骨形成蛋白作盖髓剂的探讨

早在1965年,Urist[l]报道脱钙骨基质可诱导异位骨内外组织的间充质细胞分化形成新骨.此后,Urist等在这方面做了大量的研究,并已分离出了一种具有这种骨诱导活性的蛋白--骨形成蛋白,又称骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Pro-tein,BMP).目前已在兔、鼠、牛、猴等动物及人的骨基质中、牙本质基质中和小鼠及人的骨肉瘤中发现了这种蛋白成分.目前已发现了15种BMP,除BMP-1外,其余都属于转化生长因子(TGF-β)超家族的成员.研究发现,BMP是通过与细胞表面受体结合发生作用的,其I型和Ⅱ型受体是跨膜的丝氨酸或苏氨酸激酶,它与膜上配体结合形成受体复合体从而传递信号.现已标记出7种不同的工型丝氨酸或苏氨酸受体,称为苯丙酸诺龙受体样激酶ALK1-6.另外,亦已分离出BMPⅡ型受体[2].     

BMPs Ⅱ型突变受体真核表达载体的构建与鉴定

0　引言　骨形成蛋白 (BMPs)不仅在骨 ,软骨及与骨骼有关的结缔组织的形成上有重要作用 ,而且起着十分重要的调控作用 [1 ] .与其他 TGF- β超家族成员一样 ,BMPs在细胞表面与 BMP的 , 型受体相互作用 , 型受体可以和过量的配体结合 ,而 型受体与配体的结合则是特异性的 [2 ] .t BRK3k为 BMPs 型突变受体 ,其可以阻断 BMP的信号转导 ,这样 ,BMP就无法发挥其骨诱导及在胚胎发育 ,器官形成及细胞分化中的作用 .因此 ,为研究 BMPs信号转导在组织发育和细胞分化中的作用 ,我们构建了 BMPs 型突变受体的真核表达载体 ,为此方面研…     

Gremlin和BMP7在纤维化疾病中的作用

Gremlin是进化上高度保守的分泌型糖蛋白,属于骨形态蛋白拮抗剂家族成员,在个体胚胎发育过程中肺、肾等器官的形态形成过程中起重要作用,并参与成熟组织器官功能的维持。Gremlin通过与BMP直接结合,阻断BMP与受体结合,而拮抗BMP的生物学活性。TGF-β是目前已知的最重要的促纤维形成因子,参与肾、肺、肝、眼、心等组织器官的纤维性病变。BMP7和TGF-β同属于TGF-β超家族成员,两者所介导的信号途径存在交联反应,共同参与调节正常生     

干扰素受体研究进展

1957年Isaacs与lindenmann发现一种能干扰病毒在宿主细胞增殖的蛋白质———即干扰素(Interferon:IFN)[1],分为I型干扰素和II型干扰素两大类。I型IFN家族包括IFN-α,IFN-β[2]。IFN-α和IFN-β的分子有序列同源性,共用相同的细胞表面受体,并且有类似的功能[3]。II型IFN又称为免疫干扰素或γ-干扰素(IFN-γ),是一种同源二聚体糖蛋白,其亚单位多肽的分子量为21～24KD[4]。IFN生物效应的发挥,需要跟相应的信号受体结合[5]。根据IFN的分类,干扰素受体(INFR)分为:结合I型干扰素的I型干扰素受体和结合IFN-γ的II型干扰素受体…     

过氧化物酶体增殖物激活受体与糖脂代谢

1　分类、结构、基因和基因表达1.1　分类　过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPARs)是一组由四种异构体组成的配体激活的核受体 ,即α、β(δ或hNUC1)、γ1、γ2 ,属于Ⅱ型核受体超家族成员 ,由各自不同的基因编码[1 ] 。1.2　结构　PPARs在结构上由 3个结构域组成 ,即DNA结合区域、基因活化区域和配体结合区域。PPAR为 4 4 1个氨基酸的蛋白质 ,与过氧化物酶体增殖物反应元件 (PPRE)结合区含有 2个锌指结构 ,故属于核受体家族的转录因子[2 ] 。1.3　基因　编码PPARα的基因定位于染色体 2 2q ,编码鼠PPARβ的基因由含有 30kb以上的…     

