PGG通过激活Nrf2抗氧化通路保护AGEs诱导的系膜细胞损伤

目的:研究五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-penta-O-galloy-β-D-glucose,PGG)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠肾小球系膜细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:通过AGEs处理小鼠系膜细胞建立系膜细胞损伤模型,将实验分为正常对照组、模型组及不同浓度PGG(5、10、20μM)组;采取DCFH法检测细胞内ROS含量;试剂盒法检测细胞培养上清中SOD活性和MDA含量;Western blot检测全细胞Nrf2、HO-1蛋白表达及胞核、胞质中Nrf2蛋白表达。结果:与模型组相比,PGG显著降低细胞中ROS水平,增加SOD活性,减少MDA含量,增加细胞Nrf2和HO-1蛋白表达,增加胞核Nrf2蛋白表达。结论:PGG对AGEs诱导系膜细胞的保护作用是通过激活Nrf2/HO-1抗氧化信号通路。     

石甘散对戊四氮致痫大鼠氧化应激反应及Nrf2、HO-1因子影响的研究

目的观察石甘散及其主要药物甘松、石菖蒲对戊四氮致痫大鼠氧化应激反应的影响,并根据核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)因子的变化研究石甘散可能的抗氧化作用机制。方法除空白组外,将点燃成功的戊四氮致痫大鼠随机分为模型组、西药组(丙戊酸钠灌胃治疗)、甘松组、石菖蒲组和石甘散组。所有大鼠经14 d干预后处死,取大鼠脑部海马组织,考马斯亮蓝法测定海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)蛋白含量,Western bloting法测定海马组织Nrf2和HO-1蛋白含量,RT-PCR法测定海马组织Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA表达。结果 1)癫痫模型点燃成功后,大鼠海马组织SOD、GSH-Px含量明显降低,MDA含量明显升高(P0.01)。丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均可以增加致痫大鼠SOD、GSH-Px含量、降低MDA含量,丙戊酸钠、石甘散作用效果强于甘松、石菖蒲单独应用(P0.05或P0.01),且两组间差异无统计学意义(P0.05);2)癫痫模型点燃后,大鼠海马组织Nrf2、HO-1蛋白含量均升高(P0.05或P0.01)。丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均能进一步增加Nrf2、HO-1蛋白含量,西药组、石甘散组Nrf2、HO-1蛋白的增加明显高于甘松、石菖蒲单独应用(P0.05或P0.01),且两组间效果差异无统计学意义(P0.05);3)癫痫模型点燃后,大鼠海马组织Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA含量升高,丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均可以进一步使Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA表达增加(P0.05或P0.01),且各治疗组间提高m RNA表达效果差异无统计学意义(P0.05)。结论石甘散及其配方组成甘松、石菖蒲均具有抗戊四氮致痫大鼠氧化应激损伤、清除自由基的作用,其作用效果可能与激活Nrf2/HO-1信号通路中Nrf2因子并促进下游HO-1因子表达相关,甘松、石菖蒲的合成方石甘散作用效果最显著。     

薯蓣皂苷通过GSK3β/Nrf2/HO-1 通路改善尿酸诱导的HK-2 细胞氧化应激损伤的作用及机制研究

目的 探讨薯蓣皂苷（dioscin）对尿酸（uric acid,UA）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 将HK-2细胞分为正常组、模型组（尿酸刺激造模）、条件对照组（尿酸+DMSO）和薯蓣皂苷组（尿酸+薯蓣皂苷）。通过尿酸诱导HK-2细胞氧化应激损伤模型;采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞活性氧（ROS）水平,Real-time PCR法检测糖原合成激酶3(GSK3β)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)在mRNA水平的表达,Western Blot法检测GSK3β、磷酸化糖原合成激酶3(p-GSK3β)、Nrf2及HO-1在蛋白水平的表达。结果 经尿酸刺激后,HK-2细胞的活力明显下降,ROS水平明显升高（均P<0.001）。经薯蓣皂苷治疗后,HK-2细胞的活力增加,ROS水平明显降低（均P<0.001）。在蛋白及mRNA水平上,尿酸刺激后Nrf2和HO-1的表达均下降,薯蓣皂苷干预后Nrf2和HO-1表达均明显增加（均P<0.001）。在蛋白水平上,模型组细胞p-GSK3β/GSK...     

