睾丸特异性基因BAFL在人和小鼠中的表达及其生物信息学分析

目的 筛选与精子发生相关的基因.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析.RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段4d、9d、11d、14d、18d、21d、38d、6月龄及人和小鼠不同组织心、肝、脾、肺、肾、脑、附睾和睾丸中的表达.结果 芯片结果分析筛选出1个差异表达杂交点,生物信息学分析发现该差异点是BAFL基因,该基因全长527bp,含有273bp的完整ORF,编码90个氨基酸、相对分子量(Mr)为10.266kDa的蛋白质.RT-PCR分析表明小鼠mBAFL基因在小鼠21d龄睾丸及之前没有表达,在35d龄睾丸后开始高表达并特异性地表达于睾丸组织.人hBAFL基因在所检测的8种组织中,也只在睾丸组织中表达.结论 BAFL基因为睾丸特异性基因,小鼠mBAFL的表达与小鼠精子发生的过程一致,可能在精子发生中起重要作用.     

睾丸特异性基因TSF22在小鼠中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因。方法 将4、9、18、35、54日龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段及小鼠不同组织中的表达。结果 芯片结果分析筛选出一个差异表达杂交点（GenBank登录号：NM_199034），生物信息学分析发现该基因全长1597bp，含有570bp的完整ORF，编码190个氨基酸、分子量为22．106kDa的蛋白质，我们将其命名为TSF22。RT-PCR分析表明TSF22基因特异性表达于睾丸组织及18日龄小鼠睾丸中。结论 TSF22基因的表达与小鼠精子发生的过程一致，可能在精子发生中起重要作用。     

小鼠睾丸特异性新基因TSAF76的克隆及其在睾丸组织中的表达

目的筛选与精子发生和（或）睾丸发育相关的基因。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA与小鼠睾丸DNA芯片进行杂交，通过杂交信号比较，筛选出差异表达基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR方法分析该基因在小鼠不同组织及不同发育阶段睾丸组织中的表达。结果通过4日龄和18日龄小鼠睾丸芯片信号比较筛选出一个差异表达的基因，命名为TSAF76基因（GenBank登录号：AF503943），测序提示该基因全长1052bp，包含1个474bp的开放阅读框，编码157个氨基酸。对TSAF76蛋白质序列分析表明该蛋白质理论相对分子量为18．77kDa，等电点PI为9．782。TSAF76蛋白与表达于人类睾丸和成熟精子中的AAT1蛋白类似。RT-PCR分析表明TSAF76基因在处于精子发生中的睾丸组织特异性表达。结论TSAF76基因可能在小鼠精子发生过程中起作用。     

睾丸特异性新基因TSC23在小鼠和人睾丸组织中的表达分析

目的筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因，并探讨其在精子发生过程中所起的作用。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，通过杂交信号的比较，筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织及人不同组织中的表达。结果通过4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达基因（GenBank登录号：AK016041），全长有803bp，含有606bp的完整ORF，编码一个有201氨基酸、分子量为22．686kDa的蛋白质，我们将其命名为TSC23。亚细胞定位预测显示TSC23基因可能在细胞核中表达。SMART功能域分析表明氨基酸序列1-18区域为信号肽功能域，36-58区域为穿膜功能域。TSC23蛋白在人的同源基因GenBank登录号为XM-371248，在201个氨基酸区域内有75％的同源性。RT-PCR分析表明TSC23基因特异性表达于人和小鼠睾丸组织中，且只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达。结论TSC23为人和小鼠睾丸特异性表达基因，只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达，提示其可能在精子发生中起着重要作用。     

1700001O22RIK基因在小鼠睾丸的特异表达及生物信息学分析

目的:研究1700001O22RIK(RIKEN c DNA 1700001O22)基因在小鼠睾丸的表达特征,结合生物信息学分析初步探讨其功能。方法:通过分析小鼠基因表达谱芯片,发现1700001O22RIK基因特异性表达于睾丸组织。采用RT-PCR、实时PCR、Western印迹及免疫组化等方法分析该基因在成年C57BL/6J小鼠各组织中的表达特征,以及不同发育阶段小鼠的睾丸组织中的表达变化。利用生物信息学软件对该基因进行相关生物信息学分析。结果:1700001O22RIK基因在小鼠睾丸组织中呈现特异性表达,表达水平具有年龄依赖性,在成年期表达最强;1700001O22RIK蛋白在成年小鼠睾丸组织中主要定位于精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞。经生物信息学分析,1700001O22RIK基因编码蛋白氨基酸序列在人和小鼠具有高度同源性,提示该基因在哺乳动物进化过程中十分保守。结论:1700001O22RIK属于睾丸特异性基因,主要表达于生精小管的精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞,提示其可能参与精子发生的调节。     

