PCB153对人B淋巴母细胞基因表达谱的影响

目的 研究2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(2,2',4,4',5,5'-hexachlorobiphenyl,PCB153)对人B淋巴母细胞基因表达谱的影响.方法 采用0(对照)和25、100、200 μmol/L的PCB153分别处理人B淋巴母细胞2、24、48 h,收集细胞后提取总RNA.PCB153处理24 h的RNA样本用Illumina人HT-12 v4全基因组表达谱芯片筛测差异表达基因,并对差异基因进行基因本体论(gene ontology,GO)分类分析.在PCB153处理2、24、48 h样本中用实时定量PCR对候选差异基因进行验证.结果 芯片结果显示,各剂量PCB153处理样本中分别发现161、191、1 006个差异基因,三个剂量组重叠差异基因数为15个,其中,上调基因4个、下调基因11个.选取6个差异基因用定量PCR进行验证,发现2个上调基因(CCDC92和TMEM175)及3个下调基因(CCL22、STK38L和GZMK)的表达改变与芯片结果一致.基因CCDC92、CCL22、GZMK和TMEM175等可影响多种淋巴细胞功能,基因STK38L可作用于细胞周期和细胞凋亡等,基因CCL22和MTDH的异常表达则与多种癌症密切相关.结论 体外急性染毒PCB153干扰了人B淋巴母细胞某些重要功能基因的表达,为多氯联苯毒性的分子作用机制提供了依据.     

六价铬对职业人群细胞周期相关基因表达的影响

目的研究六价铬暴露对职业人群细胞周期相关基因表达的影响。方法选取某电镀厂155名六价铬职业暴露工人为研究对象,调查工人基本情况并采集肝素抗凝外周血,采用电感耦合等离子体质谱仪检测血铬水平(ppb),根据血铬水平将研究对象分为4组(组1≤0.04 ppb、0.04 ppb组2≤1 ppb、1 ppb组3≤5 ppb、组45 ppb),比较各组p16和CDK6基因表达水平,并分析基因表达的影响因素。结果共纳入155名工人,其中男性89人,女性66人,平均(39.65±8.86)岁,工龄中位数为36个月,血铬中位数为0.95 ppb。4组p16基因表达水平中位数(四分位间距)分别为4.22(19.91)、7.19(30.71)、7.47(21.47)和14.60(27.28),组间差异无统计学意义(P=0.19)。4组CDK6基因表达水平中位数(四分位间距)分别为4.00(8.13)、15.05(32.72)、8.03(17.32)和24.81(35.09),其中组1的CDK6基因表达水平低于其他各组(P0.01)。Spearman相关分析结果显示,CDK6基因表达水平与血铬水平呈正相关(rs=0.28,P0.01);Logistic回归分析结果显示,血铬水平高是CDK6基因过量表达的危险因素(OR=1.168,95%CI:1.040~1.312)。结论六价铬职业暴露可致细胞周期相关基因CDK6表达升高。     

X射线对人淋巴母细胞基因表达谱的影响

目的 应用基因芯片分析X射线对人淋巴母细胞基因表达的影响,为阐明辐射生物效应的作用机制提供理论依据。方法 应用基因芯片分析人淋巴细胞经0.5和2 Gy X射线照射后的基因表达情况,通过Real-time PCR对部分差异表达基因进行验证。结果 人淋巴母细胞经0.5和2 Gy X射线照射后6h差异表达基因分别有1 250和1 773个,照射后20 h差异表达基因分别有1 076和690个。通过Real-time PCR验证差异表达的基因PERP与基因芯片结果一致,与对照组相比表达下调。结论 电离辐射诱导差异表达的基因与照射剂量和照后时间相关,本研究为寻找新型辐射生物剂量计和研究辐射生物效应机制提供了新的理论依据。     

甲基汞通过miRNA对人胚胎神经干细胞细胞周期相关基因表达的调控

[目的]通过研究甲基汞对人胚胎神经干细胞miRNA表达的影响,探讨低剂量甲基汞对神经干细胞细胞周期调控基因的调节作用. [方法]以0、10、50 nmol/L甲基汞染毒人胚胎神经干细胞24h后,用MTT法测定甲基汞对细胞活力影响,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测甲基汞对细胞周期调控基因(p16、p21)的mRNA的表达水平影响,利用实时荧光定量多聚酶链反应技术检测调控p16、p21的miRNA(miR-24、miR-106a)的表达情况. [结果]50 nmol/L甲基汞染毒组细胞活力降低为对照组的53.5％,差异有统计学意义(P＜0.05);p16与p21基因的mRNA表达水平随着甲基汞染毒浓度的升高而升高,差异均有统计学意义(P＜0.05),但10 nmol/L与50 nmol/L组的p16基因表达差异无统计学意义.miR-24、miR-106a的表达水平随着甲基汞染毒浓度的升高而降低,差异有统计学意义(P＜0.05). [结论]50 nmol/L的甲基汞可以引起人胚胎神经干细胞增殖抑制,并可能通过miRNA调节细胞周期调控基因的表达.     

