白表达的影响。方法采用中药血清药理学方法制备含抗骨增生胶囊大鼠血清。取乳鼠颅骨,利用复合胶原蛋白酶反复消化,离心,体外培养成骨细胞。加入不同浓度的抗骨增生胶囊含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测中药血清对成骨细胞增殖的影响,测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Western Blot检测OPG和RANKL蛋白表达。结果成骨细胞经抗骨增生胶囊含药血清作用后,细胞的生长呈现不同程度的增殖,中、高剂量中药组在24、48、72 h均有明显的促进作用(P0.01),且呈剂量依赖性。低剂量中药组在24、48 h时与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05),72 h时作用较强(P0.05)。除低剂量组培养24 h外,低、中、高剂量中药组培养24、48、72 h后,ALP分泌均呈不同程度增加,均有明显的促进作用(P0.01)。成骨细胞经过抗骨增生胶囊含药血清低、中、高剂量作用72 h后,对比值进行统计分析,与空白对照组比较,OPG表达明显升高(P0.01),RANKL表达明显降低(P0.01)。结论抗骨增生胶囊含药血清可以促进成骨细胞的增值、分化,从而促进骨形成。     

风湿宁胶囊含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨风湿宁胶囊(FSN)含药血清干预对CIA-FLS细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测各组血清干预24、48、72 h后对CIA-FLS细胞增殖状态的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察各组血清干预48 h后对CIA-FLS细胞早期和晚期凋亡情况的影响。结果:CCK-8法结果表明,在24 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖无抑制作用;在48 h,20%FSN含药血清和10%FSN含药血清干预对CIA-FLS细胞的增殖都表现出不同程度的抑制。在72 h,FSN各浓度(20%、10%和5%)含药血清对CIA-FLS细胞增殖均可见显著的抑制效果,其中20%风湿宁胶囊含药血清效果最好。Annexin V-FITC/PI双染检测结果表明,风湿宁胶囊含药血清各浓度(20%、10%和5%)组都不同程度地提高了细胞总凋亡率,其中20%风湿宁胶囊含药血清组对CIA-FLS细胞凋亡促进作用最强。结论:风湿宁胶囊含药血清对CIA-FLS细胞增殖的抑制及凋亡的促进可能是其治疗类风湿关节炎的机制之一。     

益骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞分泌NO、NOS的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清对体外培养的大鼠成骨细胞(OB)表达NO、NOS的影响.方法:(1)将40只12月龄SD大鼠分为益骨胶囊组(高、中、低剂量组)和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清;确定最佳灌胃剂量组和最佳血清添加浓度.(2)分离、培养新生SD大鼠的颅骨成骨细胞,传至第3代后分为2组(含药血清组和空白血清对照组),分别在培养24 h、48 h和72 h后用RT-PCR和试剂盒检测OB表达NOSmRNA的量及其活性变化和OB分泌NO的量.结果:益骨胶囊含药血清组在24h、48 h和72 h时OB表达NOSmRNA的量及其活性和分泌NO的量均明显高于空白血清对照组(P＜0.01或P＜0.05).结论:益骨胶囊含药血清能促进OB NO的分泌和NOS的表达,提示这可能是该方防治骨质疏松的机理之一.     

左归丸对去势大鼠血清基质金属蛋白酶的影响

目的:观察左归丸对去势大鼠血清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的影响,探讨左归丸抗骨质疏松的作用机制。方法:将48只6月龄雌性SD大鼠随机分为模型组、正常组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组和假手术组。除假手术组外,其余组均采用双侧切除大鼠卵巢的方法制备去势大鼠,造模后进行治疗干预,持续3个月。ELISA法检测血清中MMP-2、MMP-9和MMP-13的含量。结果:与假手术组相比,模型组血清中MMP-2、MMP-9和MMP-13含量均有不同程度的升高(P 0. 05);与模型组相比,西药组和中药高剂量组血清中MMP-2、MMP-9和MPP-13含量均有不同程度的下降(P 0. 05)。结论:左归丸可通过降低去势大鼠血清中的MMP-2、MMP-9和MMP-13的含量,从而抑制骨细胞的功能活性,降低骨质的吸收破坏。     

