参苓白术散对溃疡性结肠炎小鼠NLPR3,NLPR6蛋白及相关炎症因子表达的影响

目的:探讨参苓白术散对3%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用及相关的作用机制。方法:60只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,柳氮磺吡啶组(0.52 g·kg~(-1)),参苓白术散高、中、低(31.2,15.6,7.8 g·kg~(-1))剂量组。除正常组外小鼠饮用3%葡聚糖硫酸钠蒸馏水1周造成UC模型。造模结束后每日给药1次,正常组和模型组按20 mL·kg~(-1)给予0.9%生理盐水,共14 d。每日观察小鼠体质量、粪便性状及隐血情况并计成疾病活动指数(DAI)评分。给药结束后取血收集血清,取小鼠结肠称质量测量长度并制作病理切片。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素-18(IL-18),IL-1β含量;苏木素-伊红(HE)及阿利新蓝-过碘酸雪夫氏(AB/PAS)染色观察结肠病理情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLPR3),NLPR6蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠DAI评分显著升高(P0.01),结肠质量增加、长度变短(P0.01);结肠黏膜病理受损严重;血清中IL-1β含量明显增高(P0.05); NLRP3蛋白表达升高,NLRP6表达降低(P0.01)。给药后,与模型组比较,SASP组与高剂量组DAI评分降低(P0.05),结肠质量、长度、病理情况均改善;血清中IL-1β含量降低(P0.05); NLRP3蛋白表达降低(P0.01),NLRP6蛋白表达上调(P0.05,P0.01)。结论:参苓白术散有治疗DSS诱导UC小鼠的作用,其作用机制可能与其调节NLRP3,NLRP6蛋白及相关炎症因子,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤有关。     

白头翁汤激活NLRP3炎症小体治疗炎症性肠病的研究

目的:探讨白头翁汤治疗炎症性肠病(IBD)的分子机制。方法:84只BALB/c小鼠随机分为7组(n=12):乙醇对照组、模型组、SASP组、白头翁汤组(低、中和高剂量组)和zVAD组。各组分别灌胃和腹腔给药。疗程结束后取小鼠结肠组织分别利用荧光定量RT-PCR、Elisa和免疫组化等方法检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18和IL-1β在结肠组织中的表达量。结果:与模型组比较,SASP组和中、高剂量白头翁汤对IBD有显著的治疗作用(P0.01),但这种治疗作用在zVAD组被抑制(P0.05)。同时,中、高剂量白头翁汤能够升高NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18和IL-1β在结肠组织的表达(P0.05),而zVAD能抑制这种上调(P0.05)。结论:白头翁汤可能通过激活NLRP3炎症小体进而促进相应的炎症因子包括IL-18及IL-1β的生成来发挥治疗IBD的作用。     

穴位埋线调控NLRP3炎症小体及IL-27表达对溃疡性结肠炎大鼠的黏膜保护作用

目的：观察穴位埋线对溃疡性结肠炎(UC)大鼠NLRP3炎症小体及IL-27表达的调控作用,探讨其治疗UC的作用机制。方法：SD大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、药物组和穴位埋线组,每组各10只。除空白组外,其余各组采用葡聚糖硫酸钠 (DSS) 法制备UC大鼠模型。药物组给予柳氮磺胺吡啶(SASP)连续灌胃14 d,穴位埋线组给予穴位简易埋线,每7 d 干预1次,共3次。观察各组大鼠一般状况,记录疾病活动度指数(DAI)、黏膜损伤指数(CMDI)和结肠长度变化;HE 染色观察大鼠结肠组织病理形态改变;ELISA测定大鼠血清IL-18、IL-1β、IFN-γ、IL-27炎性因子水平;Western-blot及RT-PCR检测大鼠结肠组织中NLRP3、caspase-1及IL-27的蛋白和mRNA表达。 结果：与模型组比较,穴位埋线治疗可有效改善 UC大鼠一般状况,降低DAI和CMDI评分,增加大鼠结肠长度,并减轻结肠组织病理损伤;同时降低了大鼠血清中IL-18、IL-1β、IFN-γ水平,升高IL-27的水平(P＜0.05);下调结肠组织中NLRP3、 caspase-1的蛋白和mRNA表达,上调了IL-27的表达(P＜0.05)。 结论：穴位埋线疗法对DSS所诱导的UC大鼠模型具有明显的治疗作用,其机制可能是通过上调IL-27的表达,抑制NLRP3炎症小体通路激活及炎性细胞因子的表达,从而减轻UC肠黏膜炎性损伤。     

