真武汤对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察真武汤对慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,真武汤组,依那普利组。采用腹主动脉缩窄法制作CHF大鼠模型,术后4周开始灌胃给药,连续给药6周。检测血流动力学指标,RT-PCR和Western Blot法检测大鼠心肌组织Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果与模型组相比,真武汤组LVEDP、＋dp/dtmax明显下降,MBP、-dp/dtmax、HR明显上升,Bax表达下降,Bcl-2表达上升。结论真武汤可通过降低Bax在心肌细胞中的表达,调节Bcl-2和Bax平衡来改善CHF大鼠的心功能。     

真武汤对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：研究真武汤对阿霉素诱导慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡因子的影响。方法：将24只斯泼累格·多雷(SD)大鼠分为空白组、模型组、美托洛尔组、真武汤组,每组6只。利用腹腔注射阿霉素建立慢性心力衰竭模型。给药7周后,利用彩超仪检测心功能左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS);利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2的浓度改变;蛋白免疫印迹(Western Blotting)法观察心肌组织Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白含量。结果：与空白组比较,模型组LVEF、LVFS降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,真武汤组LVEF、LVFS升高(均P<0.01),BAX的浓度和蛋白表达显著降低(均P<0.01),Bcl-2的浓度及蛋白表达显著上升(均P<0.01),MMP-9的蛋白表达降低(P<0.01)。结论：真武汤能有效调控大鼠心肌细胞凋亡因子,进而改善大鼠心功能。     

人参皂苷Rg1通过calpain-1通路减轻肥大心肌细胞凋亡

目的:人参皂苷Rg1可以抑制心肌肥厚,本研究主要探讨人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导肥大心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能的作用机制。方法:H9C2心肌细胞传代后,以10μmol/L的ISO诱导心肌细胞肥大和凋亡,鬼笔环肽染色测定细胞体积;Lowry法测定心肌细胞蛋白含量;JC-1染色观察各组线粒体膜电位的变化;Western Blot测定bcl-2,bax和calpain-1的蛋白表达;Fluo-3/AM为荧光探针,测定细胞内钙的变化。结果:人参皂苷Rg1(40,80μmol/L)可降低ISO诱导的细胞体积增大,蛋白合成增加,增加ISO诱导的线粒体膜电位降低,增加bcl-2蛋白表达,降低bax蛋白表达。机制研究显示人参皂苷Rg1可同时降低ISO诱导的calpain-1表达增加和细胞内钙增加。结论:人参皂苷Rg1可通过Ca2+/calpain-1通路减轻ISO诱导的肥大心肌细胞凋亡。     

真武汤对心力衰竭模型大鼠心室重构及心肌细胞凋亡、纤维化的影响

目的探讨真武汤治疗心力衰竭的可能作用机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及真武汤低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外其余各组采用结扎腹主动脉方法建立心力衰竭模型。真武汤低、中、高剂量组分别给予真武汤6、12、18 g/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组分别给予蒸馏水3 ml灌胃,每天1次,连续给药28天。给药后各组大鼠行高频超声心动图检查,测定左心室舒张末期内径(LVIDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短指数(FS)。TUNEL法检测并计算各组大鼠心肌细胞凋亡指数;ELISA法检测各组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达;Real-time PCR检测各组大鼠心肌组织骨膜蛋白、转化生长因子β1(TGF-β1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)mRNA表达;Western blot法检测各组大鼠心肌组织骨膜蛋白、TGF-β1、GRP78、CHOP蛋白表达。结果与模型组比较,真武汤高、中、低剂量组心脏超声各项指标、心肌纤维化程度均明显改善,心肌凋亡细胞显著减少,ColⅠ、ColⅢ表达,骨膜蛋白、TGF-β1、GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达均明显降低,且真武汤高剂量组改善最为明显(P0.05)。结论真武汤可改善心力衰竭大鼠心室重构,减少心肌细胞凋亡和心肌纤维化,可能是其治疗心力衰竭的机制之一。     