朝医麻黄定喘汤对支气管哮喘模型小鼠p38MAPK/Nrf2/HO-1信号通路的影响

探讨朝医麻黄定喘汤治疗支气管哮喘的可能作用机制。方法将40只BABL/c小鼠随机分成空白组、模型组、麻黄定喘汤低剂量组、麻黄定喘汤高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组用卵清蛋白致敏、激发制备小鼠哮喘模型。麻黄定喘汤低剂量组每日给予4 ml/100 g麻黄定喘汤(浓度20 mg/ml)灌胃,麻黄定喘汤高剂量组每日给予12 ml/100 g麻黄定喘汤灌胃,空白组和模型组每日给予12 ml 0. 9%氯化钠溶液灌胃,共计8周。在末次激发24 h后取肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。观察肺组织病理学变化;检测BALF中炎症细胞计数,活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)含量,抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性; Western Blot法检测肺组织中磷酸化p38核丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、核因子E2相关因子2 (Nrf2)、血红素加氧酶1 (HO-1)蛋白水平;肺组织中Nrf2、HO-1 mRNA水平。结果与空白组比较,模型组BALF中炎症细胞总数、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞及ROS、MDA含量,肺组织中p-p38 MAPK、Nrf2、HO-1蛋白水平及Nrf2、HO-1 mRNA表达水平明显升高,SOD、CAT活性明显降低(P 0. 05);与模型组比较,中药高、低剂量组小鼠BALF中炎症细胞总数、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞显著降低,BALF中ROS、MDA含量,肺组织中p-p38 MAPK蛋白水平降低,BALF中SOD、CAT的活性及肺组织中Nrf2、HO-1蛋白表达,Nrf2、HO-1 mRNA表达升高(P 0. 05)。与麻黄定喘汤低剂量组比较,麻黄定喘汤高剂量组BALF中炎症细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞数及ROS、MDA含量,肺组织p-p38MAPK水平明显减少,SOD、CAT活性及Nrf2、HO-1蛋白和mRNA表达升高(P 0. 05)。结论朝医麻黄定喘汤可抑制支气管哮喘小鼠气道炎症反应,通过抗氧化机制影响p38 MAPK/Nrf2/HO-1信号通路可能是其机制之一。     

基于TLR4信号通路探讨豨莶草对痛风性关节炎影响

目的:基于TLR4信号通路探讨豨莶草对痛风性关节炎影响。方法:将48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱组和豨莶草高(4 g/kg)、中(2 g/kg)、低(1 g/kg)组,对照组和模型组灌胃给予生理盐水,其他各组给予相应的药物,连续7天,第七天给药1 h后向大鼠膝关节腔注射尿酸钠,建立痛风性关节炎模型,对照组不做处理,采用HE染色观察滑膜组织病理情况,ELISA检测大鼠血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量,RT-PCR测定MyD88,TRAF6,TBK1和NFκBmRNA表达。结果:与对照组比较,模型组炎性细胞浸润,滑膜细胞增生,成纤维细胞,不同浓度豨莶草组对滑膜组织炎性细胞浸润明显减少,滑膜细胞增生和成纤维细胞增生明显减轻;模型组大鼠血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量明显增高,不同浓度豨莶草组血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量明显降低;RT-PCR结果显示模型组滑膜组织MyD88、TRAF6、TBK1和NF-κB mRNA表达明显增加,不同浓度豨莶草组能够明显降低痛风性关节炎大鼠MyD88、TRAF6、TBK1和NF-κB mRNA表达。结论:豨莶草能够明显改善痛风性关节炎症状,抑制TLR4信号通路异常激活。     

黄芪甲苷调控Nrf2/Bach1/HO-1信号通路抑制缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤

