全反式维甲酸诱导人胃癌细胞凋亡

目的探讨不同分化程度的胃癌细胞凋亡情况和全反式维甲酸对其影响。方法以人胃癌细胞系低分化的ＭＫＮ４５和高分化的ＭＫＮ２８细胞作为研究对象，以不同浓度的全反式维甲酸干预其７２小时后，以原位ＤＮＡ断段切口标记法和ＤＮＡ琼脂糖电泳检测细胞凋亡情况。结果两种细胞系的凋亡率均低于５％，全反式维甲酸干预后凋亡指数上升，且可能与药物浓度有关。结论全反式维甲酸可诱导胃癌细胞凋亡。     

全反式维甲酸对Walker-256肝癌细胞分化及凋亡的诱导作用

目的: 观察ATRA对Walker-256肝癌细胞的分化诱导及促进凋亡作用,探讨其作用机制.方法: 在肝癌细胞Walker-256细胞株中加入不同浓度的ATRA(100、10、5、1 μmol/L),培养2 d,荧光倒置显微镜观察细胞形态学变化;MTT比色法检测Walker-256细胞的增殖抑制;流式细胞术分析不同DNA含量的细胞分布,计算细胞凋亡百分率;RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2 mRNA的表达;Western blot检测Caspase 3、8蛋白的表达.结果: 随着ATRA浓度的递增,Walker-256细胞表现出细胞分化及凋亡的形态学上的改变.ATRA可明显抑制细胞增殖,5和10 μmol/LATRA对细胞增殖抑制最为明显,24、48、72 h的增殖抑制率分别为21.86%、57.39%、68.17%和27.23%、80.09%、92.15%,呈浓度及时间依赖性.5和10 μmol/L ATRA对细胞的凋亡诱导率与对照组相比,差异有统计学意义(t=9.61,11.38,P<0.05,0.01).ATRA作用Walker-256细胞后上调Fas表达,下调bc1-2的表达,10 μmol/L ATRA对Fas及bc1-2的调节与对照组相比,差异有统计学意义(t=12.33,10.78.均P<0.05).与对照组相比,10 μmol/LATRA作用48 h后对Caspase 3及Caspase 8酶原剪切活化明显(t=9.76,10.21,均P<0.05).结论: ATRA对Walker-256肝癌细胞具有分化诱导及促进其凋亡的作用.     

全反式维甲酸诱导胰腺癌细胞凋亡机制研究

目的 维甲酸类药物调节肿瘤细胞生长、分化和凋亡是其防治肿瘤的基础。本研究观察全反式维甲酸(ATRA)诱导体外胰腺癌细胞凋亡的可能机制。方法 胰腺癌细胞Patu8988与ATRA共同孵育。通过DNA断裂分析、TUNEL标记证实凋亡存在，并用流式细胞仪检测凋亡细胞比例。用RT-PCR和Western blot方法检测凋亡诱导过程中p53、bcl-2和bax基因的水平及其表达变化。结果 ATRA处理组细胞凋亡比例明显增加。TUNEL标记和DNA断裂分析发现典型凋亡特征。ATRA处理组bax和phospho-p53(Ser 46)表达上调，但bcl-2表达下调。结论 ATRA能诱导胰腺癌细胞凋亡，其分子机制可能与bcl-2/bax和p53的表达相关。     

全反式维甲酸诱导肝癌细胞SNU-398表达nm23-H1

目的 研究全反式维甲酸(all Hans retinoic acid,ATRA)诱导肝癌细胞SNU-398表达nm23H1及其可能的分子机制.方法 ATRA处理肝癌细胞株SNU-398后不同时间采用定量RT-PCR检测nm23-H1的表达水平.用ATRA受体(retinoic acid receptor,RAR)的选择性激动剂与阻滞剂处理SNU-398细胞,观察nm23-H1表达与细胞侵袭力的变化.克隆nm23-H1启动子系列缺失突变片断,Luciferase报告基因检测ATRA对启动子活性的影响.结果 ATRA能够明显上调nm23-H1的转录水平,并具有时间依赖关系.RARγ激动剂能够明显促进nm23-H1转录水平的上调,并抑制SNU-398的体外侵袭力.启动子片断-1 260 bp的活性在ATRA的诱导下较对照上调3.5倍左右.结论 ATRA能够通过RARγ上调nm23-H1的转录以及体外抑制肝癌细胞株SNU-398的侵袭力.nm23-H1启动子潜在的ATRA调控位点位于-478至-1 260bp之间.     

