补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路影响的研究

目的：探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响。方法：以“大黄 利血平 控制饮食”多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,随机分为补中益气汤低、中、高剂量组和脾虚泄泻模型组,观察大鼠造模及给药后泄泻指数及肠粘膜Na -K ATP酶的变化,采用western blot法检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠氢交换体3（NHE3）、P38MAPK、p- P38MAPK、MAPKAPK2、p-MAPKAPK2、AKT2、p-AKT2、EZRIN、p-EZRIN蛋白的表达。结果：补中益气汤给药后腹泻指数有不同程度的的下降,以补中益气汤中、高剂量组较为明显（P<0.01或P<0.05）,脾虚泄泻大鼠小肠粘膜Na -K ATP酶活性与正常对照组比较显著降低（P<0.01）,而补中益气汤有提高Na -K ATP酶活性的作用。脾虚泄泻大鼠小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3、 P- P38MAPK、P-MAPKAPK2、P-Akt2、P-Ezrin蛋白表达量较正常组减低（P<0.01）,经补中益气汤治疗后SGLT1、GLUT2、NHE3及P- P38MAPK、P-MAPKAPK2、P-Akt2、P-Ezrin蛋白表达量均有所提高（P<0.01或P<0.05）。结论：补中益气汤可能通过提高SGLT1蛋白的表达,促进P38 MAPK/Ezrin通路中蛋白的磷酸化,进而促进包浆内NHE3募集到顶端膜,从而增加水钠的吸收,这可能是补中益气汤治疗腹泻的机理之一。     

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠小肠黏膜修复及葡萄糖吸收相关转运体的影响

目的:探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠小肠黏膜修复及葡萄糖相关转运体表达的影响。方法:以"大黄+利血平+控制饮食"多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,随机分为补中益气汤低、中、高剂量组和脾虚泄泻模型组,采用HE染色观察大鼠小肠黏膜组织病理学改变,并检测大鼠体质量、尿D-木糖排泄率及小肠葡萄糖吸收量,采用荧光定量RT-PCR检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠氢交换体3(NHE3)mRNA的表达。结果:脾虚泄泻大鼠小肠绒毛部分损伤,表面上皮缺失,补中益气汤可促进小肠黏膜的修复;与正常对照组比较,造模后大鼠尿D-木糖排泄率和葡萄糖吸收量显著降低(P0.05或P0.01);经补中益气汤治疗后尿D-木糖排泄率及葡萄糖吸收量升高。模型组大鼠小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3 mRNA表达量均显著低于正常对照组(P0.01);给予补中益气汤后SGLT1、GLUT2、NHE3 mRNA表达量均不同程度提高,其中以高剂量组作用最佳(P0.05或P0.01)。结论:补中益气汤可促进脾虚泄泻大鼠小肠黏膜损伤的修复,上调SGLT1、GLUT2、NHE3mRNA表达,从而促进葡萄糖及水、钠的吸收。     

补中益气汤含药血清对caco-2细胞SGLT1、P38MAPK通路及NHE3表达影响的研究北大核心CSCD

目的探讨补中益气汤含药血清对人结肠腺癌细胞(caco-2细胞)钠葡萄糖共转运体蛋白1(SGLT1)、P38MAPK通路及钠-氢交换体3(NHE3)蛋白及基因表达的影响。方法根据血清药理学方法制备补中益气汤含药血清,将caco-2细胞分为正常组、根皮苷组、根皮苷+补中益气汤含药血清组和根皮苷+空白大鼠血清组。检测各组SGLT1蛋白和基因、P38MAPK/Ezrin通路蛋白和NHE3蛋白的表达。结果与根皮苷组比较,根皮苷+补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1蛋白表达有所上调(P <0.05),且呈浓度依赖关系;根皮苷+15%补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1mRNA,NHE3蛋白及P38MAPK/Ezrin通路磷酸化蛋白表达均有所增加,与根皮苷组比较差异有显著性(P <0.05);根皮苷+补中益气汤含药血清组的SGLT1mRNA及NHE3、P-P38MAPK、P-Ezrin蛋白表达均高于根皮苷+15%空白血清组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论补中益气汤含药血清可上调caco-2细胞SGLT1的基因和蛋白表达、增加NHE3蛋白表达,这可能与其促进P38MAPK和Ezrin磷酸化有关。     