EB病毒相关淋巴母细胞样细胞系的建立及鉴定

目的由于EB病毒与肿瘤的关系极为复杂且存在争议,淋巴母细胞样细胞系LCLs(lymphoblastoid celllines)没有肿瘤形成过程中的复杂因素,从而成为了研究EBV介导的细胞永生化的最佳模型。本实验旨在建立EBV原型株相关的永生化淋巴母细胞系,为后期LCLs的端粒酶活性及其体内外成瘤性的相关研究提供基础。方法利用体外培养B95.8细胞产生EB病毒原型株感染正常人外周血淋巴细胞培养传代得到5株EB病毒相关淋巴母细胞,并用RT-PCR对其进行了基因表达、流式细胞仪进行细胞表面标记以及核型的鉴定。结果淋巴母细胞样细胞系能不断传代,能表达EBV基因,具有成熟B细胞表面标记;细胞传代过程早期未发生核型改变。结论建立了5株永生化细胞株,分别为LCL1-5、LCL2-5、LCL3-5、LCL4-30、LCL5-30。     

脂肪乳剂对人肠道相关淋巴组织的影响

探讨脂肪乳剂对胃肠道肿瘤患者肠道相关淋巴组织的影响。方法：20例胃肠道癌症患者随机分为含脂组（n＝10）和无脂组（n＝10），分别接受全肠外营养（TPN）支持7天后，分离肠系膜淋巴结和肠粘膜固有层的淋巴细胞，调细胞浓度至1×109／L，以植物血凝素（PHA）诱导培养48小时，测其上清液中肿瘤坏死因子α（TNF－α）和可溶性白介素-2受体（sIL-2R）含量。结果：含脂组肠系膜淋巴结淋巴细胞中TNF－α显著降低（P＜0．05），而肠粘膜固有层淋巴细胞中sIL-2R显著增高（P＜0．05）。结论：脂肪乳剂对肠道相关淋巴组织的诱导部位和效应部位均有抑制作用。     

藻毒素对fos、jun基因表达及细胞周期的影响

目的 研究藻毒素对c-fos、c-jun表达及细胞周期的影响,探讨其可能的致癌机制。方法 将经色谱柱纯化的微囊藻毒素样品加入到SHE细胞培养体系中,用免疫组化方法分别于第1、3、6h观察细胞c-fos和c-jun蛋白表达,并用流式细胞仪分别检测细胞在第6、12、24h不同时相的周期改变情况。结果 微囊藻毒素可以诱导c-fos和c-jun持续高表达,6h后增高至5－6倍,具有明显的剂量反应关系;同时,藻毒素尚能介导G0／G1期细胞进入分裂状态,S、G2／M期细胞比例明显增加,24h后有44.9%细胞进入S期。结论 诱志细胞c-jun和c-fos异常表达并引起细胞过度增殖是微囊藻毒素可能的促癌机制之一。     

EB病毒转化的永生性人B淋巴母细胞中的MTHFR基因的表达

为检测用ＥＢ病毒转化建立的永生性人Ｂ淋巴细胞株中Ｎ＾５,Ｎ＾１０－亚甲基甲氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）基因的表达及其ｃＤＮＡ序列,用ＥＢ病毒转化人外周血Ｂ淋巴细胞,建立永生性细胞株后,从培养细胞中提取总ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＭＴＨＦＲ基因ｃＤＮＡ的不同片段,进行ＰＡＧＥ电泳分析和ｃＤＮＡ序列测定。结果显示永生性人Ｂ淋巴母细胞中有ＭＴＨＦＲ基因表达,其ｃＤＮＡ序列与文献报道的人肝脏ＭＴＡＨＦＲ基     