建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及基质金属蛋白酶表达的影响

目的：通过观察建中理劳汤含药血清对转移生长因子-β1（TGF-β1）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）增殖、基质金属蛋白酶及其抑制酶表达的影响,探讨建中理劳汤治疗慢性肾衰纤维化的机制。方法：体外培养HBZY-1细胞,制备理劳汤含药血清,实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组、空白血清组、建中理劳汤低、高剂量组和尿毒清组,通过乳酸脱氢酶（LDH）检测方法观察含药血清对HBZY-1细胞的毒性作用;通过CCK8方法观察各组HBZY-1细胞形态和增殖的情况;通过ELISA方法检测各组HBZY-1细胞中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其抑制酶TIMP-1、TIMP-2表达的情况。结果：建中理劳汤含药血清对HBZY-1细胞无毒性作用（P>0.05）;与模型组相比,建中理劳汤可明显抑制TGF-β1诱导的HBZY-1细胞的增殖（P<0.05）;建中理劳汤可明显增加MMP-2、MMP-9的表达（P<0.05）,同时抑制TIMP-1、TIMP-2的表达（P<0.05）。结论：建中理劳汤含药血清可明显抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞的增殖,并通过影响基质金属蛋白酶及其抑制酶的表达改善慢性肾衰纤维化。     

壮骨止痛胶囊含药血清对大鼠成骨样细胞增殖分化影响的实验研究

【目的】观察壮骨止痛胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响,为明确壮骨止痛胶囊防治骨质疏松症的作用机制提供实验依据。【方法】取2代培养的大鼠成骨细胞,在壮骨止痛胶囊含药血清为40％的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成,碱性磷酸酶(ALP)测定成骨细胞增殖和分化,噻唑蓝(MTT)法测成骨细胞生长曲线。【结果】成骨细胞在6d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,壮骨止痛胶囊含药血清可促进成骨细胞的增殖、ALP的分泌。【结论】壮骨止痛胶囊含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化。壮骨止痛胶囊含药血清可能通过直接促进成骨细胞增殖、分化,从而防治骨质疏松症。     

加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞-T6 (HSC-T6)增殖与凋亡的影响.方法 以不同浓度的加味四逆散含药血清[(加味四逆散低浓度组(含生药量0.78 g/ml)、加味四逆散中浓度组(含生药量1.56 g/ml)、加味四逆散高浓度组(含生药量3.12 g/ml)]作用于体外培养的HSC-T6细胞,作用时间分别为12、24、48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6.采用流式细胞仪和TUNEL法检测对HSC-T6凋亡的影响.结果 ①加味四逆散含药血清作用于大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到抑制,呈时间和浓度依赖性,加味四逆散各浓度组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);加味四逆散高浓度组[48 h:(0.399±0.041)％]与鳖甲软肝片组[48 h:(0.429±0.037)％]比较差异有统计学意义(P＜0.05).②流式细胞仪分析结果:与空白对照组比较,加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12、24、48 h后,细胞凋亡增加.与鳖甲软肝片组[12 h:(8.31±0.30)％,24 h:(16.25±0.25)％,48 h:(27.12±0.39)％]比较,加味四逆散中浓度组[12h: (17.83±0.25)％,24 h:(26.06±0.26)％,48h:(39.30±2.25)％]、加味四逆散高浓度组[12h:(27.15±0.29)％,24h:(38.96±0.51)％,48h:(49.34±0.77) ％]细胞凋亡均增加(P＜0.05).③TUNEL检测,与鳖甲软肝片组[(30.0±3.92) ％]比较,加味四逆散各浓度[低浓度组(25.1±1.48)％、中浓度组(39.30±2.25)％、高浓度组(39.30±2.25)％]药物血清作用48 h后,细胞凋亡率均增加(P＜0.01).结论 加味四逆散含药血清可抑制体外HSC-T6的增殖、促讲其凋亡,以高剂量作用48 h最明显.     

