理冲生髓饮有效组分调控炎性因子对卵巢癌侵袭转移影响的研究

目的探究理冲生髓饮有效组分通过调控炎性因子对卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移的影响。方法 (1)将32只大鼠随机分为空白组、生髓饮低剂量组、生髓饮中剂量组和生髓饮高剂量组,每组8只。生髓饮低、中、高剂量组分别给予3.76 g/(kg·d)、7.52 g/(kg·d)、11.28 g/(kg·d)理冲生髓饮灌胃,空白组给予同体积蒸馏水灌胃,均2次/d,连续7 d。末次灌胃结束2 h后眼眶取血,获得含药血清。(2)实验分为空白组、生髓饮低剂量含药血清组、生髓饮中剂量含药血清组、生髓饮高剂量含药血清组和贝伐单抗组,应用鸡胚绒毛尿囊膜血管实验观察各组血管生成情况。(3)选取在体外培养至对数生长期的人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白组、生髓饮低剂量含药血清组、生髓饮中剂量含药血清组、生髓饮高剂量含药血清组和贝伐单抗组,除空白组外,其余组分别加入相应浓度的理冲生髓饮含药血清及5 mg/L贝伐单抗培养,应用MTT法观察各组细胞增殖情况,用Transwell小室实验以及划痕实验检测细胞的迁移和侵袭能力,应用ELISA法检测卵巢癌相关炎性因子蛋白表达水平。结果生髓饮各含药血清组及贝伐单抗组一级和二级血管数目均明显少于空白组(P均0.05),且生髓饮中剂量含药血清组和贝伐单抗组均明显少于生髓饮低、高剂量含药血清组(P均0.05);与空白组比较,生髓饮各含药血清组及贝伐单抗组SKOV3细胞迁移率和侵袭率均显著降低(P均0.05),且生髓饮中、高剂量含药血清组和贝伐单抗组均显著低于生髓饮低剂量含药血清组(P均0.05)。生髓饮各含药血清组及贝伐单抗组血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及生髓饮高剂量含药血清组、贝伐单抗组白细胞介素-1(IL-1)水平均明显低于空白组(P均0.05);生髓饮高剂量含药血清组和贝伐单抗组VEGF、IL-6、TNF-α水平均明显低于生髓饮中、低剂量含药血清组(P均0.05),各组基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论理冲生髓饮有效组分能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的侵袭转移,其作用机制与抑制相关炎性因子的表达、影响肿瘤周围的炎性微环境有关。     

理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响

目的:探讨理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响。方法:以卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度顺铂对SKOV3细胞抑制作用,Annexin V-FITC法检测SKOV3细胞凋亡情况,细胞周期与细胞凋亡检测试剂测定SKOV3细胞周期变化,流式细胞术检测SKOV3细胞中CD44~+CD117~+细胞比例。结果:与空白组比较,24 h和48 h顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44~+CD117~+细胞比例明显增加,与顺铂组比较,24 h和48 h理冲生髓饮联合顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44~+CD117~+细胞比例明显降低,其中理冲生髓饮中剂量组联合顺铂组作用效果最强。结论:理冲生髓饮具有抗肿瘤作用,其机制可能是增加顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡,调控细胞周期阻滞,降低卵巢癌SKOV3细胞中干细胞数量。     

理冲生髓饮对大鼠卵巢肿瘤组织P53和PCNA表达影响的研究

目的:观察理冲生髓饮对大鼠卵巢肿瘤组织P53和PCNA表达的影响。方法:采用二甲基苯蒽(DMBA)卵巢局部埋线法诱发大鼠卵巢肿瘤模型,观察理冲生髓饮对癌组织P53和PCNA表达的影响,免疫组化SABC法检测卵巢肿瘤组织的P53和PCNA阳性表达。结果:大鼠卵巢肿瘤组织存在P53蛋白基因和PC-NA的过度表达。理冲生髓饮组可降低卵巢肿瘤细胞的PCNA和P53的表达,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:P53基因蛋白的突变可能是导致大鼠卵巢恶性肿瘤发生发展的原因,理冲生髓饮对其过度表达有调节作用。     