EB病毒转化的永生性人B淋巴母细胞中MTHFR基因的表达

ＨｐＳＶ２－ｎｅｏ质粒作为载体，在ＥｃｏＲＩ酶切位点上插入小鼠金属充蛋白（ＭＴ－Ｉ）基因，然后用ＤＮＡ－磷酸钙介导的基因转移法将重组质粒转染ＨｅＬａ细胞，经筛选得到表达ＭＴ－Ｉ的抗性细胞克隆，经检测，Ｇ４１８抗性细胞内有ＭＴ的特异性表达，表达量是未围染细胞的２．６倍。用不同浓度顺铂、阿霉素处理细胞，观察ＭＴ－Ｉ基因的表达与ＨｅＬａ细胞耐药性的关系。结果表明：０．１μｍｏｌ／ｍｌ顺铂作用细胞７２ｈ后     

植酸对人肝癌细胞株HepG_2细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法以体外培养人肝癌细胞株HepG2为研究对象,应用流式细胞仪检测不同浓度IP6作用24h后对HepG2周期的影响;以免疫细胞化学法检测IP6对细胞周期相关蛋白cyclinD1、Rb、P27表达的影响;RT-PCR法检测IP6对HepG2细胞cyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响。结果经IP6作用处理的HepG2细胞的细胞周期发生G1期阻滞。免疫细胞化学结果显示:与对照组比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1蛋白的表达(F=225.02,q=15.20-25.35,P<0.05),上调Rb(F=63.31,q=2.77-13.06,P<0.05)、P27蛋白的表达(F=254.75,q=4.71-25.71,P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1(F=672.34,q=16.41-41.99,P<0.05)和CDK4 mRNA(F=108.35,q=5.32-16.27,P<0.05)的表达。结论 IP6对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用。其机制可能是IP6降低cyclinD1、CDK4水平,上调Rb、P27蛋白的水平而作用于G1-S限制点,使HepG2细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞侵袭及转移相关基因表达的影响

目的 研究c9,t11－共轭亚油酸（CLA）对人胃腺癌细胞（SGC－7901）侵袭能力的影响,探讨其抑制肿瘤转移的可能机制。方法 用重组基底膜侵袭实验评价癌细胞侵袭能力;用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测SGC－7901细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达。结果 在200、100和50μmol/L浓度时,c9,t11-CLA对SGC－7901细胞侵袭重组基底膜的抑制率分别为53.7%、40.9%和29.3%。c9,t11-CLA可诱导SGC－7901细胞中TIMP－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达。结论 c9,t11-CLA抑制SGC-7901细胞侵袭重组基底膜。c9,t11-CLA的抗侵袭活性与诱导肿瘤细胞中TIMP－1、TIMP－2和nm23-H1mRNA的表达等有关。     

六价铬对人淋巴细胞程序外DNA合成的影响

铬是机体必需元素,但六价铬(Cr~(+6))对机体却有明显毒性,可干扰许多重要酶系统活性、伤害肝肾、诱发恶性肿瘤。有关六价铬的细胞毒性,虽有研究报导,但对DNA损伤作用的报导不多。我们用健康成人静脉血淋巴细胞为靶细胞,用六价铬盐溶液对细胞直接作用,观察其程序外DNA合成(UDS)情况。现将初步研究结果报告如下。     

工频磁场对人绒毛滋养细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究50Hz工频磁场对人早孕绒毛滋养细胞凋亡相关基因表达的影响，探索工频磁场对人生殖健康影响的可能机制。方法体外分离培养人早孕绒毛滋养细胞。以50Hz、0．4mT强度的正弦磁场分别辐照处理6、48、72h，同时设立相应的平行对照组，用实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测工频磁场辐照对bcl-2、bax、caspase-3、p53、fas基因表达的影响。结果辐照6、48、72h后bcl-2、bax、caspase-3、p53、fas基因表达变化倍数平均值均接近1，暴露组与对照组的差异均没有统计学意义（P〈0．05）。结论72h内，0．4nat工频磁场体外辐照不会影响人早孕绒毛滋养细胞bcl-2、bax、caspase-3、p53、fas等凋亡相关基因的表达水平。     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期的影响

本文对近年来国外有关人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染对宿主细胞周期影响的研究作一综述,对ＨＣＭＶ干扰正常细胞生长发育的分子机理进行了探讨。     

