脑缺血再灌注后突触后膜NMDA受体重塑性机制的研究

目的探讨脑缺血再灌注后神经元突触后膜NMDA受体发生迁移重塑的机制。方法实验使用脑缺血再灌注Wistar大鼠模型,分为无缺血再灌注对照组(Ctrl),缺血再灌注0.5h组(I/R-0.5h),缺血再灌注4h组(I/R-4h),缺血再灌注24h组(I/R-24h)。再灌注时间达到后将脑组织取出,并制成脑组织匀浆液(HOM),利用差速离心法分离突触后膜组分(SYN)和突触外膜组分(EXTRA),通过Western Blot分析Src蛋白激酶的表达分布及NMDA受体NR2A和NR2B的表达分布。结果 Western Blot分析发现,脑缺血再灌注0.5h后,突触后膜组分Src蛋白激酶出现超激活状态(P0.01),NR2A和NR2B在突触外膜组分中的表达显著降低(P0.01),而NR2A和NR2B在突触后膜组分中的表达升高(P0.05);在再灌注4h后,Src蛋白激酶激活程度更加明显(P0.01),NR2A和NR2B在突触外膜组分中的表达仍显著下降(P0.05),但NR2A和NR2B在突触后膜组分中却出现不同程度的下降。结论脑缺血再灌注后神经元突触后膜出现Src蛋白激酶超激活状态,并介导NMDA受体NR2A和NR2B的表达分布出现重塑性,NMDA受体从突触周膜向突触后膜转移聚集。     

高功率微波辐射后大鼠海马组织中N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的变化及其意义

目的观察高功率微波（HPM）辐射后大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体表达的变化及其意义。方法采用10mW／cm^2和100mW／cm^2 HPM辐射110只Wistar雄性大鼠，于辐射后6h、1d、7d、14d和28d活杀取海马组织，采用免疫组化、原位杂交和图像分析等技术分析海马组织中NMDA受体——NR1、NR2A和NR2B的蛋白及mRNA含量的变化。结果10mW／cm^2及100mW／cm^2 HPM辐射后，可见大鼠海马神经元固缩等病理变化，100mW／cm^2组的病变较10mW／cm^2组严重，且恢复迟。2个辐射组的NR1、NR2A及NR2B的表达均增强；10mW／cm^2组辐射后6h，NMDA受体表达始见增加，1d达高峰，28d基本恢复；100mW／cm^2组照后6h，NMDA受体表达始见增加，7d达高峰，28d基本恢复，且与10mW／cm^2组相比，100mW／cm^2组增高明显，恢复较迟。NR1mRNA变化规律与其蛋白表达类似。结论10mW／cm^2及100mW／cm^2 HPM辐射可造成大鼠海马神经元损伤，使NMDA受体表达上调，参与HPM致海马组织损伤的病理生理过程。     

海洛因成瘾对大鼠海马CA3区NR1、NR2A亚基表达的影响

目的 观察海洛因依赖大鼠海马CA3区NMDA受体NR1、NR2A亚基的表达。方法 将40只SD大鼠随机分成海洛因依赖组、海洛因+MK801组、海洛因戒断组及对照组,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测海马NMDA受体NR1、NR2A亚基mRNA的表达。结果 与对照组比较,海洛因依赖组、海洛因戒断组和海洛因+MK801组的NR1表达明显升高(P<0.05),且海洛因依赖组NR1的表达明显高于海洛因戒断组和海洛因+MK801组,海洛因戒断组与海洛因+MK801组的NR1表达差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,海洛因+MK801组NR2A的表达降低(P<0.05),海洛因戒断组NR2A表达升高(P<0.05),依赖组NR2A的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 海洛因依赖可使大鼠海马CA3区NR1的表达明显上调。海洛因戒断的大鼠海马CA3区NR2A表达上调,使用MK801干预的大鼠海马CA3区NR2A表达下调。     