研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制。将H9c2心肌细胞缺氧培养12 h再复氧培养8 h复制心肌细胞缺氧复氧损伤(H/R)模型,AS-Ⅳ干预后检测活性氧(ROS)的产生,细胞活力,细胞上清SOD,MDA,IL-6,TNF-α等指标水平,以评估AS-Ⅳ的干预效应;进一步通过蛋白印记试验观察AS-Ⅳ对Nrf2,Bach1,HO-1蛋白表达的影响;最后通过siRNA方法敲低HO-1基因表达观察其对AS-Ⅳ干预效应的逆转作用。结果显示,与H/R模型组比较,H/R+AS-Ⅳ组细胞活力显著提高(P0.01),细胞内ROS显著减少(P0.01),细胞上清MDA,hs-CRP,TNF-α含量显著减少(P0.01),SOD含量显著增加(P0.01);细胞HO-1蛋白表达显著增加(P0.01),细胞核蛋白Nrf2表达显著增多(P0.01),细胞核蛋白Bach1表达显著减少(P0.01);预先采用脂质体转染HO-1 siRNA至H9c2细胞,敲低HO-1的表达后,可部分逆转AS-Ⅳ的上述效应。该研究结果提示,AS-Ⅳ对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用,其机制与调控Nrf2/Bach1/HO-1信号通路有关。     

绞股蓝黄酮对过氧化氢损伤A549细胞的作用

该文主要研究绞股蓝黄酮对H_2O_2氧化损伤的人肺腺癌A549细胞的修复作用并探讨其可能的作用机制。分别使用浓度为200~700μmol·L~(-1)的H_2O_2诱导A549细胞不同时间,从而建立氧化损伤模型,再用50 mg·L~(-1)绞股蓝黄酮保护10 h。利用MTT法检测6个绞股蓝黄酮化合物对H_2O_2损伤A549细胞活力修复的影响;DCFH-DA荧光探针检测细胞中ROS的含量;分别采用TBA法、NBT法和TNB法检测细胞内MDA,SOD和GSH的含量,Western blot法检测细胞内Nrf2,NOQ1,HO-1蛋白的表达。结果表明,500μmol·L~(-1)H_2O_2作用10 h,细胞存活率降低至60.4%,在50 mg·L~(-1)芦丁(1),4'-O-甲基-山柰酚-3-O-芸香糖(2),异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖(5),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖(6)作用10 h后,细胞存活率显著提高。与正常组比较,H_2O_2损伤使SOD,GSH含量以及HO-1蛋白表达量降低,使ROS,MDA含量增加,引起细胞氧化损伤。与模型组比较,绞股蓝黄酮组可降低细胞内ROS,MDA的含量,提高SOD,GSH的含量,激活Nrf2,NOQ1,HO-1蛋白的表达,从而改善H_2O_2诱导的A549细胞氧化应激损伤。     

松花粉对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨松花粉对过氧化氢(H_2O_2)诱导人肝癌HepG2细胞应激性氧化损伤的保护作用。方法:将HepG2细胞分为正常组,H_2O_2模型组和样品干预组。样品干预组用不同浓度的松花粉预处理HepG2细胞12 h,H_2O_2模型组和样品干预组用400μmol·L~(-1)过氧化氢氧化损伤细胞2 h,产生氧化应激损伤。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞活力;微板法检测细胞内活性氧(ROS),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测抗氧化通路中关键基因核因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达水平,以评价松花粉对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。结果:MTT结果显示,与正常组比较,松花粉(80,40,20,10,5 mg·L~(-1))对HepG2细胞没有毒性;H_2O_2模型组中ROS,LDH及MDA的水平显著升高(P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著降低(P0.01)。与H_2O_2模型组比较,松花粉干预组中ROS,LDH及MDA的水平显著降低(P0.05,P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著升高(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,松花粉显著上调Nrf2,HO-1和GCL的蛋白表达,并下调Keap1的蛋白表达。结论:质量浓度5~20 mg·L~(-1)松花粉可有效保护400μmol·L~(-1)H_2O_2对HepG2细胞应激性氧化损伤。其机制可能与调节SOD,GSH-Px活性,ROS,LDH,MDA水平有关,同时与调控抗氧化通路中关键基因Nrf2,Keap 1,HO-1,GCL蛋白的表达水平有关。     

