益气除痰散结法对Lewis 肺癌小鼠的作用研究

【摘要】目的：观察益气除痰散结法治疗中晚期非小细胞肺癌的临床疗效,并讨论其部分作用机理。方法：将复制转移性 Lewis 小鼠肺癌模型,随机设为中药高、中、低剂量组、化疗组和模型组（各10 只）,观察其肿瘤增长体积、瘤体重量、免疫器官指数、肺转移率,并采用免疫组化方法结合计算机图象分析技术,观察小鼠肿瘤组织中的 VEGF 表达的差异。结果：从HE染色的病理切片中发现,在应用中药治疗后,动物肿瘤组织的病理学表现与对照组存在明显的异差,与模型组相比,益气除痰散结法中、高剂量组能明显减少发生肺转移的小鼠数目以及肺部转移灶数量 (P＜0.05),提示益气除痰散结法具有明显抗转移效果,与环磷酰胺组无统计学差异（P＞0.05)。用免疫组化法检测益气除痰散结法各剂量组移植瘤的VEGF表达情况,显微图象分析表明,肿瘤微血管内皮细胞被染成棕黄色,VEGF主要表达肿瘤细胞核和胞浆内,肿瘤细胞亦有少量染色,阳性染色的肿瘤细胞大多位于液化坏死区,浸润的淋巴细胞有表达,各组血管内皮细胞呈弱阳性染色。但益气除痰散结法各剂量组VEGF值与生理盐水组比较,无统计学意义（P＜0.05）。结论：益气除痰散结法能明显抑制荷瘤小鼠局部肿瘤的生长及自发性肺转移。 其抗肺癌作用的机理可能与促进肿瘤细胞凋亡、提高细胞分化程度,增强免疫力有关,与 VEGF 靶点的意义不大。     

益气除痰散结法治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的:探讨晚期非小细胞肺癌患者采取益气除痰散结法治疗的临床疗效。方法:选择我院2015年1月-2018年1月收治的60例晚期非小细胞肺癌患者作为研究对象,纳入对象临床资料完整,按照随机数表法分为观察组与对照组,每组30例。对照组接受常规支持治疗,观察组则采取益气除痰散结法治疗,对两组患者瘤体改善情况进行评价,调查治疗前后卡氏(Karnofsky,KPS)评分,记录治疗前后常见症状评分,予以组间统计学分析。结果:观察组患者瘤体改善效果明显优于对照组(P<0.05);两组患者治疗前KPS评分与常见症状评分比较无显著差异(P>0.05),治疗后观察组明显优于对照组(P<0.05)。结论:益气除痰散结法应用在晚期非小细胞肺癌患者中可取得不错的疗效,而且改善症状更显著,使得患者生活质量提高,值得借鉴。     

益气扶正方对Lewis肺癌小鼠抑瘤作用的实验研究

目的:观察益气扶正方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的影响,并通过拆方和不同时间点预防性给药研究其抑瘤作用。方法:选用5周龄纯系C57BL/6雄性小鼠150只,将Lewis肺癌细胞悬液接种于小鼠右侧腋下建立皮下肺癌模型,接种后小鼠随机分组,治疗组给予相应中药汤剂灌胃,对照组给予同体积生理盐水,测量肿瘤体积大小并统计。结果:益气扶正方能抑制Lewis肺癌皮下移植瘤小鼠的肿瘤生长(P0.05),拆方后的加减四君子汤和黄芪、党参、白术、茯苓、陈皮均未观察到抑瘤作用。益气扶正方接种前2周、接种前1周、接种后给药均能发挥抑瘤作用(P0.05)。结论:益气扶正方能明显抑制Lewis肺癌皮下移植瘤小鼠的肿瘤生长,预防性给药则起效更早,抗癌作用更显著。     

