杨梅树皮提取物体外抗人肺腺癌A549作用的实验研究

目的:分离筛选出杨梅树皮中具有抗人肺腺癌A549的有效部位。方法:采用系统溶剂提取分离法,从杨梅树皮中分离出有效成分,通过~3H-TdR掺入法观察各提取物体外对A549细胞的抑制作用,确定抑瘤效果最好杨梅树皮提取物。结果:各杨梅树皮提取物对A549细胞均有很好的抑制作用,其中杨梅树皮醇提取物和氯仿萃取层部位对人肺腺癌A549的抑制作用最明显,抑制率分别为3.5%～97.0%、38.7%～99.4%,并且具有较好的量效关系。结论:杨梅树皮提取物体外对人肺腺癌A549具有很好的抑制作用。     

4种蜘蛛毒素对人肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的 比较4种蜘蛛毒素对肺腺癌细胞株A549体外增殖抑制作用的强弱.方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定了不同质量浓度的雷氏大疣蛛、敬钊缨毛蛛、海南单柄蛛和虎纹单柄蛛毒素对人肺腺癌细胞株A549的抑制作用,DNA琼脂糖凝胶电泳法检测4种蜘蛛毒素对A549细胞的凋T亡作用并观察细胞形态变化.结果 4种蜘蛛毒素对A549的细胞增殖具有不同的抑制作用;同一蜘蛛毒素浓度越高抑制作用越好,蜘蛛毒素作用时问越长抑制效果越强,量效关系和时效关系良好.经雷氏大疣蛛和敬钊缨毛蛛毒素作用的A549细胞电泳均出现相差约200 bp的DNA梯子状条带,形态学观察到细胞凋亡.结论 4种蜘蛛毒素对A549细胞增殖的抑制作用效果不同,以雷氏大疣蛛毒素作用最强,IC50为16 μg/mL.     

卷丹百合体外对肺腺癌A_(549)细胞抑制作用的实验研究

目的:研究百合对肺腺癌细胞株A549增殖作用的影响及其相关机制。方法:体外培养肺腺癌细胞株A549,用不同浓度的百合水提物分别作用于对数期生长的A549细胞24、48和72h,MTT(甲基噻唑基四唑)比色法检测百合对A549细胞增殖的抑制率,碘化丙啶(PI)染色,荧光显微镜下观察细胞形态改变及凋亡情况。结果:MTT法检测结果显示,百合水提物在1~8mg/mL浓度范围内、24~72h时间范围内对A549的生长有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系(P<0.05);PI染色荧光显微镜观察显示百合作用48h后,细胞出现凋亡的形态学改变。结论:百合具有体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用,其可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抑制A549细胞增殖的作用。     

平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的:研究中药复方平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及诱导细胞凋亡的作用。方法:采用CCK-8比色法和磷脂酰丝氨酸外翻分析法分别检测平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的作用。平肺浸膏(1 g.mL-1)由中日友好医院药学部提供,实验前经定性滤纸粗滤,0.22μm滤膜过滤后分装。人肺腺癌A549细胞常规复苏、培养及传代,处于对数生长期开始用于实验。实验分为空白对照、生药终浓度1,5,10 g.L-1共4组。细胞以7×104/mL接种于96孔培养板,24 h细胞贴壁后加不同浓度平肺浸膏,对照组只换液不加药。分别于加药后24,48,72 h用CCK-8法检测细胞增殖情况。将细胞以3×104/mL接种于6孔培养板,5 h细胞贴壁后加不同浓度的平肺浸膏。药物作用17 h后收获细胞,应用磷脂酰丝氨酸外翻分析法,于流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:平肺浸膏生药5,10 g.L-1在体外作用24 h以上表现出对A549细胞增殖的抑制作用,与常规对照组相比存在统计学差异(P<0.05),且这种抑制作用随时间和药物浓度增加而增强。生药10 g.L-1可诱导早期细胞凋亡,与常规对照组相比存在统计学意义(P<0.05)。结论:中药复方平肺浸膏能够抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡。     

