迷迭香酸通过线粒体通路诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的研究

目的研究迷迭香酸通过线粒体通路诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法体外培养MG-63细胞,将10、20、30、40、50、60μmol/L迷迭香酸作用于MG-63细胞,MTT和CCK-8法检测迷迭香酸对细胞生长的影响;AO/EB染色法观察细胞凋亡;流式细胞仪检测对细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting法检测Cyt-c、Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 MTT和CCK-8结果显示迷迭香酸可浓度相关性地抑制MG-63细胞的生长;AO/BE染色可看到迷迭香酸组凋亡细胞明显增加;流式细胞仪检测结果显示迷迭香酸可浓度相关性地促进MG-63细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在S期;Western blotting法结果显示与对照组比较,迷迭香酸20、40、60μmol/L组的Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达水平明显增加(P0.05、0.01);与对照组比较,迷迭香酸20、40、60μmol/L组的Bcl-2蛋白表达水平则明显降低(P0.05、0.01),且呈剂量相关性。结论迷迭香酸可显著促进人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其机制可能与调控线粒体凋亡通路有关。     

TRAIL联合顺铂诱导骨肉瘤HOS-8603细胞凋亡研究

目的研究TRAIL联合顺铂诱导HOS-8603细胞的凋亡及其机制。方法 MTT法分别测定TRAIL,顺铂,和TRAIL+顺铂对HOS-8603细胞的抑制率,流式细胞法测定亚G1期细胞百分率及PI和Rh123双染色后细胞的ΔΨm。结果三组分别由TRAIL、顺铂、TRAIL+顺铂处理过的HOS-8603细胞用MTT法测抑制率分别为29%、33.6%、58.5%。随着药物作用时间增加,HOS-8603细胞凋亡数增加和ΔΨm降低(P<0.01),两者呈直线相关。结论 TRAIL和顺铂能协同诱导HOS-8603细胞凋亡,其机制可能是通过使线粒体膜通透性转运孔开放,ΔΨm降低来实现的。     

苦参碱对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的 探讨苦参碱在MG-63细胞中促凋亡的作用及机制。方法 实验分为0浓度组和10%苦参碱组,分别灌胃生理盐水和10%苦参碱制备大鼠含药血清,干预人成骨肉瘤细胞株MG-63。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测c-myc、胱天蛋白酶9(caspase-9)基因的表达,采用免疫印迹（Western blot）法检测细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路中相关蛋白Nur77、丝裂原激活蛋白激酶5(MEK5)及凋亡相关蛋白c-myc,caspase-9的表达水平。结果 与0浓度组相比,10%苦参碱组能显著抑制MG-63细胞增殖,并促进其凋亡;荧光定量PCR实验结果表明,10%苦参碱组能抑制c-myc转录,并促进caspase-9转录;Western blot实验结果表明,在ERK5信号通路中,10%苦参碱组Nur77、MEK5及c-myc蛋白表达下调,而caspase-9蛋白表达上调。结论 苦参碱可能通过干扰ERK5信号通路,调控c-myc,caspase-9等蛋白的表达,从而抑制MG-63细胞增殖,并促进其凋亡。     

依托泊苷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨依托泊苷对骨肉瘤细胞的毒性作用和作用机制。方法：用NTT比色法检测0．02,0．04,0．08,0．16,0．31,0．62,1．25,2．5,5．0mg·L~(-1)浓度梯度依托泊苷作用骨肉瘤细胞24,48,72和96h后的细胞活性。用流式细胞仪检测依托泊苷作用骨肉瘤细胞后细胞凋亡情况。用电镜观察药物作用后骨肉瘤细胞形态改变。结果：依托泊苷对骨肉瘤细胞有明显的生长抑制作用,随着药物浓度和作用时间的增加,细胞凋亡明显增加,依托泊苷可以诱导骨肉瘤细胞凋亡。依托泊苷作用后骨肉瘤细胞出现典型的凋亡改变,透视电镜可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集核膜下。结论：依托泊苷对骨肉瘤细胞有杀伤作用,细胞毒作用与促细胞凋亡有关。     

