附子制药方法的研究

通过模拟临床煎药,对附子分别进行浸润、浸泡30min、热水煎煮、冷水煎煮不同时间,提取水煎液中乌头碱,用薄层扫描法进行含量测定。结果:附子在不同煎煮条件下乌头碱含量变化的速率、趋势不同。热水煎组乌头碱含量最低,其他方法在适当煎煮时间内也能制得乌头碱含量较低的汤剂。结论:附子宜热水煎煮40min以上或直接煎煮50min以上。     

基于化学组分动态变化的附子配伍甘草煎煮条件研究

目的:研究与甘草配伍前后,附子化学组分在煎煮过程中的动态变化规律,以确定附子配伍甘草的最佳煎煮条件。方法:测定不同时间附子单煎液和附子-甘草合煎液中乌头总碱及3种双酯型生物碱的含量,确定最佳煎煮条件;考察最佳煎煮工艺所得汤液的大鼠心脏毒性。结果:附子-甘草配伍的最佳煎煮条件为大火煮沸后小火微沸保持30 min;在煎煮0～90 min时,附子-甘草配伍前后的乌头总碱及3种双酯型生物碱的含量呈现不同的变化趋势,30 min时达两者综合的峰值;煎煮30 min的单附煎液和附子-甘草合煎液均表现出一定的大鼠毒性,但合煎液心脏毒性较小。结论:优选的配伍煎煮工艺可为中药复方及临床应用中附子的"减毒存性"提供参考。     

煎煮时间及甘草配伍剂量对附子中酯型生物碱含量的影响

目的研究煎煮时间及甘草剂量对附子中酯型生物碱含量的影响。方法采用紫外分光光度法测定附子中的酯型生物总碱含量;采用高效液相法比较乌头碱和次乌头碱的含量。结果酯型生物碱含量的降低,与煎煮时间和甘草剂量有较高的相关性;煎煮时间超过30 min,100 g制附子煎煮液所含的乌头碱和次乌头碱含量低于2 mg/ml。结论大剂量附子用药必须通过合理煎煮和配伍以降低毒性,发挥其特长。     

基于化学组分动态变化的附子配伍甘草最佳煎煮条件的研究

摘要：目的：通过研究配伍甘草前后附子化学组分在煎煮过程的动态变化规律,以确定附子配伍甘草的最佳煎煮条件。方法：测定不同时间附子单煎液和附子-甘草合煎液中总碱和三种双酯型生物碱含量以确定最佳煎煮条件,继而考察最佳煎煮工艺所得汤液的大鼠心脏毒性。结果：在0-90min煎煮过程,附甘配伍前后其乌头总碱和三种双酯型生物碱出现不同的变化趋势,30min达两者综合的峰值;煎煮30min的单附煎液和附甘合煎液均表现出一定的大鼠毒性,而附甘合煎液心脏毒性较小。结论：附子-甘草配伍“减毒存性”的最佳煎煮条件为大火煮沸后小火微沸保持30min。     

附子煎煮过程中酯型生物碱含量的动态变化

目的:研究附子煎煮过程中酯型生物碱的动态变化规律,建立其含量变化与煎煮时间的关系。方法:采用E-clipse XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,0.1 mol.L-1醋酸铵溶液(每1 000 mL加0.5 mL冰醋酸)为A相,乙腈-四氢呋喃(25∶15)为B相,梯度洗脱,测定生附子和白附片不同时间水煎液中酯型生物碱的含量。结果:生附子中双酯型生物碱水煎极不稳定,仅在0.5 h检测出次乌头碱;而白附片水煎液在10 h内均能检出新乌头碱和次乌头碱,其含量逐渐降低,在4 h内可检出乌头碱。生附子水煎液中3种单酯型生物碱含量呈现逐渐增加的变化趋势,在8 h达到峰值;而白附片水煎液中苯甲酰新乌头原碱和苯甲酰乌头原碱含量先增后减,约在3～5 h达到峰值,苯甲酰次乌头原碱含量在10 h内逐渐增大至峰值。结论:生附子和白附片煎煮过程中酯型生物碱含量的变化规律不同,总体趋势是双酯型生物碱转化为焦新乌头碱、焦乌头碱、焦次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱。     