补中益气汤含药血清对caco-2细胞SGLT1、P38MAPK通路及NHE3表达影响的研究

目的探讨补中益气汤含药血清对人结肠腺癌细胞(caco-2细胞)钠葡萄糖共转运体蛋白1(SGLT1)、P38MAPK通路及钠-氢交换体3(NHE3)蛋白及基因表达的影响。方法根据血清药理学方法制备补中益气汤含药血清,将caco-2细胞分为正常组、根皮苷组、根皮苷+补中益气汤含药血清组和根皮苷+空白大鼠血清组。检测各组SGLT1蛋白和基因、P38MAPK/Ezrin通路蛋白和NHE3蛋白的表达。结果与根皮苷组比较,根皮苷+补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1蛋白表达有所上调(P 0.05),且呈浓度依赖关系;根皮苷+15%补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1mRNA,NHE3蛋白及P38MAPK/Ezrin通路磷酸化蛋白表达均有所增加,与根皮苷组比较差异有显著性(P 0.05);根皮苷+补中益气汤含药血清组的SGLT1mRNA及NHE3、P-P38MAPK、P-Ezrin蛋白表达均高于根皮苷+15%空白血清组,差异有统计学意义(P 0.05)。结论补中益气汤含药血清可上调caco-2细胞SGLT1的基因和蛋白表达、增加NHE3蛋白表达,这可能与其促进P38MAPK和Ezrin磷酸化有关。     

代谢综合征患者中医体质分析

目的探讨黄芪对脾虚证大鼠模型小肠黏膜葡萄糖吸收功能的影响及其作用机制。方法采用皮下连续注射利血平注射液(0.5 mg·kg~(-1))14 d建立脾虚证大鼠模型。大鼠随机分为正常组、造模组,并将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄芪组(6.0 g·kg~(-1)),连续给药21 d。每日记录大鼠体质量;分别于造模结束和给药结束后收集大鼠尿液,采用硫酸苯酚法测定尿D-木糖排泄率;采用大鼠在体空肠灌流实验及葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖吸收量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定钠依赖葡萄糖转运蛋白(SGLT1)和2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)的蛋白表达;荧光定量PCR法测定SGLT1/GLUT2的m RNA表达。结果与正常组比较,造模组大鼠体质量及模型组大鼠尿D-木糖排泄率、葡萄糖吸收量、SGLT1/GLUT2蛋白相对表达量、SGLT1/GLUT2 m RNA相对表达量均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,黄芪组大鼠尿D-木糖排泄率、葡萄糖吸收量、SGLT1/GLUT2蛋白相对表达量、SGLT1/GLUT2 m RNA相对表达量均明显提高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论黄芪能够改善利血平致脾虚证大鼠小肠对葡萄糖的吸收功能,其机制可能与调节SGLT1/GLUT2的蛋白表达有关。     

