铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0. 02 mol·L~(-1)乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);检测波长250 nm;流速1. 0 mL·min~(-1);柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0. 4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290 nm;流速0. 8 mL·min~(-1);柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0. 15~3. 0,0. 075~2. 25μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率分别为99. 01%(RSD 2. 1%),101. 69%(RSD 2. 0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12. 75%~36. 40%,2. 93%~18. 39%,19. 23%~54. 58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14. 33%~29. 47%,6. 64%~15. 20%,25. 73%~44. 37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0. 020 8~0. 832 0μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率为101. 96%(RSD 1. 8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0. 053 2~0. 122 4 mg·g~(-1)(均值为0. 081 0 mg·g~(-1)),0. 040 3~0. 090 0 mg·g~(-1)(均值为0. 068 3 mg·g~(-1)),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0. 02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。     

贵州兴义四种石斛的多糖和总生物碱含量分析

目的分析贵州兴义束花石斛、金钗石斛、流苏石斛、美花石斛中多糖和总生物碱的含量差异。方法采用3,5-二硝基水杨酸比色法测定多糖含量,酸性染料比色法测定总生物碱含量。结果贵州兴义束花石斛、金钗石斛、流苏石斛、美花石斛的折干率分别为13.72%,18.13%,20.77%,32.63%;多糖含量分别为22.70%,12.88%,6.29%,5.20%;总生物碱含量分别为0.41%,0.58%,0.68%,0.46%。多糖与生物碱负相关,r=-0.522(P=0.448);多糖与折干率负相关,r=-0.810(P=0.190);生物碱与折干率相关系数r=-0.041(P=0.959)。结论贵州兴义四种石斛中束花石斛多糖含量较高,但总生物碱含量与折干率较低,总生物碱含量以流苏石斛较高;总生物碱含量、折干率与多糖含量负相关,但在α=0.05水平检验不显著,可能与样本数较少有关。     

霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生HPLC特征图谱比较

目的 研究比较霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生高效液相色谱（HPLC）特征图谱的差异。方法 以盐酸水解石斛多糖,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）进行衍生化,采用HPLC法分析单糖的衍生物。色谱柱为Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为乙腈-0.02 mol·L-1的乙酸铵溶液（冰乙酸调pH=6.7）,梯度洗脱;检测波长为250 nm;柱温为30 ℃;流速为1 mL·min-1。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）生成对照图谱。结果 10批霍山石斛多糖柱前衍生特征图谱标示出6个特征峰,主要由D-甘露糖（71.8 %）与D-葡萄糖（27.2 %）组成,D-甘露糖与D-葡萄糖峰面积比值为2.05～3.71,此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。10批美花石斛多糖柱前衍生特征图谱亦标示出6个特征峰,主要为D-甘露糖（42.9 %）与D-葡萄糖（54.0 %）组成,D-甘露糖与D-葡萄糖峰面积比值为0.67～0.98,此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。与对照图谱比较,10批霍山石斛、美花石斛的相似度分别为0.994～1.000,0.934～1.000,霍山石斛与美花石斛共有模式之间的相似度为0.871。结论 该方法准确可靠,重复性好;两种石斛多糖构成差异较大,不宜混用。     

铁皮石斛、流苏石斛及紫皮石斛中总多糖含量测定研究

目的:建立铁皮石斛、流苏石斛及紫皮石斛中总多糖的含量测定方法。方法:采用紫外分光光度法,以无水葡萄糖为对照品,在483nm波长处测定铁皮石斛、流苏石斛及紫皮石斛中总多糖的含量。结果:无水葡萄糖在1.742～12.191μg·mL~(-1)质量浓度范围内具有良好的线性关系,r=0.999 3;平均回收率为99.8%,RSD为3.29%。铁皮石斛中总多糖含量在35.64～39.39g·100g~(-1)之间,流苏石斛总多糖含量在9.25～12.82g·100g~(-1)之间,紫皮石斛总多糖含量在32.57～37.27g·100g~(-1)之间。结论:不同品种含量差异较大,采用紫外分光光度法测定石斛中总多糖含量的方法操作简便、快速,具有较好的专属性和准确性。     