Tesmin基因在小鼠睾丸中的表达分析

目的 研究Tesmin基因的表达特点值.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织提取RNA,通过RT-PCR分析差异表达基因Tesmin在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 基因芯片结果显示4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸中分别是31.4(A)、34(A),1292(P)、865.6(P)、977.2(P) 和830.7(P),代表Tesmin基因在4d,9d小鼠中无表达,18d龄后开始高表达,RT-PCR结果表明小鼠Tesmin基因在小鼠9d龄及之前的睾丸中没有表达,在18d龄后睾丸中开始高表达,与基因芯片分析结果相一致.结论 Tesmin基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠Tesmin基因的表达与小鼠精子发生有很强的一致性,推测该基因可能在精子发生中起重要作用.     

Pgk2在小鼠中的年龄依赖性表达特征分析

目的 利用基因芯片技术筛选与精子发生相关的基因,并研究其表达特点.方法 将4d、9d、18d、35d、54d龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.然后通过RT.PCR分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过在NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是Pgk2基因.该基因在4d、9d、18d、35d、54d龄和6月龄小鼠睾丸中信号强度分别是1.7(A)、161.5(e)、634(P)、1881.3(P)、3123.7(P)和3440.4(P)表明Pgk2基因在4d龄小鼠睾丸中无表达,9d低表达,从18年龄后开始高表达;RT-PCR结果表明:小鼠Pgk2基因在小鼠9d龄及之前的睾丸中无表达或低表达,在18d龄睾丸后开始高表达,与芯片数据的结果相一致.结论 Pgk2基因为小鼠年龄依赖性表达基因,推测其在精子发生过程中有重要作用.     

1700008O03Rik基因在小鼠睾丸中的表达特征及生物信息学分析

目的:研究1700008O03Rik(RIKEN cDNA 1700008O03)基因在B6小鼠睾丸中从出生到性成熟过程的表达特征,并初步探讨其参与调控小鼠精子发生的作用。方法:小鼠基因表达谱芯片筛选得到睾丸特异性基因1700008O03Rik,本研究采用反转录PCR、实时定量PCR、Western印迹、免疫组化及免疫荧光等实验方法,检测1700008O03Rik基因在小鼠睾丸发育中的表达特征,并用生物信息学方法作相关分析。结果:1700008O03Rik基因在小鼠睾丸中高表达,且呈鼠龄依赖性增加;免疫组化结果表明其主要表达于长形精子胞浆。生物信息学分析结果显示人和小鼠的1700008O03Rik蛋白序列高度同源,进化树分析结果表明从低等哺乳动物到高等哺乳动物1700008O03Rik蛋白均高度保守。结论:1700008O03Rik为小鼠睾丸高表达基因,且主要表达于长形精子胞浆,其可能参与调控小鼠精子的成熟过程。     

Lyzl6基因在小鼠中的表达及其生物信息学分析

目的分析Lyzl6基因在小鼠中的表达特点.方法本研究通过RT-PCR实验明确Lyzl6基因在9、15、18、21、28、35d和6月龄小鼠睾丸中的表达变化及Lyzl6基因在成年小鼠各组织表达特点.采用多种生物信息学方法对该基因进行生物信息学分析.结果 RT-PCR结果显示,Lyzl6基因在小鼠21d龄及之前的睾丸中没有表达,28d睾丸中开始持续高表达.Lyzl6基因在14种小鼠组织中呈现睾丸显著高表达.经生物信息学分析,Lyzl6蛋白属于典型的C型溶菌酶,是一种分泌蛋白,其蛋白的信号肽剪切位点在第19~20个氨基酸之间.小鼠和人Lyzl6蛋白氨基酸序列有高度相似性和同源性,显示该基因在哺乳动物中高度保守.结论Lyzl6基因为小鼠睾丸年龄依赖性表达基因,在小鼠睾丸中高表达,显示其可能在生精过程发挥重要作用.     

CatSper基因家族在人和小鼠组织中的表达特征

目的研究CatSper基因家族在人和小鼠组织中的分布特点。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA与Affymetrix全基因组芯片探针进行杂交,筛选出差异表达基因CatSper基因家族。RT—PCR验证差异表达基因在不同发育阶段的小鼠睾丸组织的表达特征,及其在人和小鼠不同组织中的分布。结果基因芯片分析发现CatSper1、CatSper2和CatSper3在小鼠睾丸的表达呈阶段特异性。RT-PCR结果表明该基因家族在睾丸的表达丰度明显高于其它组织;CatSper1和CatSper4在人体睾丸组织中特异性表达。结论CatSper基因家族在人和小鼠中呈现睾丸特异性表达或高表达,可能在精子发生中发挥重要功能。     