电针“足三里”穴对脾气虚大鼠小肠黏膜转运体SGLT1及GLUT2表达的影响

目的:观察电针双侧"足三里"穴对脾气虚模型大鼠小肠黏膜上皮组织内的钠依赖葡萄糖转运体(SGLT1),葡萄糖运载蛋白2(GLUT2)的基因及蛋白表达的影响。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为正常组、脾气虚组、足三里组、非经非穴组,每组10只。所有大鼠均在SPF级动物实验中心饲养。除正常组外,其余3组均采用劳倦过度和不规则饮食复合法建立脾气虚证的大鼠模型。造模成功之后,对足三里组、非经非穴组大鼠分别进行电针"足三里"穴、非经非穴点干预处理7天。采用HE染色方法观察各组大鼠小肠黏膜组织形态变化;采用荧光定量PCR法检测大鼠小肠黏膜上皮的SGLT1和GLUT2的mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测大鼠小肠黏膜上皮组织内的SGLT1和GLUT2的蛋白含量变化。结果:脾气虚组大鼠小肠黏膜组织部分损伤,足三里组的小肠黏膜组织有一定程度的恢复;脾气虚组和非经非穴组大鼠小肠黏膜组织内的SGLT1和GLUT2蛋白和基因表达水平均明显低于正常组(P 0. 05);足三里组大鼠小肠黏膜组织内的SGLT1和GLUT2蛋白和基因表达水平相比于脾气虚组有所升高(P 0. 05),非经非穴组未见显著性差异(P 0. 05)。结论:电针"足三里"穴可以调节脾气虚大鼠小肠黏膜上皮组织内的SGLT1和GLUT2基因及蛋白的异常表达,参与小肠对葡萄糖的吸收作用进而改善脾气虚证。     

补中益气汤加减升麻、柴胡对脾虚泄泻大鼠胃肠、免疫功能及肠黏膜屏障的影响差异

目的 研究引经药升麻、柴胡对补中益气汤治疗脾虚泄泻的引经增效作用。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、补中益气汤全方组、补中益气汤缺升麻组、补中益气汤缺柴胡组和补中益气汤缺升麻柴胡组。除正常组外,其余大鼠采用利血平⁺大黄⁺隔日进食法复制脾虚泄泻大鼠模型。从第3周开始,各组分别灌胃相应药物,正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续给药2周。末次给药后,计算腹泻、脾脏及胸腺指数;苏木素-伊红(HE)法观察空肠组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、胃泌素(GAS)、血管活性肠肽(VIP)水平;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞百分比;Western Blot法检测空肠中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠腹泻指数...     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照、脾虚损伤、补中益气汤、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天。第18天,除空白对照组外,另三组灌服消炎痛溶液造成胃粘膜损伤,采用逆转录PCR(RT-PCR)检测TFF1mRNA,采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测TFF1蛋白表达的变化。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、TFF1蛋白表达明显降低;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、蛋白明显上调。结论:脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA、蛋白表达显著下调,提示脾虚大鼠胃粘膜防御能力减弱,补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA与蛋白的表达,这可能是补中益气汤保护胃粘膜,降低脾虚大鼠胃粘膜易损性的机理之一。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达的变化及补中益气汤对其的影响,并探讨相关机制。方法:SD大鼠称重随机分组,分为设空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天,第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天,第18天,除空白对照组外的另外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤。采用免疫组化法检测EGFR蛋白表达的变化。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达明显下调;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达明显升高。结论:补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后EGFR蛋白表达,促进受损胃粘膜的修复,该方对脾虚大鼠胃粘膜易损性复健作用的机制可能与此有关。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜MUC5ACmRNA与蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜MUC5ACmRNA与蛋白表达的变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠称重随机分为空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天,第18天,除空白对照组外的另外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤。采用逆转录PCR(RT-PCR)检测MUC5ACmRNA,用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测MUC5AC蛋白。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜MUC5AmRNA、蛋白表达有所下降,但无统计学意义;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜MUC5AC蛋白表达显著升高。结论:脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜MUC5AC蛋白表达显著下调,提示脾虚时胃粘液凝胶层防御能力下降,补中益气汤可提高脾虚大鼠MUC5AC蛋白的表达,提示该方可通过粘液蛋白MUC5AC促进胃粘液凝胶层的形成,增加胃粘液屏障防护功能,并与TFF1发挥协同增效作用,这可能是补中益气汤胃粘膜保护的机制之一。     

黄芪六一汤对2型糖尿病大鼠降糖作用的机制研究

目的:探讨黄芪六一汤对糖尿病大鼠的降糖作用及其机制。方法:采用高脂高糖饲养合并腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、达格列净阳性对照组及黄芪六一汤低、中、高剂量组。实验期间每周称体质量,尾静脉采血测量空腹血糖、糖化血红蛋白及胰岛素的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)和钠-葡萄糖转运蛋白(SGLT2)的表达;荧光定量PCR分别检测GLUT2、SGLT2 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血糖、糖化血红蛋白水平及SGLT2、GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪六一汤各组糖化血红蛋白、SGLT2蛋白表达均显著降低,GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。黄芪六一汤对模型大鼠体质量及GLUT2、SGLT2 mRNA表达无明显影响。结论:黄芪六一汤对高脂高糖饲养合并腹腔注射STZ致糖尿病大鼠具有降糖作用,治疗效果与达格列净相似,其作用机制与抑制SGLT2蛋白功能有关。     