真武汤治疗心力衰竭大鼠心肌细胞超微结构的影响

目的:通过电镜观察真武汤对心力衰竭大鼠超微结构影响探讨真武汤治疗心力衰竭疗效。方法:通过结扎大鼠冠状动脉前降支配合力竭式游泳成功复制心力衰竭大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分成中药组(真武汤高、中、低剂量组)、西药组(卡托普利组)、模型组和空白组,每组10只,每日两次灌胃,持续15 d。用酶联免疫吸附试验法(ELISA)法测定大鼠血清BNP,电镜观察心肌细胞超微结构。结果:真武汤组与西药组均可明显降低心力衰竭大鼠BNP水平,电镜观察显示真武汤组和西药组心肌超微结构均有不同程度改善,且真武汤大剂量组最为显著。结论:真武汤治疗心力衰竭有较好疗效。     

白藜芦醇通过抑制SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探究白藜芦醇通过抑制沉默信息调节因子3(Silent Information Regulator 3,SIRT3)/β-连环蛋白(β-catenin)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptorγ,PPARγ)信号通路对急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction, AMI)大鼠心肌细胞凋亡。方法:45只SD大鼠随机分为3组(n=15):假手术组,AMI组和白藜芦醇组。AMI组和白藜芦醇组建立AMI模型。白藜芦醇组大鼠舌静脉注射白藜芦醇干预。检测和比较各组大鼠心肌细胞损伤、凋亡情况并比较SIRT3、β-catenin、PPARγ蛋白水平。结果:AMI组大鼠细胞形状发生改变,排列紊乱,并出现炎性浸润和细胞坏死。白藜芦醇组细胞形态和排列恢复,细胞坏死显著减少。AMI组大鼠血清cTnT、CK-MB、IL-6和TNF-α水平显著高于假手术组(P0.05),白藜芦醇组大鼠血清cTnT、CK-MB、IL-6和TNF-α水平显著低于AMI组(P0.05)。AMI组大鼠心肌细胞凋亡率显著高于假手术组(P0.05),白藜芦醇组大鼠心肌细胞凋亡率显著低于AMI组(P0.05)。AMI组大鼠心肌组织中SIRT3、β-catenin、PPARγ蛋白水平高于假手术组(P0.05),白藜芦醇组大鼠心肌组织中SIRT3、β-catenin、PPARγ蛋白水平显著低于AMI组(P0.05)。结论:白藜芦醇通过抑制SIRT3/β-catenin/PPARγ通路缓解AMI引起的心肌细胞凋亡,并减少炎症反应改善心肌功能。     

真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究

目的:通过真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究,阐述真武汤抗心肌细胞凋亡的具体机制。方法:(1)采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量;(2)筛选真武汤含药血清的最佳浓度;(3)实验分为模型对照组[异丙肾上腺素(10~6 mol/L)]、空白对照组、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)、卡托普利组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)];(4)AO/EB双重荧光染色和流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;(5)Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:(1)异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;异丙肾上腺素10μmol/L作用6h后,细胞存活率降低明显。(2)真武汤含药血清浓度的选择:各组心肌细胞与相应干预措施作用48h后,各干预组细胞活性均低于空白组,差异有统计学意义(P0.05);卡托普利组及不同浓度含药血清组细胞活性均高于异丙肾上腺素组(P0.05);20%含药血清组、10%含药血清组与卡托普利组相比细胞存活率相似,差异无统计学意义,但考虑到中药的细胞毒作用及成本,选择10%含药血清组进行后续实验。(3)AO/EB双重荧光染色检测细胞凋亡:与空白组比较,真武汤组及西药组可见明显抑制心肌细胞凋亡。(4)流式细胞仪检测心肌细胞凋亡:模型对照组细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较有显著差异(P0.01);卡托普利组及真武汤组与模型对照组相比细胞凋亡明显降低,有统计学差异(P0.05)。(5)Western Blotting检测结果:真武汤组和卡托普利组与模型对照组相比较,Caspase-3蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能降低心肌细胞损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与调节Caspase-3蛋白表达有关。     