芦丁对溃疡性结肠炎小鼠的干预作用及NLRP3炎症小体的影响

目的观察芦丁对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的干预作用。探讨其对NLRP3炎症小体信号分子活化的影响。方法将60只SPF级C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只。除空白组外,其余组均采用葡聚糖硫酸钠诱导建立溃疡性结肠炎模型,美沙拉嗪组同时给予美沙拉嗪缓释颗粒灌胃,芦丁高、中、低剂量组分别给予100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)芦丁溶液灌胃,空白组、模型组以等体积l%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,均连续5 d。灌胃结束后,比较各组疾病活动度(DAI)评分、组织学评分,采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清和结肠组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平,采用qRT-PCR法检测结肠组织中NLRP3、IL-1βmRNA表达量,采用Western blot法检测结肠组织中NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分、组织学评分,血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,芦丁高、中剂量组和美沙拉嗪组上述指标均明显降低(P均<0.05),且芦丁高剂量组血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显低于美沙拉嗪组(P均<0.05)。结论芦丁可明显改善溃疡性结肠炎小鼠临床症状,抑制黏膜炎症损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活化有关。     

芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响

目的观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷低剂量组、芍药苷高剂量组,每组12只。采用线栓阻断法制作大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h后进行再灌注,再灌注后1 h腹腔注射芍药苷(2.5、5 mg/kg),每日1次,连续7 d。Zea Longa 5分评价方法对大鼠进行神经功能评分。ELISA检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。RT-PCR和Westernblot分别检测大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠神经功能评分各时点均降低,芍药苷低剂量组第7日和芍药苷高剂量组第3、5、7日神经功能评分差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1和NLRP3m RNA和蛋白表达均上调;与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.01)。结论芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症体信号通路分子的表达、减轻炎症反应相关。     

别旁茶苷通过PXR/NF-κB信号通路治疗小鼠溃疡性结肠炎机制研究

目的探讨别旁茶苷Jasminoside(SC)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用及其机制。方法将小鼠随机分为正常对照组,模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP)组和SC高、中、低剂量组。除正常对照组外,其余各组采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)建立小鼠结肠炎的模型。给药治疗7 d后取材,显微镜下观察结肠黏膜损伤情况,采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测定结肠中α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠组织中细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)、孕烷X受体(PXR)、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达;采用Western Blot法检测结肠组织中CYP3A4和核转录因子P65(NF-κBP65)表达。结果与正常对照组相比,模型组有明显的病理变化,小鼠结肠黏膜和粘膜下层的多形核细胞浸润情况较严重,出现溃疡和上皮杯状细胞缺失的情况;与TNBS组相比,SASP组和SC各给药组结肠组织的TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β1的水平及TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表达水平均有显著下降,并呈剂量依赖性,SASP和SC组中CYP3A4和PXR的mRNA水平显着上调;与正常对照组相比,TNBS组NF-κBP65蛋白表达显着增加,而SASP组和SC组中NF-κBP65表达下降。结论 SC对溃疡性小鼠结肠炎有显著疗效,其可能通过激活PXR、CYP3A,抑制NF-κB的表达,降低炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β1的水平来发挥保护作用。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/caspase-1细胞焦亡通路的影响