创伤感染致多器官功能障碍综合征大鼠肝组织中肝X受体的表达

目的 研究创伤感染致MODS过程中孤核受体家族成员肝X受体的表达变化及对MODS演变过程中发生脂质代谢障碍的意义.方法 建立创伤感染致MODS动物模型:Wistar大鼠100只,随机分为单纯创伤组(T组)和创伤感染序贯致MODS组(M组),每组50只.钳夹大鼠肢体,造成多发性闭合型骨折和广泛性软组织挫伤,M组12 h后造成背部30% TBSA Ⅲ度烫伤,并在创面涂布绿脓杆菌.分别于创伤前、创伤后24、48、96、120 h,每时相点10只动物,检测血浆内毒素(LPS)、谷丙转氨酶(ALT)、游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白(VLDL),对所有计数数据作χ2检验,计量资料采用单因数方法分析.同时采用荧光实时定量RT-PCR检测肝X受体基因的表达变化.结果 大鼠伤后血清ALT、LPS呈逐步上升趋势;FFA水平在伤后96 h达到峰值(P＜0.05);TG呈现先增高后降低的趋势,在伤后96 h降至谷底;HDL呈逐步下降趋势;VIDL先降后升;对照组大鼠肝组织LXRα的基因表达在伤后24 h先是出现小幅增强,此后表达明显下调,MODS组下降趋势更明显,并显著低于对照组.结论 ALT伤后逐步增高,与血浆LPS趋势同步,呈显著正相关,表明感染直接加重了肝功能损害程度;LXRα基因在早期表达增高,后期下降,LPS同LXRα表达呈负相关,可能是引起LXRα变化的影响因素;肝脏LXRα基因在MODS期转录活性显著下降,结合血清FFA、TG、HDL、VLDL变化分析,可能导致胆固醇向肝内的转运和肝内脂肪酸的合成障碍.     

重度胸外伤78例临床分析

目的:探讨重度胸部创伤的早期诊断与治疗.方法:回顾性分析78例重度胸外伤患者的临床资料.结果:本组ISS评分17分～25分49例,≥25分29例,治愈64例,死亡14例.闭合伤死亡10例,开放伤死亡4例.其中因急性呼吸窘迫综合征(ARDS)死亡5例,失血性休克3例,弥散性血管内凝血(DIC)和心脏大血管破例各2例,颅内出血并脑疝和多器官功能衰竭综合征(MODS)各1例.结论:严重胸部创伤多发伤和并发症多见,表现复杂,死亡率高,早期全面正确的诊断与及时有效的处理是减少死亡的关键.     

针刺预处理对脑缺血-再灌注大鼠顶皮质NR2A和NR2B蛋白表达的影响

目的：探讨肾俞、百会穴针刺预处理对脑缺血-再灌注损伤大鼠顶皮质Ⅰ区Ⅴ层神经元N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2A和NR2B蛋白表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠140只，随机分成空白对照组、假手术对照组、针刺预处理对照组、脑缺血-再灌注模型组和针刺预处理脑缺血-再灌注组。以双侧肾俞、百会穴电刺激为针刺预处理方式，以颈动脉引流法制备全脑缺血-再灌注模型。术后6、24和72h取脑组织，恒冷箱连续冠状切片，用免疫细胞化学卵白素——生物素免疫染色法(ABC法)反应和图像分析系统检测顶皮质Ⅰ区Ⅴ层NR2A和NR2B蛋白免疫阳性面积。结果：肾俞、百会穴针刺预处理对脑缺血-再灌注大鼠顶皮质神经元NR2A和NR2B蛋白表达调控作用明显，抑制再灌注早期缺血神经元NR2A和NR2B蛋白的过度表达，再灌注中、后期则维持在一定水平。结论：肾俞、百会穴针刺预处理对脑缺血-再灌注大鼠顶皮质神经元NR2A和NR2B蛋白表达的调控可能是其发挥抗脑缺血-再灌注损伤作用的重要基础。     