溃结康对溃疡性结肠炎小鼠结肠抗氧化作用及 Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:探讨溃结康对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜抗氧化应激作用及Nrf2/ARE信号通路的影响。方法:建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶0.45g/kg组、溃结康12.8g/kg、6.4g/kg、3.2g/kg组。造模同时灌胃给药,连续7天,第8天实验结束时,采集结肠组织,生化法检测小鼠肠粘膜中T-SOD、MDA、GSH-PX、CAT的活性;实时荧光定量PCR检测结肠NOX1、NOX2、Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO-1mRNA表达,Western blot法检测结肠NOX1、NOX2、p-Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO-1蛋白表达。结果:模型组小鼠结肠SOD、GSH-PX及CAT抗氧化酶活性显著降低,MDA生成显著增加,Keap1、NOX1、NOX2mRNA及蛋白表达均显著上调,Nrf2mRNA表达显著增加,II相解毒酶NQO-1、HO-1mRNA表达无明显变化。溃结康12.8g/kg、6.4g/kg组可提高SOD、GSH-PX活性,上调Nrf2mRNA、p-Nrf2蛋白、NQO-1基因及蛋白,下调NOX1、NOX2mRNA表达;溃结康12.8g/kg组还可显著提高CAT活性,降低MDA含量,上调HO-1mRNA及蛋白,下调Keap-1mRNA,NOX1、NOX2蛋白表达;溃结康6.4g/kg组NOX2蛋白表达明显降低,Keap-1mRNA及蛋白表达明显降低;溃结康3.2g/kg组NOX1 mRNA表达明显降低,而其它指标无明显变化。结论:溃结康具有一定的抗氧化应激损伤作用,可能为其治疗溃疡性结肠炎的作用机制之一。     

玉香参附汤对心脏骤停大鼠的心肌保护作用及对Nrf2、NQO1、HO-1表达的影响

目的观察玉香参附汤对心脏骤停大鼠心肌损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法制备心脏骤停/心肺复苏模型大鼠,随机分为对照组、模型组、依拉达奉组[5 mg/(kg·d)]、低[5 mg/(kg·d)]、中[10 mg/(kg·d)]、高[20 mg/(kg·d)]剂量玉香参附汤组,模型组及对照组灌胃等量0.9%氯化钠注射液。3 d后,统计各组大鼠存活情况,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织结构;试剂盒检测心肌组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量及过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白印迹(WB)法检测心肌组织核转录因子(Nrf2)、NADH脱氢酶1(NQO1)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌组织出现心肌细胞坏死、炎性细胞浸润等病变,ROS水平、MDA含量显著升高,GSH含量及CAT、SOD活性显著降低,Nrf2蛋白核转移量明显减少,NQO1、HO-1蛋白表达量显著降低;与模型组比较,低、中、高剂量玉香参附汤组大鼠心肌组织病变明显减轻,ROS水平、MDA含量显著降低,GSH含量及CAT、SOD活性显著升高,Nrf2蛋白核转移量明显增多,NQO1、HO-1蛋白表达量显著增高(均P0.05)。结论玉香参附汤可保护心脏骤停/心肺复苏所致大鼠心肌损伤,其机制可能是通过促进Nrf-2、NQO1、HO-1蛋白表达,减轻心肌组织氧化应激实现的。     