探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠细胞焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor thermoprotein domain 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。建立3%葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为6组:正常组,模型组,黄芩汤低、中、高(4.55,9.1,18.2 g·kg~(-1))剂量组及柳氮磺胺吡啶组(0.45 g·kg~(-1))。造模同时给予灌胃给药,连续7 d,第8天实验结束时采集结肠组织进行HE染色观察病理变化,酶联免疫法检测结肠组织中细胞因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)含量的变化,微板法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平,TUNEL染色法检测细胞死亡,免疫组织化学染色法检测结肠组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)的表达水平,蛋白免疫印迹法检测结肠中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、caspase-1、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)蛋白的表达。经过检测发现,与正常组相比,模型组LDH含量、TUNEL染色阳性、炎症因子(IL-18和IL-1β)及焦亡相关蛋白表达显著升高(P0.05)。与模型组相比,黄芩汤不同剂量干预组LDH含量、TUNEL染色阳性、炎症因子(IL-18和IL-1β)及焦亡相关蛋白表达降低,其中以黄芩汤高剂量组效果更显著(P0.05)。HE染色结果表明,黄芩汤能改善小鼠结肠组织病理学变化。以上结果表明黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠细胞焦亡有抑制作用,其作用机制与调控NLRP3/caspase-1通路密切相关。     

淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠NLRP3炎性小体信号通路的影响

目的探讨淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠的干预作用及NLRP3炎性小体信号通路的影响。方法将50只雄性DBA/1小鼠随机分为对照组、模型组、淫羊藿苷10 mg/kg组、淫羊藿苷20 mg/kg组、淫羊藿苷40 mg/kg组,每组10只。模型组和淫羊藿苷各组尾巴根部皮下注射含Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎模型,在第21天二次免疫造模后,淫羊藿苷各组开始给予相应剂量淫羊藿苷灌胃,对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均每天1次,连续3周。观察各组小鼠关节炎评分和关节肿胀度;眼球取血,采用ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;分离关节滑膜组织,采用HE和番红O染色观察各组小鼠关节滑膜的病理变化;采用RT-PCR检测各组小鼠滑膜组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测各组小鼠滑膜组织中NLRP3炎性小体信号通路分子(IL-1β、Caspase-1及NLRP3)表达水平。结果首次免疫21 d后,模型组及淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分开始增加,模型组小鼠的关节炎评分持续增加至实验结束;从第27天开始,淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分与模型组比较呈剂量依赖性降低(P均0.05)。淫羊藿苷各组关节肿胀度均明显低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。模型组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著高于对照组(P均0.05);淫羊藿苷各组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。病理结果显示模型组小鼠滑膜组织中出现严重的炎性细胞浸润、基质破坏及钙含量显著减少,淫羊藿苷各组炎性症状及基质破坏减轻,钙含量显著增加。结论淫羊藿苷可通过抑制NLRP3炎性小体介导的炎症反应来缓解类风湿关节炎,对类风湿关节炎的治疗具有潜在价值。     

芍药汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织病理变化及免疫功能的影响

目的观察芍药汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织病理变化及免疫功能的影响,探究其对UC大鼠的免疫调节机制。方法采用TNBS诱导制作UC模型。实验大鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和芍药汤组,各给药组给予相应药物灌胃,连续7 d。观察大鼠一般状况、体质量、结肠组织大体形态、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,HE染色观察结肠组织病理变化,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4含量,免疫组化检测结肠组织IL-1β、TNF-α、IL-4蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P0.01),CMDI评分、血清和结肠组织IL-1β、TNF-α含量和蛋白表达显著升高(P0.01),IL-4含量和蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组比较,芍药汤组和美沙拉嗪组大鼠体质量显著升高(P0.05),结肠组织一般形态和病理变化显著改善,CMDI评分、血清和结肠组织IL-1β、TNF-α含量和蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),IL-4含量和蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论芍药汤能有效改善UC模型大鼠结肠组织一般状况及病理变化,提高机体免疫功能,其机制可能与调节IL-1β、TNF-α及IL-4等细胞因子的含量和蛋白表达相关。     

电针预处理对急性心肌缺血小鼠心功能及免疫炎性反应的影响

目的:观察电针预处理对急性心肌缺血模型小鼠心脏射血分数(EF),脾脏、心脏巨噬细胞数量及心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨电针预处理促心肌保护的可能机制。方法:30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和电针预处理组,每组10只。模型组和电针预处理组通过结扎小鼠心脏冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血模型,对照组仅在小鼠心脏冠状动脉左前降支穿线不做结扎。电针预处理组电针小鼠双侧"内关",疏密波,频率2 Hz/15 Hz,强度2 m A,每次电针20min,每天1次,共干预3d后造模。采用超声心动图M图EF值评价心功能;流式细胞计数法检测脾脏、心脏巨噬细胞数量;免疫印迹法检测小鼠心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠EF值下降(P0.001),心脏、脾脏巨噬细胞数量增加(P0.001),心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达水平上升(P0.001,P0.01);与模型组比较,电针预处理组小鼠EF值上升(P0.01),心脏、脾脏巨噬细胞数量下降(P0.01),心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达水平下降(P0.01,P0.05)。结论:电针预处理可减少急性心肌缺血小鼠脾脏、心脏巨噬细胞数量,下调心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达,减轻心肌局部炎性反应,从而实现心肌保护效应。     