五苓散含药血清对大鼠系膜细胞增殖性及细胞外基质的影响

目的:观察五苓散含药血清是否能够抑制内皮素刺激下,体外培养的大鼠系膜细胞的增生及纤维连接蛋白(fibronection,FN)、层粘连蛋白(lam in in,LN)和Ⅳ型胶原(Ⅳtype collagen,ColⅣ)的分泌。方法:采用常规血清药理学方法,以内皮素(endothelin,ET)-1为刺激因子,用MTT法检测五苓散含药血清对细胞增殖性的影响;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质中FN、LN及ColⅣ的含量。结果:五苓散含药血清可以抑制内皮素刺激下体外培养的大鼠系膜细胞的增生及纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)的分泌。结论:系膜细胞是五苓散治疗肾病的重要靶细胞,五苓散可以拮抗内皮素对系膜细胞的作用,这是其发挥疗效的作用机理之一。     

冠心舒通胶囊含药血清对AGEs诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨冠心舒通胶囊含药血清对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:分别以0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊内容物对大鼠灌胃给药28d制备冠心舒通胶囊含药血清;以各剂量含药血清单独或联合体外制备的AGE-牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理原代培养大鼠VSMCs,MTT法检测各处理组细胞增殖水平、RT-PCR检测细胞血小板源性生长因子-B(PDGF-B)mRNA表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清PDGF-B浓度。结果:40mg/L终浓度AGE-BSA显著增强VSMCs增殖水平(P<0.05),0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清对正常VSMCs生长未见显著影响(P>0.05),但显著抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖(P<0.05),作用具有明显的剂量依赖性。AGE-BSA诱导VSMCs PDGF-B表达与分泌显著增强(P<0.05),1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清可有效抑制AGE-BSA这一作用(P<0.05),0.5g/kg剂量血清对AGE-BSA这一作用则未见明显影响(P>0.05)。结论:冠心舒通胶囊可剂量依赖性抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,作用机制与抑制AGE诱导的PDGF-B表达与分泌有关。     

黄瓜香含药血清对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察黄瓜香含药血清在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法制备黄瓜香含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察黄瓜香含药血清对K562细胞增殖的影响,采用wright-Giemsa染色观察肿瘤细胞形态学变化.采用caspase-3活性检测试剂盒检测K562细胞内caspase-3的酶活力水平.结果:不同浓度黄瓜香含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂童依赖关系.高剂量黄瓜香含药血清对K562细胞形态学有明显的影响.在黄瓜香含药血清处理K562细胞24 h后,caspase-3活性均显著增加,随黄瓜香含药血清浓度的升高呈现较好的剂量依赖性.结论:黄瓜香含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖及诱导凋亡的作用,其作用强度与时间一浓度呈正相关.其作用机理可能与其直接细胞毒作用及提高caspage-3酶的活性有关.     

定心胶囊对房颤大鼠血栓素B2及基质金属蛋白酶9的影响

目的 观察定心胶囊对房颤大鼠血栓素B2(TXB2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,探讨其预防房颤的作用机理.方法 采用氯化钙-乙酰胆碱混合液以鼠尾静脉给药的方式建立房颤的动物模型.筛选典型房颤心电图表现的大鼠,随机分为房颤模型组、定心胶囊治疗组、维拉帕米对照组及正常组.定心胶囊治疗组、维拉帕米对照组给药4周后,测定血清中TXB2、MMP-9的含量.结果 定心胶囊治疗组与房颤模型组比较,血清中TXB2、MMP-9的含量明显降低,均P<0.05,差异有统计学意义;定心胶囊治疗组与西药对照组比较,房颤大鼠血清中TXB2、MMP-9的含量均降低,且定心胶囊治疗组优于西药对照组.结论 定心胶囊能降低血清中TXB2、MMP-9的含量,是防治房颤的有效药物.     