一种创伤感染致多器官功能障碍综合征动物模型的建立

目的 复制符合临床特征且简便易行的创伤感染双相打击致多器官功能障碍综合征(MODS)动物模型,为进一步探讨其发病机制和治疗方法奠定基础.方法 6月龄Wistar雄性大鼠,体重(203.5±11.4)g.随机分为单纯创伤组(T组)和创伤感染序贯致MODS组(M组).钳夹大鼠肢体造成多发性闭合型骨折和广泛性软组织挫伤,M组12 h后致背部30%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤,并创面涂布绿脓杆菌.分别于创伤前以及创伤后24、48、96和120 h观察动物活动和创面情况,测定体重、体温、心率,并检测各时间点大鼠血浆及肝脏内毒素水平以及心、肝、肾、脑、小肠的功能变化,全身炎症反应发生率、MODS发生率及死亡率,同时对重要脏器进行组织病理学观察.结果 M组大鼠创伤48 h后,丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(Tbil)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CPK)的最高值均显著高于伤前自身对照值(P均＜0.05),且与T组比较差异有统计学意义(P均＜0.05);48 h后病理变化明显,大鼠处于若干脏器功能衰竭早期伴若干脏器功能受损期;内毒素水平在伤后96 h增至峰值,达到基础值的8.36倍;伤后96 h内毒素水平与脏器功能的变化具有明显的相关性(r=0.927 2),MODS发生率为86%,死亡率30%;伤后120 h,MODS发生率为100%,死亡率50%.结论 本模型较好地模拟了临床创伤继发感染后发展为MODS的过程,感染过程符合临床经过,内毒素释放稳定,机体反应充分,是用于创伤导致MODS发病机制和治疗方法研究较好的动物模型.     

严重多发伤的院内分期救治

目的：探讨严重多发伤的院内分期救治策略。方法：回顾性分析我科2008-01-2012-12收治的204例严重多发伤患者的临床资料。本研究将病例分为3组：组1,以胸伤腹伤为主的病例107例（52.5%）;组2,以四肢骨盆脊柱骨折为主的病例79例（38.7%）;组3,以胸伤腹伤四肢骨盆脊柱骨折均严重的18例（8.8%）。采用分期救治的策略,即按照严重多发伤在不同治疗阶段（手术复苏期、脏器功能支持期、创伤修复期和功能康复期）的特点,对伤者进行救治的方法。主要分析了手术复苏期各种急诊手术的复苏方式,心肺肝肾等各个主要脏器的功能支持手段以及创伤修复的方式。结果：全组204例,存活190例,存活率93.1%;死亡14例,死亡率6.9%。其中以胸伤腹伤为主的107例病例中,存活100例（93.5%）,死亡7例（6.5%）;以四肢骨盆脊柱骨折为主的79例病例中,存活77例（97.5%）,死亡2例（2.5%）;以胸伤腹伤四肢骨盆脊柱骨折均严重的18例病例中,存活13例（72.2%）,死亡5例（27.8%）。全组病例在手术复苏期死亡8例,占死亡总数的57.1%,死亡原因：创伤失血性休克3例,急性肺挫裂伤呼吸功能衰竭2例,弥散性血管内凝血（DIC）2例,急性脂肪栓塞并肺栓塞1例;在脏器功能支持期死亡4例,占死亡总数的28.6%,死亡原因：急性呼吸窘迫综合征（ARDS）2例,严重脓毒血症并发多器官功能障碍综合征（MODS）2例;在创伤修复期死亡2例,占死亡总数的14.3%,死亡原因：迟发型肠坏死和创伤后脓胸全身感染各1例。结论：从接诊严重多发伤的第一刻起,特别是胸伤腹伤或合并骨盆脊柱损伤,即应主动、有计划地实施分期救治。掌握手术复苏期合理的手术复苏方式、加强重要脏器的功能支持以及选择最佳的创伤修复方式,是提高救治成功率、实施多发伤分期救治一体化模式的重要途径。     

NMDA受体NR2B基因对海马成年新生神经元生存的影响

目的:研究NMDA受体NR2B基因对海马成年新生神经元生存的影响。方法:通过Cre-loxp重组酶系统构建NMDA受体NR2B亚型基因单细胞敲除模型。观察NR2B基因敲除神经元的存活情况及其形态发生。结果:在逆转录病毒注射后7、17、28、56 d,NR2Bfl/fl小鼠中,成年海马新生神经元生存比例在各观察时间点一致,与同组野生型神经元无显著性差异。NR2B基因敲除神经元神经元大体形态分化发育与野生型神经元类似,但在17、28 d时顶端树突上的棘突发生显著减少(P<0.01)。结论:NMDA受体NR2B亚型基因敲除对海马成年新生神经元生存无显著性影响,但可影响突触发生。     