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤LRP蛋白表达的影响

目的通过观察补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤中LRP蛋白表达影响,探讨补中益气汤治疗肺腺癌的作用机制。方法体外培养A549/DDP及A549细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予低、中、高剂量补中益气汤治疗。实验共分为10组:即A组(A549/DDP荷瘤对照组)、B组(A549/DDP荷瘤+顺铂组)、C组(A549/DDP荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组)、D组(A549/DDP荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组)、E组(A549/DDP荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组)、a组(A549荷瘤对照组)、b组(A549荷瘤+顺铂组)、c组(A549荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组)、d组(A549荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组)、e组(A549荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组)。测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织LRP蛋白的表达。结果顺铂对A549/DDP移植瘤体积无显著影响(P0.05),而使A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05,P0.05),顺铂抑瘤率均增加(P0.05,P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小,顺铂抑瘤率逐渐增加;顺铂使A549/DDP移植瘤组织中LRP蛋白表达增加(P0.05),A549移植瘤组织中LRP蛋白表达减少(P0.05);补中益气汤使A549/DDP移植瘤组织中LRP蛋白表达减少(P0.05),以中剂量效果最为显著,补中益气汤使A549移植瘤组织中LRP蛋白表达也减少(P0.05),但低、中、高剂量之间效果无显著差异。结论在对顺铂敏感及顺铂耐药的肺腺癌移植瘤组织中,补中益气汤均可使移植瘤体积缩小,顺铂的抑瘤率增加,LRP蛋白的表达下调。     

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞中整合素β1蛋白表达的影响

目的:利用补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的肺腺癌A549细胞,观察A549细胞中整合素β1的表达变化,探讨补中益气汤在肺癌侵袭和转移过程中的作用。方法:采用血清药理学方法制备含药血清,按照随机对照方法将40只SD大鼠随机分为4组,分别为补中益气汤高剂量含药血清组(11.34 g·kg-1)、补中益气汤中剂量含药血清组(5.67 g·kg-1)、补中益气汤低剂量含药血清组(2.84 g·kg-1)和空白血清组(10 m L·kg-1),每日给药一次,连续灌胃三天后提取大鼠血清,用于后续实验。将A549细胞分为空白血清组(10%大鼠空白血清)、TGF-β+空白血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠空白血清)、TGF-β+补中益气汤高剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠高剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤中剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠中剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤低剂量含药血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠低剂量含药血清)。MTT法检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞的抑制率。细胞划痕实验检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞迁移能力的影响。细胞免疫荧光技术、western blot方法检测整合素β1在蛋白水平上的表达。结果:与A549细胞空白血清组、TGF-β+空白血清组分别比较,补中益气汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清可提高对TGF-β介导的A549细胞的抑制率(IR)(P0.01),分别具有抑制TGF-β介导的A549细胞的迁移作用(P0.01),且能减少整合素β1在蛋白水平上的表达(P0.01)。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β介导的A549细胞的生长及迁移,以及能降低整合素β1在蛋白水平上的表达。     

黄芪对脾虚模型大鼠肠道粘膜经由SGLT1/GLUT2的葡萄糖吸收的影响

摘要 目的：探讨黄芪对脾虚证模型大鼠小肠粘膜葡萄糖吸收的影响，并研究其可能通过调控SGLT1/GLUT2的作用机制。方法：采用注射利血平方法建立脾虚症模型大鼠，用在体灌流技术观察黄芪对大鼠小肠粘膜的葡萄糖吸收影响并收集小肠粘膜，检测钠依赖葡萄糖转运蛋白（SGLT1）和2型葡萄糖转运蛋白（GLUT2）转运蛋白和mRNA的表达变化。结果：与正常组对比，模型组大鼠体重及尿D-木糖排泄率明显降低（P<0.01），同时葡萄糖吸收量、SGLT1和GLUT2的蛋白及mRNA表达均下降（P<0.01），与模型组相比，通过黄芪水煎液的干预治疗，各指标有得到明显的改善。结论：黄芪能够改善利血平致气虚的模型大鼠小肠对葡萄糖吸收的功能。     