芍药苷对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织病理形态及血清抗炎因子和促炎因子平衡的影响

目的:观察芍药苷对溃疡性结肠炎(UC)大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)的影响。方法:将实验动物分为4组,采用TNBS/乙醇灌肠法造模,光镜观察结肠组织形态并评分,采用ELISA法检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4水平。结果:模型组大鼠结肠组织黏膜层可见溃疡形成,且有明显的炎症、充血存在,证实造模成功。模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α水平均高于空白组(P<0.05),而血清IL-4水平则低于空白组(P<0.01);治疗后,芍药苷组血清IL-1β、TNF-α水平均较模型组降低(P<0.05、P<0.01),而血清IL-4水平则较模型组升高(P<0.01)。结论:芍药苷能够通过下调IL-1β、TNF-α和升高IL-4的表达,调节肠道异常免疫反应、抑制炎症反应,修复溃疡,进而治疗UC。     

西黄丸对炎症微环境下肺癌A549荷瘤小鼠NLRP3炎症小体及其产物和肿瘤增殖的影响

目的:研究并探讨西黄丸对炎症微环境下的肺癌A549荷瘤小鼠的抑瘤作用,并探讨西黄丸对肺癌A549荷瘤小鼠的血清及肿瘤组织中的核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体及其产物表达的影响作用。方法:采用肺癌A549荷瘤小鼠模型,肺癌A549细胞采用培养基中加入脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)的办法造炎症微环境下的肺癌A549细胞模型。造模成功后随机分为空白组(等体积生理盐水),MCC950组(MCC950溶液,0.79 g·kg~(-1)),西黄丸低、中、高剂量组(0.39,0.78,1.95 g·kg~(-1)),采用口服给药的方式进行,每天给药1次,连续给药21 d,处死小鼠并剥离肿瘤组织测量肿瘤体积及质量,免疫组织化学法检测肿瘤组织NLRP3表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测丙二醛(MDA),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18),NLRP3炎性小体蛋白表达,眼底静脉取血以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-1β,IL-18,MDA表达水平。结果:与空白组比较,MCC950组,西黄丸低、中、高剂量组的抑瘤率分别为39.21%,31.72%,42.24%,55.68%;ELISA检测发现,西黄丸高剂量组能明显下调小鼠血清中的MDA,IL-1β,IL-18表达水平(P0.05);Western blot结果显示,与空白组比较,西黄丸高剂量组能够有效降低小鼠肿瘤组织中的MDA,IL-1β,IL-18,NLRP3的蛋白表达水平(P0.05);免疫组织化学法结果显示,与空白组比较,MCC950组与西黄丸各剂量组均能降低小鼠肿瘤组织中的NLRP3炎症小体表达阳性率(P0.05),且MCC950组和高剂量西黄丸组抑制效果最好(P0.05)。结论:西黄丸可以抑制荷肺癌A549细胞小鼠的肿瘤组织生长,其机制可能是通过抑NLRP3炎症小体及IL-1β,IL-18,MDA的表达水平,进而抑制肿瘤细胞的炎症微环境达到抑制肿瘤细胞生长的结果。     