人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期的影响

本文对近年来国外有关人巨细胞病毒(HCMV)感染对宿主细胞周期影响的研究作一综述,对HCMV干扰正常细胞生长发育的分子机理进行了探讨。     

茶多酚对人肝癌细胞激活蛋白1及细胞周期影响

目的 观察茶多酚对人肝癌细胞激活蛋白1（AP—1）及细胞周期的影响。方法 构建AP-1报告质粒测量AP-1活性，免疫组化测量细胞周期素D1和细胞周期素依赖激酶4表达变化，流式细胞仪分析细胞周期。结果 茶多酚抑制AP-1活性，细胞周期索Dl和细胞周期素依赖激酶4表达降低，细胞阻滞在Gl期。结论 茶多酚可能通过下调AP-1活性使细胞周期索Dl表达降低；而茶多酚使细胞周期素依赖激酶4表达降低，可能与AP-1的活性无关。     

姜黄素对人肺成纤维细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLFs)体外生长、细胞周期及凋亡的影响。方法应用CCK-8、Annexin-V/PI、PI流式细胞分析术、免疫印迹法,检测姜黄素对细胞的增殖、凋亡、细胞周期和Bax蛋白表达的影响。结果姜黄素对HLFs的增殖有抑制作用,可促进HLFs的早期凋亡,对细胞周期可产生G2/M期阻滞,增加HLFs的Bax蛋白的表达。结论姜黄素可抑制HLFs的增殖并能诱导其凋亡,其机制可能与细胞的G2/M期阻滞及凋亡相关蛋白的表达增强有关。     

氢醌对人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响。方法将HBE细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160、320μmo/lL)的氢醌作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定16HBE细胞的相对存活率,用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布。结果在0～40μmo/lL范围内HQ作用24 h后,16HBE细胞的存活率未见明显变化(P>0.05);当染毒剂量超过80μmo/lL时,细胞存活率明显下降(P<0.01)。SCGE显示随着HQ浓度的升高,16HBE细胞的DNA断裂程度加重。HQ作用浓度在10～320μmo/lL范围内,16HBE细胞的细胞周期表现为G2期阻滞,G1期比例下降。结论 HQ会对16HBE细胞的DNA产生损害,并且引起G2期细胞阻滞。     

氟对大鼠骨组织RBPJ及相关基因表达影响

目的 观察氟中毒大鼠骨组织中核转录抑制因子(RBPJ)、Jag1和Hes5蛋白表达变化,探讨Notch通路与氟骨症关系。方法 成年SD大鼠24只,随机分为3组:对照组(饮水含氟<1 mg/L),低、高氟组(饮水含氟50、100 mg/L),每组8只;饲养6个月后,收集尿液和骨组织,测定尿氟和骨氟,观察骨组织学变化并测定骨组织系列形态学指标,免疫组化法检测成骨细胞中RBPJ、Jag1和Hes5蛋白表达,免疫印迹法和实时荧光定量法分别检测骨组织RBPJ、Jag1和Hes5蛋白与mRNA表达量。结果 与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟和骨氟[分别为(11.80±1.08)、(18.08±1.13)mg/L和(5974.76±2036.13)、(7996.51±2669.93)μg/g)]均升高(均P<0.05);染氟组大鼠骨组织呈骨质硬化病理改变;与对照组比较,低、高氟组大鼠骨组织RBPJ蛋白表达[分别为(4.985±0.913)、(4.279±1.507)]均升高,高氟组Jag1、Hes5蛋白表达[分别为(0.112±0.024)、(0.128±0.039)]均降低(均P<0.05);与对照组比较,高氟组大鼠骨组织Jag1、RBPJ mRNA表达量[分别为(0.0057±0.0054)、(0.0055±0.0044)]降低(均P<0.05)。结论 过量氟抑制Notch通路信号,使该通路下游靶基因表达受到抑制,从而促进成骨作用,参与氟骨症发病过程。     

低剂量氢醒对TK6淋巴母细胞生物学性状及miR-221表达影响

目的 探讨低剂童氮醌(HQ)对TK6淋巴母细胞的生物学性状及小分子非编码RNA(microRNA)-221(miR-221)表达的影响.方法 磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0 μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组.应用CCK-8试剂盒检测细胞活力和细胞增殖,通过磷脂结合蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞调亡,用实时荧光定童-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测milR-221的表达改变.结果 细胞增殖以48 h最为明显,2.5、5.0和10.0 μmol/L组细胞增殖指数分别为1.33(P<0.05)、1.14(P<0.05)和1.12(P<0.05);milR-221表达改变以72h最为明显,2.5、5.0、10.0 p.μmol/L HQ组细胞milR-221表达量分别抑制了0.31倍(P<0.05)、0.39倍(P<0.05)和0.33倍(P<0.05).结论　低剂量HQ能抑制TK6细胞调亡和milR-221的表达,促进细胞增殖.