六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路抗氧化应激防治阿尔茨海默病的机制研究

目的 观察六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路对H₂O₂诱导海马神经元细胞(HT22)氧化损伤的保护作用,探讨其防治阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的作用机制。方法 (1)以过氧化氢(Hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导HT22细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,DCFH-DA荧光染色法检测细胞内ROS含量,构建基于氧化应激损伤的早期AD细胞模型;(2)制备六味地黄丸含药血清(Medicated Serum of Liuwei Dihuang Pill,MSLDP),分别设置空白组、模型组、MSLDP组,检测细胞内SOD活力、MDA及ROS含量的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞内Nrf2、HO-1及NQO1等因子的mRNA的转录水平及蛋白表达量的变化;(3)采用Nrf2的抑制剂(ML385)抑制细胞内Nrf2的激活,RT-qPCR及Western blot法检测各组细胞内Nrf2、H...     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:研究温肾醒脑方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2、Keap1相关信号通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况。检测脑组织中SOD、MDA、GSH-Px、NOS,HE染色观察脑海马组织的病理变化情况,RT-PCR大鼠脑组织NQO1、HO-1的mRNA水平和Western Blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与ARE结合力。结果:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);大脑组织结构明显受损伤,细胞形态改变,细胞核固缩,核仁不清晰;同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。结论:温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-Keap1-NQO1/HO-1抗氧化应激信号通路相关。     

异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的研究异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法细胞SH-SY5Y建立OGD/R损伤细胞模型。NC Nrf2-siRNA、siRNA-Nrf2质粒转染SH-SY5Y细胞,并培养48 h,20μmol/L异甘草素预处理2 h后构建OGD/R损伤,24 h后继续加入20μmol/L异甘草素再培养24 h。OGD/R损伤48 h后,测定细胞活力,LDH水平,caspase-3、caspase活性,ROS、MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、NQO1、HO-1 mRNA表达;Western blot检测HO-1蛋白表达。结果 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞活力降低,caspase-3、caspase活性升高,ROS、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达降低,Bax mRNA表达增高(P0.01);经异甘草素干预后,OGD/R SY5Y细胞活力升高,caspase-3、caspase活性降低,ROS、MDA水平降低,SOD、GSH水平及Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA和HO-1蛋白表达升高,Bax mRNA表达降低(P0.01)。而敲除Nrf2基因逆转异甘草素对OGD/R细胞的作用。结论异甘草素能减轻OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,可能与激活Nrf2/ARE信号通路,增强SH-SY5Y细胞的抗氧化能力有关。     

参莲提取物通过调控Nrf2/Keap1信号通路减轻TNF-α诱导的ECV304损伤

探讨参莲提取物对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞(ECV304)损伤的干预作用及可能的作用机制。以TNF-α诱导ECV304细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)、半胱天冬酶3(caspase-3)、半胱天冬酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果显示,与对照组相比,50μg·L~(-1)的TNF-α能够导致ECV304细胞活力显著下降(P0.01),引起ECV304细胞ROS产生增加,SOD活性降低,MDA、NO、ET-1、IL-1β含量显著增加(P0.01),Keap1、caspase-9、Bax蛋白表达显著上调,NQO1、Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05);与模型组比较,参莲提取物可以提高ECV304细胞存活率,抑制细胞ROS产生,提高SOD活性,降低MDA、NO、ET-1、IL-1β含量(P0.01或P0.05),下调Keap1、caspase-3、caspase-9、Bax蛋白表达水平,提高Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达(P0.01或P0.05)。提示参莲提取物可能通过调控Nrf2/Keap1信号通路降低TNF-α诱导的ECV304细胞氧化应激损伤,减少炎症反应和细胞凋亡。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠氧化应激反应的影响

目的:以氧化应激损伤为切入点探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为模型组,假手术组,尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),益气活血方高、中、低剂量组(2. 916,1. 458,0. 729 g·kg~(-1)),连续灌胃14 d后,采用结扎双侧颈总动脉法建立急性脑缺血损伤模型,透射电镜观察突触超微结构,生化法检测脑匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)酶的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠缺血区脑皮层血红素氧化酶-1(HO-1),核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白和m RNA表达。结果:透射电镜观察结果显示益气活血方对脑缺血损伤程度有明显改善作用。与假手术组比较,模型组大鼠脑匀浆MDA水平显著上升,T-SOD,GSH-Px水平显著降低(P 0. 01),LDH,Na+-K~+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶及ATP酶的活性均明显降低(P 0. 05,P 0. 01),脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量以及HO-1,Nrf2 m RNA表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,益气活血方中、高剂量组可明显降低脑组织中MDA含量,升高T-SOD,GSH-Px的水平(P 0. 05,P 0. 01);益气活血方高剂量组可显著增加LDH,Na+-K+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和总ATP酶活性(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方中、高剂量组大鼠脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方高剂量组HO-1,Nrf2 m RNA表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气活血方可能通过Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激水平实现对脑缺血损伤的保护作用。     