基于结肠黏膜ICAM-1探讨芍药汤对溃疡性结肠炎(胃肠湿热证)大鼠的作用机制

目的采用RT-PCR和Western-blot检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因生成以及蛋白的表达水平,探讨芍药汤治疗溃疡性结肠炎(UC)可能的作用机制。方法随机将48只清洁级SD大鼠分为4组,分别为空白组、模型组、西药对照组(SASP组)以及芍药汤组,每组12只;模型组、芍药汤组及SASP组3组大鼠在成功制成胃肠湿热证模型基础上,再建立UC模型;造模完成后,各组大鼠分别进行疾病活动指数(DAI)评分,灌胃治疗2周,处死大鼠前对其进行第2次DAI评分,完毕后麻醉并处死各组大鼠;解剖后,取病变的结肠组织观察,进行组织大体形态损伤(CMDI)评分;随后,将病变最明显结肠组织肠段2 cm左右,平均分为两等分,分别用于检测ICAM-1基因的蛋白的表达。结果相比空白组,模型组大鼠的DAI及CMDI评分升高明显(P0.01),治疗后芍药汤组上述积分与模型组相比而言,下降明显(P0.05);在结肠组织ICAM-1蛋白表达方面,Western-blot结果显示,模型组大鼠灰度值较空白组明显下降,治疗后,芍药汤组与SASP组ICAM-1灰度值均有所上升,且与正常组水平相近;大鼠结肠组织中ICAM-1 m RNA生成方面,与空白组相比而言,模型组上升明显(P0.01),而在治疗后与模型组相比,芍药汤组及SASP组ICAM-1 m RNA生成水平显著降低(P0.01)。结论芍药汤通过抑制UC(胃肠湿热证)大鼠结肠黏膜组织中ICAM-1基因及蛋白的表达,从而改善UC大鼠的症状及体征,这可能是其治疗UC的作用机制。     

针灸通过NOXs-ROS-NLRP3信号通路治疗大鼠溃疡性结肠炎的实验研究

目的探讨针灸对大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用及作用机制。方法将SD雄性SPF级大鼠40只,随机分成正常组、模型组、电针组、隔药灸组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均给予2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-25%乙醇0.25ml混合液灌肠建立UC模型,空白组大鼠给予等量生理盐水灌肠。隔药灸组、电针组选取"天枢"(双)和"气海"进行隔药灸或电针穴位治疗,连续治疗14d,正常组、模型组不予处理。观察大鼠精神状态及死亡情况,计算大鼠的疾病活动指数(DAI),采集结肠组织,计算结肠黏膜损伤指数(CMDI)、检测大鼠结肠组织中NLRP3 mRNA及IL-1βmRNA相对表达量,采取腹主动脉血,检测血清中NLRP3、NOXs、ROS及IL-1β的表达量。结果除正常组外,各模型组造模后均有明显的溃疡性结肠炎临床症状和病理学改变(P0.05);模型组、电针组、隔药灸组NLRP3 mRNA、IL-1βmRNA表达量,NOXs、ROS、NLRP3及IL-1β表达量高于正常组(P0.05);电针组、隔药灸组NLRP3 mRNA及IL-1βmRNA表达量,NOXs、ROS、NLRP3及IL-1β表达量均明显低于模型组(P0.01)。结论电针、隔药灸可能通过影响NOXs-ROS-NLRP3信号传导通路发挥治疗UC的作用。     

肉桂醛对白念珠菌定植下DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠治疗作用及对dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路的影响

观察肉桂醛对白念珠菌(Candida albicans,Ca)定植+葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用,以及对dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路的影响。将C57BL/6小鼠随机分为正常组、DSS组、DSS+Ca组、肉桂醛(75 mg·kg~(-1))组和美沙拉嗪(200 mg·kg~(-1))组。DSS+Ca组小鼠每日灌服Ca(1×10~8 CFU/只),连续4 d后给予3.0%DSS溶液,自由饮用7 d;肉桂醛组和美沙拉嗪组则在DSS+Ca组的基础上,在给予DSS的同时,分别给予药物灌胃治疗;正常组和DSS组给予蒸馏水对照处理。每日观察小鼠的一般状态,记录小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI),平板培养检测小鼠粪便真菌载荷量。末次给药次日,人道处死小鼠,测量结肠长度,计算结肠黏膜损伤指数(colon mucosa damage index,CMDI),HE染色法进行组织病理学分析。ELISA法检测血清抗酿酒酵母抗体(anti-saccharomces cerevi-siae antibody,ASCA)、β-1,3-葡聚糖以及血清和组织中细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,IL-10)的含量。免疫荧光染色法检测结肠组织β-1,3-葡聚糖含量和巨噬细胞浸润程度。Western blot法和免疫组织化学染色法检测结肠组织dectin-1,TLR2,TLR4和NF-κB的蛋白表达情况。结果显示,肉桂醛可显著改善Ca定植下UC小鼠的一般状态,降低DAI评分和病理学评分;减轻肠道黏膜充血、糜烂和结肠缩短的程度;减少小鼠肠道Ca的载荷;下调血清ASCA和β-1,3-葡聚糖含量;降低血清和结肠组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8的含量,升高IL-10的含量,抑制结肠巨噬细胞的浸润,下调结肠组织dectin-1,TLR2,TLR4和NF-κB的蛋白表达水平。结果表明,肉桂醛对Ca定植下DSS诱导的小鼠UC具有治疗作用,其机制可能在于肉桂醛能够显著抑制Ca增殖,调节dectin-1/TLRs/NF-κB信号通路,协调促炎因子和抗炎因子之间的平衡。     

