芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察芍药苷对血管紧张素Ⅱ刺激下离体大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响和基质金属蛋白酶-2活性的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、芍药苷干预血管平滑肌细胞,采用MMT法检测细胞增殖,硝酸还原酶及化学比色法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,应用酶谱法测基质金属蛋白酶-2活性的变化.结果 AngⅡ能明显促进平滑肌增殖、提高基质金属蛋白酶-2活性,芍药苷在125～1000 μg/mL能显著提高NO、NOS、iNOS水平,抑制平滑肌增殖,并呈剂量及时间依赖性;能显著抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌基质金属蛋自酶-2活性的升高.结论 芍药苷可能通过升高NO和NOS水平抑制AngⅡ诱导的平滑肌胞增殖.     

血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖迁移及温经活血中药的干预作用

目的：观察温经活血中药对AngⅡ诱导VSMC增殖和迁移的抑制作用及其对相关因子的影响。方法：用组织贴块法培养兔VSMC，以AngⅡ作为诱导因素，复制VSMC增殖迁移模型。用温经活血中药血清进行干预。应用MTT法测定VSMC增殖活性，用免疫细胞化学检测方法测定细胞增殖核抗原（PCNA）及血小板源性生长因子（PDGF-BB）。结果：AngⅡ作用后细胞增殖活性和迁移距离明显增加。而中药组则降低。AngⅡ组PCNA阳性细胞数和吸光度明显高于空白对照组、PDGF—BB呈强阳性表达，中药组则均显著降低。结论：温经活血中药可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖和迁移、抑制PCNA和PDGF—BB的蛋白表达。     

大黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察大黄素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制。方法:斑贴法培养大鼠主动脉VSMC,AngⅡ刺激VSMC建立细胞增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖,观察大黄素(10,20,40,80μmol.L^-1)、亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME,100μmol.L^-1)对AngⅡ诱导VSMC增殖的影响。免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达;硝酸还原酶及化学比色法测细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMC iNOS mRNA的表达。结果:大黄素在10~80μmol.L^-1呈剂量及时间依赖性抑制VSMC增殖,但可被100μmol.L^-1的L-NAME部分抵消;大黄素能减少PCNA阳性细胞表达,升高NO,NOS,iNOS水平,增加iNOS mRNA的表达。结论:大黄素对AngⅡ诱导的VSMC增殖有抑制作用,抑制VSMC PCNA的表达,上调iNOS基因表达,升高NO水平可能是其发挥作用的机制。     

止消通脉宁干预TGF-β_1诱导HK-2细胞增殖的研究

目的：通过观察止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖的影响,探讨治疗糖尿病肾病有效中药复方止消通脉宁在防治肾间质纤维化方面的作用。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组（TGF-β110ng/mL）、空白血清对照组（TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清）、干预1组（TGF-β110 ng/mL＋10%低剂量止消通脉宁含药血清）、干预2组（TGF-β110 ng/mL＋10%中剂量止消通脉宁含药血清）、干预3组（TGF-β110 ng/mL＋10%高剂量止消通脉宁含药血清）。倒置显微镜下观察各组细胞形态,MTT法检测细胞增殖。结果：TGF-β110 ng/mL能显著诱导人肾小管上皮细胞增殖,与空白对照组相比有显著性差异（P〈0.05）,且其作用随处理时间的延长而增强,但和止消通脉宁含药血清共同作用后,其促细胞增殖作用受到一定抑制（P〈0.05）。结论：止消通脉宁能抑制HK-2细胞增殖,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。     

