淫羊藿素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制及促凋亡作用

基于PI3K/Akt信号通路,观察人卵巢癌SKOV3细胞在不同浓度淫羊藿素(icaritin)干预下的增殖与凋亡变化过程,探讨可能存在的分子机制。研究对象为人卵巢癌细胞SKOV3,设置空白对照组和淫羊藿素不同浓度组(5,10,20μmol·L^-1),药物干预48 h,采用cell counting kit-8(CCK-8)法检测淫羊藿素对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制效果;通过EdU试验检测SKOV3细胞增殖能力;采用Hoechst 33342荧光染色法观察各组SKOV3细胞凋亡形态变化,通过流式细胞术检测各组细胞周期分布状况和细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR)法检测各组细胞中PTEN,PI3K,Akt基因的表达情况;Western blot法检测PTEN,PI3K,Akt,p-Akt蛋白的表达情况。结果显示,与空白对照组比较,各浓度淫羊藿素组SKOV3细胞增殖抑制率升高(P<0.05),Edu阳性细胞率均降低(P<0.05),SKOV3细胞均呈现凋亡形态学改变,SKOV3细胞凋亡率均显著上升(P<0.05),SKOV3细胞G0/G1期细胞比例均降低(P<0.05),S期细胞比例均升高(P<0.05),SKOV3细胞中PTEN的基因和蛋白表达升高,PI3K和Akt的基因表达下降,PI3K和p-Akt的蛋白表达下降(P<0.05)。结果表明,淫羊藿素可能通过调控PI3K/Akt信号通路,抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、诱导细胞发生凋亡并影响细胞周期分布。     

淫羊藿苷对高糖诱导内皮细胞衰老的干预作用

目的:观察淫羊藿苷对高糖环境下内皮细胞衰老的影响及可能的作用机制研究。方法:人脐静脉内皮细胞分别培养在正常糖浓度(5.5 mmol/L),高糖浓度(33 mmol/L),高糖+淫羊藿苷低剂量及高糖+淫羊藿苷高剂量组中,药物干预48 h后,β半乳糖苷酶染色测定细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期,NO检测试剂盒检测细胞培养上清中NO水平,Westernblot检测培养细胞PI3K,Akt蛋白表达水平。结果:与正常糖浓度组比较,高糖浓度组衰老细胞的阳性率明显增高,G0/G1期细胞比率增加,S期显著减少,细胞培养上清中NO水平减少,PI3K和磷酸化Akt蛋白水平降低。而淫羊藿苷能够明显降低高糖环境下衰老细胞阳性率,增加S期细胞比率,提高培养上清中NO水平,同时能够提高高糖环境下内皮细胞PI3K和磷酸化Akt蛋白表达水平。结论:淫羊藿苷能延缓高糖诱导的内皮细胞衰老进程,提高内皮细胞功能,其作用机制可能与调节高糖环境下内皮细胞PI3k/Akt通路有关。     

淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠NLRP3炎性小体信号通路的影响

目的探讨淫羊藿苷对类风湿关节炎小鼠的干预作用及NLRP3炎性小体信号通路的影响。方法将50只雄性DBA/1小鼠随机分为对照组、模型组、淫羊藿苷10 mg/kg组、淫羊藿苷20 mg/kg组、淫羊藿苷40 mg/kg组,每组10只。模型组和淫羊藿苷各组尾巴根部皮下注射含Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎模型,在第21天二次免疫造模后,淫羊藿苷各组开始给予相应剂量淫羊藿苷灌胃,对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均每天1次,连续3周。观察各组小鼠关节炎评分和关节肿胀度;眼球取血,采用ELISA法检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;分离关节滑膜组织,采用HE和番红O染色观察各组小鼠关节滑膜的病理变化;采用RT-PCR检测各组小鼠滑膜组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测各组小鼠滑膜组织中NLRP3炎性小体信号通路分子(IL-1β、Caspase-1及NLRP3)表达水平。结果首次免疫21 d后,模型组及淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分开始增加,模型组小鼠的关节炎评分持续增加至实验结束;从第27天开始,淫羊藿苷各组小鼠的关节炎评分与模型组比较呈剂量依赖性降低(P均0.05)。淫羊藿苷各组关节肿胀度均明显低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。模型组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著高于对照组(P均0.05);淫羊藿苷各组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平和滑膜组织中IL-1βmRNA、IL-18 mRNA、IL-1β、Caspase-1、NLRP3表达水平均显著低于模型组(P均0.05),且呈剂量依赖性降低。病理结果显示模型组小鼠滑膜组织中出现严重的炎性细胞浸润、基质破坏及钙含量显著减少,淫羊藿苷各组炎性症状及基质破坏减轻,钙含量显著增加。结论淫羊藿苷可通过抑制NLRP3炎性小体介导的炎症反应来缓解类风湿关节炎,对类风湿关节炎的治疗具有潜在价值。     