木瓜总三萜对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路及黏膜屏障的影响

观察木瓜总三萜对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路及结肠黏膜屏障的影响。将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、木瓜总三萜(50,100 mg·kg~(-1))组和柳氮磺吡啶(250 mg·kg~(-1))组。实验小鼠通过自由饮用2.5%DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)模型,在自由饮用2.5%DSS前3 d,各给药组灌胃给予相应的药物,正常组和模型组给予等体积的0.5%羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,连续10 d。每天观察实验小鼠一般状况、记录疾病活动指数(DAI)。末次给药次日,取血,进行血液中TNF-α,IL-1β,IL-6,IFN-γ,IL-4,IL-10含量检测;取结肠进行长度测量、结肠黏膜损伤指数(CMDI)计算、MPO活性检测和组织形态学分析;实时定量PCR法检测结肠组织中E-cadherin,occludin,MUC2,TFF3 mRNA表达,Western blot法检测结肠组织中SIRT1,IKKβ,p-IKKβ,IκBα,p-IκBα及胞浆和胞核中PPARγ,NF-κBp65蛋白表达。结果显示,木瓜总三萜(50,100 mg·kg~(-1))可显著改善DSS诱导的UC模型小鼠一般状况,降低DAI,CMDI和组织病理学评分,增加结肠长度,减轻结肠黏膜溃疡、糜烂及炎性浸润,恢复黏膜屏障的正常功能,降低血液中促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IFN-γ含量,升高抗炎因子IL-4,IL-10含量,抑制结肠组织中MPO活性,上调结肠组织中黏膜屏障保护因子E-cadherin,occludin,MUC2,TFF3 mRNA表达,下调结肠组织胞浆中PPARγ,组织中p-IKKβ,p-IκBα和胞核中NF-κBp65蛋白表达,降低p-IKKβ/IKKβ和p-IκBα/IκBα的比值,上调胞核中PPARγ,组织中SIRT1和胞浆中NF-κBp65蛋白表达(P0.05或P0.01),且随着剂量的增加,其作用效果更加明显。表明木瓜总三萜对DSS诱导的小鼠UC有显著治疗作用,其作用机制可能与其调节PPARγ/SIRT1/NF-κBp65信号通路、抑制促炎因子生成、上调肠黏膜屏障保护因子的蛋白表达有关。     

左金丸阻断溃疡性结肠炎小鼠NF-κB激活MIF、TNF-α及IL-1β、IL-6表达

目的:研究左金丸阻断溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠核因子-κB(NF-κB)激活巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。方法:2.4.6-三硝基苯磺酸复制UC模型,用左金丸水煎液(3.0和6.0g/kg)和柳氮磺吡啶肠溶片(0.1g/kg)灌胃给药,每天1次,连续3周,观察实验小鼠一般状况。3周后检测,眼球取血,进行血液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量分析;取结肠组织进行组织形态学分析;实时定量PCR检测结肠组织中MIF及对应的受体CD74基因表达,Western blot检测结肠组织中NF-κBp65蛋白表达。结果:左金丸(3.0和6.0g/kg)和柳氮磺吡啶肠溶片(0.1g/kg)可显著改善UC模型小鼠的一般状况,降低血液中促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量及结肠组织中MIF、CD74和NF-κBp65的基因和蛋白表达,减轻促炎因子对结肠造成的损伤,其中以左金丸6.0g/kg剂量组作用效果更为显著。结论:左金丸对UC结肠中各细胞因子的表达具有重要的抑制效应,阻断NF-κB信号通路可能对于UC具有潜在治疗价值。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响

目的：研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法：60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^-1),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^-1),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-...     

