可注射型富血小板纤维蛋白在年轻恒牙感染根管牙髓血管再生治疗中的临床应用

目的比较可注射型富血小板纤维蛋白(i-PRF)作为支架和血凝块作为支架在年轻恒牙感染根管牙髓血管再生治疗中的临床应用效果。方法选取2018年1月至2020年6月在我院口腔科就诊的患儿44例为研究对象,按随机数字表法分为观察组与对照组,各22例。对照组将血凝块作为支架行牙髓血运重建术,观察组将i-PRF作为支架行牙髓血运重建术。所有患儿治疗后的第3、6、12个月进行复诊。评价临床疗效;根据X线片测量两组患牙术前术后根管长度、根管壁厚度、根尖孔直径,计算并比较根管长度、牙本质壁厚度及根尖孔直径的变化值;进行牙髓电活力测试。结果随访过程中,观察组失访4例,对照组失访1例,引血不足1例,最终纳入观察组18例,对照组20例,随访6～24个月。术后,两组临床疗效有效率比较,差异无统计学意义(P> 0.05);观察组根管长度增加比及根管壁厚度增加比高于对照组(P <0.05);观察组根尖孔直径缩小比与对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05);观察组牙髓电活力测试阳性者与对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论应用i-PRF及血凝块作为支架材料进行牙髓血运重建术对年轻恒牙感染根管的治疗效果均较好,但使用i-PRF较血凝块更能促进患儿年轻恒牙根管长度增加及根管壁增厚。     

可注射型富血小板纤维蛋白在口腔疾病治疗中应用的研究进展

可注射型富血小板纤维蛋白（iPRF）是一种具有流动性的新型血小板浓缩物（PC）。iPRF在传统富血小板纤维蛋白（PRF）制备方法的基础上,改变了离心参数和收集方式,因此具有更良好的生物学性能。iPRF已在某些疾病的基础研究和临床治疗中得到应用,特别是在口腔医学领域的应用相对较广泛,如在减轻口腔黏膜疾病患者疼痛和缩小病损面积、辅助根管消毒及根管充填、防治牙周疾病、促进骨缺损的修复重建、修饰种植体表面、加快正畸牙齿移动、缓解颞下颌关节紊乱病症状、诱导口周容貌年轻化及促进创伤愈合等方面均展现出良好效果。此外,iPRF也被用来治疗脱发和神经损伤等。现结合最新文献,总结iPRF的制备工艺和生物学特性,并从iPRF在口腔黏膜病、牙髓病、牙周疾病、种植及相关骨量不足、错畸形、颞下颌关节紊乱病、口周容貌衰老和口腔颌面部创伤等口腔疾病或状态治疗中的应用入手,对其使用方式、治疗效果和作用机制等进行重点阐述,同时归纳iPRF在其他领域的应用现状并展望其发展前景,为iPRF的后续研究提供参考。     

Gravin参与血管内皮生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞体外血管形成

目的研究Gravin在血管内皮生长因子（VEGF）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）迁移和体外“小管样结构”（TLS）形成中的作用。方法用VEGF诱导HUVEC,通过Western blot和细胞免疫荧光分析Gravin在细胞内分布的变化;用Gǒ6983【蛋白激酶C（PKC）抑制剂】和VEGF共处理内皮细胞,观察对Gravin分布的影响,观察其对VEGF诱导HUVECs迁移和TLS形成的影响。结果VEGF呈时间和剂量依赖性诱导Gravin磷酸化,并向核周和细胞边缘重分布;以上效应能被0.5μmol/LGǒ6983抑制;Gǒ6983同时抑制VEGF诱导HUVEC迁移和TLS形成。结论PKC-Gravin信号通路参与VEGF诱导的内皮细胞迁移和血管形成。     

雷帕霉素抑制人脐静脉内皮细胞增殖与迁移

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移的抑制作用。方法应用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞仪、迁移实验研究不同浓度雷帕霉素对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖、迁移的影响。结果雷帕霉素浓度大于10ng/ml、作用48h以上可以明显抑制VEGF诱导的HUVECs的增殖(P<0.05),呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞被阻滞在G0/G1期,并诱发了细胞凋亡;利用Transwell装置证实雷帕霉素浓度大于10ng/ml时抑制了HUVECs的迁移。结论雷帕霉素可通过抑制血管内皮细胞的增殖与迁移抑制血管生成。     