谷胱甘肽耗竭在芹菜素诱导成骨肉瘤MG- 63 细胞凋亡中的作用

目的研究芹菜素（apigenin）诱导体外培养人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用及其机制。方法体外培养MG-63细胞,分光光度法测定细胞内谷胱甘肽（GSH）含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 apigenin显著降低MG-63细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。apigenin以浓度依赖方式诱导MG-63细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂;500μmol/LGSH预孵育1h,能有效阻断apigenin诱导MG-63细胞内GSH耗竭和细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论 apigenin通过耗竭MG-63细胞内GSH诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

氧化应激在TRAIL诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的 探讨氧化应激在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用.方法 40μg·L-1 TRAIL处理细胞后,用MTT法检测TRAIL对细胞增殖的抑制作用;用分光光度法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测胞浆内的活性氧(ROS)水平;激光共聚焦测定细胞线粒体膜电位(△Ψm);蛋白质印迹法检测Bcl-2、Cyt C、DR 4、DR 5蛋白量.结果 40 μg·L-1 TRAIL对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用;使抗氧化因子GSH含量明显下降,氧化应激产物ROS、MDA含量明显增多;到6h时△Ψm不断降低,能明显下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,引起线粒体Cyt C向细胞质的释放;同时上调死亡受体DR 5的表达.而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能抑制TRAIL引起的这些变化.结论 氧化应激在TRAIL诱导的Hela细胞凋亡中起着重要作用,可能与ROS激活线粒体途径和上调DR 5的表达密切相关.     

泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素表达的影响

目的:研究泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素(survivin)表达的影响。方法:将泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132加入食管癌细胞Eca9706中,采用MTT法测定细胞生长抑制率,经流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测survivin的表达。结果:MG-132对食管癌细胞生长具有显著抑制作用,作用24、48、72、96h后的IC50分别为120.2、18.1、—12.2、—16.9μmol/L;5.0μmol/L的MG-132作用于食管癌细胞24、48、72、96h后,细胞凋亡率分别为(3.1±0.4)%、(31.7±3.5)%、(50.4±4.8)%、(66.6±6.2)%;Survivin在食管癌细胞中呈高表达,经MG-132作用后,表达明显降低。结论:MG-132能显著抑制食管癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin表达有关。     

枸橘苷对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抑制作用

目的 探讨枸橘苷对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抑制作用.方法 分别以0,5,10,20,40,80,160μmol/L的枸橘苷处理U-2 OS细胞,检测细胞活力并计算枸橘苷对U-2 OS细胞的半数抑制浓度(IC50);U-2 OS细胞实验分为空白对照组[等体积磷酸盐缓冲液(PBS)]和枸橘苷高、低剂量组(52,26μmo...     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。     

Nocodazole对骨肉瘤MG-63细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的以细胞有丝分裂阻滞剂Nocodazole为诱导物,诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,并进行生物化学指标的检测。方法首先,观察1nmol/L～10μmol/L递增浓度的Nocodazole对MG-63细胞的作用,然后选取10,50,100,500nmol/L4个浓度诱导凋亡,通过噻唑蓝(MTT)比色实验测定细胞生长曲线;流式细胞技术(FCM)分析细胞周期;免疫细胞化学方法检测PLK1表达情况;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析Nocodazole作用前后MG-63细胞内PLK1基因表达情况。结果不同浓度Nocodazole作用MG-63细胞24h后,对细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性增加。流式细胞仪分析结果显示,Nocodazole作用MG-63细胞后,G0/G1期细胞含量降低,S期细胞比例增加,G2/M期细胞比例则明显增加,且随着处理浓度的增加其G2/M期细胞含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Nocodazole作用后,免疫细胞化学检测显示,PLK1表达明显下降。RT-PCR分析显示经Nocodazole作用后的骨肉瘤细胞株MG-63表达PLK1较用药前明显下降。上述结果都有明显的量-效关系。结论 Nocodazole诱导MG-63细胞凋亡、G2/M期阻滞的机制可能是通过抑制PLK1基因的表达实现的。     