扶肝化纤汤含药血清对TGF-β1诱导HSC-T6细胞增殖及TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨扶肝化纤汤抗肝纤维化的可能作用机制。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、扶肝化纤汤组,每组20只,扶肝化纤汤组以16. 78g/kg扶肝化纤汤灌胃,正常对照组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续7天,末次给药后于大鼠腹主动脉取血制备含药血清。培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,设置空白对照组及1%、2%、5%、8%、10%、15%、20%扶肝化纤汤含药血清组,检测不同浓度扶肝化纤汤含药血清对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的HSC-T6活化增殖的影响,确定15%扶肝化纤汤含药血清为最佳给药浓度。细胞实验分为空白对照组(HSC-T6细胞)、正常组(HSC-T6细胞+正常对照血清+TGF-β1)、中药组(HSC-T6细胞+15%扶肝化纤汤含药血清+TGF-β1);阻断组1 (HSC-T6细胞+SIS3)、阻断组2 (HSC-T6细胞+正常对照血清+TGF-β1+SIS3)及阻断组3 (HSC-T6细胞+15%扶肝化纤汤含药血清+TGF-β1+SIS3),培养24 h后比较各组HSC-T6细胞增殖抑制率及细胞中Smad 3、Smad 7、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原mRNA表达。结果与空白对照组比较,正常组、中药组、阻断组2、阻断组3 HSC-T6细胞增殖抑制率差异有统计学意义(P 0. 01)。与正常组比较,中药组、阻断组2、阻断组3HSC-T6细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P 0. 01)。与中药组比较,阻断组3抑制率明显升高(P 0. 01)。与空白对照组比较,中药组、阻断组2、阻断组3均可下调Smad 3、Ⅰ型胶原mRNA表达,上调Smad 7、α-SMA mRNA表达(P 0. 01);正常组可上调Smad 3、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA表达,下调Smad 7mRNA表达(P 0. 01)。与正常组比较,中药组、阻断组2、阻断组3均可下调Smad 3、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA表达,上调Smad 7 mRNA表达(P 0. 01)。与中药组比较,阻断组3可下调Smad 3、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA表达,上调Smad 7 mRNA表达(P 0. 01)。结论扶肝化纤汤能够抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的活化增殖,其可能通过影响TGF-β1/Smad信号转导通路发挥抗肝纤维化作用。     

活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法：贴块法行SD大鼠胸主动脉VSMC分离培养。倒置相差显微镜，透射电镜，α-SM-actin鉴定，以血清药理学方法进行实验。采用通法采集药物血清，10^-6mol/LATⅡ为刺激因子，卡托普利（Captopril)为对照，活血潜阳胶囊药物血清分为10%，7.5%,5%,2.5%共4个浓度，采用结晶紫染色法观察细胞生长曲线，测定氚标-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入量了解DNA合成的变化。并用透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果：（1）经活血潜阳胶囊处理后。细胞增殖速度明显下降，生长曲线下移，^3H-TdR掺入量减少，DNA合成明显受到抑制，其作用与Captopril相当，且在一定范围内有剂量依赖性。（2）活血潜阳胶囊可以改善ATⅡ引起的细胞超微结构改变，使VSMC仍保持收缩型的特征，与Captopril的作用相似。结论：活血潜阳胶囊能抑制ATⅡ引起的VSMC增生和结构改变，从细胞水平初步探讨了活血潜阳胶囊改善高血压血管重构的机理。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的考查淫羊藿苷(Icariin)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖以及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响。方法采用体外培养HK-2细胞,分为空白对照组、模型组(5 ng·mL^-1TGF-β1)、淫羊藿苷不同浓度给药组(5 ng·mL^-1TGF-β1+25、50、100、200μg·mL^-1淫羊藿苷),培养24 h后给药处理。药物作用72 h后,观察细胞形态变化,并采用MTT法检测细胞增殖情况;采用实时荧光定量PCR法检测细胞FN mRNA的表达;采用ELISA法检测细胞上清液中FN蛋白的含量。结果与空白对照组比较,模型组的细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),HK-2细胞的FN mRNA表达显著增加(P<0.01),细胞培养液中FN蛋白含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,25μg·mL^-1淫羊藿苷可以促进HK-2细胞的增殖(P<0.01),并使细胞形态逐渐趋向正常;不同浓度组的淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞FN mRNA表达以及细胞培养液中的FN蛋白含量均有下调作用,50、100、200μg·mL^-1浓度组作用明显(P<0.01)。结论淫羊藿苷可能通过促进HK-2细胞增殖与抑制其FN mRNA及蛋白表达,发挥抗TGF-β1诱导的HK-2细胞向成纤维细胞转化的作用。     