淫羊藿苷对D-半乳糖诱导的脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响

目的:观察淫羊藿苷对脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响,并探讨淫羊藿苷抗衰老的可能机制。方法:将实验小鼠随机分为空白组、模型组、淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组,除空白组外,其他各组通过D-半乳糖诱导建立脑衰老模型。淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组灌胃淫羊藿苷药液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。用Morris水迷宫评价各组小鼠的学习记忆能力;用ELISA检测各组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST、MDA的表达。用Real time-PCR和免疫组化检测各组小鼠海马中p53和p21的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间都明显增加(P0.01),而小鼠穿越平台次数和目标象限时间则明显较少(P0.01)。与模型组相比,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间均有所较少(P0.01,P0.05),而小鼠越平台次数和目标象限时间有所增加(P0.01,P0.05)。与空白组比较,模型组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST明显降低(P0.01),而MDA明显升高(P0.01);与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST均有不同程度升高(P0.01,P0.05),而MDA则有所降低(P0.01)。与空白组比较,模型组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平升高(P0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05)。结论:淫羊藿苷具有延缓衰老作用,其机制可能与其抑制衰老信号通路p53/p21有关。     

淫羊藿苷调控NLRP3缓解小鼠类风湿关节炎的研究

目的：探讨淫羊藿苷是否通过上调miR-223-3p表达抑制NLRP3缓解小鼠类风湿关节炎。方法：采用骨胶原诱导法建立关节炎小鼠模型，分别为对照组、模型组、淫羊藿苷组（10 mg/kg与40 mg/kg组）。监测小鼠关节炎发生情况并进行评分，收集小鼠血清和滑膜组织。CCK-8检测滑膜成纤维样细胞活性；ELISA检测TNF-α与IL-6、IL-1β炎症因子；q RT-PCR检测miR-223-3p的表达；Western bolt检测NLRP3炎性体、抗凋亡蛋白Bcl-2与凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达；免疫组化检测滑膜组织中NLRP3表达。结果：淫羊藿苷以剂量依赖的方式抑制滑膜成纤维样细胞活性。淫羊藿苷组小鼠关节病变显著低于模型组（P<0.05），与剂量呈负相关。模型组中3种炎症因子水平显著高于其他组（P<0.05）。淫羊藿苷组Bcl-2显著低于模型组（P<0.05），凋亡蛋白及miR-223-3p表达显著高于模型组（P<0.05）；免疫组化显示NLRP3表达在模型组显著增多。结论：淫羊藿苷可通过上调miR...     