益气除痰方对小鼠lewis肺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨益气除痰方对小鼠Lewis肺癌生长的抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法 复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,将96只接种Lewis肺癌的小鼠随机分为6组:益气除痰方高、低剂量组,顺铂对照组,顺铂联合中药高、低剂量组,模型组,每组16只。给药1周后停药观察1周,其中一半动物处死观察细胞凋亡相关指标,另一半动物用于观察生存期。结果 与模型组比较,益气除痰方高、低剂量组均能明显降低瘤质量指数,差异有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01)。益气除痰方低剂量组肺转移抑制率为 28 %、高剂量组为 52 %,顺铂对照组为 50 %,顺铂联合低剂量组为40 %、高剂量组为50 %,与模型组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)。与模型组比较,益气除痰方组高、低剂量组和顺铂对照组、联合用药组均能明显提高肿瘤细胞凋亡率,差异均有统计学意义(P < 0.05,P < 0.01,P < 0.001)。与模型组比较,益气除痰方低剂量组及顺铂对照组能有效延长模型小鼠的生存期,差异均有统计学意义(P < 0.01)。结论 益气除痰方有抑制肿瘤生长、延长肿瘤动物生存期及促进Lewis肺癌细胞凋亡的作用。     

花粉提取物对同系小鼠腹腔种植Lewis肺癌的抗肿瘤作用

精选的植物花粉提取物广泛用于治疗慢性前列腺炎、前列腺增生已近30年。花粉提取物Cernitin T60含有水溶性的α-氨基酸和其它水溶性物质。本文报告花粉提取物对同系小鼠腹腔种植Lewis肺癌的抗肿瘤作用及与其它标准化疗药物联合应用的有益作用。实验用培养的KB细胞作细胞毒性测试。测试药物作用的肿瘤动物由美国国立癌症研究所提供。Lewis肺癌种植于同系C57BL/6小     

加味百合地黄汤对Lewis肺癌小鼠抗肿瘤转移作用机制的研究

目的探讨加味百合地黄汤对肺癌转移小鼠肿瘤转移干预作用及机制。方法复制移植性小鼠Lewis肺癌转移模型,用药后观察肺组织显微镜下转移灶数目、抑瘤率、抗转移率,免疫组化法检测瘤组织中P53、PCNA、Cyclin D1的表达情况。结果加味百合地黄汤对Lewis肺癌有非常显著的抑制作用,可抑制肿瘤细胞增殖,降低PCNA蛋白及Cyclin D1蛋白的表达。结论加味百合地黄汤有较好的抗肿瘤转移作用。     

扶正散结方调控Lewis肺癌小鼠TAMs免疫重塑作用的相关研究

目的:探讨扶正散结方对Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞有关细胞因子的调控作用。方法:建立Lewis肺癌小鼠模型,称瘤重,算抑瘤率;应用免疫组化法检测各组肿瘤组织中CD68+浸润程度;采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ,TGF-β,IL-4,IL-13,IL-6,IL-10,IL-12,TNF-α的含量。结果:与荷瘤模型组相比,其他各组均较高,分别为DDP组(50.28%)、中药预防组(34.37%)、中西结合组(66.76%),差异具有统计学意义(P<0.05)。CD68+浸润程度差异不具统计学意义。各组荷瘤小鼠血清中IFN-γ,IL-6,IL-12含量均较空白对照组低,而IL-4,IL-13,TGF-β含量均较空白对照组高,且在不同药物干预下,部分相关细胞因子含量具有显著性差异(P<0.05),中药预防组、中西医结合组与荷瘤对照组差异亦具有统计学意义(P<0.05),而TNF-α,IL-10含量,与荷瘤对照组比较,不具统计学意义。结论:扶正散结方可以通过下调肺癌免疫微环境中IL-4,IL-13,TGF-β等,上调IFN-γ等细胞因子,从而逆转TAMs的免疫重塑作用,控制肿瘤生长。     

肺癌舒颗粒剂对小鼠Lewis肺癌的作用机理研究

通过动物实验观察中药复方肺癌煎剂对Lewis肺癌荷瘤小鼠体重、瘤重、血清TNF—α含量．探讨肺癌舒颗粒剂对肿瘤的作用机理。目的：研究中药复方肺癌舒对小鼠Lewis肺癌的影响，探讨其作用的部分机理。方法：以C57／BL近交系Lewis肺癌荷瘤小鼠为模型，观察肺癌舒对肿瘤生长情况和动物机体免疫功能的作用。结果：中药复方肺癌舒可增加体重，抑制肿瘤组织生长，提高荷瘤小鼠血清TNF—α水平。结论：肺癌舒可能通过抑制癌细胞增殖及转移，增强机体免疫力等机制抑制肿瘤。     