理冲生髓饮药物血清对卵巢癌细胞集落形成和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞株SKOV3集落形成和对Bcl-2蛋白表达的作用机理.方法:以不同剂量理冲生髓饮水煎剂灌饲大鼠,制备药物血清,培养SKOV3卵巢癌细胞株,采用SABC法检测SKOV3细胞Bcl-2蛋白表达和显微镜观察集落形成情况.结果:理冲生髓饮血清组Bcl-2基因蛋白表达低于顺铂组和空白血清组(P＜0.01);显微镜下可见集落内SKOV3细胞数量少,结构松散.结论:理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长有抑制作用,可阻断Bcl-2癌基因蛋白的表达,提示Bcl-2是一种重要的细胞生存基因.     

复方理冲生髓饮对二甲基苯蒽诱发的大鼠卵巢肿瘤组织形态学的影响

目的:观察中药复方理冲生髓饮对二甲基苯蒽诱发大鼠卵巢肿瘤组织形态学的变化。方法:采用苯溶二甲基苯蒽(DMBA)卵巢局部埋线法诱发大鼠卵巢肿瘤模型,观察理冲生髓饮对模型大鼠卵巢肿瘤组织光镜和电镜下病理形态学及超微结构的变化。结果:理冲生髓饮对诱发的卵巢肿瘤组织形态改变明显,光镜下细胞病理改变以卵巢实质增生和腺泡囊肿为主,细胞异型性不大,间质受浸较轻。电镜下细胞核固缩,染色体边集,胞浆内可见大量脂滴堆积,出现凋亡小体。结论:理冲生髓饮对化学致癌因子诱发的大鼠卵巢肿瘤有抑制和阻断作用,并且长期用药在抑制靶细胞的肿瘤性转归方面具有显著效果。     

理冲生髓饮对卵巢上皮性癌患者免疫状态影响的临床研究

目的：研究理冲生髓饮提高卵巢癌患者免疫功能的机理。方法：随机设单纯化疗组和理冲生髓饮加化疗组针对NK细胞活性、T淋巴细胞亚群、红细胞C3b受体等指标进行临床研究。结果：理冲生髓饮可以减轻化疗药物的毒副作用，保障化疗顺利进行，同时通过增强卵巢患者免疫功能而达到抗肿瘤的作用。结论：理冲生髓饮对卵巢癌具有减毒增效、抗肿瘤的作用。     

多指标正交试验优化理冲生髓饮的醇提工艺

目的优选理冲生髓饮的最佳醇提工艺。方法采用L_9(3~4)正交试验法,以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、黄芪甲苷的转移率和干膏得率为指标,通过综合评分法,考察乙醇浓度、提取时间、提取温度、溶媒用量对理冲生髓饮醇提工艺的影响。结果最佳提取工艺为:10倍量60%乙醇浸泡2 h后,加热回流提取2次,提取时间1.5 h,提取温度80℃。结论该工艺提取率高,工艺稳定、可行,可为理冲生髓饮的进一步研究提供数据。     

HPLC-DAD法同时测定理冲生髓饮中7种亲脂性成分

目的建立RP-HPLC法同时测定理冲生髓饮中亲脂性成分的分析方法。方法理冲生髓饮超临界萃取,HPLC法分析采用Dikma Diamonsil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,体积流量为1 m L/min,检测波长210 nm。结果姜黄素、莪术二酮、莪术醇、牻牛儿酮、呋喃二烯、亚油酸、β-榄香烯分别在0.16~8.14μg/m L、0.27~13.44μg/m L、0.10~4.98μg/m L、0.18~9.10μg/m L、0.08~4.06μg/m L、0.21~10.59μg/m L、0.28~14.18μg/m L范围内线性关系良好。平均加样回收率在96.76%~100.38%之间。结论本方法能够准确测定理冲生髓饮7种亲脂性成分。     