肝细胞癌TGF-β受体表达的改变——一种组成性活性TGF-βI型受体突变体的效应

背景与目的:通常肝细胞癌(H CC)有抑制转化生长因子-β(TG F-β)的作用。本研究旨在揭示这种抑制作用的分子机制,以探讨治疗肿瘤的新方法。方法:分析临床HCCs患者和人类肝细胞瘤系H uH-7和H epG2的TGF-βI型和II型受体(TGF-βRI/R II)的转录和蛋白表达。用一种组成性活性TGF-βI型受体突变体(CATGF-βR I)瞬时和稳定转染H uH-7细胞。检测其生长动力学、整联蛋白表达、侵袭力、TG F-β介导的人类1型纤溶酶原激活物抑制剂(PA I-1)启动子的激活和Sm ad表达。结果:临床HCCs患者的肿瘤中TG F-βRII蛋白表达(6/10例)较毗邻…     

生长分化因子6研究进展

生长分化因子6（growth differentiation factor 6,GDF6）是骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）的成员之一,亦称为 BMP13。BMP 与转化生长因子β（ transforming growth factor β,TGF-β）相比,两者含有20％～30％的同源氨基酸。在最初被发现的时候,BMP 被认为是去矿化骨基质的组件,当发生异位植入或者骨折时,能刺激新骨组织的产生［1］。BMP 主要参与细胞的分化与增殖。在胚胎发育、维持及胚胎干细胞分化的过程中受很多 GDF 控制,尤其是 TGF-β超家族成员如 BMP及活化素［2］。BMP 的生物学功能近年来成为研究的热点,由于BMP 的表达及其受体在众多类型的细胞中被发现,表明 BMP具有比目前所认知的更为复杂的功能。随着重组 DNA 技术的发展,一些 BMP 亚型已被合成,并应用于实验室和医学的许多学科,如骨移植［3］。现将 GDF6的研究进展综述如下。     

甲状腺乳头状癌及滤泡状癌I型转化生长因子β受体与增值细胞核抗原的表达状态及意义(英文)

目的观察高分化甲状腺癌I型转化生长因子β(Transforming Growth Factor-β), TGF-β受体与增值细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达状态,讨论TGF-β抵抗机制在甲状腺乳头状癌及滤泡状癌中的可能途径。方法取25例甲状腺乳头状癌、7例甲状腺滤泡状癌及19例正常甲状腺组织标本,免疫组化检测I型TGF-β受体和PCNA蛋白的表达水平。结果I型TGF-β受体与PCNA在甲状腺癌中的阳性率显著高于正常甲状腺组织(P<0.05),两者在甲状腺癌呈正相关关系(r=0.3637、P= 0.0437)。结论TGF-β抵抗机制在本组甲状腺癌中的实现并非通过I型TGF-β受体的丢失,而更可能是II型TGF-β受体丢失或TGF-β合成水平降低所至。     

骨形态发生蛋白信号传导系统与成骨细胞分化

骨形态发生蛋白(bone morphogenetic prote in,BMP)属于转化生长因子-β(transform ing growth factor-,βTGF-β)超家族,能够促进骨的形成。而骨形成的关键是骨髓基质干细胞向成骨细胞分化。BMP及其下游的级联蛋白组成的信号传导系统通过影响相关转录因子,如:Cbfa1,Osx,D lx5/     

BMP-2诱导成骨及传送的研究进展

骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)属于TGF-β超家族成员,是一种多功能的生长因子,对胚胎骨形成及出生后成骨有重要的作用,其中BMP-2是最主要的骨形成调控因子.骨组织工程的主要研究内容为细胞支架、种子细胞、细胞调控信号.BMP-2是骨组织工程中研究较热的细胞信号蛋白[1].最近,在BMP-2诱导成骨及其应用的传送释放系统的研究方面取得了一些新的进展,现综述如下.     

TGF-β在青光眼滤过性手术后滤泡瘢痕化中的作用

1 TGF-β的概念及生物学特性 1.1概念及种类 TGF-β(转化生长因子-β)是一个具有多种功能的多肽类生长因子超家族,TGF-β属活化素、抑制素和骨形态发生蛋白等结构相关的多肽类族.目前发现TGF-β家族有5种亚型,在哺乳动物体内有三种亚型,即TGF-β1～3.TGF-β4存在于小鸡软骨细胞,TGF-β5是从蛙卵的cDNA文库中克隆而来.具有生物学活性的TGF-β是由含390-412氨基酸残基的非活性前体经酶解产生.TGF-β基因家族共编码4种蛋白,即TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3和TGF-β5.哺乳动物的TGF-β1和TGF-β4是异体同构体[1].在人体中只存在TGF-β1、2、3三种亚型,分布于全身,三种亚型功能相似,作用效果呈剂量依赖性.     