玉竹提取物对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞线粒体损伤及凋亡的保护作用

目的:探究玉竹提取物对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞线粒体损伤及凋亡的保护作用。方法:选取雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、玉竹提取物低、中、高剂量组及银杏内酯B组,采用可逆性左前降支结扎法建立心肌缺血再灌注模型,给予大鼠心肌缺血30 min,再灌注120 min。玉竹提取物低、中、高剂量组及银杏内酯B组在缺血前30 min给予玉竹提取物100,200,300 mg·kg-1及银杏内酯B 60 mg·kg-1腹腔注射,假手术组及模型组给予相同体积0.9%Na Cl溶液腹腔注射;记录大鼠血流动力学指标;采用原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色观察各组大鼠心室肌细胞凋亡情况;采用透射电子显微镜观察大鼠心肌线粒体形态及病理变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠心肌组织游离脂肪酸(FFA),三磷酸腺苷(ATP),腺苷酸(AMP),乳酸(LAC)含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心室肌组织半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-9,Caspase-12蛋白的表达。分离心肌线粒体检测其超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)及游离钙含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠左室收缩最大压、左心室压力最大上升速率下降,左室舒张末压、左心室压力最大下降速率升高,心肌细胞凋亡明显,心肌组织FFA,LAC含量升高,Caspase-3,Caspase-9,Caspase-12蛋白表达明显增加,ATP/AMP值明显降低,线粒体膜崩解、内嵴明显消失(P0.05);与模型组比较,玉竹提取物低、中、高剂量及银杏内酯B组大鼠血流动力学指标、心肌细胞凋亡程度及心肌线粒体病理变化均有改善,心肌组织FFA,LAC含量明显降低,Caspase-3,Caspase-9,Caspase-12蛋白表达降低,ATP/AMP值明显升高(P0.05)。结论:玉竹提取物可改善大鼠心肌缺血再灌注损伤,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与保护线粒体,增强心肌细胞线粒体能量代谢有关。     

当归芍药散对AD大鼠线粒体稳态及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的：探讨当归芍药散对阿尔茨海默病(AD)大鼠线粒体形态和功能的影响及作用机制。方法：采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)构建AD模型大鼠。40只大鼠随机分为假手术组、模型组、当归芍药散低、中、高剂量(12、24、36 g·kg^-1)组,连续灌胃14 d后透射电镜观察大鼠海马区线粒体形态变化,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测活性氧(ROS)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COXⅣ)、PGC-1α mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、PGC-1α蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠海马区线粒体损伤明显,ROS产生和细胞凋亡率显著增高(P<0.01),MFN2、COXⅣ、PGC-1α mRNA表达显著下调,Drp...     

虎杖苷通过调控Nrf2/HO⁃1信号通路减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探究虎杖苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(HIR)的保护作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO?1)信号通路的作用关系。方法采用随机数字法将40只SD大鼠分为5组(每组8只),即假手术组、模型组、低剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷联合Nrf2抑制剂组。建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,并于造模前连续3 d给予不同剂量虎杖苷或联合Nrf2抑制剂ML385预处理。再灌注6 h后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、白细胞介素1β(IL?1β)、白细胞介素6(IL?6)和肿瘤坏死因子α(TNF?α)表达水平以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;HE染色观察大鼠肝组织病理特征并进行病理评分;TUNEL法检测大鼠肝组织细胞凋亡情况;Western blot检测肝组织核蛋白Nrf2、全蛋白HO?1、Bax、Bcl?2及cleaved caspase?3等表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠肝组织病理评分、血清ALT与AST活性及IL?1β、IL?6和TNF?α水平升高,肝组织细胞凋亡率、MDA水平以及Nrf2、HO?1、Bax、cleaved caspase?3蛋白表达增加,而SOD活性和Bcl?2表达水平降低,组间差异显著。高剂量虎杖苷能显著缓解模型大鼠肝组织损伤,降低炎症水平、氧化应激以及细胞凋亡,并且促进Nrf2及HO?1的蛋白表达,组间差异显著。ML385处理可抑制高剂量虎杖苷的干预效果。结论虎杖苷可能通过激活Nrf2/HO?1信号通路,抑制HIR诱导的炎症、氧化应激以及肝细胞凋亡,改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤。     