HPLC法测定流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量

目的：建立流苏石斛精制饮片中的石斛酚的含量测定方法。方法：采用Hypersil–C18（200mm×4.6mm,5μm）为色谱柱,流动相为乙腈-0.05%三氟乙酸（梯度洗脱）,流速为1.0m L/min,检测波长为230nm。结果：石斛酚进样量在0.4~4.0μg范围内有良好的线性关系,r=0.9994,平均回收率99.65%,RSD为1.87%。结论：所建立方法操作简便、准确、可靠、重复性好,可用于流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量测定。     

流苏石斛与其他黄草类石斛HPLC特征图谱的比较研究

目的建立流苏石斛HPLC特征图谱,并初步比较黄草类石斛(金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛)高效液相(HPLC)特征图谱的差异。方法采用HPLC特征图谱技术,建立流苏石斛及黄草类石斛特征图谱分析方法,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)进行相似度分析。结果在流苏石斛的HPLC特征图谱中,标记出9个共有峰,相似度为0.837~0.992。检测发现金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛3种石斛所含化学成分存在较大差异,但均含有石斛酚。结论建立流苏石斛HPLC特征图谱的方法稳定可靠、重复性好,能在一定程度上能够反映金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛3种石斛主要化学成分的种类和相对含量差异,并为流苏石斛与另外两种黄草石斛的鉴别提供依据。     

球花石斛和流苏石斛的显微鉴别及多糖含量测定

目的建立球花石斛和流苏石斛的鉴别方法,为进一步鉴别不同种石斛提供实验基础。方法采用组织切片和显微数量分析对球花石斛和流苏石斛进行显微鉴别;采用苯酚-浓硫酸法测定二者多糖含量。结果球花石斛和流苏石斛组织切片特征明显,且针晶束和硅质块数量差异具有统计学意义(P0.01);球花石斛及流苏石斛的多糖含量分别为4.42%、4.47%。结论球花石斛和流苏石斛多糖含量相近,可采用显微数量分析方法鉴别,此方法简单、快速、重复性好,可为临床上准确使用不同石斛品种提供可靠的鉴别方法。     

流苏石斛和其它黄草类石斛HPLC特征图谱的比较研究

摘要：目的 建立流苏石斛HPLC特征图谱,并初步比较黄草类石斛（金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛）HPLC特征图谱的差异。方法 采用HPLC特征图谱技术,建立流苏石斛特征图谱分析方法,并建立黄草类石斛特征图谱分析方法,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）进行相似度分析。结果 建立了流苏石斛的HPLC特征图谱,标记出9个共有峰,相似度为0.837~0.992。金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛这三种石斛所含化学成分存在很大差异, 不过金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛都检测出含有石斛酚。结论 建立流苏石斛HPLC特征图谱的方法稳定可靠、重复性好。金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛三种石斛的HPLC特征图谱分析方法在一定程度上能够反映三种石斛主要化学成分的种类和相对含量差异,为流苏石斛和另外两种黄草石斛的鉴别提供依据。     

美花石斛HPLC特征图谱研究及其与水煎液相关性分析

目的建立美花石斛HPLC特征图谱分析方法,研究美花石斛及其水煎液指纹图谱的相关性。方法采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱;流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长为280 nm;柱温为35℃;流速为0.8 mL·min~(-1)。结果 16批美花石斛药材样品,标示出22个特征共有峰,相似度为0.854~0.969;10批美花石斛水煎液样品,标示出药材中的16个共有峰,相似度均在0.909以上。经对照品保留时间定位及特征峰紫外光谱分析,鉴别了2个特征峰(峰14为柚皮素、峰16为石斛酚)。每批药材与其水煎液间的相似度为0.815~0.910。结论方法准确可靠稳定,重复性好,为美花石斛质量控制和物质基础研究提供参考。     