淫羊藿提取物对急性髓系白血病SCID小鼠模型细胞生物学特性的影响

目的观察淫羊藿提取物对急性髓系白血病SCID模型小鼠细胞生物学特性的影响。方法 SCID小鼠共60只,随机选取其中的50只,采用腹腔注射对数生长期HL-60细胞株于经环磷酰胺预处理的SCID小鼠以建立急性髓系白血病SCID小鼠模型,4周后随机均分为模型组、阿糖胞苷组、观察1组、2组和3组,另10只正常小鼠设为空白对照组。观察1组、2组和3组分别用淫羊藿提取物10、5、2.5 m L/kg灌胃治疗5周,模型组和空白对照组灌胃等体积0.9%氯化钠注射液5周,阿糖胞苷组尾静脉注射阿糖胞苷。在治疗第5周时尾静脉采血,采用人工法计数外周血血象及分类;采用Western blotting法检测同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)和多聚腺苷二磷酸核糖多聚酶(PARP)蛋白表达;流式细胞学检测HL-60细胞膜CD13和CD71表达率及细胞各周期细胞百分率。结果观察2组、3组外周血白细胞、淋巴细胞和HL-60细胞总数明显降低,中性粒细胞升高,PARP蛋白表达量、CD13和CD71阳性表达率明显下降,PTEN蛋白表达量增加,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。两组HL-60细胞均被阻滞于G_1期,且G_1和S期细胞百分率呈浓度效应关系。结论淫羊藿提取物有与阳性药阿糖胞苷相似的药理作用,在体内对急性髓系白血病HL-60细胞株有一定的抑制作用,其机制可能通过下调CD13和CD71,裂解PARP以诱导急性髓系白血病细胞凋亡,增强PTEN蛋白表达并促使细胞阻滞于G_1期,从而发挥抑制白血病细胞的增殖作用。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞OCN表达水平的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞骨钙素（OCN）表达水平的影响,为淫羊藿苷治疗牙周病提供依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001μg/mL6个浓度的淫羊藿苷作用,Elisa测定OCN表达水平。结果：人牙周膜细胞在矿化诱导条件下与不同浓度淫羊藿苷作用72小时后,1～0.01μg/mL组的OCN表达水平均较对照组显著增加（P＜0.05）;10μg/mL组OCN表达水平较对照组低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞骨向分化。     

淫羊藿素对BALB/c-nu裸鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响

目的观察淫羊藿素对雄激素依赖型前列腺癌模型小鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响并探讨其机制。方法雄性BALB/c-nu裸鼠40只,随机分为空白对照组、荷瘤组、LY294002组和淫羊藿素组,每组10只,除空白对照组外均采用含有2×107个/mL的人LNCaP前列腺癌细胞悬液前列腺内注射以建立前列腺癌LNCaP荷瘤鼠模型。2周后淫羊藿素组按80 mg/kg剂量尾静脉注射淫羊藿素治疗4周,PI3K/Akt抑制剂组尾静脉注射PI3K/Akt抑制剂LY294002,空白对照组、荷瘤组尾静脉注射等体积生理盐水。治疗结束后取前列腺组织,采用Western blotting检测磷酸化雄激素受体AR(p-AR)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7);免疫荧光双重染色(FITCCY3)法检测降钙素(Calcitonin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)表达。结果荷瘤组前列腺组织p-AR和p-Akt均高表达,前列腺瘤组织芯片标本中AR-V7和Calctionin阳性率分别为(32.45±2.15)%和(46.31±5.01)%,E-cadherin阳性率(22.93±1.96)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。淫羊藿素组前列腺组织p-AR和p-Akt低表达,AR-V7和Calctionin阳性率分别为(17.02±1.23)%和(29.76±2.74)%,E-cadherin阳性率为(86.27±6.75)%,与荷瘤组比较差异有统计学意义(P0.05)。LY294002组和淫羊藿素组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论淫羊藿素具有调控P13K/Akt信号通路的作用,主要通过调控p-AR、pAkt、AR-V7和Calctionin水平而影响前列腺癌LNCa P细胞侵袭和转移。     

淫羊藿苷对与复合支架共培养脂肪干细胞成骨分化的影响

目的探讨淫羊藿苷对与复合支架共培养的脂肪干细胞成骨分化的影响。方法将透明质酸溶液、丝素蛋白溶液、壳聚糖溶液按照1∶2∶4的比例配置成混合液,应用3D打印机制作复合支架。将脂肪干细胞随机分为对照组、共培养组和淫羊藿苷组。对照组常规培养脂肪干细胞,共培养组加入复合支架和脂肪干细胞培养,淫羊藿苷组加入复合支架、脂肪干细胞及10μg/L淫羊藿苷培养。成骨诱导7 d后,MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和I型胶原(Col-I)表达水平。结果共培养组和淫羊藿苷组细胞相对存活率明显低于对照组(P均<0.05),但淫羊藿苷组明显高于共培养组(P>0.05);3组间细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);共培养组和淫羊藿苷组ALP、BSP、RUNX2、Col-I表达水平均明显高于对照组(P均<0.05),淫羊藿苷组BSP、RUNX2表达水平均明显高于共培养组(P均<0.05)。结论淫羊藿苷能促进与复合支架共培养的脂肪干细胞的增殖和成骨分化。     