人脐静脉内皮细胞体外培养及其相关研究

血管内皮损伤是许多疾病如动脉粥样硬化等发生的始动机制。血管内皮细胞在体外的成功培养为研究内皮细胞功能及其在各种疾病的发生发展中所起的作用提供了良好的基础。人脐静脉内皮细胞取材容易,操作方便,目前已成为血管内皮细胞体外实验的的重要材料。近年来,人脐静脉内皮细胞在妊娠高血压综合征、静脉血栓等方面的研究中有很高的应用价值。     

人脐静脉内皮细胞体外培养方法的改进

目的：建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)且操作方便的体外分离、培养方法。方法：采用胶原酶对HUVEC进行消化，加入内皮细胞生长因子和肝素促其生长，以胰蛋白酶消化贴壁细胞，继续传代培养。细胞鉴定采用形态学观察和免疫荧光法。结果：经相差显微镜观察及Ⅷ因子染色证实培养的细胞是内皮细胞。结论：实验建立的HUVEC培养方法简便，细胞获得量多。     

可注射型富血小板纤维蛋白联合封闭式负压引流技术治疗慢性难愈性创面的应用研究

目的 探讨可注射型富血小板纤维蛋白(i-PRF)联合封闭式负压引流(VSD)技术治疗慢性难愈性创面的疗效.方法 选取80名慢性难愈创面患者,随机均分为对照组和i-PRF组.对照组予创面清创后行封闭式负压引流治疗,i-PRF组予创面清创后即行创面及创周i-PRF多点分散注射,再行封闭式负压引流治疗,两组患者均以7d为一周期重复上述治疗,达修复标准后修复创面.比较两组患者治疗后第7、14天的细菌培养结果、白细胞计数、C反应蛋白、红细胞沉降率、新鲜肉芽组织生长情况及疼痛评分,记录达修复标准准备时间及创面愈合时间.结果 治疗后第7、14天i-PRF组各项炎症指标及疼痛评分降低较对照组更明显,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后第7、14天观察组新鲜肉芽组织覆盖率及细菌转阴率更高,差异有统计学意义(P＜0.05);i-PRF组达修复标准准备时间及创面愈合时间均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 i-PRF联合VSD治疗慢性创面相比于单纯应用VSD技术,能更有效控制创面感染,减轻患者疼痛,加速创面愈合,减少住院时间.     

人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定

目的研究人脐静脉内皮细胞的体外培养方法,并进行细胞鉴定。方法胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞,加入DMEM/F12混合培养基,37℃5%CO2培养箱中培养,观察细胞形态及生长状况,近融合时消化传代培养。采用形态学观察和CD34免疫组化法进行细胞鉴定。结果原代培养的人脐静脉内皮细胞约于24h完全贴壁,4~5d后融合成单层铺路石样结构。CD34染色证实培养的细胞是人脐静脉内皮细胞。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的人脐静脉内皮细胞。     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法体外培养HUVECs,取对数生长期HUVECs细胞接种96孔培养板中,常规培养细胞24 h后,弃掉旧培养基,加入新Ham′s F12k培养基,并分别加入AngⅡ,使其终浓度分别为0μmol.L-1、0.01μmol.L-1、0.1μmol.L-1、1μmol.L-1和10μmol.L-1,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测不同浓度AngⅡ在不同时间点的细胞活性,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果MTT结果:与对照组相比,1μmol.L-1AngⅡ组作用24 h和10μmol.L-1AngⅡ组作用12 h、18 h和24 h的HUVECs的细胞活性均显著下降(P<0.05或P<0.01),并呈现时间依赖性;其余各组差异均无统计学意义(P>0.05)。琼脂糖凝胶电泳结果:10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs呈现明显的"梯状"DNA断裂条带。流式细胞术结果:对照组和10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs细胞凋亡率分别为(1.11±0.54)%和(19.87±3.18)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论10μmol.L-1AngⅡ可通过诱导细胞凋亡引起HUVECs损伤,从而可能在动脉粥样硬化发生发展中发挥作用。     

TDL复合物提高人脐静脉内皮细胞基因转染效率的体外实验

目的 研究HIV-1 Tat蛋白转导域/质粒DNA/Liposome(TDL)复合物介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, pEGFP)在体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)的转染效率.方法 将质粒DNA与Tat肽以不同的电荷比混匀,再加入2 μl Lipofectamine 2000制成TDL复合物.琼脂糖凝胶电泳分析质粒DNA与Tat肽的结合力;荧光显微镜和流式细胞仪观察TDL复合物与lipofectamine 2000介导基因在体外培养人脐静脉内皮细胞中的转染效果;MTT法检测TDL复合物对人脐静脉内皮细胞生长活性的影响.结果 TDL复合物组琼脂糖凝胶电泳未发现明显DNA条带.TDL复合物的转染率优于单用Lipofectamine 2000(P《0.05). Tat/DNA电荷比为8∶1时,TDL复合物的转染效率最高.TDL复合物组对细胞活性均无明显影响.结论 TDL复合物可明显提高基因在体外培养人脐静脉内皮细胞的转染效率,该方法可作为提高基因转染效率的有效手段之一.     