I型和Ⅱ型TGF-β受体在人增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中表达的研究

运用免疫组化技术检测增生性瘢痕(HTS)和瘢痕疙瘩(KS)中I型(R I)和Ⅱ型(RⅡ)TGF-β受体的表达和分布情况,了解TGF-β受体在人HTS和KS形成中的作用.结果发现,HTS成纤维细胞(Fb)表面R I和RⅡ有阳性表达,而且随着病程的延长,受体表达逐渐减弱,直至消失;KS浸润部Fb表面R I和RⅡ呈强阳性表达,中央部未见受体表达阳性的Fb;正常皮肤Fb表面受体表达阴性.提示在HTS形成过程中,不仅TGF-β增高,Fb表面I型和Ⅱ型TGF-β受体也增高,使TGF-β作用放大;TGF-β及其受体可能与KS的浸润性生长有关.     

慢性鼻窦炎患者鼻窦黏膜上皮中TGF-β信号通路分析

背景 研究发现,CRSsNP和CRSwNP患者的鼻窦黏膜组织之间存在TGF-β1表达量的显著不同。而在下气道疾病的研究中发现,TGF-β通过调节气道黏膜上皮细胞增殖能力从而影响下气道黏膜重塑。TGF-β可能作为一个关键的因素参与了慢性鼻窦炎的鼻窦黏膜上皮重塑过程。 方法 通过Western Blot 分析CRS患者和正常对照组中筛窦黏膜组织中TGF-β1, TGF-β 受体I, TGF-β 受体 II, Smad3, 磷酸化的Smad3, Smad7 及 SARA差异。 以TGFβ1、EGF及相应抑制剂分别或共同作用于原代培养的鼻窦黏膜上皮细胞,通过MTT法测定各刺激组间细胞增殖水平的差异。 结果 在CRSsNP组, TGF-β1, TGF-β受体I, TGF-β 受体II和 Smad3 蛋白水平显著高于正常对照组。在 CRSwNP组, TGF-β1, Smad3 及 磷酸化的Smad3 蛋白水平 显著低于正常对照组. Smad7 蛋白在各CRS组均显著高于正常对照组.体外细胞培养实验中。各CRS组的鼻窦黏膜上皮细胞增殖能力均显著低于正常对照组。 结论 与正常对照组相比,CRSwNP 患者有着TGF-β 信号通路信号的显著低水平表达。在CRSsNP ,尽管TGF-β上游信号为高表达,负性调节因子Smad7蛋白的高表达可能抑制了TGF-β信号通路。从而,在CRSsNP 及 CRSwNP 患者中不同表达的TGF-β1并未显著影响鼻窦黏膜上皮增殖能力。     

人骨形成蛋白2，3成熟肽削短／突变体的表达及其诱骨活性

0　引言　骨形成蛋白 [1 ] (bone morphogenetic proteins,BMPs)是属于 TGF-β超家族的成员 ,目前已有 18个 h BMP基因被克隆 .除 BMP- 1外 ,其他 BMPs在胚胎时期骨组织分化发育、成年骨损伤修复、胚胎发育期中胚层的诱导和分化以及神经系统的发育和修复等方面都起着重要作用 [2 - 4 ] ,因而BMPs有十分乐观的临床应用前景 .利用 E.coli表达的不同的长于成熟肽的羧端肽经复性后均具有不同程度诱骨活性 [5 ,6 ] ,但对短于成熟肽的肽段及其氨基酸组成与其生物学活性的关系 ,尚未见报道 .在上述工作的基础上 ,本研究在大肠杆菌中表达削…     

反义BMP2逆转录病毒表达载体的构建及鉴定

0　引言　骨形成蛋白 (Bone Morphogenetic Protein,简称BMP) 2在骨肉瘤中有较高的表达并影响骨肉瘤的生物学活性 ,引起骨肉瘤的预后不良 .为了进一步研究 BMP2在骨肉瘤细胞中的作用机制并为探讨骨肉瘤反义核酸技术治疗的可行性 ,我们构建了反义 BMP2的逆转录病毒表达载体 .1　材料和方法1.1　材料　含 BMP2的 PSP6 4质粒由美国基因研究所 Dr.Wonzey馈赠 ,由 1.6 4kb的人 BMP2 c DNA克隆至 PSP6 4的Eco RI位点而成 .PGEM- 3Z(+ ) (2 .74kb,含 Eco RI,Smal I和 Sal I位点 )和逆转录病毒表达载体 PDOR(6 .5 kb,含Eco RI…     