安徽霍山产3种石斛多糖组成的比较研究

目的:安徽霍山为兰科石斛属植物地理分布的最北端,主产3种石斛:霍山石斛、细茎石斛和铁皮石斛,其多糖提取物具有显著的药理活性,本研究旨在探究同一特殊生境下3种石斛所含多糖在组成上的相似和差异。方法:实验以越冬茎条为供试材料,采用苯酚-硫酸法分析多糖含量差异,利用HPSEC法分析分子量分布差异,通过柱前衍生化HPLC法分析单糖组成差异。结果:霍山石斛、细茎石斛和铁皮石斛多糖含量分别为其干重的(18.65±1.50)%、(11.32±1.30)%和(20.78±1.60)%;其多糖分子量呈连续分布状态,其中分子量介于50~200 kDa的高活性多糖在3种石斛多糖中的比例分别为:(16.38±1.40)%、(21.61±1.30)%和(14.19±1.50)%;3种石斛多糖水解产物中检出葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖醛酸(GalUA)、阿拉伯糖(Ara)共7种单糖,且都以甘露糖和葡萄糖为主要单糖组分,但铁皮石斛中的甘露糖和葡萄糖的相对峰面积比值最大。结论:同一生境下3种石斛所含多糖在含量、分子量分布和单糖组成上既存在共性也存在明显差异,实验探究了同一特殊生境下3种石斛多糖组分间的异同,其结果对石斛的鉴别和组效关系的研究提供了重要参考。     

金钗石斛煎煮熬膏过程中多糖和总生物碱含量的变化

目的探索金钗石斛在长时间煎煮和熬膏过程中其多糖和总生物碱含量的变化情况。方法模拟临床应用,将金钗石斛饮片(长约0.5 cm的小节)浸泡24 h后加水煎煮三次(每次用50倍量水),煎煮液在微沸状态下加热浓缩成膏;用苯酚-硫酸法测定多糖含量,用酸性染料(溴甲酚绿)比色法测定总生物碱含量。结果 1煎煮7 h,金钗石斛有效成分的累积溶出率:多糖约为50%,总生物碱约为15%;24 h的熬膏过程中,多糖和总生物碱的多次测定结果差异不大,RSD分别为7.55%、5.67%;3分别给出了描述煎煮过程中多糖和总生物碱溶出情况的数学模型。结论 1金钗石斛饮片用水煎煮熬膏,多糖和生物碱较难溶出,应考虑增加粉碎度以及酒(乙醇)、水并用;2煎煮熬膏过程对金钗石斛多糖和生物碱类成分的破坏较小,熬膏使用值得推广。     

叠鞘石斛中联苄类成分的定性定量分析

 目的建立叠鞘石斛中联苄类成分的定性、定量分析方法。方法运用薄层色谱法对叠鞘石斛中联苄类成分石斛酚(gigantol)和杓唇石斛素(moscatilin)进行定性分析,采用高效液相色谱法测定石斛酚的含量,以Shim-pack CLC-ODS柱为固定相,流动相乙腈-0.2%甲酸(35∶65),检测波长280 nm,柱温25℃。结果石斛酚在0.196～12.54μg内峰面积与进样量呈良好的线性,r=0.999 9;平均回收率100.6%;RSD3.01%。结论通过10批不同来源的叠鞘石斛的鉴别和含量测定,证明方法灵敏,准确可靠,重复性好。在不同采收期的叠鞘石斛中,石斛酚的含量在春季4,5月份和秋季10,11月份相对高于其他月份。     

自动电位滴定法测定金钗石斛药材中总生物碱的含量

目的:测定金钗石斛药材中总生物碱的含量。方法:药材以90%乙醇回流提取3次,醇提液浓缩至无醇味后以3%盐酸溶解,酸水溶液经强酸型阳离子交换树脂柱吸附,以去离子水洗脱至中性后,收集5%氨水-50%乙醇液洗脱流份(以生物碱的检识反应判定终点)并浓缩至干,即得含量测定用供试品。供试品在冰醋酸中以高氯酸滴定液(0.1mol/L)自动滴定,由此以石斛碱(C16H25NO2)为基准物计算金钗石斛中生物碱的含量(每1mL高氯酸滴定液相当于石斛碱26.3mg)。结果:三个批次金钗石斛药材的总生物碱含量测定结果分别为0.85%、0.63%、1.03%。结论:经方法学考察,该含量测定方法具有良好的专属性和灵敏度,检测结果稳定可靠,可用于金钗石斛药材中总生物碱的定量分析。     