淫羊藿苷对SAMP8小鼠记忆能力、神经元微观形态及GSK-3β蛋白表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对SAMP8小鼠记忆能力、神经元微观形态及GSK-3β蛋白表达的影响,为临床治疗提供依据。方法:采用随机、平行对照设计将所选动物分为4组,正常组、模型组、安理申组、淫羊藿苷组,每组各10只,淫羊藿苷组的小鼠灌胃剂量为20 mg/kg,安理申组的小鼠灌胃剂量为1.3 mg/kg,药液浓度均为2 mg/m L。模型组予蒸馏水灌胃10 m L/kg,时程长为4周,灌胃结束后进行水迷宫,电镜,Western检测。结果:(1)模型组与正常组比较在水迷宫实验中逃避潜伏时间明显增长,安理申组与淫羊藿苷组可以改善这一现象。在第一天的训练中淫羊藿苷组、模型组和正常组没有表现出明显统计学意义(P>0.05)。在随后的四天中淫羊藿苷组和安理申组的小鼠潜伏期明显低于模型组,均有明显统计学意义(P<0.05)。在第五天的在空间探索实验中淫羊藿苷组、安理申组穿越平台次数明显多于模型组,其中淫羊藿苷组最为明显。(2)电镜下观察发现,模型组与正常组比较神经元细胞器丰富度明显降低,各个细胞器结构有明显损害,淫羊藿苷组与安理申组可以保护细胞器的完整程度,降低细胞水肿程度,使线粒体,内质网等细胞器相对完整,其中淫羊藿苷组在降低细胞水肿方面优于安理申组,保护线粒体以及内质网方面相差不大。(3)Western检测发现海马DG区模型组GSK-3β表达量升高最明显,淫羊藿苷组与安理申组表达量相对较少,安理申组相对更明显,两组均介于模型组与正常组之间。结论:淫羊藿苷可改善模型小鼠学习记忆能力,该作用可能与保护小鼠海马神经元结构,降低神经纤维缠结相关蛋白表达相关。     

基于内质网应激探讨淫羊藿苷对TM4细胞损伤的保护作用

目的:基于内质网应激(ERS)探讨淫羊藿苷对D-半乳糖(D-Gal)诱导的小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞损伤的保护作用。方法:将TM4细胞分为正常对照组、模型组及淫羊藿苷低(0.5μmol/L)、高(1.0μmol/L)浓度组。Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达水平。结果:Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达显著降低(P0.01),给予淫羊藿苷干预后上述蛋白表达均显著升高(P0.05或P0.01)。结论:淫羊藿苷可减轻D-Gal诱导的TM4细胞损伤,其机制可能与上调内质网应激信号通路有关。     

淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导H9C2细胞心肌重塑模型CYP27B,维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导H9C2大鼠心肌细胞心肌重塑模型CYP27B与维生素D受体mRNA表达的影响。方法将H9C2细胞随机分为6个组:对照组,模型组,淫羊藿苷0.1μmol/L+模型组,淫羊藿苷1μmol/L+模型组,淫羊藿苷10μmol/L+模型组,淫羊藿苷100μmol/L+模型组,利用浓度为80μmol/L的异丙肾上腺素(ISO)进行造模。MTT法观察H9C2心肌细胞增殖活性,Real-Time QPCR法检测CYP27B与维生素D受体mRNA表达。结果 MTT结果显示与对照组相比模型组细胞存活率下降(P0.05),经过淫羊藿苷处理后细胞存活率提高(P0.05)。Real-TimeQPCR显示模型组CYP27B与维生素D受体基因mRNA表达量相对对照组均降低(P0.05),不同浓度淫羊藿苷作用后CYP27B与VDR基因表达量相对模型组则上升(P0.05)。结论淫羊藿苷可以通过调节维生素D轴对异丙肾上腺素诱导的H9C2细胞心肌重塑模型产生保护作用。     