尼古丁对人脐静脉内皮细胞凋亡及坏死的影响

目的不同浓度尼古丁对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及坏死的影响。方法用CD34以免疫组织化学法鉴定HUVECs。通过3种不同浓度的尼古丁(3、30、300 ng/ml)刺激HUVECs 24 h后,用流式细胞仪检测其凋亡及坏死率。结果低浓度尼古丁促进细胞凋亡最强,而随着尼古丁浓度的增加,细胞凋亡率反而逐渐降低,各组差异具有统计学意义(P<0.05);此外,随着尼古丁浓度增加,细胞坏死率也日益增多,各组差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关(r=0.675)。结论尼古丁对HUVECs凋亡的影响具有浓度依赖性,细胞坏死率与尼古丁浓度呈正相关。     

人脐静脉内皮细胞体外培养方法

目的探索人脐静脉内皮细胞体外培养方法和注意事项。方法采用0.1%I型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于RPMI-1640和20?S内培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶和0.02?TA消化传代,并以倒置光显微镜观察内皮细胞生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果原代培养细胞在接种4 h后开始贴壁生长,5~7 d后融合成单层,倒置光显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,有接触抑制现象,免疫组化显示细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原阳性。结论用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种较可靠的方法,成活率较高,培养的多个环节均需关注。     

人脐静脉内皮细胞的原代培养

目的建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)且操作方便的体外培养方法。方法采用不同浓度的Ⅱ型胶原酶(0.05%,0.1%和0.2%)对HUVEC进行灌注,并分别孵育不同的时间(10min,13min,15min和18min)进行消化,观察细胞的形态、数量以及生长融合情况。结果采用0.1%的胶原酶消化10-13min为最佳条件,经光学显微镜观察培养的细胞数量较多,生长、繁殖状态良好,培养3d左右细胞可达到融合状态。结论本实验建立的胶原酶法消化HUVEC培养方法简便,细胞获得量较多且生长状态良好。     

人脐静脉内皮细胞体外培养方法的改进

目的 建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVECS)的体外培养方法,为血管内皮细胞的大规模体外实验研究奠定基础.方法 比较0.25%胰酶、0.1%Ⅰ型胶原酶、0.25%胰酶与0.1%Ⅰ型胶原酶(1∶1)3种消化方法分离HUVECs的细胞数量和活细胞率的差异.观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对细胞生长的影响.细胞鉴定采用形态学观察和免疫荧光法检测.结果 0.1%Ⅰ型胶原酶单独或混合0.25%胰酶消化分离细胞数量较多、活细胞率较高(P＜0.05).VEGF能明显促进细胞增殖能力,延长细胞自然生长时间.细胞呈单层"铺路石"样排列,免疫荧光细胞化学法染色,激光买聚焦检测可见胞质中绿色荧光颗粒.结论 Ⅰ型胶原酶与胰酶混合消化HUVECs是获取血管内皮细胞的一种经济且效果较好的方法,添加VEGF能明显促进细胞增殖,可用于构建体外研究血管内皮细胞的模型.     

金丝桃素光动力通过抑制HUVECs细胞增殖、迁移和管腔形成抑制血管生成

目的 探讨金丝桃素光动力(hypericin-photodynamic therapy,HY-PDT)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管腔形成的影响,研究抑制血管生成的作用机制.方法 以血卟啉为阳性药,用金丝桃素及血卟啉分别与HUVECs避光孵育24 h后,给予585 nm黄光照射(1.0 J/cm2),24 h后采用MTT法检测不同浓度HY对HUVECs细胞增殖的影响,细胞划痕实验观察HUVECs迁移情况,Matrigel实验观察对HUVECs细胞管腔形成的作用,qRT-PCR检测Smad2基因mRNA的表达,Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2、Smad2表达变化.结果 HY-PDT能够抑制HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成;HY-PDT使HUVECs中ERK1/2磷酸化比率(p-ERK1/2/ERK1/2)显著降低(P＜0.01),并显著下调Smad2mRNA及蛋白表达(P＜0.01).结论 HY-PDT通过抑制ERK1/2蛋白磷酸化活化、降低Smad2 mRNA表达及蛋白水平,使HUVECs细胞增殖、迁移管腔形成受到抑制,抑制血管的生成.     