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及血管紧张素Ⅱ的影响

目的:通过观察稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平变化的影响,探讨其防治肺动脉高压的物质基础和作用机制,为中药开发提供基础研究资料.方法:稳心草品种由药学专家进行植物基源鉴定,稳心草黄酮类化合物委托甘肃中医学院科研中心提取并鉴定.用原代培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,采用放射免疫法检测细胞外AngⅡ含量的变化.结果:稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05);稳心草黄酮类化合物各剂量组AngⅡ含量低于空白对照组,差别有统计学意义(P＜0.05),且AngⅡ含量降低的程度与药物剂量呈一定的正相关.结论:稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,机制可能是其通过对AngⅡ的抑制,此可能是稳心草黄酮类化合物具有一定的降低肺动脉高压作用的原因之一.     

补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1(TGF-β1)/骨形成蛋白-4(BMP-4)诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:应用TGF-β1/BMP-4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖。细胞分为正常组(10%正常大鼠血清),诱导增殖组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4的10%正常大鼠血清),4%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,6%正常大鼠血清及4%补肺益肾大鼠血清),6%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,4%正常大鼠血清及6%补肺益肾大鼠血清)及8%补肺益肾方含药血清组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,2%正常大鼠血清及8%补肺益肾大鼠血清)。24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,Brd U)法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1),结缔组织生长因子(CTGF),分化抑制因子-1(ID-1)和ID-2 mRNA的表达。结果:TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加(P0.05),补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8%浓度显著抑制细胞增殖(P0.01)。TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达(P0.05),8%补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导的p-Smad2/3表达(P0.05)。TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加(P0.01),8%补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达(P0.05)。结论:补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径。     

牛磺酸抑制缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及信号转导机制

目的：探讨牛磺酸（taurine,Tau）对缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响,并且研究细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）通路是否参与了Tau抑制PASMCs增殖的过程及可能的分子机制。 方法：原代培养大鼠PASMCs,选用第2~5代用于实验。Tau给药浓度为 80 mmol·L^-1,ERK1/2阻断剂（PD98059）浓度为50 μmol·L^-1,给药时间24 h。①体外噻唑蓝比色法（MTT）、细胞免疫荧光和蛋白免疫印记法检测牛磺酸在不同条件下对大鼠PASMCs增殖能力的影响,将细胞分为4组：常氧组、常氧+Tau组、缺氧组、缺氧+Tau组。②蛋白免疫印记法检测ERK1/2通路是否参与了Tau抑制缺氧诱导PASMCs增殖的进程中。实验分为5组：常氧组、缺氧组、缺氧+Tau组、缺氧+Tau+PD98059组、缺氧+PD98059组。 结果：①缺氧可诱导PASMCs增殖,常氧情况下Tau对PASMCs细胞增殖无影响,常氧及缺氧条件下Tau对PASMCs中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达无影响。Tau可以逆转缺氧诱导的细胞增殖核抗原（PCNA）（P<0.01）、细胞周期蛋白A（Cyclin A）表达上调（P<0.05）。②常氧情况下Tau对磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（p-ERK1/2）的表达没有影响,缺氧使p-ERK1/2的表达上调（P<0.01）,Tau逆转缺氧诱导的p-ERK1/2表达上调（P<0.05）。PD98059与Tau均可抑制缺氧诱导的PCNA,Cyclin A,p-ERK1/2表达上调,与缺氧单独加药Tau或缺氧单独加入PD98059对比,缺氧+Tau+PD98059组PCNA,Cyclin A,p-ERK1/2表达下调更显著。 结论：Tau可抑制缺氧诱导的PASMCs增殖,并且可能是通过ERK1/2通路调控的。     

稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及其TGF-β表达影响的实验研究

目的：研究稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMs）增殖和TGF-β表达水平的影响,探讨其防治肺动脉高压的疗效及作用机制。方法：组织帖块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,MTT法确定高、中、低剂量分组及作用时间。MTT法进行细胞计数,流式细胞仪进行细胞周期测定,ELISA法进行细胞培养夜TGF-β含量测定。结果：贴块培养的细胞经电镜鉴定为动脉平滑肌细胞;台盼蓝染色倒置显微镜观察表明细胞生长状态良好。黄酮类化合物高、中剂量组细胞计数明显减少、细胞周期G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少;细胞TGF-β含量明显降低,与空白对照组比较有统计学意义（P〈0.05）;低剂量组与空白对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：稳心草黄酮类化合物可抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,延缓细胞周期进程,调节细胞分泌TGF-β水平。     