补肾中药有效成分对SAMP8小鼠海马APP及PS1基因表达的影响

[目的]观察补肾中药有效成分淫羊藿苷、补骨脂素、齐墩果酸对6月龄SAMP8小鼠淀粉样前体蛋白(APP)及早老素-1(PS1)基因表达的作用,为补肾中药防治老年性痴呆提供实验依据。[方法]选择6月龄健康雄性SMAP8小鼠40只,随机分为模型组、淫羊藿苷组、补骨脂素组、齐墩果酸组,每组10只。另取10只SAMR1小鼠作为对照组。治疗组分别给予淫羊藿苷、补骨脂素、齐墩果酸灌胃治疗(浓度为淫羊藿苷20 mg/kg,齐墩果酸、补骨脂素各50 mg/kg),每日1次,每次0.3 mL,连续灌胃4周。对照组与模型组均给予等量生理盐水灌胃。4周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织PS1基因表达。[结果]1)与对照组相比,淫羊藿苷组、齐墩果酸组及补骨脂素组对APP基因下调均具有统计学意义(P<0.05)。2)与对照组相比,补骨脂素组有下调小鼠海马组织PS1基因的趋势,淫羊藿苷组及齐墩果酸组对PS1基因下调具有统计学意义(P<0.05)。[结论]补肾中药可能通过下调APP及PS1基因的表达,进而达到治疗老年性痴呆作用。     

基于网络药理学的淫羊藿苷对氟尿嘧啶所致大鼠骨髓间充质干细胞凋亡抑制作用的机制研究

目的基于网络药理学的淫羊藿苷（ICA）对氟尿嘧啶（5-FU）所致大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）凋亡抑 制作用机制研究。方法在TCMSP 数据库收集淫羊藿苷的药代动力学相关数据,利用CTD 和GeneCards 两个 数据库,检索获取淫羊藿苷的所有潜在作用靶点,采用DAVID 6.8 数据库对淫羊藿苷潜在靶点进行GO 富集 分析以及进一步的筛选收集关键靶点。将关键靶点导入STRING 数据库,结合运用Cytoscape 3.8.2 软件制作蛋 白互作网络（PPI）,并用STRING 数据库进行通路富集分析（KEGG）。采用Western Blot 法检测Akt/GSK3β/ CyclinD1 通路3 个特征蛋白以及凋亡密切相关蛋白Bcl-2、Bax 的表达情况。结果获得淫羊藿苷潜在作用靶 点83 个,进一步筛选得到关键靶点29 个,通路富集分析结果按照FDR 值从小到大排序,其前20 条中具有重 要作用的为PI3K-Akt 通路、HIF-1 信号通路以及FoxO 信号通路等。基于KEGG 富集分析结果,建立了 PI3K-Akt 核心作用通路的可视化通路网络图。Western Blot 实验结果揭示,与模型组比较,淫羊藿苷处理组 p-Akt（P＜0.01）的表达升高,p-GSK3β 水平和CyclinD1 的表达有升高趋势（P＞0.05）,Bcl-2/Bax 比值升高 （P＜0.001）;LY294002 抑制Akt 磷酸化之后,相应p-Akt、p-GSK3β 水平和CyclinD1 的表达下降（P＜0.05, P＜0.001）,Bcl-2/Bax 比值减少（P＜0.001）。结论淫羊藿苷对5-FU 所致大鼠骨髓间充质干细胞凋亡抑制作 用可能是通过激活Akt/GSK3β/CyclinD1 信号通路以及Bcl-2 途径介导的。     