烧伤后小鼠海马糖皮质激素受体的变化

目的观察严重烧伤应激后糖皮质激素受体(GR)的变化特点以及兴奋性氨基酸谷氨酸的3类受体(代谢型受体、离子型NMDA受体、离子型非NMDA受体)对其表达的调节,以期寻找创伤后GR的可靠调节手段。方法以小鼠背部造成30%总体表面积Ⅲ度烧伤,利用RT-PCR技术,检测烧伤后小鼠海马GR转录水平的变化特点;通过Western-blot方法检测GR蛋白水平的变化特点;选取烧伤后GR表达最明显的时相点,分别检测烧伤前腹腔注射谷氨酸的3种受体拮抗剂[NMDA受体拮抗剂(MK-801)、非NMDA受体拮抗剂(CNQX)、代谢型受体拮抗剂(MCPG)]对伤后GRmRNA水平的影响。结果烧伤各组海马GRmRNA水平明显降低;各组海马GR蛋白水平的表达亦明显降低;烧伤前30min腹腔注射MK-801可显著抑制伤后(2h)GRmRNA水平的下降,而腹腔注射CNQX,MCPG却无此作用。结论严重烧伤可导致海马GR减少,谷氨酸的离子型受体NMDA受体参与了这种变化,提示调控NMDA受体活性可调节创伤后GR的改变。     

烧伤后小鼠海马糖皮质激素受体的变化

目的：观察严重烧伤应激后糖皮质激素受体(GR)的变化特点以及兴奋性氨基酸谷氨酸的3类受体(代谢型受体、离子型NMDA受体、离子型非NMDA受体)对其表达的调节，以期寻找创伤后GR的可靠调节手段。方法：以小鼠背部造成30％总体表面积Ⅲ度烧伤，利用RT-PCR技术。检测烧伤后小鼠海马GR转录水平的变化特点；通过Western-b10t方法检测GR蛋白水平的变化特点；选取烧伤后GR表达最明显的时相点。分别检测烧伤前腹腔注射谷氨酸的3种受体拮抗剂[NMDA受体拮抗剂(MK-801)、非NMDA受体拮抗剂(CNQX)、代谢型受体拮抗剂(MCPG)]对伤后GR mRNA水平的影响。结果：烧伤各组海马GR mRNA水平明显降低；各组海马GR蛋白水平的表达亦明显降低；烧伤前30min腹腔注射MK-801可显著抑制伤后(2h)GR mRNA水平的下降，而腹腔注射CNQX，MCPG却无此作用。结论：严重烧伤可导致海马GR减少，谷氨酸的离子型受体NMDA受体参与了这种变化，提示调控NMDA受体活性可调节创伤后GR的改变。     

重度颅脑外伤并发MODS的临床救治研究

目的：探讨重度颅脑外伤并发多器官功能障碍综合征（MODS）的发病机制与综合治疗方法。方法：回顾性分析1995-2000年来我院NICU中收治的重度颅脑外伤并发MODS患者43例的临床资料。结果：197例重度颅脑外伤患者救治过程中出现MODS43例（发生率为21.83%),其中死亡28例（病死率65.12%);发生肺功能障碍28例（发生率65.12%)。此外,广泛脑实质的损伤、脑疝的发生,入院时的低格拉斯哥昏迷评分是发生MODS的危险因素;脑干与下丘脑的损害是MODS发生的始动因素。结论：及时有效地缓解颅高压,恢复脑干功能是治疗的首要问题;而肺部并发症的合理治疗是控制MODS的重要环节;综合救治策略仍然是降低病死率的关键手段。     