附子甘草配伍对乌头碱、甘草酸、甘草苷的动态影响

 目的建立水煎液中甘草苷、甘草酸、乌头碱的HPLC定量测定方法。研究附子与甘草配伍前后产生的化学成分的动态变化现象,探讨附子甘草配伍增效减毒的物质基础。方法用高效液相色谱法测定附子、甘草单煎及附子与甘草配伍合煎液中甘草苷、甘草酸、乌头碱的含量,分别观察在煎煮的0,5,10,20,30,45,60,75,90 min化学成分的动态变化情况。结果附子甘草配伍后乌头碱、甘草苷、甘草酸含量均比单煎时低。结论甘草苷、甘草酸、乌头碱等化学成分的变化是附子甘草配伍能增效减毒的重要物质基础。本实验从组分合和的角度,肯定了附子甘草组分配伍的合理性与科学性。     

不同煎煮时间内生草乌中乌头碱含量变化研究

目的考察生草乌在不同煎煮时间内毒性成分乌头碱的含量变化。方法采用反相高效液相色谱法测定乌头碱的含量,以甲醇-水-氯仿-二乙胺(70∶30∶3∶0.2)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温30℃,紫外检测波长为240 nm。结果乌头碱在0.08～0.8μg范围内呈良好的线性关系,r＝0.9998(n＝6),平均回收率为97.16%。生草乌在煎煮过程中乌头碱的含量0～2 h内逐渐升高,2 h以后逐渐降低,2～4 h降低幅度尤为明显。结论高效液相色谱法测定乌头碱的含量快速、简便、准确、重复性好、结果可靠。生草乌煎煮4h能有效减低乌头碱的含量。     

生附子水煎过程中双酯型乌头碱溶出的动态变化研究

目的 研究生附子临床煎煮过程中双酯型乌头碱的溶出动态变化规律,建立双酯型乌头碱含量与煎煮剂量和煎煮时间的关系。方法 采用高效液相色谱法（HPLC）,Technologies Athena C18-WP色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相：甲醇（0.1 %三乙胺）-水（70∶30）,流速：1.0 mL·min-1,柱温：35 ℃,检测波长：235 nm。结果 生附子水煎液中双酯型乌头碱水煎极不稳定,随煎煮时间的增加,乌头碱比例不断增加,4 h达到峰值。新乌头碱和次乌头碱相似,均有下降趋势,其中次乌头碱明显下降,0.5 h最高,4 h最低。结论 该方法学考察符合定量要求,结果准确,可说明生附子临床水煎液中双酯型乌头碱的溶出动态变化规律。     

LC-MS/MS 比较研究附子配伍甘草对大鼠体内次乌头碱药动学影响

目的:建立大鼠血浆中次乌头碱的LC-MS/MS检测方法,用于研究附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学的变化。方法:大鼠分别灌服附子单煎液、附子甘草合煎液,其中次乌头碱含量分别为73.29μg.kg-1、34.85μg.kg-1,LC-MS/MS测定次乌头碱血药浓度,采用3P97药动学软件分别计算其药动学参数。结果:血浆中次乌头碱在1.98～198 ng.mL-1范围内呈现良好的线性关系。附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内Tmax显著延长,CL显著减小,AUC/dosage显著增大(P<0.05)。结论:附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学行为发生显著改变。     