电针通过下丘脑TSC1-mTOR信号通路减轻肥胖大鼠体重的机制研究

目的探讨电针通过下丘脑结节性硬化症基因1(tuberous sclerosis complex 1,TSC1)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路减轻食源性肥胖(diet-induced obesity,DIO)大鼠体重的机制。方法 40只雄性SD大鼠随机分为造模组(30只)和正常组(10只)。采用高脂饲料饲养12周制备食源性肥胖大鼠模型,将造模成功的19只大鼠随机分为模型组(9只)和针刺组(10只)。针刺组选天枢、三阴交、中脘、足三里穴进行治疗,每天1次,每周连续针刺5天,休息2天,治疗4周。模型组和正常组不予以干预治疗。观察各组大鼠体重变化;采用重亚硫酸盐的测序法检测TSC1启动子甲基化程度;采用RT-PCR检测m TOR基因表达。结果与本组治疗前比较,针刺组大鼠体重下降(P0.05);与正常组比较,治疗后模型组和针刺组大鼠体重差异无统计学意义(P0.05)。模型组大鼠下丘脑TSC1启动子甲基化率(94.0±4.5)%高于正常组的(87.0±3.6)%,针刺组TSC1启动子甲基化率(87.4±3.9)%低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠下丘脑m TOR基因表达(1.84±0.51)高于正常组(1.02±0.22),针刺组(1.46±0.29)低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论电针可通过下调下丘脑TSC1启动子甲基化程度,调节m TOR基因表达减轻DIO大鼠体重。     

人参皂苷Rg1通过NF-κB通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨人参皂苷Rg1对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制。方法:50只SD大鼠随机分为1假手术组、②模型组、③人参皂苷Rg1 1mg/kg、④人参皂苷Rg1 5mg/kg⑤人参皂苷Rg1 10 mg/kg。采用冠状动脉结扎法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。HE染色观察心肌形态学变化;氯化硝基四氮唑蓝(NBT)法测定心肌梗死面积;TUNEL法测心肌细胞凋亡;酶联免疫吸附法测定血清中TNF-α,IL-1β含量;电泳法测定心肌组织中p65,IκB表达。结果:10 mg/kg人参皂苷Rg1预处理可改善缺血再灌注损伤引起心肌组织的形态学变化,降低心肌梗死面积,减轻心肌细胞凋亡程度,降低TNF-α,IL-1β含量和p65蛋白表达,增加IκB蛋白表达。结论:人参皂苷Rg1对缺血心肌再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能通过下调NF-κB通路,降低炎症反应有关。     

白藜芦醇通过调控SIRT1抑制卵巢癌细胞生长及Wnt信号通路的研究

目的研究白藜芦醇对卵巢癌A2780细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法运用MTT法检测白藜芦醇(50、100、200、400μmol/L)对A2780细胞的抑制率;白藜芦醇+pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1)、白藜芦醇+pc DNA3.1-SIRT1组(转染pc DNA3.1-SIRT1)均用脂质体法转染,加入白藜芦醇(200μmol/L)处理;采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测细胞中信息调节因子1(SIRT1)、β-catenin、c-Myc的m RNA水平;Western blotting法检测细胞中SIRT1、β-catenin、c-Myc蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,白藜芦醇(50、100、200、400μmol/L)处理组细胞增殖抑制率、凋亡率均显著升高(P0.05),且白藜芦醇(200μmol/L)组细胞中SIRT1的m RNA和蛋白水平均显著降低(P0.05),可失活Wnt信号通路;过表达SIRT1可逆转白藜芦醇对A2780细胞增殖及Wnt信号通路的失活作用。结论白藜芦醇可调控SIRT1抑制卵巢癌细胞增殖,促进凋亡,其促凋亡机制可能与失活Wnt信号通路有关。     

天麻素通过SIRT1/PGC-1α信号通路抗叔丁基过氧化氢诱导的HL7702细胞氧化损伤

目的 :探讨天麻素对叔丁基过氧化氢诱导的人肝细胞HL7702氧化损伤的保护作用。方法:以叔丁基过氧化氢损伤人肝细胞HL7702建立氧化损伤模型,以不同浓度天麻素(5²0μmol/L)进行干预。采用MTT比色法检测细胞活力,光学显微镜观察细胞形态,罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变,免疫印迹实验检测细胞中SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结果:不同浓度天麻素(520μmol/L)进行干预。采用MTT比色法检测细胞活力,光学显微镜观察细胞形态,罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变,免疫印迹实验检测细胞中SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结果:不同浓度天麻素(5²0μmol/L)能够提高叔丁基过氧化氢作用的细胞存活率并呈时间-剂量依赖性,确定其最佳作用时间为24 h,最佳作用浓度为10μmol/L。与对照组相比,模型组细胞氧化应激作用明显增强,而天麻素10μmol/L作用24 h后,能够显著降低活性氧和丙二醛含量,升高超氧化物歧化酶活力;抑制叔丁基过氧化氢诱导的线粒体膜电位降低并显著增加SIRT1和PGC-1α蛋白的表达。结论 :天麻素能够抑制活性氧对HL7702细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起线粒体功能损伤并上调SIRT1/PGC-1α蛋白表达有关。     