羟基喜树碱与TRAIL协同诱导A549细胞凋亡

目的:探讨羟基喜树碱是否与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand,TRAIL)协同诱导人肺腺癌A549细胞凋亡。方法:MTT法检测抑制率,流式细胞仪检测凋亡。结果:100ngmlTRAIL,4、40、400ugml羟基喜树碱对A549细胞抑制率分别为13.9%、3.0%、23.4%和76.7%,联合用药的抑制率分别为43.6%、52.5%、83.1%。结论:低剂量羟基喜树碱与TRAIL协同诱导A549细胞凋亡。     

氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞,通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.结果浓度为1.77,3.55,5.32 mmoL·L-1的氧化苦参碱对OS732骨肉瘤细胞相对抑制率分别为16.4%,29.0%,47.0%;流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为11.8%,18.6%,27.7%;DNA电泳见DNA"梯形"图谱;显微镜显示细胞的凋亡形态.结论氧化苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡.     

乌头碱通过ROS/JNK信号转导通路诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制研究

目的 基于ROS/JNK信号转导通路探讨乌头碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制.方法 MTT法测定乌头碱对人骨肉瘤143B细胞活力的抑制作用;Western Blot法检测乌头碱处理后143B细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平;采用流式细胞术检测用乌头碱处理后143B细胞的凋亡及活性氧簇(ROS)的产生.结果 乌头碱可显著诱导143B细胞发生凋亡,产生ROS.乌头碱处理后143B细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、磷酸化JNK均显著上升.乌头碱有显著的体外抗骨肉瘤作用,能显著抑制143B细胞的活力.结论 乌头碱通过ROS/JNK信号通路诱导人骨肉瘤143B细胞发生凋亡,具有显著的抗肿瘤作用.     

乌头碱通过ROS/JNK信号转导通路诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制研究

目的 基于ROS/JNK信号转导通路探讨乌头碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制.方法 MTT法测定乌头碱对人骨肉瘤143B细胞活力的抑制作用;Western Blot法检测乌头碱处理后143B细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平;采用流式细胞术检测用乌头碱处理后143B细胞的凋亡及活性氧簇(ROS)的产生.结果 乌头碱可显著诱导143B细胞发生凋亡,产生ROS.乌头碱处理后143B细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、磷酸化JNK均显著上升.乌头碱有显著的体外抗骨肉瘤作用,能显著抑制143B细胞的活力.结论 乌头碱通过ROS/JNK信号通路诱导人骨肉瘤143B细胞发生凋亡,具有显著的抗肿瘤作用.     

千层纸素对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡的作用

目的 探讨千层纸素对人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡诱导作用及其可能机制.方法 用终浓度分别为0、12.5、25、50、100、200和400 μmol/L的千层纸素处理MG-63细胞.采用MTT法检测千层纸素对MG-63细胞增殖的抑制作用,透射电镜下观察千层纸素对细胞超微结构的改变,流式细胞术检测千层纸素对MG-63细胞凋亡率的影响,Western blot法分析半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)的表达水平.结果 千层纸素呈时间-和剂量依赖地抑制MG-63细胞的增殖.电镜下可发现千层纸素能诱导细胞凋亡,表现为胞质内出现大量空泡,细胞核染色质固缩,细胞表面微绒毛减少.此外,千层纸素能剂量依赖性地诱导细胞凋亡,上调MG-63细胞中cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9和Bax蛋白的表达水平,下调pro-Caspase-3、pro-Caspase9和Bcl-2蛋白的表达水平.结论 千层纸素可诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡;这可能与升高Bax/Bcl-2比率、激活Caspase-9和Caspase-3蛋白有关.     