温心胶囊对大鼠缺血心肌血管生成及其相关基因表达的影响

目的:以血管生成作为靶点,研究温心胶囊对心肌缺血损伤保护作用的分子机制。方法:采用盐酸异丙肾上腺素皮下多点注射制备大鼠心肌缺血模型。应用免疫组化(S-P)法对各组大鼠心肌组织中第Ⅷ因子相关抗原表达进行观察并计数心肌组织中微血管数(MVC),观察心肌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的变化情况。结果:心肌缺血损伤大鼠心肌组织中MVC 数较正常组略增多,但无统计学意义,VEGF 表达增强(P<0.05);温心胶囊具有显著增多缺血损伤大鼠心肌组织 MVC 数量,并使 VEGF、bFGF 蛋白表达显著增强的作用。结论:心肌缺血损伤有侧支循环的自然代偿不足,温心胶囊具有加速和增强侧支循环的建立和新血管生成的作用,可能是其对心肌缺血损伤保护作用的机制之一。     

通脉地仙丸对大鼠缺血心肌血管生成及其相关基因表达的影响

目的观察通脉地仙丸对大鼠缺血心肌血管生成及其相关基因表达的影响。方法除假手术组外,大鼠进行慢性心肌缺血造模,造模成功后,随机分为模型组、麝香保心丸组与通脉地仙高、中、低剂量组,各组灌胃给药,6周后采用免疫组化法检测心肌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白含量,并观察VEGF、bFGF mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组、通脉地仙丸各剂量组和麝香保心丸组bFGF、VEGF蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与模型组比较,通脉地仙各剂量组和麝香保心丸组bFGF、VEGF蛋白表达均上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与假手术组比较,模型组、麝香保心丸组和通脉地仙高、中剂量组VEGF、bFGF mRNA表达上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,通脉地仙高、中剂量组和麝香保心丸组VEGF、bFGF mRNA表达均上调(P<0.01,P<0.001)。结论通脉地仙丸对大鼠缺血心肌血管生成的影响与血管内皮生长因子VEGF、bFGF相关,且发挥重要作用。     

中药益髓生血颗粒对β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿基因表达的影响

目的探讨益髓生血颗粒治疗β-珠蛋白生成障碍性贫血的作用机制。方法观察20例患儿治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、网织红细胞计数(Ret)和胎儿血红蛋白(HbF)的改变;选取3例有效病例。通过mRNA差异显示技术(DDRT—PCR)研究益髓生血颗粒对β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿骨髓有核细胞的基因表达差异。结果与治疗前比较治疗后患儿各项血液学参数均有提高(P<0．05或P<0．01);患儿骨髓有核细胞的铁蛋白基因表达明显降低。结论益髓生血颗粒可以改善患儿的临床症状,明显降低患儿铁蛋白基因的表达,有效缓解患儿体内铁的蓄积,这可能是益髓生血颗粒治疗本病的分子机制之一。     

益髓生血颗粒对珠蛋白生成障碍性贫血患者SCF及c-kit基因表达的影响

目的:探讨益髓生血颗粒治疗珠蛋白生成障碍性贫血的作用机制。方法:观察20例患儿治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、网织红细胞计数(Ret)、胎儿血红蛋白(HbF)的改变;选取10例有效病例,通过实时荧光定量PCR技术探讨该药对珠蛋白生成障碍性贫血患者骨髓有核细胞SCF和c-kit基因表达的影响。结果:治疗后患者各项血液学参数均有改善;骨髓有核细胞c-kit基因表达明显升高,与治疗前比较差异有显著性(P<0.05);SCF基因表达无明显改变。结论:益髓生血颗粒可以明显改善患者的临床症状,通过SCF/c-kit信号传导途径,调节红系祖细胞及其它造血细胞的增殖和分化过程,来达到治疗目的。     

通脑饮对大鼠脑梗死组织血管神经再生的影响

目的 探讨通脑饮对大鼠脑梗死组织VEGF,bFGF,SDF-1,CXCR4基因的影响,明确通脑饮与脑梗死后血管再生的作用机制相关性.方法：选取成年雄鼠24只,制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型16只,术后随机分为对照组8只,给药组8只,假手术组8只,于24h后分别通过腹腔注射给予等量等渗生理盐水或通脑饮,于术后2h、1d、7d、14d4个不同时间点对脑梗死后大鼠神经功能恢复程度进行神经功能缺损评分;术后14 d,于对照组及给药组随机选取3只断颈处死,分别取损伤周边部位和侧脑室部位脑组织,利用荧光定量PCR方法检测VEGF,bFGF,SDF-1/CXCR4基因量的变化.结果 神经功能评分上治疗组评分在术后7d后明显低于对照组;荧光定量-PCR检测结果显示,术后14 d治疗组梗死灶中VEGF,bFGF,SDF-1,CXCR4基因量较对照组明显增高,差异有统计学意义.结论 通脑饮可以改善大鼠脑缺血后的神经功能恢复,其机制可能与通脑饮上调VEGF,bFGF,SDF-1,CXCR4基因促进对脑梗死后血管再生作用有一定相关性.     