全反式维甲酸对多种胰腺癌细胞的诱导凋亡作用

目的观察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否诱导人胰腺癌细胞的凋亡。方法分别将人胰腺癌细胞SW1990、PaTu8988、BxPC3和ATRA共同孵育后,用MTT法检测细胞活性,分别用流式细胞仪检测、TUNEL和透射电镜观察细胞的凋亡。结果MTT法显示,ATRA对3株人胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988和BxPC3的生长均有明显的抑制作用(P<0.05)。流式细胞仪的检测、TUNEL和电镜的观察结果均证实ATRA诱导后,3株胰腺癌细胞株凋亡率均高于对照(P<0.01),并随诱导时间延长而增加。结论ATRA在体外能显著抑制多株胰腺癌细胞株的生长,并促进其凋亡。     

全反式维甲酸对多种胰腺癌细胞的诱导凋亡作用

目的 观察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否诱导人胰腺癌细胞的凋亡.方法 分别将人胰腺癌细胞SW1990、PaTu8988、BxPC3和ATRA共同孵育后,用MTT法检测细胞活性,分别用流式细胞仪检测、TUNEL和透射电镜观察细胞的凋亡.结果 MTT法显示,ATRA对3株人胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988和BxPC3的生长均有明显的抑制作用(P ＜ 0.05).流式细胞仪的检测、TUNEL和电镜的观察结果均证实ATRA诱导后,3株胰腺癌细胞株凋亡率均高于对照(P ＜ 0.01),并随诱导时间延长而增加.结论 ATRA在体外能显著抑制多株胰腺癌细胞株的生长,并促进其凋亡.     

全反式维甲酸和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK对胰腺癌细胞凋亡的作用

目的观察全反式维甲酸(ATRA)对体外胰腺癌细胞生长的影响以及caspase抑制剂Z-VAD-FMK对细胞凋亡的作用.方法胰腺癌细胞PaTu8988与ATRA或与ATRA+caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同孵育后,用MTT方法观察细胞活性,观察细胞超微结构改变,DNA断裂分析,流式细胞仪检测凋亡细胞比例和测定caspase-3活性.结果ATRA对细胞的生长有明显的抑制作用.ATRA诱导后电镜和DNA断裂分析发现典型凋亡特征.与ATRA处理组相比,ATRA和Z-VAD-FMK联合作用对细胞凋亡比例无影响.ATRA组caspase-3蛋白的活性随孵育时间延长而升高,且与凋亡比例相关,Z-VAD-FMK处理组caspase-3活性明显下降.结论ATRA能够抑制胰腺癌细胞生长并诱导细胞凋亡.同时,与Z-VAD-FMK联合作用能抑制caspase蛋白活性,但未使细胞凋亡比例相应降低,提示在胰腺癌凋亡过程中可能有其他蛋白酶的作用.     

人乙酰胆碱酯酶基因转染增强全反式维甲酸诱导胰腺癌细胞凋亡

目的探讨转染人乙酰胆碱酯酶(AChE)基因对全反式维甲酸诱导胰腺癌细胞凋亡的影响。方法应用含人AChE基因的真核表达质粒pcDNA3/AChE和绿色荧光蛋白(GFP)真核表达质粒pcDNA3/GFP,以脂质体介导上述两种质粒DNA对人胰腺癌细胞株Patu8988进行瞬时转染,转染后的细胞经全反式维甲酸(ATRA,1μmol/L)分别处理24h及48h,流式细胞仪分别检测AnnexinV染色后早期细胞凋亡率及转染效率,以细胞化学染色法(KarnovskyRoots染色)检测AChE表达。结果流式细胞仪测定GFP显示转染效率达(45.50±3.84)%,人AChE基因转染后联合ATRA治疗凋亡比例增加,转染前后分别为(14.26±1.16)%/(42.84±7.21)%(24h,P<0.01)和(18.08±0.75)%/(56.29±2.54)%(48h,P<0.01)。细胞化学染色法可见AChE阳性细胞,染色聚集于胞核部位。结论胰腺癌细胞AChE基因的高表达可增加细胞对ATRA诱导凋亡的敏感性。     

全反式维甲酸诱导胰腺癌细胞凋亡过程中bcl-2/bax和p53表达的变化

目的胰腺癌细胞对一般化疗药物的诱导凋亡作用不敏感.维甲酸类药物对肿瘤的治疗和预防作用在于其可调节肿瘤细胞的生长、分化及凋亡.     