β-榄香烯联合高温对肺腺癌A549细胞作用的实验研究

目的:观察榄香烯联合高温对人肺腺癌A549细胞的协同杀伤作用。方法:用MTT法检测高温处理或常温处理细胞对榄香烯的敏感性。采用15μg/mL榄香烯或60μg/mL榄香烯联合42℃高温处理1.5h或常温处理,使用流式细胞仪检测细胞周期,透射电镜观察细胞形态学改变。结果:高温作用后,榄香烯对A549细胞的IC50从35.43μg/mL降低至28.68μg/mL;MTT法检测显示低浓度榄香烯联合高温对A549细胞具有明显的协同杀伤作用,细胞呈现凋亡形态,可见凋亡小体,同时有细胞坏死。结论:低浓度榄香烯联合高温对A549细胞有协同细胞毒效应。     

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;Western Blot 检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞;40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12,24,36,48h,药物组G1～G0期细胞百分比分别为(42.82±3.95)%,(51.84±6.37)%,(54.76±8.85)%和(64.94±7.56)%,药物组细胞凋亡率分别为(5.72±0.98)%,(7.10±2.08)%,(19.89±4.25)%,(32.55±6.51)%,均高于对照组(P均﹤0.05),且G1～G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加;Western Blot显示,白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞,Bax的表达随作用时间增加而增加,Bcl-2的表达随作用时间增加而减低.结论 白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加;其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1～G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的.     

姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对A549细胞存活率的影响。运用吖啶橙染色方法,观察细胞形态变化。利用TUNEL染色,检测DNA断裂情况。采用Western blot技术,检测P53蛋白表达变化。结果：姜黄素显著抑制A549细胞增殖。吖啶橙和TUNEL染色显示姜黄素可以诱导A549细胞凋亡。Western blot结果显示姜黄素提高了A549细胞中P53蛋白的表达。结论：姜黄素通过激活P53蛋白,抑制A549细胞增殖和诱导A549细胞凋亡。     

平肺复方对人肺腺癌A549细胞PPAR-γ信号通路的影响

目的研究平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖及过氧化物酶体增长因子活化受体（peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR）-γ信号通路的影响。方法运用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）比色法检测平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并添加PPAR-γ特异性阻断剂GW9662,观察PPAR-γ通路阻断后平肺复方对A549细胞生长的影响。结果平肺复方生药5 mg/ml和10 mg/ml在作用24小时、48小时和72小时表现出对A549细胞增殖的抑制作用（P〈0.05）;单纯加入GW9662对细胞的生长并未产生影响;加入GW9662的平肺复方仍可对细胞生长产生抑制作用（P〈0.05）,但这种抑制作用明显弱于平肺复方（P〈0.05）。结论平肺复方的抗肿瘤作用机制可能部分涉及到PPAR-γ信号通路,但并不完全是通过这一条信号通路在发挥作用。     

大黄及其有效成分对人肺腺癌A549细胞的影响

目的：观察大黄及其有效成分大黄素对人肺腺癌A549细胞的影响,为临床抗肿瘤提供实验证据。方法：采用实时细胞分析系统和改良MTT方法,观察单味中药大黄（0.05μg/L、0.5μg/L、5μg/L）及其有效成分大黄素（16 nmol/L、80 nmol/L、400 nmol/L、2μmol/L、10μmol/L）对A549细胞的作用,同时观察FRAP/mTOR抑制剂、PI3K抑制剂、MAPKK抑制剂和Caspase-3抑制剂对上述作用的影响。结果：大黄及其有效成分大黄素能显著抑制A549细胞增殖,并呈剂量依赖性,动态IC50研究发现大黄素在55 h时IC 50值最低,反应此时刻抑制A549细胞效应最大,其中Caspase-3抑制剂可以明显阻断大黄素对A549细胞的抑制作用。结论：大黄及其有效成分大黄素能有效抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性,证实大黄素是通过激活Caspase-3来抑制肺腺癌细胞的增殖。     