淫羊藿苷对强直性脊柱炎成纤维细胞向成骨型分化的影响

目的异位成骨是强直性脊柱炎病理过程的核心环节。成纤维细胞是AS异位成骨的靶细胞,BMP/Smad信号传导通路是骨形成过程中的一条重要通路。该研究通过观察淫羊藿苷对体外培养强直性脊柱炎成纤维细胞增殖和凋亡的作用,同期观察淫羊藿苷对体外培养AS成纤维细胞成骨表型表达及BMP/Smad信号通路蛋白表达的影响,初步探讨淫羊藿苷干预强直性脊柱炎异位成骨的分子机制。方法采用组织学原代培养法,建立人髋关节囊成纤维细胞系,应用免疫组化法鉴定细胞来源。以第3代对数生长期的AS成纤维细胞为研究对象,将实验分为AS空白对照组与淫羊藿苷小剂量组(25μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)与大剂量组(100μg/mL)。MTT法检测淫羊藿苷干预下AS成纤维细胞的增殖情况;Annexin V法流式细胞术检测淫羊霍苷对AS成纤维细胞凋亡的影响。检测淫羊藿苷作用下AS成纤维细胞成骨表型的表达状况,观察其ALP活性、胶原合成及OC分泌量。Western blotting技术检测在不同剂量淫羊藿苷干预下,AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路中Smad1、Smad5、Smad4及成骨标志基因Cbfa-1蛋白的表达情况。结果淫羊藿苷100μg/mL可明显抑制AS成纤维细胞增殖(P0.05),且无细胞毒产生,各组细胞不同时间点增殖情况无显著差异;淫羊藿苷各剂量组对AS成纤维细胞凋亡均无明显作用。大剂量淫羊藿苷对AS成纤维细胞ALP活性、胶原合成及OC分泌均有明显抑制作用。与AS对照组相比,淫羊藿苷作用后AS成纤维细胞BMP/Smad信号通路Smad1、Smad4、pSmad1以及Cbfa-1蛋白表达受明显抑制(P0.05)。结论淫羊藿苷能有效抑制AS成纤维细胞增殖,且抑制AS成纤维细胞成骨表型的表达,其分子机制可能是淫羊藿苷通过干预BMP/Smad信号通路活化,从而调节成骨标志基因Cbfa-1表达,抑制AS成纤维细胞向成骨型分化,可能是淫羊藿苷干预AS异位成骨的机制之一。     

基于miR-223-3p研究淫羊藿苷治疗大鼠颅脑外伤后神经损伤的作用机制

目的基于miR-223-3p探讨淫羊藿苷治疗大鼠颅脑外伤神经损伤的作用机制。方法随机选取70只大鼠,建立局部脑挫裂伤模型,将建模成功的60只大鼠随机分为模型组、淫羊藿苷(30mg/kg)组、淫羊藿苷(30mg/kg)+阴性对照组和淫羊藿苷(30mg/kg)+miR-223-3pantagomir组,每组15只,另取15只大鼠作为对照组。给予相应药物进行干预,末次干预2 h后,对各组大鼠进行改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,m NSS);测定各组大鼠脑组织含水量;采用ELISA法检测各组大鼠脑组织白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和IL-1β水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织病理变化;采用TUNEL染色法观察各组大鼠脑组织神经元凋亡情况;采用q RT-PCR法检测各组大鼠脑组织miR-223-3p和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-bindingoligomerizationdomain-likereceptor protein 3,NLRP3)m RNA表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-223-3p对NLRP3的靶向性。结果与模型组比较,淫羊藿苷组大鼠m NSS显著降低(P0.05),脑组织含水量显著降低(P0.05),脑组织IL-18和IL-1β水平显著降低(P0.05);脑组织损伤面积和红细胞数减少;神经元细胞凋亡指数显著降低(P0.05);脑组织miR-223-3p mRNA表达水平升高,NLRP3 mRNA表达水平显著降低(P0.05);脑组织NLRP3、Caspase-1和Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与淫羊藿苷组比较,淫羊藿苷+miR-223-3pantagomir可显著逆转上述指标(P0.05)。双荧光素酶报告结果显示,miR-223-3p可靶向调控NLRP3。结论淫羊藿苷对大鼠颅脑外伤神经损伤具有改善作用,其作用机制可能与调控miR-223-3p从而靶向抑制NLRP3表达、抑制炎性反应、减少神经元细胞凋亡有关。     

淫羊藿多糖改善小鼠学习记忆障碍作用的实验研究

目的:探讨淫羊藿多糖改善小鼠学习记忆障碍的作用及其可能机制。方法:将昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、吡拉西坦阳性对照(30 mg/kg)组及淫羊藿多糖高(120 mg/kg)、低(60 mg/kg)剂量组,每组10只。灌胃给药,1次/d;连续给药15 d,末次给药结束30 min后,腹腔注射东莨菪碱2 mg/kg建立记忆障碍小鼠模型;考察淫羊藿多糖对学习记忆障碍小鼠学习能力、胆碱能神经递质、氧化应激水平、炎症因子及Cleaved Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达的影响。结果:与模型组比较,淫羊藿多糖高、低剂量组小鼠5 min内错误次数显著减少,跳台潜伏期显著延长(P0.05);与模型组比较,淫羊藿多糖高、低剂量组小鼠脑组织乙酰胆碱转移酶活性、CAT、SOD、IL-4、IL-10水平显著升高,乙酰胆碱酯酶活性、TNF-α、MDA含量及Cleaved Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:淫羊藿多糖具有改善小鼠学习记忆障碍的作用,其机制与调节胆碱能神经递质活性、抗氧化应激、降低炎症反应及抑制凋亡有关。     