不同生长年限霍山石斛的主要成分分析及其对急性肝损伤保护作用的比较研究

通过研究不同生长年限霍山石斛主要成分与对小鼠急性肝损伤的保护作用的差异,为霍山石斛的适时采收提供科学依据。采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定3种不同生长年限霍山石斛多糖、总黄酮、总生物碱和石斛酚的含量。将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型组和分别给予3种不同生长年限霍山石斛高(7.5 g·kg^-1)、低(1.25 g·kg^-1)剂量组,各组连续每日给药14 d。末次给药2 h后,除空白对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组腹腔注射500 mg·kg^-1对乙酰氨基酚。12 h后采集小鼠血清及肝组织,检测小鼠血清中ALT和AST活性,肝组织SOD和MDA的水平,并观察肝脏病理变化。结果显示,不同生长年限霍山石斛主要成分含量差异显著(P<0.05),二年生霍山石斛多糖和石斛酚含量均为最高。总黄酮和总生物碱含量均为三年生霍山石斛最高,二年生次之,一年生最低。肝损伤保护作用研究发现,与模型组比较,各给药组均能降低血清中ALT,AST含量,升高肝组织中SOD活性并降低MDA水平,减轻对乙酰氨基酚对肝脏的病理损伤,但不同生长年限的霍山石斛保肝效果不同。结合不同生长年限霍山石斛成分进行多成分SPSS配对检验的结果表明,多糖和石斛酚很可能在小鼠急性肝损伤保护作用中起主导作用,二年生霍山石斛药效最佳,霍山石斛适宜采收期为二年生。     

基于UPLC-ESI-Orbitrap-MS技术对金钗石斛生物碱的分析

目的:通过UPLC-ESI-Orbitrap-MS技术对金钗石斛生物碱的主要化学成分进行分析。方法:采用Thermo Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱-色谱联用系统分析,以Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm)为固定相,流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~2 min,5%B,2~15 min,5%~95%B,15~17 min,95%B),流速0.3 m L·min~(-1),柱温40℃,进样量2μL;质谱条件采用电喷雾离子化(ESI)方式,在正离子模式下,以full scan/targeted-dd MS2扫描模式检测,研究金钗石斛生物碱的主要化学成分。结果:通过与对照品比对、结合参考文献,分析多级质谱数据,根据化学成分的质谱碎片,推测色谱峰对应的化学结构,共归属8种倍半萜类金钗石斛生物碱,分别是石斛碱(dendrobine),mubironine B,石斛氨碱(dendramine),石斛醚碱(dendroxine),石斛酮碱(nobilonine),6-羟基金石斛碱(6-hydroxynobiline),N-异戊烯基石斛碱(N-isopentenyldendrobinium),N-异戊烯基-6-羟基石斛碱(N-isopentenyl-6-hydroxydendroxinium)。结论:建立了金钗石斛倍半萜类生物碱的主要化学成分的分析方法,为金钗石斛药材的鉴别及质量控制提供了科学依据。     

基于HPLC-ESI-MSn技术的流苏石斛黄酮类化学成分分析

目的 应用高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI-MSⁿ)联用技术对流苏石斛中主要的黄酮成分进行分析鉴定。方法 采用Kromasil 100-5 C₁₈色谱柱,用乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱以分离各主要成分,体积流量为0.8 mL·min^-1,柱温为35℃,紫外检测波长为340 nm;质谱使用ESI离子源,负离子模式下采集数据。结果 结合相关文献及碎片离子信息进行数据分析,从流苏石斛中共鉴定出黄酮类化学成分27个,均为黄酮碳苷。该研究发现流苏石斛碳苷取代糖为葡萄糖、阿拉伯糖与1个未知己糖为主,3个芹菜素-6,8-二-C-己糖苷(峰1、峰2、峰4)相对丰度均较大,具有鉴别意义。结论 该研究可为流苏石斛的质量控制提供参考。     

UPLC-Q-TOF法分析金钗石斛化学成分

目的:通过超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF),对金钗石斛的乙酸乙酯萃取部位的主要化学成分进行定性分析研究。方法:采用UPLC C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱;流速0.4 mL/min;柱温30℃。质谱分析采用电喷雾(ESI)离子源,独立数据采集(IDA)、正负离子模式下分别采集数据。针对保留时间、测得的精确相对分子质量,应用MassHunter软件Formula Calculator等功能、天然产物数据库,分析比较各色谱峰的一级二级质谱裂解碎片。结果:从金钗石斛的乙酸乙酯萃取部位共鉴定了45个天然化合物,其主要化学成分包括生物碱类、联苄类、菲类、倍半萜类等。结论:该方法准确、可靠,适用于金钗石斛化学成分的鉴定研究,为金钗石斛的药效物质基础、资源开发利用提供参考。     