Caco-2细胞体外吸收模型的建立及评估

目的:建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法:将细胞接种在Transwel转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值(TEER)和表观渗透系数(Papp)及碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果:培养21d后,细胞间形成紧密连接,跨膜电阻值达到恒定值,为500Ω/cm2,表观渗透系数低于0.5×10-6cm/s;肠腔侧碱性磷酸酶活性显著高于基底侧酶活性。结论:在本实验室条件下构建的Caco-2细胞模型在形态上与小肠上皮细胞相似,细胞已产生极性,可作为小肠吸收的体外模型。     

猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌A549细胞活性研究

目的：观察猫爪草总皂苷体外对人非小细胞肺癌A549细胞活性的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法：采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对A549细胞凋亡和周期的影响。结果：猫爪草总皂苷对A549细胞增殖和集落形成均有较好的抑制作用,呈现较好的量效关系,可促进A549细胞的早期凋亡,细胞周期出现G0/G1期的阻滞。结论：猫爪草总皂苷能较好的抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导凋亡、G0/G1期阻滞有关。     

胰岛细胞损伤体外模型的建立及在药物筛选中的应用

目的:体外建立胰岛细胞损伤模型,并初步应用于保护和修复胰岛细胞中药的筛选。方法:将INS-1胰岛细胞接种于96孔板中,以四氧嘧啶诱导建立体外胰岛细胞损伤模型,MTT法测定不同剂量四氧嘧啶对细胞活力的影响,并应用于研究不同药物对损伤的胰岛细胞的增殖作用。结果:将密度为1×104个/孔的INS-1细胞接种于96孔板,细胞24h贴壁后予以12mmol.L-1四氧嘧啶诱导,可建立稳定的胰岛细胞损伤模型;翻白草、银杏叶能够保护和修复四氧嘧啶损伤的INS-1细胞。结论:以四氧嘧啶诱导胰岛细胞损伤的方法,可建立稳定的体外胰岛细胞损伤模型,并可用于保护修复胰岛细胞药物的筛选。     

加味四君固本汤与Iressa联合用药对裸鼠移植瘤的影响

目的:研究加味四君固本汤对皮下成瘤裸鼠的影响。方法:使用人非小细胞肺癌A549细胞在裸鼠皮下接种成瘤,随机分成对照组,易瑞沙(Iressa)治疗组(100 mg·kg-1·d-1),中药治疗组(加味四君固本汤0.10 g·kg-1·d-1),加味四君固本汤和Iressa联合治疗组,观察肿瘤生长情况及裸鼠生存质量,并采用免疫印记实验(Western blot)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组肿瘤中上皮生长因子受体(EGFR)蛋白质与mRNA的表达情况。结果:西药组、中药组和联合用药组的肿瘤抑制率分别为55.75%、35.22%和82.3%,与对照组比较差异显著(P<0.01),联合用药组与单独用药组差异具有统计学意义(P<0.01)。观察治疗期间裸鼠的运动量、饮食、体重等指标,显示联合用药组裸鼠的生存质量优于西药组。Western Blot与RT-PCR结果显示联合用药组的肿瘤组织中增殖相关的指标明显低于其他3组。结论:加味四君固本汤与Iressa联合用药能更好地抑制肿瘤生长,对肿瘤的治疗效果明显优于Iressa组。加味四君固本汤能提高裸鼠治疗过程中的生存质量。     

通脉降脂口服液对体外培养兔主动脉壁平滑肌细胞生长周期的实验研究

报告了通脉降脂口服液对体外培养的兔主动脉壁中层平滑肌细胞（Ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ，ＳＭＣ）周期动力学的影响。观察到１．５％、２．０％浓度的通脉降脂口服液随着加药培养时间的延长，可使Ｇ０／Ｇ１期ＳＭＣ所占百分比逐渐减低，Ｓ期ＳＭＣ百分比逐渐升高，而且药物浓度较高时这种作用更为明显。提示通脉降脂口服液对体外培养兔主动脉壁中层ＳＭＣ的增殖有明显的抑制作用。     