法舒地尔对VEGF诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖是肺动脉高压（PAH）中肺动脉重塑的一个重要因素.各种刺激均可促进PASMCs的移行和增殖,导致动脉壁增厚和PAH的形成[1].血管内皮生长因子（VEGF）可以促进PASMCs的增殖[2,3],在严重的PAH发病过程中,VEGF控制着毛细血管前动脉的重构[4].小G蛋白Rho及其效应物Rho激酶（ROCK）信号通路在各种细胞功能中,包括血管平滑肌细胞的收缩和增殖中都起着重要作用.     

清达颗粒对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨清达颗粒(QDG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响。方法采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用表型标志蛋白α-SM-actin对VSMCs进行免疫荧光染色鉴定,取3～6代的VSMCs用于实验。将VSMCs分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+QDG 0.125 mg/m L组、AngⅡ+QDG 0.25 mg/m L组、AngⅡ+QDG 0.5 mg/m L组,共5组。以10~(-6) mol/L AngⅡ作为诱导剂,干预建立VSMCs增殖、迁移的模型。采用CCK-8法检测VSMCs的细胞活力,计算AngⅡ对VSMCs的增殖率以及QDG对AngⅡ诱导VSMCs增殖的抑制率;采用划痕实验检测VSMCs划痕损伤修复情况;transwell法检测VSMCs迁移情况。结果与对照组比较,AngⅡ能显著促进VSMCs的增殖和迁移;不同浓度QDG可在一定程度上抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,且随着浓度的升高,抑制作用越明显。结论 QDG具有抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖与迁移的作用。     

大黄素对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞增殖的影响

目的:研究大黄素对TGF-β1诱导的肾成纤维细胞株(NRK-49F)增殖以及降低FN(纤连蛋白),Col-I(I型胶原蛋白),Smad2/3蛋白及基因表达的机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度大黄素对NRK-49F细胞增殖情况的影响;终浓度为20、40、80μmol/L的大黄素处理NRK-49F细胞30 min后,模型组和观察组均以TGF-β1以5 ng/m L的终浓度刺激24 h,并收集细胞,蛋白质免疫印迹技术(Western blot)检测FN,Col-I,Smad2/3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(Realtime PCR)检测FN,Col-I,Smad2/3 mRNA表达。结果:模型组FN,Col-I,Smad2/3蛋白和基因的表达明显增加,大黄素含药血清组能抑制NRK-49F细胞增殖,且抑制FN,Col-I,Smad2/3蛋白和的表达(P 0. 05)。大黄素浓度越高,抑制作用越明显,成一定的量效关系。结论:大黄素干预后,可改善肾纤维化程度,保护NRK-49F细胞模型损伤。     

田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:通过观察田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,探讨其治疗动脉粥样硬化的可能药效机制。方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,采用SABC-Cy3荧光免疫组化技术鉴定其纯度;以TNF-α刺激VSMC建立细胞增殖和迁移模型;采用MTT法检测细胞的增殖,Transwell小室法检测细胞的迁移,免疫酶组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:2.5～10μg/ml田蓟苷可不同程度抑制TNF-α诱导的VSMC增殖、迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定剂量依赖关系的趋势。结论:田蓟苷通过抑制TNF-α对VSMC的增殖和迁移作用,可能是其治疗动脉粥样硬化的药效机制之一。     

川芎嗪抗血管紧张素Ⅱ诱导的离体培养血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(angiotensinII,AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)中钙调神经磷酸酶(Calc ineunrin,CaN)活性及原癌基因c-fos表达水平的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,应用免疫细胞化学法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞表达c-fos的影晌;并用酶促反应定磷法测定CaN活性变化。结果与正常对照组比较,AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖,细胞增殖活度明显升高(P<0.01):AngⅡ作用后VSMCs中CaN活性和c-fos表达量(A值)较正常对照组均显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪作用后,各组CaN活性和c fos表达水平均显著下降(P<0.01)。结论AngⅡ能显著刺激血管平滑肌细胞增殖,川芎嗪能使血管平滑肌细胞中原癌基因c-fos的表达减弱及增殖受抑。     

桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:考察桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:应用80%乙醇回流提取,正己烷萃取,MCI柱层析甲醇洗脱获得桂竹糖芥苷。采用体外培养的血管平滑肌细胞,检测细胞增殖、细胞内钙和c-myc基因的mRNA表达,并与哇巴因、地高辛进行比较。结果:(1)桂竹糖芥苷浓度在10-5mg·mL-1时具有促血管平滑肌细胞增殖作用;哇巴因和地高辛浓度分别在10-14和10-9mg·mL-1时具有促血管平滑肌细胞增殖作用,最大增殖率分别为49.08%和51.05%。(2)桂竹糖芥苷浓度在10-3mg·mL-1时可暂短升高细胞内钙;哇巴因浓度在10-4mg·mL-1时可持久升高细胞内钙。(3)桂竹糖芥苷浓度在10-8mg·mL-1时对c-myc mRNA表达没有影响;哇巴因和地高辛浓度在10-12mg.mL-1时可增加c-myc mRNA表达。结论:与哇巴因和地高辛相比,桂竹糖芥苷对血管平滑肌细胞增殖的影响较小。     

活心灵汤对兔血管平滑肌细胞增殖的干预作用

血管平滑肌细胞(VSMCs)的过度增殖是动脉粥样硬化及高血压等疾病的病理变化之一。VSMCs分为合成型和收缩型两种表现，收缩型呈分化状态，不能增殖；合成型是去分化的细胞，具有很强的增殖能力。因此寻找药物、基因等有效治疗方法干预、抑制VSMCs异常增殖，已成为心血管疾病研究预防的重要手段。我们根据前期研究，对具有益气活血祛淤功效的活心灵汤进行观察，研究其对兔血管平滑肌细胞增殖的干预作用，以期阐明其防治心血管疾病的作用机理。     

平肝潜阳方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移及DNA甲基化水平的影响

目的观察平肝潜阳方对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的抑制作用及DNA甲基化水平的影响。方法采用组织贴块法培养VSMCs,制备平肝潜阳方含药血清。将培养细胞分为正常组(原代培育的VSMCs)、模型组、叶酸组及平肝潜阳方组(下称中药组)。以AngⅡ作为诱导复制VSMCs增殖及迁移模型,在AngⅡ诱导VSMCs培育24 h后,叶酸组加入40μg/mL叶酸干预48 h,中药组加入5%中药血清干预48 h。采用CCK-8(Cell Counting Kit)试剂盒绘制VSMCs生长曲线,MTT法测定VSMCs增殖活性,体外细胞划痕实验检测细胞迁移情况,以抗5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化水平;Real-time q-PCR方法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)mRNA表达水平。结果 AngⅡ在10-6mol/L浓度下诱导24 h后可促进VSMCs生长。与正常组比较,模型组细胞增殖活性及迁移数量明显增加,DNA甲基化水平明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs生长、细胞增殖活性及迁移数量均明显降低,DNA甲基化水平升高(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组VSMCs DNMT1 mRNA表达水平降低(P0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs DNMT1 mRNA表达明显增强(P0.01)。结论平肝潜阳方可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,可导致基因组DNA高甲基化,其DNA甲基化水平改变可能与DNMT1表达有关。     

芍药苷对血管紧张素转化酶活性的抑制作用

目的：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定了芍药苷对血管紧张素转化酶活性的影响。方法：采用Brava BDS C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-0.01％甲酸水溶液（25：75）,柱温为30℃,流速为1.0mL·min^-1,检测坡长为228nm。结果：马尿酸在1.17-149μg·mL^-1（r=0.9999）范围内呈良好的线性关系;平均回收率（n=6）为100.4％（RSD=0.88％）;日内、日间精密度的RSD分别为1.32％和1.96％。芍药苷的IC50值为37.47μmol·L^-1。结论：该法分离效果和重复性均良好,结果准确可靠,可用于马尿酸的检测,也为血管紧张素转化酶抑制剂活性测定提供了可靠的方法。