补肾壮骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖及骨保护素mRNA表达的影响

目的:观察补肾壮骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨其防治骨质疏松的机理。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠分为补肾壮骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和空白对照组制备含药血清和空白对照血清;取1天龄SD大鼠颅盖骨,分离、培养成骨细胞(OB),分别加入各实验血清组培养液培养OB,倒置相差显微镜下观察OB生长情况,MTT法测定OB的OD值,RT-PCR检测各组成骨细胞OPGmRNA表达。结果:3-8天时,补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组成骨细胞OD值均高于空白对照组(P<0.05)。各含药血清组成骨细胞OPGmRNA表达均高于空白对照组(P<0.01);补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组间比较,差异无显著意义(P<0.05)。结论:补肾壮骨胶囊含药血清组能促进OB增殖、上调OPGmRNA表达,可能是其防治骨质疏松的机制之一。     

益肺饮含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响

目的:研究中药复方益肺饮不同浓度含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响。方法:将SD小鼠分为2组,分别灌胃益肺饮和0. 9%氯化钠注射液,获得5%、10%、15%、20%的益肺饮含药血清和10%无药血清。A549细胞进行培养后分为实验组、对照组和空白对照组,实验组加入不同浓度的含药血清,对照组加入10%无药血清,空白对照组加入10%胎牛血清。采用CCK-8法观察各组血清对A549细胞的增殖影响;采用流式细胞仪检测不同浓度含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组相比,各浓度益肺饮含药血清对A549细胞均有明显的增殖抑制作用(P 0. 05),其抑制率随药物浓度递增而增强,5%含药血清组与20%含药血清组相比,差异有统计学意义(P 0. 05)。流式细胞术检测结果表明,不同浓度下含药血清组凋亡率明显优于对照组及空白对照组(P 0. 05);不同浓度含药血清组组内比较,5%、10%、15%各浓度之间两两比较差异有统计学意义(P 0. 05),但15%与20%浓度组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:益肺饮含药血清对肺癌A549细胞具有明显的增殖抑制、诱导凋亡的作用,并具有一定的浓度依赖性。     

丹黄通脉方对颈动脉粥样硬化大鼠血清基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

目的探讨丹黄通脉方对颈动脉粥样硬化斑块的影响及可能作用机制。方法 30只SD大鼠随机分为空白组、模型组、丹黄通脉方组,每组10只。模型组、丹黄通脉方组采用高脂复合饲料及腹腔注射维生素D3法制作颈动脉粥样硬化模型。造模成功后丹黄通脉方组给予丹黄通脉方10 ml/(kg·d)灌胃,空白组及模型组给予等量蒸馏水,每日2次,连续6周。观察各组大鼠颈动脉病理形态学变化,测定血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)水平。结果光镜下观察显示,模型组血管内膜明显增厚,泡沫样细胞堆积,弹力纤维层不同程度破坏、断裂。丹黄通脉方组血管内膜稍增厚,可见少量泡沫样细胞形成,弹力纤维层稍紊乱,程度较模型组轻。与空白组比较,模型组和丹黄通脉方组颈动脉内膜、中膜面积比(I/M)、MMP-9、TIMP-1均明显升高(P0.05);与模型组比较,丹黄通脉方组大鼠I/M、血清MMP-9水平明显降低(P0.05或P0.01)。结论丹黄通脉方能够下调MMP-9水平,可能是改善颈动脉粥样硬化和稳定斑块的作用机制之一。     

疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨疏血通脉胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)凋亡的影响以及作用机制。方法:体外培养大鼠BMSCs,以不同浓度双氧水(H2O2)诱导BMSCs凋亡,取最适宜浓度1.0 mmol·L~(-1)用于实验。疏血通脉胶囊低、中、高剂量(含生药1.81,3.62,7.24 g·kg~(-1))灌胃给药制备大鼠含药血清。选择第3代BMSCs,随机分正常组(不做处理,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液),模型组(H2O2诱导细胞凋亡,加入体积分数为15%正常大鼠血清培养液)和疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组(H2O2诱导细胞凋亡,分别加入对应剂量、体积分数为15%的疏血通脉胶囊含药血清培养液),共5组,作用24 h后噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA的表达。结果:H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导BMSCs凋亡。MTT结果显示疏血通脉胶囊低、中、高剂量含药血清组细胞存活率较模型组有明显提高(P0.01),且存活率随剂量增加而增高(P0.05);Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果显示疏血通脉胶囊含药血清可以降低H2O2诱导的BMSCs凋亡率(P0.01)。Real-time PCR结果显示H2O2诱导可以增加BMSCs的Caspase-3 mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA表达。疏血通脉胶囊含药血清处理下调了Caspase-3 mRNA的表达(P0.01),上调了Bcl-2 mRNA的表达(P0.01)。结论:疏血通脉胶囊含药血清可通过上调Bcl-2基因表达,负性调控Caspase-3基因,从而抑制H2O2导致的BMSCs凋亡。     

丹参含药血清对大鼠肝星状细胞增殖及视黄酸受体的影响

目的:为研究丹参含药血清对大鼠肝星状细胞增殖及视黄酸受体的影响。方法:将30只SD大鼠随机分为丹参1.04 g/kg组、丹参2.08 g/kg组、丹参4.17 g/kg组、秋水仙碱组、空白组,制备含药血清。MTT法筛选血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)刺激HSCs增殖的最佳作用浓度。CCK-8法检测丹参含药血清对肝星状细胞增殖影响。体外培养肝星状细胞,除空白组外,其余各组均先予所得血小板衍生生长因子BB最佳浓度刺激,再给予相应的含药血清干预,培养于37℃、5%CO2孵箱中,24 h后收集细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定视黄酸受体(RXR-α)mRNA,用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)及RXR-α蛋白的表达情况。结果:与秋水仙碱组相比,丹参4.17 g/kg组及丹参2.08 g/kg组上调RXR-αmRNA表达,减少α-SMA、CollagenⅠ,增加RXR-α含量。结论:丹参含药血清对肝星状细胞的增殖有抑制作用,从而发挥抑制肝纤维化作用,其机制可能与促进视黄酸受体表达有关。     

壮药红桃抗乳腺增生胶囊对乳腺增生大鼠影响实验研究

目的：对壮药红桃抗乳腺增生胶囊进行药效学研究。方法：建立大鼠乳腺增生模型,观察壮药红桃抗乳腺增生胶囊的治疗效果。结果：壮药红桃抗乳腺增生胶囊能明显降低大鼠的乳头高度,缩小增生的乳腺腺泡体积,减轻导管扩张程度,减少分泌现象,各指标改善情况与模型组比较差异有统计学意义,P〈0．05。结论：壮药红桃抗乳腺增生胶囊具有一定的抑制乳腺增生作用。     

宁心红杞含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制

目的探讨宁心红杞含药血清对离体大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养的卵巢颗粒细胞中用氯化镉造模,加入宁心红杞含药血清共同作用24 h后收集颗粒细胞,通过流式细胞仪观察其凋亡现象和用酶标法检测caspases-3蛋白的表达。结果流式细胞仪结果显示宁心红杞含药血清可明显改善氯化镉导致的颗粒细胞凋亡,凋亡峰较模型组明显降低;含药血清组明显降低caspases-3的表达,与模型组相比有显著性差异（P〈0.01）。结论宁心红杞可通过降低caspases-3蛋白的表达来改善颗粒细胞的凋亡,延缓卵巢衰老。