补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响

目的:观察补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响。方法:将SPF级雄性SD大鼠48只随机分为空白对照组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组和美沙拉嗪组,每组各8只。采用5%葡聚糖硫酸钠溶液制备UC大鼠模型。造模结束后,补中益气汤组分别予低、中、高剂量补中益气汤灌胃,空白对照组和模型组给予生理盐水灌胃,美沙拉嗪组给予美沙拉嗪溶液灌胃,连续7天。观察大鼠结肠组织形态学改变,检测大鼠外周血清中的IL-10的含量、结肠组织中Foxp3基因表达水平及Foxp3蛋白的含量,并检测大鼠外周血、肠系膜淋巴结、结肠固有层和脾脏中Treg细胞的数量。结果:(1)与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组和美沙拉嗪组均可上调大鼠血清中IL-10含量(P0.01);(2)与模型组比较,补中益气汤低、高剂量组和美沙拉嗪组结肠组织中Foxp3的基因表达均有所升高(P0.05),各给药组大鼠结肠中的Foxp3蛋白表达均明显增加(P0.01);(3)模型组大鼠结肠固有层中的Treg细胞数量低于各组,且与补中益气汤中剂量组和美沙拉嗪组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补中益气汤可以改善DSS诱导的大鼠结肠黏膜损伤,其作用机制可能与上调损伤部位Treg细胞数量,促使Treg分泌IL-10有关。     

补中益气汤退热作用及机制的探讨

目的:探讨补中益气汤退热作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脾虚发热组、补中益气汤组共3组,每组10只.采用饮食失节+过度疲劳+注射LPS法复制脾虚发热模型.每周测体温1次.第18天开始补中益气汤组每天ig(6.83 g·kg-1),正常组和脾虚发热组给予同体积蒸馏水,每天1次,连续5d.第22天AM 8:00脾虚发热组和补中益气汤2组大鼠ip脂多糖(LPS,80μg·kg-1)诱导发热,正常组ip等体积生理盐水.测量各组大鼠ip LPS后30,60,120,180,220 min肛温及绘制体温曲线,测定下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)、前列腺素E2(PGE2).结果:与正常对照组相比,脾虚发热组大鼠体温曲线明显上抬,各观察点体温均明显升高,下丘脑PGE2和cAMP明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与脾虚发热组比较,补中益气汤组大鼠体温曲线明显下移,下丘脑PGE2和cAMP均明显下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:补中益气汤对脾虚发热模型大鼠具有明显的退热效用,其退热作用可能与降低中枢发热介质PGE2和cAMP有关.     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