丹红注射液对糖尿病合并脑缺血大鼠的神经保护作用及Nrf2/HO-1通路的影响

目的观察丹红注射液对糖尿病合并脑缺血大鼠的神经保护作用及转录因子红细胞2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的影响。方法 SD大鼠100只,分成5组:对照组、模型组及丹红注射液低、中、高剂量组。模型组、丹红注射液各剂量组构建糖尿病合并脑缺血大鼠模型,并于造模成功开始给予相应药物灌胃,对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠注射液。实验结束后,对大鼠进行神经缺失神经细胞症状评分、计算神经细胞存活率;检测大鼠脊髓组织中Nrf2、HO-1 mRNA、蛋白水平以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)蛋白表达水平。结果与对照组比较,丹红注射液各剂量组神经缺失症状评分升高,神经细胞存活率降低(P 0.05);与模型组比较,丹红注射液各剂量神经缺失症状评分降低(P 0.05),神经细胞存活率升高(P 0.05)。与对照组比较,模型组、丹红注射液低、中剂量组脊髓组织Nrf2、HO-1 mRNA、蛋白表达水平及MDA、NO蛋白表达水平明显升高,SOD蛋白表达水平明显降低(P 0.05);与模型组比较,丹红注射液各剂量组Nrf2、HO-1 mRNA、蛋白表达水平及MDA、NO蛋白表达水平明显降低,SOD蛋白表达水平明显升高(P 0.05)。结论丹红注射液能显著改善糖尿病合并脑缺血大鼠引起的神经缺失症状,减轻脊髓神经元损伤程度,其机制与抑制Nrf2、HO-1 mRNA、蛋白的表达水平,激活抗氧化途径,降低氧化应激产物水平有关。     

黑米花色苷通过激活Nrf2/HO-1信号通路保护四氯化碳所致急性肝损伤的机制

目的研究黑米花色苷(anthocyanin from black rice, AEBR)对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用及相关机制。方法腹腔注射四氯化碳(CCl_4)建立大鼠急性肝损伤模型。Elisa法检测血清中AST、ALT和LDH活性,测定肝组织中SOD、CAT、GSH、GST、GSH-PX和MDA含量, HE染色观察肝组织病理改变, Western blot检测肝组织细胞核内Nrf2和HO-1蛋白的表达。结果与CCl_4组比较, AEBR保护组(150和300 mg/kg)血清AST、ALT和LDH活性明显降低;肝组织SOD、CAT、GSH、GST明显升高,而MDA明显降低,肝组织病理改变也明显改善。同时黑米花色苷保护组能显著诱导肝组织中的Nrf2转位入核,其下游靶基因HO-1蛋白表达水平也显著升高。结论黑米花色苷对四氯化碳所致急性肝损伤有保护作用,其机制与激活Nrf2/HO-1通路有关。     