益心泰对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨益心泰对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 60只大鼠随机分成正常对照组、模型组、益心泰组(4.2 g/kg)、卡维地洛组(10 mg/kg),灌胃给药8周后,通过血流动力学检测大鼠心脏功能,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,Western blot检测β-arrestin、p-Akt、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠左室舒张末期内径增大,左室射血分数、左室短轴缩短率降低,每搏量及β-arrestin、p-Akt、Bcl-2蛋白表达下降,Bax表达、细胞凋亡增加(P0.05,P0.01);与模型组比较,益心泰组、卡维地洛组大鼠左室舒张末期内径、Bax表达下降,左室射血分数、左室短轴缩短率、每搏量升高,β-arrestin、p-Akt、Bcl-2蛋白表达增加,细胞凋亡减少(P0.05,P0.01);与卡维地洛组比较,益心泰组大鼠各项指标无明显变化(P0.05)。结论益心泰对心力衰竭大鼠心脏有保护作用,在一定程度上改善了心脏功能,抑制了心肌细胞凋亡,其机制可能是通过调控β-arrestin-Akt-Bcl-2/Bax信号通路实现的。     

人参皂苷Rg1通过SIRT1/PGC-1α信号通路抑制AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大的研究

目的:探讨人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导乳鼠心肌细胞肥大及能量代谢的作用,及对沉默信息调节因子1(silent information regulator 1, SIRT1)和过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)表达的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌细胞,用AngⅡ0.1μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察人参皂苷Rg1 12.5、25、50μmol/L及SIRT1特异性阻断剂EX527 1μmol/L对肥大心肌细胞的影响。采用消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝(Bradford)法检测细胞中蛋白质含量;Western blot法检测心肌细胞心房钠尿肽(Atrial natriuretic peptide, ANP)、SIRT1及PGC-1α的蛋白表达;酶联免疫吸附(Elisa)法检测细胞外液中三磷酸腺苷(ATP)、单磷酸腺苷(AMP)及游离脂肪酸(FFA)的含量。结果:与空白组比较,模型组心肌细胞体积、蛋白及FFA含量明显升高,ATP/AMP比值降低,ANP蛋白表达显著上调,SIRT1及PGC-1α蛋白的表达显著下调。与模型组比较,人参皂苷Rg1 25、50μmol/L组心肌细胞体积、蛋白和FFA含量显著降低,ATP/AMP比值显著升高,ANP蛋白表达显著下调,人参皂苷Rg1 25μmol/L组SIRT1及PGC-1α蛋白的表达显著上调。人参皂苷Rg1的调节作用随浓度增加而增强。EX527对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大各项指标无影响,但人参皂苷Rg1对肥大心肌细胞的保护作用及PGC-1α表达上调作用可被EX527部分阻断。结论:人参皂苷Rg1对AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大有抑制作用,能改善肥大心肌细胞的能量代谢,其通过上调SIRT1及PGC-1α的表达发挥保护作用。     

霍山石斛多糖通过激活GSK-3β信号通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤

目的:研究霍山石斛多糖抗心肌缺血-再灌注损伤的作用。方法:采用Langendorff离体灌流系统建造大鼠离体缺血-再灌注损伤模型。实验分为正常对照组(不停灌处理)、模型组(停灌20 min)及霍山石斛多糖低、中、高浓度(停灌前灌流已配制浓度为0.1、0.5、1.0 mg/L的KH液10 min)组。利用生物多导记录仪连续测定血流动力学参数。通过TTC染色检测心肌梗死面积。并用ELISA法检测冠脉流出液中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性。ELISA法检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比率、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。利用HE染色和TUNEL法分别检测心肌细胞的坏死和凋亡。Western blot检测心肌组织中GSK-3β的磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型组出现严重的心肌坏死和极高的凋亡率,心功能下降,冠脉流出液中LDH和CK水平显著升高,心肌组织中MDA、IL-6和TNF-α含量显著升高,SOD的活性与GSH/GSSG比值均显著降低(P0.01)。与模型组比较,霍山石斛多糖中、高剂量组的心肌坏死程度、梗死面积和细胞凋亡率显著降低,心功能显著改善;冠脉流出液中LDH、CK水平逐渐降低;心肌组织中MDA、TNF-α及IL-6含量显著降低,SOD活性和GSH/GSSG比值显著升高(P0.01)。高剂量霍山石斛多糖可显著降低心肌细胞凋亡指数,提高心肌组织中GSK-3β磷酸化水平。结论:霍山石斛多糖具有显著的抗心肌缺血-再灌注损伤作用,其作用机制可能与激活GSK-3β信号通路发挥抗氧化、抗炎和抗凋亡有关。     