大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达的影响

目的探讨大黄素对人高转移卵巢癌抗肿瘤的可能作用机制。方法应用肿瘤基因芯片检测大黄素(40μmol/L)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中癌相关基因表达的影响,并且实时定量PCR和Western blotting进行验证。结果共筛选出表达差异基因69个,其中33个基因表达水平上调,36个基因表达水平下调,涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转录和细胞代谢等7大类相关基因。结论基因芯片结果提示大黄素抗肿瘤作用可能与转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路密切相关。     

益气活血化瘀方药对血管胶原转换及相关基因表达的影响

目的：观察益气活血化瘀中药对大鼠血管细胞外基质(ECM)重塑的影响并探讨其分子机制。方法：采用^3H—TdR和^^3H—Pro掺入实验和血管壁羟脯氨酸含量测定检查血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及胶原合成与降解程度;应用Northern印迹和Ⅳ型胶原酶(MMP-2)酶图分析检测MMP-2和骨桥蛋白表达的变化。结果：益气活血化瘀中药可显著抑制bFGF对VSMC的促胶原合成作用,降低血管内皮剥脱大鼠血管壁胶原转换速率,下调MMP-2和骨桥蛋白在体外培养的VSMC及血管壁中的表达水平,抑制VSMC增殖。中药血清去蛋白后对VSMC的影响不发生明显变化。结论：益气活血化瘀中药通过调节MMP-2和骨桥蛋白基因表达及降低胶原转换速率可抑制和(或)减缓ECM重塑。     

蜈蚣败毒饮药物血清对银屑病HaCaT细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨蜈蚣败毒饮对银屑病HaCaT细胞凋亡相关基因Bcl-2、核因子-κB(NF-κB)m RNA表达的影响。方法实验大鼠随机分为空白对照组、西药对照组、中药对照组和蜈蚣败毒饮低、中、高剂量组,分别给予生理盐水、甲氨蝶呤混悬液、复方青黛胶囊混悬液和蜈蚣败毒饮低、中、高剂量浓缩液灌胃,制备相应的药物血清,将其分别作用于HaCaT细胞中培养传代,采用RT-PCR法检测不同药物血清对目的基因表达的干预作用。结果各组药物血清均能够降低HaCaT细胞Bcl-2、NF-κB m RNA的表达,蜈蚣败毒饮高剂量组和西药对照组的作用效果最为明显,且蜈蚣败毒饮各剂量组呈现出一定的量效关系。结论蜈蚣败毒饮可能通过降低Bcl-2、NF-κB m RNA的表达促进了HaCaT细胞凋亡,调控T细胞相关因子降低免疫反应,从而发挥抗银屑病样的作用。     