白芍七物颗粒对NLRP3炎症体介导溃疡性结肠炎调控研究

目的探讨白芍七物颗粒对大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用及作用机制。方法将SD雄性SPF级大鼠105只,随机分成正常组,模型组,阳性对照组,白芍七物颗粒低、中、高剂量组,半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)阻滞剂组,每组15只。除正常组外,其余各组大鼠均给予2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-25%乙醇0.25mL混合液灌肠建立UC模型,正常组大鼠给予等量生理盐水灌肠。确定造模成功后第2天开始给予灌胃治疗,阳性对照组给予美沙拉嗪溶液剂灌胃、白芍七物颗粒低、中、高剂量组分别给予相应剂量的白芍七物颗粒灌胃,Caspase-1阻滞剂组给予VX-765溶液剂灌胃,连续治疗14d,正常组、模型组不予处理。观察大鼠精神状态及死亡情况,计算大鼠的疾病活动指数(DAI),采集结肠组织,计算结肠黏膜损伤指数(CMDI),荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠结肠组织NOD样受体蛋白3(NLR family,pyrin domain containing 3,NLRP3)、接头蛋白ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD)、 Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA表达,蛋白印迹法(Western blot)法检测大鼠结肠组织NLRP3、ASC、Caspase-1相关蛋白表达,采取腹主动脉血,ELISA法检测血清IL-1β、IL-18表达量。结果除正常组外,其他各组造模后均有明显的溃疡性结肠炎临床症状和病理学改变(P0.05);模型组、阳性对照组、白芍七物颗粒低、中、高剂量组、caspase-1阻滞剂组结肠组织中NLRP3 mRNA、ASC mRNA、 Caspase-1 mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量及血清中IL-1β、IL-18表达量高于正常组(P0.05);白芍七物颗粒低、中、高剂量组、阳性对照组结肠组织中NLRP3 mRNA、ASC mRNA、 Caspase-1 mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量及血清中IL-1β、IL-18表达量均明显低于模型组(P0.01),与白芍七物颗粒中剂量组相比,阳性对照组、白芍七物颗粒低、高剂量组结肠组织中NLRP3 mRNA、ASC mRNA、 Caspase-1 mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量及血清中IL-1β、IL-18表达量较高(P0.05),Caspase-1阻滞剂组与之相比无明显差异(P0.05)。结论美沙拉嗪、白芍七物颗粒、VX-765溶液剂均对UC有治疗作用,其中以中剂量白芍七物颗粒、VX-765溶液剂治疗效果最佳,两者无明显差异(P0.05),其治疗作用与降低结肠组织中降低结肠组织NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、ASC mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mRNA表达量、血清中IL-1β、IL-18表达量有关。     

竹节参总皂苷对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠PPAR-γ信号通路及炎症因子的影响

目的:观察竹节参总皂苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的改善作用及对PPAR-γ信号通路和炎症因子的影响。方法:将小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶(SASP)阳性对照组及竹节参总皂苷高、低剂量组。通过自由饮用4%DSS诱导建立小鼠UC模型,各组连续灌胃给予不同药物10 d,正常对照组和模型组给予等体积溶剂。记录疾病活动指数(DAI)。以HE染色、免疫组化、分光光度法和ELISA法分别检测结肠病理变化、PPAR-γ表达、结肠匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性和血清IL-1β、IL-10、IL-17、IFN-γ含量。结果:竹节参总皂苷能显著降低UC模型小鼠的DAI,减轻结肠黏膜损伤,降低结肠组织MPO活性和血清IL-1β、IL-17、IFN-γ含量,而升高结肠组织PPAR-γ的表达及血清IL-10的含量。结论:竹节参总皂苷可能通过上调PPAR-γ的表达,抑制促炎因子IL-1β、IL-17、IFN-γ的释放,提升IL-10水平而产生对实验性UC的保护作用。