基于 Keap1-Nrf2-ARE 通路探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制

目的基于Kelch样相关蛋白1-核因子E2相关因子-抗氧化反应元件信号通路(Keap1-Nrf2-ARE)及下游Maf、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、血红素加氧酶(HO-1)蛋白表达探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制。方法清洁级SD雄性大鼠60只随机分为对照组、模型组、安慰剂组、治疗组,每组15只。采用腺嘌呤[100 mg/(100 g·d)]灌胃10天造模,对照组灌胃等量生理盐水。造模结束后治疗组予以加味天雄散中药灌服,安慰剂组给予等量生理盐水,连续灌胃30天。RT-PCR检测附睾组织Keap1、Nrf2 m RNA表达;Western Blot检测附睾组织Keap1、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达;检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。结果与对照组比较,模型组Keap1 m RNA及蛋白表达、MDA水平升高(P<0.01),Nrf2m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平降低(P<0.01)。与模型组和安慰剂组比较,治疗组Keap1m RNA及蛋白表达、MDA水平降低(P<0.01),Nrf2 m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平升高(P<0.01)。结论加味天雄散能够通过调节弱精子症大鼠精子Keap1-Nrf2-ARE通路及下游Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达,调控氧化应激反应,从而改善精子活力。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨黄芪甲苷对顺铂诱导的急性肾损伤的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对核转录因子NF-E2相关因子2 (Nrf2)/血红素氧合酶-1 (HO-1)通路的调控作用及对顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)的保护作用。方法:将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组5组,每组10只。除对照组外,其余各组用顺铂按7 mg/kg的剂量单次腹腔注射建立AKI模型。黄芪甲苷低、中、高剂量组分别按5、10、20 mg/kg的剂量给予黄芪甲苷注射液,模型组和对照组给予生理盐水。用HE染色观察肾脏组织病理学改变;测定血清中肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量;测定肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量;分别用蛋白质印迹法(Western blot)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肾脏组织病理病变明显,可见肾小管坏死和退行性改变;与模型组比较,黄芪甲苷低、中、高组大鼠肾脏组织病理病变程度减轻,其中黄芪甲苷高剂量组最为明显。与对照组比较,模型组血清中SCr和BUN含量显著升高(P0.05),肾组织中GSH-Px、SOD活性显著降低(P0.05),MDA含量显著升高(P0.05),Nrf2和HO-1相对蛋白表达和mRNA水平显著降低(P0.05);与模型组比较,黄芪甲苷低、中、高剂量组血清中SCr和BUN含量显著降低(P0.05),肾组织中GSH-Px、SOD活性显著升高(P0.05),MDA含量显著降低(P0.05),Nrf2和HO-1相对蛋白表达和mRNA水平显著升高(P0.05);与黄芪甲苷低剂量组比较,黄芪甲苷高剂量组血清中SCr和BUN含量显著降低(P0.05),Nrf2和HO-1相对蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论:黄芪甲苷可通过调控Nrf2/HO-1通路对顺铂诱导的AKI大鼠肾脏组织起显著的保护作用。     

慈姑多糖调节Nrf2/HO-1改善多种重金属所致肝损伤的体内外实验研究北大核心CSCD

从体内外2个方面探究慈姑多糖是否通过激活核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)信号通路对多种重金属联合诱导的肝损伤发挥保护作用。首先基于北京市售大米6种重金属膳食摄入比例,构建多种重金属混合染毒液所致小鼠及HepG2细胞肝损伤体内外模型。40只雄性昆明小鼠分为5组:对照组、模型组、谷胱甘肽阳性对照组以及慈姑多糖(Sagittaria sagittifolia polysaccharides)低、高剂量组,每组8只。灌胃干预30 d后,HE染色观察小鼠肝脏损伤情况;体外实验应用MTT法检测不同质量浓度慈姑多糖(0.25、0.5、1、2 mg·mL^(-1))在不同时间点下,对HepG2细胞存活率的影响;利用微板法检测48 h细胞培养液中谷丙转氨酶(alaninetransaminase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)的含量;流式细胞术检测细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量变化;RT-PCR法检测细胞中Nrf2、HO-1 mRNA表达;Western blot法检测细胞中Nrf2、HO-1蛋白表达情况。HE染色结果显示,与模型组比较,慈姑多糖给药组肝脏中炎细胞浸润显著减轻,脂肪浸润情况明显改善,其中高剂量组损伤改善更为明显。在体外MTT实验中,与模型组相比,4个浓度慈姑多糖给药组其细胞存活率增加、ALT和AST含量下降、ROS含量减少,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,慈姑多糖组Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。慈姑多糖能显著改善多种重金属所致小鼠肝组织炎症浸润,并纠正肝脏脂肪变性情况,可能与调节Nrf2/HO-1信号通路、降低ROS缓解氧化损伤有关。