基于水煎液中挥发性成分含量变化规律探索银翘散“香气大出即取服”的科学内涵

建立银翘散水煎液中3种挥发性成分薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮的含量测定方法,探索银翘散水煎液煎煮过程挥发性成分的变化规律,为阐明银翘散"香气大出即取服"的科学内涵提供研究基础。制备不同煎煮时间银翘散水煎液,采用GCMS定性分析其中挥发性成分的组成并测定薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮的含量,考察不同煎煮时间对银翘散水煎液中挥发性成分含量的影响。结果显示,银翘散水煎液中的挥发性成分主要来源于薄荷、荆芥、连翘3味药材;随着煎煮时间的延长,银翘散水煎液中3种挥发性成分的浓度均先增大后逐渐减小;浸泡30 min后,刚煮沸时,煮沸5,10,15,20,30,40,50,60 min时,银翘散水煎液中薄荷酮的质量浓度分别为0.058,0.268,0.216,0.073,0.065,0.048,0.048,0.041,0.038,0.034 mg·L~(-1),薄荷脑的质量浓度分别为0.965,2.847,3.633,2.420,1.539,1.189,1.273,1.188,0.905,0.663 mg·L~(-1),胡薄荷酮的质量浓度分别为0.355,0.522,0.598,0.477,0.374,0.374,0.339,0.355,0.248,0.251 mg·L~(-1),3种成分总浓度分别为1.377,3.637,4.446,2.970,1.979,1.611,1.660,1.583,1.191,0.947 mg·L~(-1)。结果表明,煎煮时间对银翘散水煎液中挥发性成分含量影响较大,煮沸约5 min时,香气大出,水煎液中3种挥发性成分的浓度较大,煮沸15 min后,香气变淡,水煎液中3种挥发性成分浓度明显变小,提示银翘散"香气大出即取服"传统煎煮方法具有一定的科学依据。     

泥附子一步煎煮制备附子配方颗粒的创新工艺与质量评价研究

目的优选泥附子一步煎煮制备附子配方颗粒的最佳工艺。方法以加水量、提取时间、提取次数3个因素设计试验,以乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、印乌头碱4个剧毒成分的含量以及苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、尼奥林、附子灵、宋果林、塔拉乌头胺、去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱10个有效成分的含量为指标,采用LC-MS/MS多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式同时测定;形成配方颗粒最优的提取、浓缩、成型工艺;并与3种市售附子配方颗粒的质量进行对比。结果 14个生物碱在各自浓度范围内线性关系良好(R~2> 0. 9900),定量限为2. 23～8. 17 ng·m L~(-1),平均回收率在94. 73%～104. 50%。优选提取工艺为料液比1∶6,提取1次,提取时间为4h。提取液滤过,减压浓缩(60～80℃)至相对密度为1. 1以上,冷冻干燥制成冻干粉。按质量比为1∶2. 3加入辅料糊精,用适量70%乙醇制颗粒。与3批市售配方颗粒相比,4个剧毒成分含量大致相当,均<0. 01%,足以确保安全;但新工艺制得的附子配方颗粒10个有效成分的含量为1. 352%,而市售附子配方颗粒含量仅为0. 834%,0. 854%,0. 892%。从产品规格上看,新工艺制成的配方颗粒为每1 g相当于生药材1 g,现有配方颗粒规格为每1 g相当于饮片6 g,即新工艺只需要使用1/18～1/24甚至更少的原料便可制得比现有产品更加质优的产品。结论采用泥附子一步煎煮法制备附子配方颗粒具有很好的品质优势与资源优势,是一种绿色制造、提质增效的创新工艺。     