益心方调控SIRT1/Nrf2/HO-1信号通路改善大鼠心肌缺血再灌注后损伤

目的 探讨中药复方益心方改善心肌缺血再灌注后损伤的作用及其机制。方法 将75只清洁级大鼠分为5组：假手术组(Sham),缺血再灌注组(IR),益心方+缺血再灌注组(YXF+IR),益心方+缺血再灌注+SIRT1抑制剂组(YXF+IR+EX527),益心方+缺血再灌注+SIRT1激动剂组(YXF+IR+SRT1720),每组各15只。再灌注7 d后超声心动图检测心功能;免疫荧光法检测心肌细胞凋亡率和组织活性氧(ROS)的活性;ELISA检测血清中的心肌酶水平;Western Blot检测相关蛋白表达。结果 与Sham组比较,IR组大鼠的左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)降低,心肌凋亡指数和ROS活性升高,血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H₂O₂)、琥珀酸脱氢酶(SDH)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,沉默信息调节因子1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达下降,B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(Bax)...     

大黄素通过线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究大黄素对Hep G2细胞的毒性和可能的作用机制。方法:通过细胞增殖与活性检测试剂(Am-blue)测定大黄素对Hep G2细胞的毒性;使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)和花青染料(JC-1)探针检测细胞内活性氧与线粒体膜电位水平;使用流式细胞仪,通过磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒检测大黄素对Hep G2细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成熟型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3,8,9(cleaved Caspase-3,8,9)以及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved-PARP)等凋亡相关蛋白表达。结果:与空白组比较,大黄素(15,30μmol·L~(-1))对Hep G2细胞具有增殖抑制作用(P0.01),并且具有浓度依赖性;大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够升高细胞内活性氧水平,并且使细胞线粒体膜电位降低(P0.01);大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够使Hep G2细胞早期和晚期凋亡增加(P0.01);大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够激活cleaved Caspases-8,9,3和PARP蛋白的表达(P0.01)。结论:大黄素对Hep G2细胞有增殖抑制作用,说明大黄素具有潜在的肝脏毒性,其毒性作用机制是通过线粒体凋亡途径实现的。     

川陈皮素通过激活SIRT1/FOXO3a信号来减轻肾缺血再灌注损伤

目的：本研究旨在探究川陈皮素（NOB）保护小鼠肾缺血再灌注损伤（RIRI）的可能分子机制。方法：将Balb/c小鼠分为5组（n=6）：假手术组、模型组、NOB组（50 mg/kg）、组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂EX527组（5 mg/kg）、NOB+EX527组（50 mg/kg的NOB+5 mg/kg EX527）。在建模前24 h对小鼠进行药物处理。通过阻断小鼠左肾动静脉血流建立RIRI模型。建模24 h后检测肾组织中氧化应激标志物含量。通过苏木精-伊红（HE）染色和天狼星红染色评价肾组织病变和纤维化。通过TUNEL染色检测肾细胞凋亡。通过蛋白质免疫印迹法检测肾组织中SIRT1、叉头框蛋白O3a（FOXO3a）、细胞凋亡和自噬相关蛋白表达。通过实时荧光定量PCR检测肾组织中SIRT1和FOXO3a mRNA的水平。结果：与模型组比较,NOB组小鼠肾脏病变程度减轻,肾脏纤维化面积降低（均P<0.05）。与模型组比较,NOB组肾组织抗氧化作用升高（P<0.05）。与模型组比较,NOB组肾组织中细胞凋亡减少（P<0.05）。与模型组比较,NOB组肾组织中SIRT1和FOXO3a的mRNA和蛋白相对表达量升高,微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,而p62降低（均P<0.05）。此外,EX527逆转了NOB对肾脏的保护作用（P<0.05）。结论：NOB通过激活SIRT-1/FOXO3a信号通路介导的自噬来减轻RIRI。