急性重度颅脑损伤死亡原因分析

目的:分析急性重度颅脑损伤病人【格拉斯哥昏迷记分法(GCS评分≤8分)】的死亡原因,以降低急性重度颅脑损伤病人的死亡率。方法:回顾性分析2005年1月至2007年12月急性重度颅脑损伤死亡病人105例的临床资料。结果:急性重度颅脑损伤的常见原因为车祸伤,造成急性重度颅脑损伤病人死亡的常见因素为严重的脑挫裂伤、急性脑水肿、急性脑肿胀,其次为肺部感染等并发症。结论:控制创伤后的急性脑水肿、急性颅内高压,防治各种并发症,早期诊断、早期治疗是降低急性重度颅脑损伤病人死亡率的关键。     

胃黏膜pH监测对重度急性颅脑外伤患者的临床意义

目的探讨重度急性颅脑外伤患者胃黏膜pH值(pHi)及其衍生指标PgapCO2和pHgap的变化与重度急性颅脑外伤患者脑外并发症(应激性溃疡出血和多器官功能障碍综合征)及近期预后之间的关系。方法队列研究2002-11～2003-12收治的重度急性颅脑外伤患者共41例,入院予以常规治疗。用自动空气张力计法每小时测一次PgCO2,共测24h。入院当时及入院后8、16、24h测动脉血气,应用S/5监护仪自动计算胃pHi及其衍生指标PgapCO2、pHgap。将一次或一次以上胃pHi值<732者归为降低组,≥732者归为正常组。根据1周内是否存活,分为存活组和死亡组。每日观察胃液隐血。连续7d每日进行SOFA评价和MOF评分。结果胃pHi正常组23例,降低组18例。死亡12例。胃pHi降低组与正常组1周内病死率、胃液隐血阳性发生率、MODS发生率、SOFA评分和MOF评分的差别有统计意义(P<001或P<005)。存活组与死亡组的胃液隐血阳性发生率和MODS发生率的差别有统计意义(P<005和P<001)。存活组与死亡组入院时PgapCO2差别有统计意义(P<001)。入院24h两组PgCO2、PgapCO2、pHi和pHgap差别均有统计意义(P<005或P<001)。结论入院24h内胃pHi及其衍生指标PgapCO2、pHgap的异常对重度急性颅脑外伤的脑外并发症及其近期预后有预警作用。     

基质金属蛋白酶-9在大鼠重度脑创伤中的表达及意义

【目的】研究大鼠重度脑创伤后脑组织基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase,MMP-9）mRNA的表达,探讨其在脑创伤中的作用。【方法160只健康成年SD大鼠随机分为假手术组和脑创伤组,每组又按处死时间点即伤后4h、1d、3d、5d和7d分为五个亚组,每亚组6只。取伤区脑组织用干湿重法测含水量、反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）法测MMP-9mRNA和电镜检查。【结果】大鼠重度脑创伤后脑组织含水量和MMP-9mRNA在伤后4h开始升高,1d达高峰,持续至3d,然后下降,7d达最低;除7d外脑组织含水量和MMP-9mRNA均明显高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0．05）。【结论】大鼠重度脑创伤诱导MMP-9mRNA表达,MMP-9可能参与了脑水肿的形成,在脑创伤后继发性脑损伤中起重要作用。     

KA1表达再分布对神经元兴奋毒性的影响

背景：特异的兴奋性神经递质受体过度活化时便发生细胞的兴奋性中毒,有关NMDA受体和AMPA受体活化致细胞兴奋性中毒死亡通路较为明确,但关于红藻氨酸（Kainate,KA）受体的功能到目前为止仍未明了。目的：探究小鼠海马内注射KA之后KA1受体的再分布状况对中枢神经元兴奋性中毒的影响。方法：成年雄性C57BL6小鼠海马内注射KA或PBS,2h后进行Bederson体征评分、全脑切片免疫组化分析和死亡神经元检测。结果与结论：海马内注射KA2h后,Bederson体征评分表明中枢神经功能出现明显损伤;KA1受体表达的变化主要出现在海马CA1和CA3区,在CA1区的表达上调明显,并开始出现神经元死亡,4~6h后可见大量神经元死亡。结果表明KA促使KA1受体亚单位在海马神经元CA区重新分布,增加神经元对兴奋性氨基酸毒性的敏感性,导致神经细胞死亡,中枢神经功能缺失。     