四逆汤组方配伍减毒实验研究

目的针对四逆汤组方中所含的有毒中药附子,从毒理学角度研究四逆汤组方配伍的合理性。方法通过平行比较附子、附子配伍甘草、附子配伍干姜和四逆汤全方水煎液小鼠急性毒性、大鼠心脏毒性和毒性成分,测定小鼠急性毒性的半数致死剂量(LD50)、大鼠心脏毒性半数中毒剂量(TD50)和水煎液液中乌头碱类生物碱含量,从急性毒性、毒性靶器官和毒性成分3个方面研究四逆汤组方中不同配伍对附子毒性的影响。结果四逆汤组方中附子配伍甘草急性毒性的 LD50和心脏毒性的 TD50高于单用附子与四逆汤全方。而附子配伍干姜对附子的急性毒性的 LD50和心脏毒性的 TD50影响不明显。附子配伍甘草水煎液中主要毒性成分双酯型生物碱含量低于附子配伍干姜。结论四逆汤组方配伍药物中甘草对附子毒性具有减毒作用。     

不同煎煮方法对麻黄细辛附子汤煎剂质量的影响

比较麻黄细辛附子汤的经方煎煮方法与临床常用2种煎煮方法所得汤剂的质量差异,探索经方煎煮方法的科学性。采用经方煎煮方法和2种临床常用煎煮方法,选取麻黄细辛附子汤中具有效/毒二重性的化学成分,考察不同煎煮方法制备煎剂中效毒成分的含量。采用多元统计分析的方法,筛选出区别3种煎煮方法所得煎剂的指标性成分,卡枯醇、新乌头碱、乌头碱。与临床常用煎煮方法相比,虽然经方煎煮方法的煎煮时间最短,但是新乌头碱和乌头碱的溶出度最低且其单酯型生物碱的溶出度也较高。经方煎煮方法较其他煎煮方法,增加了麻黄类生物碱溶出,加速了附子中双酯型生物碱的水解。采用不同煎煮方法制备麻黄细辛附子煎剂中效毒成分的含量存在差异,为经方的古为今用提供参考。     

八味地黄汤各药味对附子生物碱影响的电喷雾质谱研究

目的以八味地黄汤为研究对象,考察各药味对附子生物碱的影响规律,揭示附子配伍组方的科学内涵,为科学阐释八味地黄汤配伍规律提供化学依据。方法利用电喷雾质谱技术分别对八味地黄汤,附子加山茱萸、山药、肉桂、丹皮、泽泻、地黄、茯苓共煎液以及次乌头碱加山茱萸、山药共煎液进行系统考察。结果次乌头碱加山药、山茱萸,附子加山药等共煎液中次乌头碱含量较高;八味地黄汤、附子加山茱萸共煎液中次乌头碱含量较低;肉桂、丹皮、泽泻、地黄、茯苓等对附子生物碱的影响不明显。结论八味地黄汤中乌头碱和中乌头碱水解和溶出比较完全,次乌头碱的含量较少,次乌头碱的减少是由于水解以及溶出受到抑制导致。其中山茱萸对制附子起减毒作用,其减毒机制主要是抑制了制附子中次乌头碱的溶出。而山药则能导致附子毒性增加。     

不同浓度胆巴液浸泡下附子中生物碱含量变化研究

目的:为了规范附子加工工艺,研究附子在胆巴液浸泡过程中6种酯型生物碱的含量变化。研究方案设定了胆巴液的浓度及浸泡时间,为优化附子的泡胆过程提供依据。方法:采用高效液相色谱法测定附子中6种酯型生物碱的含量。流动相为乙腈-四氢呋喃(A,25∶15)和0. 1 mol·L~(-1)醋酸铵溶液(B),洗脱梯度为0～48 min,15%～26%A; 48～49 min,26%～35%A; 49～58 min,35%A; 58～65 min,35%～15%;检测波长为235 nm。结果:胆巴液浓度≥15%时,采挖后的泥附子中苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量均呈下降趋势,且浓度越高,下降越明显。整体下降趋势在18 d以后趋于平缓,在浸泡第18 d后分别下降60%～80%,20%～50%,75%～85%,20%～60%。结论:不同浓度的胆巴液浸泡下,附子的质量变化不同。其中,在10%浓度的胆巴液中浸泡,质量不稳定,在20%及以上浓度的胆巴液中泡胆,附子的质量相对稳定。在胆巴液浸泡过程中附子药材的效/毒比也在发生变化,在18～24 d期间,呈现出活性成分较高,而毒性成分较少的状态,有利于实际生产。     