肺癌舒颗粒剂对小鼠Lewis肺癌的作用机理研究

通过动物实验观察中药复方肺癌煎剂对Lewis肺癌荷瘤小鼠体重、瘤重、血清TNF-α含量,探讨肺癌舒颗粒剂对肿瘤的作用机理.目的:研究中药复方肺癌舒对小鼠Lewis肺癌的影响,探讨其作用的部分机理.方法:以C57/BL近交系Lewis肺癌荷瘤小鼠为模型,观察肺癌舒对肿瘤生长情况和动物机体免疫功能的作用.结果:中药复方肺癌舒可增加体重,抑制肿瘤组织生长,提高荷瘤小鼠血清TNF-α水平.结论:肺癌舒可能通过抑制癌细胞增殖及转移,增强机体免疫力等机制抑制肿瘤.     

香菇多糖联合云芝糖肽对Lewis肺癌小鼠免疫调节与抗肿瘤作用的研究

目的:探讨香菇多糖(Lentinan,LNT)和云芝糖肽(Polysaccharopeptide,PSP)联合使用对免疫抑制小鼠和肺癌小鼠的免疫调节作用和抗肿瘤活性。方法:以Lewis肺癌细胞建立肺癌小鼠模型,随机分为空白组(B1组)、生理盐水组(N1组)、PSP+LNT组(C1组)和阿霉素(Adriamycin,ADM)组(A1组);以多柔比星KM小鼠建立免疫抑制模型,随机分为空白组(B2组)、生理盐水组(N2组)和PSP+LNT组(C2组);2模型中B1组和B2组小鼠不行肺癌细胞和ADM注射,2模型中N1组与N2组、C1与C2组在建模后连续20天分别通过灌胃法注入生理盐水0.2 mL和PSP+LNT的混合溶液0.2 mL,A1组小鼠连续3天腹膜内注射4 mg/(kg·d) ADM。采用自动血细胞分析仪对外周血白细胞(WBC)进行计数;比较各组小鼠胸腺指数、脾脏指数和抑瘤作用;采用流式细胞术测定外周血中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞,并计算其比值;用微量样本多指标流式蛋白定量方法 (CBA)和小鼠Th1/Th2/Th17细胞因子CBA分析试剂盒测定小鼠血清中白细胞介素-2 (Interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-4 (Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6 (Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10 (Interleukin-10,IL-10)和白细胞介素-17A (Interleukin-17A,IL-17A)的含量。结果:肺癌模型中,与B1组比较,N1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4~+/CD8~+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著降低(P 0.05),血清中IL-10的含量增高(P 0.05);与N1组比较,C1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4~+/CD8~+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著提高(P 0.05),血清中IL-10的含量降低(P 0.05),平均肿瘤重量较低(P 0.05);而A1组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4~+/CD8~+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A明显降低(P 0.05),2组平均肿瘤重量没有差别。免疫抑制模型中,与B2组比较,N2组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4~+/CD8~+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著降低(P 0.05),血清中IL-10的含量增高(P 0.05);与N2组比较,C2组外周WBC数量、胸腺指数、脾脏指数、CD4~+/CD8~+T比值、TNF、IFN-γ、IL-2和IL-17A均显著提高(P 0.05),血清中IL-10的含量降低(P 0.05)。结论:LNT和PSP联合使用对Lewis肺癌小鼠有免疫促进作用和抗肿瘤作用。     

补虚散结胶囊对小鼠Lewis肺癌细胞增殖动力学的影响

目的:观察补虚散结胶囊对肺癌瘤株Lewis肺癌细胞增殖动力学的影响,探讨补虚散结胶囊治疗肺癌疗效机理。方法:用血清药理学方法进行增效试验,MTT法检测A590值,以每组测得光密度平均值作为药物效应值。结果:补虚散结胶囊配合替加氟组Lewis肺癌细胞存活率低于单纯替加氟组。结论:补虚散结胶囊配合化疗疗效满意,其疗效机理与补虚散结胶囊抑制肿瘤细胞增殖有关。     