不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养效果的影响

目的研究不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养生长的影响,探讨内皮细胞的最佳体外扩增培养条件。方法取健康产妇分娩后脐带,用胶原酶Ⅰ消化后得脐静脉内皮细胞,进行原代培养,并用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,传代培养时则分别采用RPMI-1640培养基和EGM-2培养基,倒置显微镜观察两种培养条件下细胞的生长状态,同时利用流式细胞仪检测其生长周期,对比培养效果。结果 EGM-2组内皮细胞生长良好,2d后贴壁生长的细胞可达90%。EGM-2组S期细胞比例为(29.07±1.48)%,RPMI-1640培养基组S期细胞为(17.58±3.49)%,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 EGM-2培养基更适合人脐静脉内皮细胞的体外传代扩增培养。     

结肠癌细胞上调脐静脉内皮细胞EMMPRIN的表达

目的：探讨结肠癌细胞对脐静脉内皮细胞中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）表达的影响,以及EMM-PRIN与肿瘤新生血管生成的关系.方法：建立结肠癌LoVo细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共培养模型,并设HUVEC单独培养对照组,培养36 h后进行形态学观察,并应用免疫细胞化学方法检测内皮细胞EMMPRIN的表达.结果：共培养组HUVEC形成大量管样结构,且EMMPRIN的表达明显强于HUVEC单独培养对照组强.结论：结肠癌细胞上调HUVEC EMMPRIN的表达,并诱导HUVEC管样结构的的形成,EMMPRIN的表达可能与肿瘤新生血管生成具有一定的相关性.     

益母草对人脐静脉内皮细胞组织因子转录及表达的影响

目的 探讨益母草(Leonurus Heterophyllus Sweet,LHS)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达和转录的影响.方法 HUVECs的培养按Jaffe法,选用第2代细胞进行试验.测定不同浓度LHS处理前后组织因子表达,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TF mRNA水平.结果 LHS对HUVECs TF活性及TFmRNA转录的影响与正常对照组相比差异有明显统计学意义(P＜0.01).结论 LHS能下凋HUVECs TF的表达,干预HUVECsTFmRNA的转录.     

CD226分子参与脐静脉内皮细胞的功能

目的：观察人血小板T细胞活化抗原1(CD226)分子所参与的内皮细胞的功能．方法：采用^3H-TdR掺入、^51Cr黏附实验、PI染色结合流式细胞仪技术观测CD226分子对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、粘附、细胞周期及凋亡的影响．结果：CD226分子参与HUVEC的粘附功能，但CD226 mAb(LeoAl)对HUVEC的增殖、细胞周期及细胞凋亡均无显影响．结论：CD226分子是活化HUVEC表面一种新的粘附分子，参与HUVEC的粘附功能．     

环境内分泌干扰物对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响及其相关机制

目的 探讨4种环境内分泌干扰物对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的影响及其可能机制。方法 HUVEC经培养扩增后分为以下几组：不加干预药物（对照组）、加入17β-雌二醇（E2组）、双酚A（BPA组）、玉米赤霉烯酮（ZEA组）、壬基酚（NP组）和邻苯二甲酸-2-乙基己酯（DEHP组）。分别在0、24、48和72h进行光吸收度值（AV）检测,在72h进行流式细胞术DNA增殖指数（PI）及凋亡指数（AI）检测。此外,在加以上各种干预物质时,另加入氟维司群,检测以上指标。在72h采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）观察细胞凋亡情况。结果 E2、BPA、ZEA、NP、DEHP组中的AV在24、48、72h均明显增加,约是对照组1．4～1.7倍,72h时的PI是对照组的1.4～1．5倍。加入氟维司群后,细胞增殖受到明显抑制。E2、BPA、zEA、NP、DEHP组中仅见少量凋亡细胞,而对照组及加氟维司群各组中可见较多凋亡细胞。结论 4种环境内分泌干扰物能促进人脐静脉血管内皮细胞的体外增殖,雌激素受体依赖途径和抑制细胞凋亡可能参与了该促增殖作用。