附子毒性研究进展

通过对近几年发表的附子毒性研究的文献可看,附子毒性研究以毒性成分、毒性作用及减毒方法方面的报道为多。附子化学成分中的乌头类生物碱是附子发挥药效的主要成分,同时也是产生毒性作用的主要成分,临床应用附子时,能够通过在品种、采收上注意、剂量上谨慎、炮制应规范、辨证上准确、配伍上得当、煎煮时间上得当等减毒方法,减轻附子的毒性作用。     

煎煮时间对附子水煎液总生物碱和6种酯型生物碱含量的影响

目的:研究煎煮时间对附子水煎液总生物碱和6种酯型生物碱含量的影响。方法:采用酸碱滴定法测定总生物碱含量;采用HPLC,Agilent ZORBAX Extend-C18分析柱测定6种酯型生物碱含量。结果:随着煎煮时间的延长,不同炮制品中总生物碱的溶出率变化不明显;不同炮制品煎煮过程中酯型生物碱的变化规律不尽相同,其中乌头碱(AC)含量最低,水解最为彻底。结论:临床大剂量应用附子时,最大限度发挥其药理作用,恰如其分地掌握剂量与煎煮时间,是必不可少的。     

甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合煎液(C液),附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数。结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化。甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长。结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学。     

江西建昌帮不同附子炮制品中6种酯型生物碱的含量比较研究

目的研究江西建昌帮不同附子炮制品中6种酯型生物碱的含量差异。方法采用HPLC法同时测定建昌帮煨附子、淡附子、阴附子及阳附子中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱及新乌头碱、乌头碱与次乌头碱含量。结果不同附子炮制品中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱与次乌头碱的平均质量分数(ωB)分别为:煨附子:(25.80±0.27)μg·g~(-1),(16.52±0.29)μg·g~(-1),(181.25±4.21)μg·g~(-1),(22.28±0.62)μg·g~(-1),(8.31±0.11)μg·g~(-1),(7.60±0.78)μg·g~(-1);淡附子:(13.23±1.00)μg·g~(-1),0,(41.32±2.17)μg·g~(-1),(1.47±0.25)μg·g~(-1),(6.26±0.64)μg·g~(-1),(31.21±1.59)μg·g~(-1);阴附子:(11.76±1.23)μg·g~(-1),(2.66±0.30)μg·g~(-1),(76.34±2.32)μg·g~(-1),(22.44±1.93)μg·g~(-1),0,(16.42±0.84)μg·g~(-1);阳附子:(152.76±1.23)μg·g~(-1),(13.39±0.91)μg·g~(-1),(162.03±3.90)μg·g~(-1),(14.85±0.49)μg·g~(-1),0,(97.60±2.45)μg·g~(-1)。结论含量测定方法准确、稳定;建昌帮不同附子炮制品中6生物碱含量不同,其中煨附子与阳附子中的总酯型生物碱含量高于其他两种方法。     

通脉四逆汤毒性分析

目的:测定通脉四逆汤中乌头类生物碱的煎出量及变化规律。方法:采用RP-HPLC法,Hypersil-BDS柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水-氯仿-三乙胺(100∶50∶3∶0.15)为流动相,流速为1mL.min-1,波长为234nm,柱温:30℃。结果:乌头碱、中乌头碱和次乌头碱在(0.0025~0.0800)μg(、0.0028~0.0880)μg和(0.0023~0.0760)μg范围内线性关系良好,r分别为0.9997、0.9996、0.9996。结论:该方在煎煮过程中,同煎的其他药物对乌头类生物碱在汤中的含量产生影响,文火滚煎约70min后,药汤中乌头碱和次乌头碱成分基本消失,中乌头碱消失过半。