人TβRⅡ-IgG1Fc融合基因重组腺病毒载体的构建

目的 构建含有人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IBG1Fc段融合基因的腺病毒载体,并进行初步的功能活性鉴定.方法 RT-PCR扩增人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IgG1Fc段基冈,通过Overlap PCR融合为目的 基因hTβRⅡ-IgG1Fc;克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,线性化后转染含骨架质粒的BJ 5183菌,同源重组构建腺病毒质粒;将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞,并扩增、纯化、RT-PCR鉴定;ELISA初步检测重组腺病毒的功能活性.结果 目的 基因经酶切分析、测序鉴定正确;RT-PCR及ELISA表明重组腺病毒能表达hTβRⅡ-IgG1Fc,中和HLF分泌的TGF-β1.结论 成功构建了含融合基因hTβRⅡ-IgG1Fc的腺病毒载体,体外实验证实表达的蛋白具有中和TGF-β1的作用.为进一步研究放射性肺纤维化的基因治疗提供实验依据.     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和I、III 型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法 培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TGF-β1及其I、II受体（TβRI、TβRII）和I、III型胶原（Col-I、Col-III）mRNA的表达。结果 姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论 姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒的构建和功能验证

目的：构建制备显性负性突变型转化生长因子（TGF-β）Ⅰ型受体腺病毒,并验证其对于相应配体功能的抑制效应．方法：利用分子克隆技术构建和重组腺病毒技术,构建制备显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒,并用其感染C3HIO细胞,采用荧光显微镜观察和RT-PCR证明显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒在C3H10细胞中的表达．采用碱性磷酸酶（ALP）定量和荧光素酶报告基因实验,分析显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒对骨形成蛋白2（BMP2）,TGF-β Ⅰ功能的影响,证明其抑制相应配体功能的有效性．结果：构建和制备了显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒,其可以感染C3H10细胞并在C3H10细胞中表达相应的显性负性TGF-β Ⅰ型受体;特定的显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒可分别抑制由BMP2诱导的ALP活性及由TGF-β Ⅰ诱导的荧光素酶活性．结论：成功构建制备的7种显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒具有抑制相应配体功能的特性,为分析TGF-β Ⅰ型受体功能及靶向TGF-β 信号通路的基因治疗提供了有用的工具．     

Gremlin与上皮细胞转分化研究进展

目前研究发现,器官纤维化的发生和发展过程中,上皮细胞转分化是重要的发病机制之一.Gremlin基因首先从爪蟾中枢神经脊中克隆出来,是半胱氨酸结超家族的成员之一,是骨形态发生蛋白( bonemorphogenetic protein,BMP)内源性拮抗剂,在胚胎发育、生长和分化过程中具有重要的调节作用.新近研究提示,Gremlin可能与上皮细胞转分化相关,本文就Gremlin在上皮细胞转分化中的作用的最新研究综述如下.一、Gremlin的生物学特性Gremlin属于BMP拮抗剂家族的成员,它是高度保守的分泌型蛋白,包含潜在的核定位位点、N-连接的糖基化位点和一些磷酸化位点,表现为可溶的和与细胞结合的两种形式[1] Gremlin编码的蛋白有3种,分别命名为Gremlin1、Gremlin2和Gremlin3.人类Gremlin1基因位于染色体15q13-q15,其mRNA全长4175 bp,编码184个氨基酸的蛋白质,其基因编码序列中有一富含半胱氨酸的重复片段.Gremlin2基因位于染色体1q43,编码168个氨基酸的蛋白质,C末端有8个氨基酸环的半胱氨酸结.人类Gremlin3基因位于染色体19q13.2,其氨基酸序列与小鼠CKTSF1B3(DANTE)分子有61.9％的同源性[2].     

遗传性出血性毛细管扩张症病人肺高压的临床和分子遗传学特征

据《N Engl J Med》2001年345卷第5期报道 骨形态形成蛋白受体2(BMPR2)是转化生长因子β(TGF-β)受体超家族的一个成员,大多数家族性原发性肺高压病人存在着这