Hormonal contraception for human males： prospects

Development of an ideal hormonal contraceptive for man has been the goal of several research workers during the past few decades. Suppression of pituitary gonadotropic hormones, which in turn would inhibit spermatogenesis while maintaining normal libido and potentia has been the approach for a contraceptive agent. Intramuscularly administered and orally active testosterone or testosterone in combination with progesterone have been shown to cause inhibition of spermatogenesis resulting in azoospermia in normal men. Similarly testosterone has been used in combination with gonadotropin releasing hormone antagonists and agonists to inhibit pituitary gonadotropic hormone release. Immunological approach to neutralize the circulating levels of follicle stimulating hormone has also been shown to cause inhibition of spermatogenesis. The available literature shows that testosterone causes reversible azoospermia without any significant side effects in Asian population effectively and appears to be a promising chemical for control of fertility in man.( Asian J Androl 2000 ; 2 : 46 - 50 )     

Medical treatment of idiopathic oligozoospermia and male factor subfertility

Pharmaceutical treatment for the so-called idiopathic oligozoospermia ( I. O. ) is possible and effective in a fair proportion of patients with the syndrome provided that appropriate investigative procedures may identify the major disorder or its level of disruption, this abnormality is reversible and appropriate prognostic indices for the treatment‘s success are devised and validated. According to the evidence available, minimal evaluation and prognostic indices for treatment eligibility in normogonadotropic men with I.O. include a routine work-up but, mainly, microscopical assessment of spermatogenesis and appraisal of Sertoli cell‘s functional capacity. Published data indicate that men with hypospermatogenesis without maturational arrest, respond favorably to agents stimulating Sertoli cells and germinal epithelium with increased sperm production. Furthermore, Sertoli cell activity as judged by cell-specific indices such as inhibin B secretion, may provide additional discriminating power to the microscopical picture of the testis. In this context, precise identification of the causative factor(s), together with the establishment of prognostic indices are the most important criteria on which the decision, for or against medical treatment in I. 0., should be based. Obviously, further basic research and clinical trials are urgently needed in this particular field, and this should be a major task for clinical andrologists. (Asian J Androl 2000; 2: 25-32)     

Expression of hyperacetylated histone H4 during normal and impaired human spermatogenesis

Histone-to-protamine exchange in haploid spermatids is preceded by hyperacetylation of core histones resulting in decreased DNA-histone interaction. During normal spermatogenesis, immunohistochemistry with a polyclonal antihyperacetylated histone H4 antibody displayed a strong signal in nuclei of elongating spermatids and, in addition, spermatogonia. Quantitative analysis revealed 98.2 +/- 1.1% of immunopositive spermatids. The percentage of positive spermatids was significantly reduced in infertile men exhibiting at least qualitatively normal spermatogenesis (scores 10-8, 93.1 +/- 6.6%) and impaired spermatogenesis (scores 7-1, 74.9 +/- 23.4%). In seminiferous tubules showing spermatogenic arrest at the level of round spermatids, only 59.5 +/- 16.5% of spermatids were immunopositive for hyperacetylated histone H4. These data demonstrate that the decrease of histone acetylation in spermatids associated with impaired spermatogenesis corresponds with the well known reduction of protamine expression in these cells and confirms the essential role of histone hyperacetylation for correct histone-to-protamine exchange. In seminiferous tubules exhibiting round spermatid maturation arrest, there was an additional signal in nuclei of spermatocytes, suggesting that premature hyperacetylation of histone H4 may result in precocious histone-to-protamine exchange followed by infertility. This is in accordance with data from transgenic mice, where it has been demonstrated that premature expression of protamine-1 results in precocious chromatin condensation followed by sterility.     

基因敲除技术在精子发生相关基因功能研究中的应用

从基因水平研究男性不育症发病机理将有助于发现男性不育治疗的新途径。基因敲除技术是目前研究基因功能的主流方法。筛选鉴定精子发生过程中相关基因,探索其特性和功能,对了解睾丸功能、探索男科疾病新的治疗靶点具有重要意义。本文概述基因敲除技术在精子发生相关基因功能研究中的应用。     

erbB4/HER4在结肠癌的表达

目的 检测第四人体表皮生长因子受体(HER4)在结肠癌(Colon cancer)组织中的表达,探讨HER4过度表达与结肠癌临床病理的关系.方法 采用免疫组织化学的方法检测69例结肠癌组织中HER4的表达.结果 结肠癌组织中HER4的过度表达率为78.26%.结肠癌中HER4的过度表达仅与淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05).结论 erbB4基因是结肠癌生长的一个调控基因,干预HER4蛋白的过度表达可能是治疗结肠癌的有效方法.