淫羊藿苷通过Akt /GSK3β/CDK通路抑制CLC5肝癌细胞增殖

目的 研究淫羊藿苷对肝细胞癌细胞CLC5增殖能力的影响及其可能的机制。方法 通过网络药理学筛选淫羊藿苷作用靶点，构建靶点网络及构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，预测淫羊藿苷可能作用靶点及相关通路；使用梯度浓度（0、6.25、12.5、25、50 μmol·L^-1）淫羊藿苷刺激肝细胞癌CLC5细胞，通过细胞活性及增殖检测（CCK-8）法检测淫羊藿苷对CLC5细胞活力的影响；使用不同浓度（0、25、50 μmol·L^-1）淫羊藿苷处理肝细胞癌CLC5细胞，通过Edu-488及克隆形成实验（Clone Forming）检测淫羊藿苷对CLC5细胞增殖的影响；使用不同浓度淫羊藿苷分别刺激CLC5细胞不同时间，通过蛋白免疫印迹法（Western blot）验证淫羊藿苷对蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）/细胞周期依赖激酶（CDK）通路蛋白表达水平的影响情况。结果 网络药理学分析发现淫羊藿苷作用于肝细胞癌的机制与阻滞细胞周期抑制肿瘤细胞增殖有关；CCK-8法结果表明，与空白组比较，淫羊藿苷组CLC5细胞活力显著下降（P<0.01），呈时间-浓度依赖性；与空白组比较，淫羊藿苷组Edu-488阳性率及克隆形成菌落数量明显减少（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，淫羊藿苷组p-Akt、p-GSK3β、CDK4、细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁）的蛋白表达水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。结论 淫羊藿苷可抑制阻滞肝细胞癌细胞周期，抑制肝细胞癌增殖，作用机制可能与抑制Akt/GSK3β/CDK通路有关。     

补肾健骨类中药活性成分对高糖诱导成骨细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨柚皮苷、补骨脂二氢黄酮、淫羊藿苷等3种补肾健骨类中药活性成分对高糖诱导成骨细胞的保护作用和机制。方法:建立高糖诱导成骨细胞模型;实验设正常对照组、模型组(30mmol/L葡萄糖)和给药组。给药组为分别在模型细胞中加入补骨脂二氢黄酮组、柚皮苷组和淫羊藿苷。作用48h后,观察细胞形态,MTT法检测成骨细胞活性,RT-PCR检测成骨细胞中胰岛素受体底物(IRS1)、AKT、Runx2的mRNA表达,Western Blot法检测各组细胞IRS1、AKT、Runx2蛋白的表达。结果:高糖(5.4mg/ml)诱导的成骨细胞,48h后细胞存活率较正常组显著下降(P0.05)。与模型组相比,淫羊藿苷组给药后48h,细胞存活率显著上升(P0.05)。柚皮苷、补骨脂二氢黄酮、淫羊藿苷给药后,AKT、IRS1、Runx2的mRNA表达上升(P0.05),AKT、IRS1、Runx2蛋白表达上升(P0.05)。结论:柚皮苷、补骨脂二氢黄酮和淫羊藿苷对高糖诱导的成骨细胞具有保护作用,促进其增殖,作用机制可能与调控成骨细胞ISR1/AKT/Runx2信号通路有关。     

淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量的影响。方法以2×10~4·ml~(-1)密度接种细胞,用异丙肾上腺素诱导小鼠HL-1心肌细胞损伤,实验分为正常组、模型组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、维生素D组。MTT法检测各组HL-1心肌细胞存活率。RealTime PCR法检测各组HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结果 MTT法显示不同剂量的淫羊藿苷均可提高小鼠肥大HL-1心肌细胞的存活率,且淫羊藿苷的浓度在10μmol·L-1时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,与模型组比较,不同剂量的淫羊藿苷均可明显下调(P0.05)异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结论淫羊藿苷对小鼠肥大HL-1心肌细胞具有保护作用,其机制可能通过维生素D轴调节VDR mRNA表达水平有关。