麦冬皂苷B体外调控非小细胞肺癌A549细胞miRNA-34b表达的研究

目的：本研究主要观察不同方式处理后的非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞中miRNA?34b表达水平,探讨miRNA?34b对MET信号通路的调控机制,以及麦冬皂苷B（OPB）抑癌效应的分子机理,探寻治疗NSCLC的新靶点。方法：采用非小细胞肺癌A549细胞、胚肺成纤维细胞MRC?5、A549+OPB细胞、感染过表达慢病毒LV?hsa?mir?34b的A549细胞、以及感染阴性对照CON181B病毒的A549细胞作为研究对象,分别设为CON组、MRC?5组、CON+OPB组、Micro?up组、NC组。采用qRT?PCR方法检测miR?34b在CON组、MRC?5组、A549+OPB组A549细胞中的表达情况。使用生物信息学软件预测miRNA?34b可能的下游功能靶基因。使用qRT?PCR的方法定量分析OPB对MET基因表达的影响,用Western blot检测miRNA?34b和OPB对靶MET蛋白表达的影响。结果：与MRC?5组相比,A549细胞中miRNA?34b的表达明显减少,加入OPB后miR?34b的表达增加。生物信息学预测显示MET基因是miR?34b可能的关键下游靶基因。加入OPB后,MET基因水平和蛋白水平的表达均降低。结论：OPB可能通过上调A549细胞miRNA?34b表达,抑制下游靶基因MET进而发挥抗癌作用。     

塔斯品碱诱导肺癌细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨塔斯品碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549细胞培养,不同浓度塔斯品碱干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,研究不同浓度塔斯品碱对其增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果:塔斯品碱可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,且呈时间剂量依赖性;FCM检测发现塔斯品碱阻滞细胞周期于S期;电镜下可见塔斯品碱能够诱导细胞出现核固缩、细胞核内染色质凝聚和凋亡小体等凋亡现象。结论:塔斯品碱有抗肿瘤和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

固本抑瘤Ⅱ号及其拆方对A549抑瘤及与化疗联合用药的实验研究

目的：探讨益气活血中药固本抑瘤Ⅱ号（全方）和各拆方组药物对A549肺癌细胞生长的影响及与化疗药物顺铂（DDP）联合应用的效果。方法：固本抑瘤Ⅱ号全方和根据功效拆分的益气组、行气活血组、培补肝肾组、散结消瘢组药物，分别制备水提物。采用MTT法检测各组药物对A549细胞生长的影响及与DDP联合作用的效果。结果：单独应用全方和行气活血组水提物对A549细胞生长表现为抑制作用，IC50分别为33．21mg生药／mL和9．55mg生药／mL；与DDP合用表现为增效作用，增效倍数分别为1．23和1．77，合并指数为1．05和0．83，表现出协同和相加作用。结论：固本抑瘤Ⅱ号在体外实验中能够抑制A549细胞生长，与DDP合用有一定的化疗增效作用；行气活血组药物也具有抑瘤和增效作用，且作用与全方接近。提示行气活血组中药为体外实验中全方抗肿瘤作用及化疗增效作用的有效组分。     

人子宫内膜细胞体外培养技术的改良研究

目的:通过体外分离培养纯化子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞,建立原代子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞模型。方法:酶解新鲜子宫内膜组织,经过反复过滤、离心、细胞传代,得到子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞。用免疫细胞化学检测其纯度。结果:分离的间质细胞纯度可达94%以上,间质细胞可有限传代,并至少可存活1月余;分离的腺上皮细胞纯度可达90%以上,腺上皮细胞不能长久生长。结论:建立了可体外培养、传代的子宫内膜细胞。该方法可在分子水平研究子宫内膜细胞的功能,且省时、高效。     

体外培养原代脊髓神经细胞

目的：用一种新方法在体外培养原代脊髓神经细胞。为脊髓神经细胞缺血再灌注损伤方面的分子机制及药物作用机制的研究提供条件。方法：取出生于24h内的SD大鼠的脊髓，然后将其中的分离出的神经细胞作原代细胞，再将其进行培养。最后用细胞形态学及细胞免疫化学检测法来检测培养细胞的状况。结果：大鼠的脊髓神经细胞在体外培养生长情况好，纯度高。结论：培养脊髓神经细胞时该方法简便，且培养的细胞生长好，纯度高。这将有助于对脊髓神经细胞的研究开展。