金钗石斛细粉与超微粉对大鼠肠道转运体影响的比较

目的:比较金钗石斛细粉和超微粉中生物碱类成分在大鼠体内的血药浓度,考察不同粒径金钗石斛对肠道转运体基因表达的影响。方法:将36只大鼠随机分为空白组、金钗石斛细粉组(0.25 g·kg~(-1))和金钗石斛超微粉组(0.25 g·kg~(-1)),每6 h灌胃1次,连续灌胃5 d,收集大鼠血浆和小肠样本。血浆样本分析采用UPLC-MS,Hypersil Gold C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测。采用实时荧光定量聚合酶链式反应分析肠道转运体多药耐药蛋白1(MDR1),寡肽转运蛋白1(PEPT1),有机阳离子转运蛋白2(OCT2),乳腺癌耐药蛋白1(BCRP1),单羧酸转运蛋白1(MCT1)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的基因表达情况。结果:灌胃给予金钗石斛细粉和超微粉后,在大鼠血浆中能检测出石斛碱、石斛氨碱和mubironine B。金钗石斛超微粉组血浆中石斛碱和石斛氨碱的质量浓度比金钗石斛细粉组显著增加(P0.05)。与空白组比较,金钗石斛细粉和超微粉均能显著抑制BCRP1的基因表达(P0.05),且金钗石斛超微粉组较细粉组表达更低(P0.05);金钗石斛细粉还能显著上调MDR1的基因表达(P0.05),而金钗石斛超微粉则对MDR1基因表达的影响不显著。结论:与金钗石斛细粉相比,金钗石斛超微粉灌胃后在大鼠体内石斛碱和石斛氨碱的血药浓度升高,这可能与肠道转运体MDR1和BCRP1有关,为金钗石斛药材粒径的选择提供了实验依据。     

不同采收期铁皮石斛主要成分含量测定及比较

目的:测定并比较不同采收期两年生长期的铁皮石斛中多糖含量、甘露糖含量、甘露糖与葡萄糖峰面积比及乙醇浸出物含量,寻找铁皮石斛的最佳采收期。方法:用紫外分光光度法进行多糖含量测定,高效液相法测定甘露糖、甘露糖与葡萄糖面积比,热浸法测定乙醇浸出物。结果:按照干燥品计,头年10月、次年3月采收的铁皮石斛中多糖含量(%)分别为(31.6±2.8)、(38.3±2.7),两组之间比较差异有统计学意义(P0.05);甘露糖含量(%)分别为(32.3±3.6)、(35.0±3.5),两组之间比较差异无统计学意义(P0.05);甘露糖与葡萄糖峰面积比为(3.2±0.7)、(2.0±0.6),两组之间比较差异有统计学意义(P0.05);乙醇浸出物含量(%)分别为(12.6±1.8)、(6.4±1.7),两组之间比较差异有统计学意义(P0.05);铁皮石斛多糖含量增加,甘露糖与葡萄糖峰面积比呈现递减趋势,乙醇浸出物含量呈现递减趋势。结论:铁皮石斛头年10月到翌年3月多糖含量最高,为最佳采收期。如中药生产上需要以铁皮石斛多糖为主要有效成分,两年生的铁皮石斛药材采收时间为次年3月更科学合理。     

不同生长年限霍山石斛高效液相指纹图谱研究

目的建立霍山石斛Dendrobium huoshanense的HPLC指纹图谱,同时测定不同生长年限霍山石斛中丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素含量,为霍山石斛药材质量的评价提供依据。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长240 nm,柱温30℃;将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1),对不同年限的霍山石斛样品进行相似度分析;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果。结果本方法建立的指纹图谱共有13个共有峰,指认了其中4个共有峰,分别为丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素;不同年限的栽培霍山石斛相似度结果小于0.900,不同年限的仿野生霍山石斛相似度结果大于0.900。结论HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够评价和鉴别不同年限的霍山石斛,为霍山石斛药材的采收、开发、评价等提供参考。