辛润苦泄方通过葡萄糖转运体改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的实验研究

目的研究辛润苦泄方通过葡萄糖转运体改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗(IR)的机制。方法采用高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素方法建立2型糖尿病IR大鼠模型,将成功造模的30只大鼠随机分为模型组、唐旨宁颗粒低剂量组、唐旨宁颗粒中剂量组、唐旨宁颗粒高剂量组和吡格列酮组,每组6只。另设正常对照组。药物干预6周后,采用荧光定量PCR法检测大鼠肝脏葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA表达;采用Western-blot方法检测糖尿病大鼠肝脏组织中GLUT2和肌肉组织中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的蛋白表达。结果模型组大鼠空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)和血清胰岛素(FINS)均显著高于正常组,胰岛素敏感性指数(ISI)显著低于正常组(P0.01)。药物干预6周后,与模型组比较,各治疗组大鼠肝脏组织中GLUT2的mRNA均显著上调(P0.05);唐旨宁颗粒中、高剂量组、吡格列酮组中GLUT2和GLUT4的蛋白表达上调显著(P0.05);唐旨宁颗粒低剂量组中GLUT2和GLUT4的蛋白表达上调不显著,差异无统计学意义(P0.05)。与吡格列酮组比较,唐旨宁颗粒中、低剂量组GLUT2 mRNA表达均下调,(P0.05);唐旨宁颗粒高剂量组GLUT2 mRNA表达上调,差异无统计学意义(P0.05);中、低剂量中药组中GLUT2和GLUT4的蛋白表达均下调(P0.05);唐旨宁颗粒高剂量组中GLUT2的蛋白表达上调、GLUT4的蛋白表达下调,差异不具有统计学意义(P0.05)。结论唐旨宁颗粒高剂量组通过上调GLUT2的mRNA及GLUT2和GLUT4的蛋白表达水平,加速葡萄糖代谢,提高胰岛素敏感性,从而改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗。     

口炎清颗粒对阴虚型口腔溃疡模型大鼠的作用机制

目的观察口炎清颗粒对阴虚型口腔溃疡模型大鼠溃疡愈合的作用,初步探讨口炎清颗粒养阴功效的作用机制。方法大鼠随机分为正常组、模型组、知柏地黄丸组(1.08 g·kg~(-1))及口炎清高、中、低剂量组(8,4,2 g·kg~(-1))。通过联合使用灌胃甲状腺素和Na OH烧灼法建立大鼠阴虚型口腔溃疡复合模型;观察大鼠的体质量、饮水量、体温等一般状况;采用ELISA法检测血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)含量,计算c AMP/c GMP比值,检测红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性等指标;观察大鼠口腔溃疡的愈合情况;采用ELISA法检测模型大鼠口腔黏膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;采用Western Blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体质量减轻、饮水量增多、体温升高(P0.05,P0.01),大鼠溃疡修复评分显著降低(P0.01),血浆c AMP水平、c AMP/c GMP比值及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性均明显升高(P0.01),c GMP水平降低(P0.05),口腔黏膜组织中TNF-α、IL-6含量明显升高(P0.05),IL-10、EGF、TGF-β1含量明显降低(P0.05,P0.01),p38MAPK蛋白表达显著上升(P0.05)。与模型组比较,口炎清中、高剂量组大鼠体质量明显增加(P0.05,P0.01);各给药组大鼠的饮水量均有所减少、体温下降(P0.05,P0.01),溃疡修复评分明显升高(P0.05,P0.01);口炎清高、中剂量组大鼠血浆c AMP水平、c AMP/c GMP比值及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性均明显降低(P0.05,P0.01),口炎清中剂量组大鼠血浆c GMP水平明显升高(P0.05);口炎清高剂量组大鼠口腔黏膜TNF-α、IL-6含量均明显降低(P0.05,P0.01),口炎清高、中剂量组大鼠口腔黏膜IL-10、EGF、TGF-β1含量亦明显升高(P0.01,P0.05);口炎清各剂量组大鼠口腔黏膜组织匀浆中p38MAPK蛋白表达明显降低(P0.05),且呈剂量相关性。结论口炎清颗粒能通过其"养阴"作用促进阴虚型口腔溃疡愈合;介导p38MAPK蛋白表达,抑制炎症反应,调节生长因子水平可能是口炎清颗粒发挥养阴功效的作用机制。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜MEK/ERKmRNA表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜MEK、ERKmRNA表达变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠随机分为设空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天开始,补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天。第18天,除空白对照组外的另外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤,采用荧光定量PCR(SYBR Green I)检测MEKmRNA、ERKmRNA。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜MEKmRNA明显下降;与脾虚损伤组比较,补中益气汤20g/kg大鼠胃粘膜MEKmRNA表达明显上调,ERKmRNA显著升高。结论:补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜MEKmRNA、ERKmRNA表达水平,提示该方的胃粘膜保护、降低胃粘膜易损性等作用可能与激活MEK/ERK信号转导途径有关。