香砂六君子汤合除痰解毒中药对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸的影响

目的 观察香砂六君子汤合除痰解毒中药对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸的作用及机制。方法 取60只SPF级C57BL/6J雄鼠,于右侧腋中线皮下注射Lewis细胞悬液0.2 mL（含细胞数2×10⁶个/mL）,接种7 d后,将造模成功的小鼠随机分为模型组、顺铂组、香砂六君子汤低、中、高剂量组、联合组,每组10只。香砂六君子汤低、中、高剂量组分别灌胃17.88、35.75、71.50 g·kg^-1香砂六君子汤加减溶液,1次/d,顺铂腹腔注射小鼠用量换算为5 mg·kg^-1,2次/周,各组均连续干预14 d,每2 d测量肿瘤体积。治疗结束后称取各组小鼠肿瘤质量并计算抑瘤率;苏木素-伊红（HE）染色观察各组肿瘤的形态学特征;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组肿瘤组织中自然杀伤（NK）细胞杀伤受体2（NKG2D）、核糖核酸输出因子-1（RAE-1）、γ干扰素（IFN-γ）mRNA含量;免疫组化法（IHC）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组肿瘤RAE-1、NKG2D、IFN-γ表达;Western blot检测各组小鼠肿瘤中IL-6、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3及脾脏组织中NKG2D、RAE-1蛋白含量。结果 与模型组比较,香砂六君子汤各剂量组肿瘤质量均下降,差异无统计学意义;肿瘤体积均缩小（P<0.05,P<0.01）;病理学形态改善;香砂六君子汤中剂量组NKG2D、RAE-1、IFN-γ mRNA含量均升高（P<0.05,P<0.01）,肿瘤组织中NKG2D、RAE-1、IFN-γ蛋白表达均升高（P<0.05,P<0.01）,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达下降（P<0.05,P<0.01）;脾脏组织中,香砂六君子汤各剂量组NKG2D、RAE-1蛋白表达均显著升高（P<0.01）。与顺铂组比较,香砂六君子汤中剂量组NKG2D、RAE-1、IFN-γ mRNA含量升高,差异无统计学意义;IHC显示联合组NKG2D、IFN-γ蛋白表达显著升高（P<0.01）,Western blot结果表明RAE-1、NKG2D、IFN-γ蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）;联合组p-JAK2、p-STAT3蛋白表达下降（P<0.05, P<0.01）;脾脏组织中,香砂六君子汤中剂量组、联合组NKG2D、RAE-1蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论 香砂六君子汤合除痰解毒中药能够通过上调RAE-1/NKG2D表达,促进NK细胞活化,抑制免疫逃逸,抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与下调JAK2/STAT3通路相关。     

益气除痰法延长非小细胞肺癌中位生存期的作用

目的:观察益气化痰法延长Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌（NSCLC）生存期的作用。方法:采用前瞻性、多中心、随机、对照的临床流行病学方法,将符合标准的病例按肺郁痰瘀型、脾虚痰湿型、阴虚痰热型及气阴两虚型四型辨证施治,辨病治疗以益气化痰法为主,辩证治疗分别以宣肺除痰、益气除痰、滋阴化痰、益气养阴法为主。用乘积极限（K-M）法分析不同证型的中位生存期及中位疾病进展时间。结果:肺郁痰瘀型、脾虚痰湿型、阴虚痰热型及气阴两虚型肿瘤总缓解率分别为9.1%、23.6%、11.5%、13.2%（P<0.05）;瘤体总稳定率分别为69.7%、77.8%、69.2%、78.9%（P>0.05）;中位生存期分别为308天、401天、300天和326天（P>0.05）;1年累积生存率分别为45.63%、51.53%、41.95%、46.01%（P>0.05）。结论:益气化痰法可使Ⅲ、Ⅳ期NSCLC的中位生存期达到9个月,与化疗配合应用可达到12个月,是晚期非小细胞肺癌的一种有效治法。其中,脾虚痰湿型患者中位生存期达到13个月,有可能进一步提高疗效。     