大蒜素诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及其机制的实验研究

目的探讨大蒜素诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及其机制。方法使用不同浓度大蒜素处理骨肿瘤细胞系后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术以及免疫印迹技术检测Bax的mRNA及蛋白水平的表达变化。结果大蒜素处理后骨肉瘤细胞凋亡率明显升高,并呈剂量依赖性;且细胞内的Bax的mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论大蒜素在体外可诱导多种骨肉瘤细胞凋亡,可能与上调Bax的表达,促进细胞色素c的释放有关;大蒜素有望成为一种新的治疗骨肉瘤的化疗药物。     

MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对caspase-3表达的影响

目的　观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV -304)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响。方法　采用两个浓度(2, 5μmol·L-1 )的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV -304细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;RT -PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase -3的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果　对照组ECV -304细胞凋亡率低于5%,在2μmol·L-1MG132作用下,凋亡率为11. 3%,MG132浓度升至5μmol·L-1,细胞凋亡率增致44 .5%,MG132诱导ECV 304细胞凋亡具有量-效关系;RT -PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase 3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase- 3蛋白表达水平升高。结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,促进caspase- 3基因转录,使细胞内caspase -3增加而促进细胞凋亡。     

α干扰素增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡

目的探讨α干扰素（Interferonα,IFNα）联合化疗药物阿霉素诱导人骨肉瘤U20S细胞凋亡的作用及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性探索新的治疗方法。方法应用台盼蓝拒染法测定IFNα和阿霉素单用以及联用对U20S细胞的生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态学变化;Westernblot法检测Caspase-3、PARP的活化;采用Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理各组细胞,检测该作用是否依赖Caspase。结果IFNα处理24h、48h、72h对U20S细胞无抑制作用,却明显增强阿霉素诱导的生长抑制作用,具有时间依赖性;联合用药72h后U20S细胞出现更为明显的凋亡形态学变化;联合用药组的凋亡关键酶Caspase-3、PARP均发生断裂活化;Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理明显减弱联合用药引起的生长抑制。结论IFNd通过Caspase依赖性凋亡通路增强阿霉素诱导的骨肉瘤U2OS细胞生长抑制和凋亡,二者联合应用可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。     

姜黄素对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究姜黄素对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用姜黄素单体处理人骨肉瘤U2OS细胞,通过台盼蓝拒染法检测细胞增殖活力,采用流式细胞术和DNA Ladder检测凋亡,通过Westernblot法检测p53和caspase-3的表达。结果 4、8、16、32、64μmol/L姜黄素处理U2OS细胞48h,生长抑制率为:(9.21±3.11)%、(16.85±3.95)%、(29.57±5.33)%、(52.30±6.07)%和(79.16±6.78)%。姜黄素(16μmol/L)在24、48和72h均可诱导U2OS细胞凋亡,凋亡率为:(18.8±3.05)%、(29.6±5.22)%和(57.3±6.62)%,姜黄素(16μmol/L)作用72h后,DNA电泳显示梯形条带改变。并且姜黄素作用48h可明显上调p53的表达和caspase-3的活化。结论姜黄素可抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖,并通过p53-caspase-3通路诱导凋亡。     

TRAIL的诱导肿瘤细胞凋亡与临床

TRAIL是最近发现的属肿瘤坏死因子家族新成员 ,它能选择性地杀伤多种肿瘤细胞而对正常细胞没有细胞毒性。它的作用机制主要通过细胞膜的表面死亡受体DR4和DR5介导细胞的凋亡信号 ,激活细胞内的多种诱导细胞凋亡蛋白的表达。主要的途径是通过TRAIL与死亡受体结合后促进DISC的形成和caspase8的激活 ,然后启动非依赖线粒体的凋亡途径和线粒体的凋亡途径。非线粒体凋亡途径通过激活的csapase8直接激活caspase3,从而启动细胞的凋亡。线粒体依赖途径通过激活的tBID导致细胞色素C的释放 ,与Apaf1和caspase9形成凋亡小体导致细胞的凋亡。通过以往的研究表明 ,非融合表达的TRAIL能明显诱导多种肿瘤细胞的凋亡 ,对正常人和猴的肝细胞没有细胞毒性 ,提示非融合表达的人TRAIL蛋白可能是未来最有发展前途的抗肿瘤药物