创伤性多器官功能不全综合征患者血浆sTNFR-P55和TNFα比值变化临床意义

目的探讨血浆可溶性肿瘤坏死因子受体P55(sTNFR-P55)与肿瘤坏死因子α(TNFα)浓度比值(sT-NFR-P55/TNFα)变化在创伤患者多器官功能不全综合征(MODS)中的诊断价值.方法测定正常对照组、创伤MODS生存组和MODS死亡组血浆sTNFR-P55和TNFα的浓度,观察血浆sTNFR-P55/TNFα比值变化及主要器官功能受损指标和预后的关系.结果创伤MODS各组患者sTNFR-P55/TNFα比值明显低于正常对照组(P＜0.01),且MODS死亡组低于MODS生存组(P＜0.01).创伤MODS患者sTNFR-P55/TNFα与主要器官功能受损指标呈明显负相关.结论创伤MODS患者血sTNFR-P55浓度升高幅度不如TNFα.sTNFR-P55/TNFα比值可作为判断MODS患者器官功能不全程度及预后转归的预警指标.     

KA1表达再分布对神经元兴奋毒性的影响

背景:特异的兴奋性神经递质受体过度活化时便发生细胞的兴奋性中毒,有关NMDA受体和AMPA受体活化致细胞兴奋性中毒死亡通路较为明确,但关于红藻氨酸(Kainate,KA)受体的功能到目前为止仍未明了。目的:探究小鼠海马内注射KA之后KA1受体的再分布状况对中枢神经元兴奋性中毒的影响。方法:成年雄性C57BL6小鼠海马内注射KA或PBS,2h后进行Bederson体征评分、全脑切片免疫组化分析和死亡神经元检测。结果与结论:海马内注射KA2h后,Bederson体征评分表明中枢神经功能出现明显损伤;KA1受体表达的变化主要出现在海马CA1和CA3区,在CA1区的表达上调明显,并开始出现神经元死亡,4~6h后可见大量神经元死亡。结果表明KA促使KA1受体亚单位在海马神经元CA区重新分布,增加神经元对兴奋性氨基酸毒性的敏感性,导致神经细胞死亡,中枢神经功能缺失。     

亚低温对大鼠脑创伤后海马组织ATP酶及神经细胞凋亡的影响

目的观察亚低温对脑创伤后海马组织ATP酶活性及神经元凋亡的影响,为其临床作用机制提供理论依据.方法 42只Spregue-Dawley大鼠随机分为假手术对照组、脑创伤组和亚低温治疗组,复制动物脑创伤模型,亚低温治疗组伤后快速予31℃±1℃亚低温,维持约24 h.各组均在受伤后2 d行神经功能行为评分及伤侧取材检测海马ATP酶活性、原位缺味端标记(TUNEL)法检测CA1区神经元凋亡情况.结果亚低温明显提高脑创伤后的神经功能行为评分(P﹤0.05),增加脑创伤后下降的Ca2 -ATP酶活性(P﹤0.01),减少海马CA1区凋亡的神经元数量(P﹤0.01).结论亚低温对创伤脑组织的保护作用与其增加Ca2 -ATP酶活性,减轻钙超载,抑制神经元凋亡有关.     

心肺复苏后大鼠延髓心血管中枢NMDA受体的表达变化

目的 研究心肺复苏后大鼠延髓心血管中枢NMDA受体的表达变化。方法 以水封瓶密闭法制作大鼠心搏骤停模型，迅速进行心肺复苏，复苏后20min制备脑组织石蜡切片，行光镜观察，并应用原位杂交、免疫组化技术检测延髓心血管中枢迷走神经背核、孤束核内NMDA受体2A／2B两个亚型的表达变化。结果 实验组大鼠延髓心血管中枢迷走神经背核、孤束核内NMDA受体NMDA-2A、NMDA-2B两个亚型的mRNA表达与对照组相比明显增高，差异有显著性（P〈0．05）。结论 心肺复苏后大鼠延髓心血管中枢NMDA-2A、NMDA-2B两型受体在mRNA及蛋白质水平上发生了显著上调，心肺复苏后大鼠脑水肿形成可能与NMDA受体上调有关。