甲胎蛋白激活PI3K/AKT信号促使肝癌Bel 7402细胞抗全反式维甲酸诱导凋亡

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,以及其在癌细胞耐受全反式维甲酸(ATRA)中的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对人肝癌Bel 7402细胞增殖的影响;显微照相观察细胞形态学的改变;流式细胞分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用;Westemblot法分析磷酸化的蛋白激酶B(pAKT)和Src表达,构建干扰AFP表达的载体(AFP-siRNA)并转染Bel 7402细胞;用PI3K特异性阻断剂Ly294002处理细胞,分析Ly294002的作用效果.通过t检验分析组间的统计学差异. 结果 MTT分析显示,人肝癌Bel 7402耐受ATRA的细胞毒性;共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞质;Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合;MTT分析发现,Bel 7402细胞转染AFP-siRNA载体后24 h后,细胞生长显著受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而且AFP-siRNA载体和ATRA共同处理组,细胞生长受到抑制更为显著,与对照组、单独处理组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01);干扰AFP表达能显著增加Bel 7402细胞对ATRA敏感性,并能抑制pAKT和Src的表达;Ly294002能抑制AFP促进Bel 7402细胞表达pAKT和Src的作用.结论 肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活PI3K/AKT信息通路对抗ATRA诱导的凋亡.     

Presenilin-1突变对全反式维甲酸诱导的PC12细胞生长和凋亡的影响

目的　观察Presenilin 1(PS 1)突变型L2 86V对全反式维甲酸 (RA)诱导的PC12细胞生长和凋亡的影响。　方法　运用脂质体介导的基因转染技术建立稳定表达PS 1WT和突变型L2 86V基因的细胞克隆 ,采用MTT法、流式细胞仪检测细胞生长曲线、生长周期及细胞凋亡情况。　结果　 (1)PS 1突变型L2 86V对RA诱导的PC12细胞生长具有抑制作用 ;主要表现为G1期细胞增多、S期细胞减少 ,细胞增殖指数降低 ;(2 )在正常培养条件下 ,对照组细胞凋亡率 (% )为 0 31±0 0 9、野生型组为 0 4 3± 0 11、L2 86V组为 0 6 2± 0 2 7;无血清培养 1、2、3d ,对照组细胞凋亡率 (% )分别为 0 5 5± 0 0 7、1 2 3± 0 4 7、5 5 9± 2 91;野生型组为 1 0 9± 0 73、3 2 1± 1 4 1、7 79± 2 78;L2 86V组为 4 6 5± 1 0 4、10 5 4± 3 18、14 4 7± 3 5 3;PS 1突变型L2 86V对RA诱导的PC12细胞均具有促进细胞凋亡的作用 ,以无血清培养时表现得更为明显。　结论　PS 1突变型L2 86V对RA诱导的PC12细胞生长具有抑制作用 ;在有和无血清培养条件下均具有促进细胞凋亡的作用 ,以无血清培养时表现得更为明显。     

PTEN的表达及其在阿霉素诱导胃癌细胞凋亡中的意义

目的 研究阿霉素干预胃癌细胞后PTEN的表达及其在阿霉素诱导胃癌细胞凋亡中的意义.方法 (1)阿霉索干预胃癌细胞BGC-823后以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和流式细胞法检测细胞存活率及凋亡率,并检测VFEN的mRNA和蛋白水平.(2)构建胃癌裸鼠异位种植瘤,采用原位末端标记(TUNEL)法检测异位种植瘤中胃癌细胞的凋亡情况,并用RT-PCR和Western blot法检测PTEN mRNA和蛋白的表达水平.(3)以PTEN特异性小干扰RNA(siRNA)转染BGC-823细胞,并以阿霉素进行干预,检测BGC-823细胞的存活率和凋亡率以及PTEN蛋白表达水平.结果 (1)阿霉素干预后,BGC-823细胞的生存率呈时间依赖性降低.(2)阿霉素能够有效诱导BGC-823细胞凋亡.(3)阿霉素在BGC-823细胞中可时间依赖性地促进PTEN的mRNA和蛋白水平的升高.裸鼠异位种植瘤试验中,阿霉素干预组的凋亡率[(28.11±1.05)%]明显高于对照组[(2.78±1.63)%];阿霉素干预组瘤体组织中PTEN mRNA和蛋白水平亦高于对照组(0.5667±0.0043比0.2217±0.0063,0.14±0.26比0.04±0.15,P值均<0.05).(4)转染与未转染[WEN siRNA的胃癌细胞以阿霉素干预后,PTEN siRNA转染组的PTEN蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.0001),且PTEN siRNA转染组[(10.35±1.04)%]凋亡率明显小于未转染组[(31.37±3.58)%],P<0.05.结论 阿霉素干预胃癌细胞后可以抑制其生长,诱导细胞凋亡,PTEN表达水平的升高可能是其机制之一.     