益气除痰法治疗肺癌理论探讨及临床应用

肺癌(原发性支气管肺癌)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,在我国肺癌已经成为城市肿瘤死亡率最高的恶性肿瘤。中医学认为肺脾两脏在气的生成及津液循行等方面关系密切,肺癌发病不离肺脾,肺脾气虚或气机不畅,均可使痰浊内生,聚而成积;治疗肺癌当培土生金、调达气机、化痰散结。益气除痰法是治疗肺癌的重要治法,在临床上应用广泛。临床研究表明,益气除痰法治疗肺癌不仅可提高患者生存质量、延长患者生存期,还具有对化疗增效减毒的作用。     

益气除痰方对脾虚Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、生存期及PRDX-1、PRDX-6表达的影响

目的 观察益气除痰方对脾虚C57BL/6J小鼠Lewis肺癌肿瘤生长、肺转移、生存期及肿瘤组织中过氧化物氧化还原酶PRDX-1、PRDX-6表达的影响。     

抗瘤增效颗粒急性毒性实验及对Lewis肺癌小鼠抗肿瘤增效作用

目的观察抗瘤增效颗粒的急性毒性实验及对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤增效作用。方法将40只ICR小鼠(雌雄各半)随机等分为4组,分别为阴性对照组、抗瘤增效颗粒低剂量组、抗瘤增效颗粒中剂量组和抗瘤增效颗粒高剂量组,每组各10只(雌雄各半),分别予0.9%氯化钠注射液0.4 mL/10 g及等容积抗瘤增效颗粒溶液(生药含量分别为312、468、624 g/kg)灌胃,每日1次,连续2周。每次灌胃后4 h内密切观察各组小鼠外观、体征、行为活动,然后每日上午、下午观察外观、体征、行为活动及粪便性状等,并分别于灌胃前及灌胃7、14 d称各小鼠体质量;2周后解剖各组小鼠,肉眼大体观察各小鼠脏器及组织变化。另取C57BL-6小鼠制备Lewis肺癌模型,选取造模成功的小鼠40只,随机等分为模型组、顺铂(DDP)治疗组、抗瘤增效颗粒低剂量+DDP组、抗瘤增效颗粒中剂量+DDP组和抗瘤增效颗粒高剂量+DDP组,模型组予0.9%氯化钠注射液0.4 mL/10 g灌胃;DDP治疗组、抗瘤增效颗粒低剂量+DDP组、抗瘤增效颗粒中剂量+DDP组和抗瘤增效颗粒高剂量+DDP组均于第1、3、5 d予DDP溶液1 mL(含DDP 0.1 mg)腹腔注射,同时分别予0.9%氯化钠注射液、抗瘤增效颗粒溶液(生药含量分别为0.6、0.8、1 g/mL)0.4 mL/10 g灌胃,每日1次,连续21 d。观察比较5组抑瘤率、肿瘤体积及组织形态学变化。结果急性毒性实验结果显示,4组小鼠外观、体征、行为活动及粪便性状均未发现异常,灌胃前及灌胃7、14 d体质量未见明显异常变化,各脏器组织均未发现异常。药效学实验结果显示,与模型组相比,DDP治疗组、抗瘤增效颗粒低剂量+DDP组、抗瘤增效颗粒中剂量+DDP组和抗瘤增效颗粒高剂量+DDP组小鼠瘤质量均显著减轻(P0.05),肿瘤体积均缩小(P0.05),且抗瘤增效颗粒中剂量+DDP组和抗瘤增效颗粒高剂量+DDP组小鼠瘤质量低于DDP治疗组(P0.05),抑瘤率高于DDP治疗组(P0.05),肿瘤体积小于DDP治疗组(P0.05);形态学观察显示,抗瘤增效颗粒中剂量+DDP组和抗瘤增效颗粒高剂量+DDP组肿瘤细胞稀疏程度增加,坏死细胞数目增加。结论抗瘤增效颗粒对Lewis肺癌小鼠化疗有明显的增效作用,且无毒性作用。