异丹叶大黄素对前列腺癌细胞血管生成相关蛋白的影响

目的探讨异丹叶大黄素对前列腺癌细胞血管生成相关蛋白缺氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factorα,VEGF-α)、上皮细胞激酶-2(erythropoietin producing human hepatocelluar A2,EphA2)、人基质金属蛋白酶2(Mateixmetalloproteinases 2,MMP2)表达水平的影响。方法选取LNCAP细胞,传代培养后进行siRNA转染,将细胞分为空白对照组、HIF-1αsiRNA组、VEGF-αsiRNA组、EphA2 siRNA组、MMP2 siRNA组、异丹叶大黄素组、异丹叶大黄素+HIF-1αsiRNA组、异丹叶大黄素+VEGF-αsiRNA组、异丹叶大黄素+EphA2 siRNA组,采用Western Blot检测HIF-1α、VEGF-α、EphA2、MMP2的蛋白表达水平。结果与空白组(0.6138±0.0316)相比,HIF-lαsiRNA组(0.0317±0.0019)、异丹叶大黄素+HIF-lαsiRNA组(0.0372±0.0172)HIF-1α蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与空白组(0.0678±0.0049)相比,VEGF-αsiRNA组(0.0159±0.0006)、异丹叶大黄素+VEGF-αsiRNA组(0.0112±0.0007)VEGF-α蛋白蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与空白组(0.1685±0.0125)相比,EphA2siRNA组(0.1365±0.0287)、异丹叶大黄素+EphA2 siRNA组(0.1655±0.0388)EphA2蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。HIF-lαsiRNA组、VEGF-αsiRNA组、EphA2 siRNA组MMP2蛋白表达量与空白组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论异丹叶大黄素通过抑制HIF-1α、VEGF-α、EphA2、MMP-2蛋白的表达,抑制前列腺癌的血管拟态形成,从而抑制前列腺癌的发生发展。     

消痰散结方对血管生成拟态相关蛋白表达的影响

目的探讨消痰散结方对血管生成拟态（VM）相关蛋白表达的影响。方法30只裸鼠皮下移植人胃癌瘤块建立荷瘤模型。造模后的荷瘤鼠随机分为生理盐水组、消痰散结组、盐酸多西环素组,每组10只,分别给予相应药物灌胃治疗4周后,脱颈椎处死荷瘤鼠。观察移植瘤中VM的形态结构,计数VM的数量;运用免疫组织化学法检测肿瘤中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和层黏连蛋白5γ2链（LN-5γ2）等VM相关蛋白的表达。结果人胃癌裸鼠移植瘤可以形成VM。消痰散结组和盐酸多西环素组VM数量明显少于生理盐水组,差异有统计学意义（P〈0．01）。消痰散结组和盐酸多西环素组MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白的阳性表达低于生理盐水组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论消痰散结方可抑制裸鼠移植瘤VM的形成,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白表达有关。     

腰腿理痛散对自体髓核移植硬膜外大鼠神经相关行为的影响

目的观察腰腿理痛散对自体髓核移植硬膜外大鼠神经相关行为的影响。方法取健康WiStar大鼠50只，随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、对照组（C组、腰痛宁组）、腰腿理痛散高剂量组（D组）、腰腿理痛散低剂量组（E组），每组10只。将大鼠自身的尾椎髓核取出移植于左侧硬膜外腔L5、L5神经根背侧，造成非压迫性大鼠自体髓核移植硬膜外模型，对其机械刺激缩爪阈值及热刺激回缩潜伏期阈值进行测定。结果术后B、C、D、E组均产生机械痛觉过敏，但C、D、E组痛觉过敏程度与B组比较明显减轻（P〈0．05），D、E组痛觉过敏程度与C组比较明显减轻（P〈0．05）；各组均未出现热痛觉过敏。结论腰腿理痛散有减轻非压迫性髓核对神经根损伤后所导致的机械痛觉过敏、提高痛阈的作用。     

腰腿理痛散对白体髓核移植硬膜外大鼠神经相关行为的影响

目的 观察腰腿理痛散对自体髓核移植硬膜外大鼠神经相关行为的影响.方法 取健康Wistar大鼠50只,随机分为假手术组(A组)、模型组(B组),对照组(c组、腰痛宁组)、腰腿理痛散高剂量组(D组)、腰腿理痛散低剂量组(E组),每组10只.将大鼠自身的尾椎髓核取出移植于左侧硬膜外腔L5,L6神经根背侧,造成非压迫性大鼠自体髓核移植硬膜外模型,对其机械刺激缩爪阈值及热刺激回缩潜伏期阈值进行测定.结果 术后B、C、D、E组均产生机械痛觉过敏,但c、D、E组痛觉过敏程度与B组比较明显减轻(P<0.05),D、E组痛觉过敏程度与C组比较明显减轻(P<0.05):各组均未出现热痛觉过敏.结论 腰腿理痛散有减轻非压迫性髓核对神经根损伤后所导致的机械痛觉过敏、提高痛阈的作用.