XAF1基因在肝癌细胞凋亡中的诱导作用

背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）与凋亡抑制和肿瘤细胞耐药现象密切相关。目的：研究XIAP相关因子1（XAF1）基因抑制人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2增殖和诱导凋亡的作用。方法：以腺病毒Ad5／F35为载体,构建重组腺病毒Ad5／F35-XAF1、对照空病毒Ad5／F35-Null和报告病毒Ad5／F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别以相同感染复数（MOI）感染人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2,并设立空白组作为对照。作用48h后,以荧光显微镜检测Ad5／F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达;以MTT法检测细胞活力;以Annexin V—FITC／PI双染法和原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率。结果：Ad5／F35-EGFP感染48h后,几乎所有Bel-7404和HepG2细胞均表达EGFP。Ad5／F35-XAF1感染48h后,两种肝癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达均明显增高．细胞活力呈剂量依赖性地降低,细胞凋亡率显著增加。结论：重组腺病毒Ad5／F35-XAF1在人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2中的感染效率高,XAF1在不同的肝癌细胞株中恢复表达后,能显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

全反式维甲酸诱导LoVo细胞分化的动物实验研究

目的：研究经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导分化的结肠癌细胞株（ＬｏＶｏ细胞）在裸鼠体内的致瘤性。方法：将ＡＴＲＡ作用下经５次和１０次传代的ＬｏＶｏ细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤生长情况。用扫描电镜观察肿瘤细胞的超微结构,用免疫组化法分析肿瘤细胞癌胚抗原（ＣＥＡ）的表达及分泌粘液的性质。结果：经５次传代实验组与对照组裸鼠均有移植瘤形成,但实验组移植瘤生长明显受抑制（Ｐ〈０．０５）。经１０次传代实验组裸     

Fas、FasL及Caspase-3在维甲酸诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨维甲酸诱导胃癌细胞BGC-803凋亡的作用及其与Fas、FasL、Caspase-3表达的关系.方法:以0.001、0.01、0.1、1、10、20 μmol/L的维甲酸作用BGC-803细胞72h后,MTT法检测维甲酸对BGC-803细胞的生长抑制作用;流式细胞术分析维甲酸对胃癌BGC-803细胞凋亡的诱导作用;Hoechst33342/PI双荧光染色观察细胞凋亡;RT-PCR法检测Fas、FasL、Caspase-3基因的mRNA表达变化.结果:0.1、1、10、20μmol/L的维甲酸作用BGC-803细胞72 h后,较对照组(未加药)能显著抑制细胞增殖(32.61%、44.42%、48.14%、51.15%vs 0.657%,均P＜0.01);20μmol/L维甲酸作用BGC-803细胞12、24和48 h后,G2/M期细胞比例显著增加,出现凋亡特征性的亚G1峰;细胞出现染色质凝集、核膜破裂等凋亡特征;作用48 h后,Fas、FasL、Caspase-3 mRNA表达水平均较对照组显著上调.结论:Fas、FasL、Caspase-3参与了维甲酸诱导胃癌细胞凋亡的调控过程.     

全反式维甲酸和Caspase抑制剂Z—VAD—FMK对胰腺癌细胞凋亡的作用

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对体外胰腺癌细胞生长的影响以及caspase抑制剂Z—VAD—FMK对细胞凋亡的作用。方法 胰腺癌细胞PaTu8988与ATRA或与ATRA caspase抑制剂Z—VAD—FMK共同孵育后，用MTT方法观察细胞活性，观察细胞超微结构改变，DNA断裂分析，流式细胞仪检测凋亡细胞比例和测定caspase一3活性。结果 ATRA对细胞的生长有明显的抑制作用。ATRA诱导后电镜和DNA断裂分析发现典型凋亡特征。与ATRA处理组相比，ATRA和Z—VAD—FMK联合作用对细胞凋亡比例无影响。ATRA组caspase-3蛋白的活性随孵育时间延长而升高，且与凋亡比例相关，Z—VAD-FMK处理组caspase-3活性明显下降。结论 ATRA能够抑制胰腺癌细胞生长并诱导细胞凋亡。同时，与Z—VAD—FMK联合作用能抑制caspase蛋白活性，但未使细胞凋亡比例相应降低，提示在胰腺癌凋亡过程中可能有其他蛋白酶的作用。     

全反式维甲酸在消化道肿瘤基因表达中的作用及其机制

全反式维甲酸(a11-trans retinoic acid，ATRA)为目前用于临床肿瘤化学治疗的一种常用的诱导分化剂，近年来已被用于治疗消化道肿瘤并初显成效。大量研究表明ATRA的这种作用与某些消化道肿瘤基因表达的抑制、失活或活化有关。     

全反式维甲酸在消化道肿瘤基因表达中的作用及其机制

全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)为目前用于临床床肿瘤化学治疗的一种常用的诱导分化剂,近年来已被用于治疗消化道肿瘤并初显成效。大量研究表明ATRA的这种作用与某些消化道肿瘤基因表达的抑制、失活或活化有关。